CN102120021B - 一种治疗乳腺增生病的浓缩丸剂的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗乳腺增生病的浓缩丸剂的检测方法，包括性状、鉴别、丸剂常规检查、浸出物检查、含量测定5个步骤，所述浓缩丸剂配方为柴胡125g、香附125g、大黄（酒炙）83.4g、青皮83.4g、川芎83.4g、莪术83.4g、土鳖虫83.4g、浙贝母83.4g、当归125g、白芍125g、王不留行83.4g。该检测方法有利于保证成品的质量。

Description

一种治疗乳腺增生病的浓缩丸剂的检测方法

技术领域

本发明属于中药技术领域，具体是涉及一种治疗乳腺增生病的浓缩丸剂的检测方法。

背景技术

乳腺增生病是常见的妇女外科疾病，其发病率高，严重影响广大妇女的身心健康，该病具有发展成乳腺癌的危险性。因而积极治疗乳腺增生病，提高妇女健康水平，降低癌变率有非常重大的意义。现代医学认为，乳腺增生病的发生是因内分泌功能紊乱、卵巢功能失调，致使体内雌激素水平增高或活性增强，孕激素水平下降所致。对于乳腺增生疼痛较重或局部结节明显，压痛明显的患者，临床多用性激素疗法和内分泌疗法。如黄体酮，丹那唑、三苯氧胺、溴隐亭等。用上述方法治疗，疗效虽好，但副作用较大，价格较昂贵，不能长期坚持治疗，而停药后疼痛复发，肿块增大，最终仍需继续治疗---手术切除。尤其是性激素应用后可能会进一步干扰人体激素间的平衡，增加癌变的可能性。综上所述，现代医学治疗此病目前以手术为主，药物为辅。无论是手术切除、药物治疗，都存在费用高、副作用明显、创伤面大、手术或停药后易复发等缺点。因此西医对该病尚无理想的解决途径和治疗方法。

子宫肌瘤也为妇科常见疾病，西医常采用手术治疗，肌瘤患者在绝经前切除子宫。即使保留卵巢，常引起更年期综合症、冠心病及骨质疏松症的提早出现，而绝大部分进行肌瘤剔除术患者会在短期内复发。目前治疗子宫肌瘤常用的化学药物虽能在短时期内缩小肌瘤体积，抑制子宫出血，却不能控制肌瘤的增长和新的肌瘤出现，且应用这些拮抗雌激素和孕激素的药物后，容易产生低雌激素水平，从而诱发闭经、更年期综合症和骨质疏松等。

    子宫肌瘤在中医学属于癥瘕、积聚、石癥范畴。《血证论》云：“子宫肌瘤乃离经之血与好血不相合是谓瘀血。日久则结为癥"。本病由于气血失调、郁怒伤肝、肝郁气滞，痰湿内蕴，瘀滞而成积块，肝肾两虚，冲任失调所致；阴阳失调、肝气不舒，肾气不化，遂致气机不畅，气滞血瘀，积而成徵癥。子宫肌瘤主要是脏腑功能失调、气血不和、以致血瘀阻滞、留而结聚而成，总病机与瘀血分不开。

中医药治疗本病多以疏肝理气、行气活血、破瘀化痰散结的方法。临床上应用行气药以川芎、香附、枳壳等为多；活血化瘀药多用桃仁、红花、王不留行等；疏肝理气药多用柴胡、郁金等；化痰药则以浙贝母、海藻、昆布为主。中药在治疗子宫肌瘤方面不仅能控制并缩小肌瘤组织，综合调节人体激素水平，并且能改善月经不调、白带、腰酸等临床症状，远期疗效显著。其作用多与改善微循环、调整机体性激素水平等有关。目前，主要有桂枝茯苓丸／胶囊、宫瘤消胶囊、大黄蛰虫丸用于治疗子宫肌瘤，但仍缺少抗子宫肌瘤疗效确切、安全系数高的中成药。

发明内容

本发明目的是提供一种治疗乳腺增生病的浓缩丸剂的检测方法，有利于保证成品的质量。

本发明治疗乳腺增生病的浓缩丸剂是由11味中药组成，具体组方为：

柴胡125g、香附125g、大黄（酒炙）83.4g、青皮83.4g、川芎83.4g、莪术83.4g、土鳖虫83.4g、浙贝母83.4g、当归125g、白芍125g、王不留行83.4g，制成1000丸。

具体制备方法：

取处方量二分之一量的酒大黄粉碎成细粉，备用。

浙贝母、王不留行加70％乙醇5倍量，回流提取2次，每次2小时，滤过，合并滤液，静置16小时，滤过，滤液回收乙醇并浓缩成清膏，备用。

香附、青皮、川芎、莪术和当归水蒸汽蒸馏6小时，提取挥发油，蒸馏后的水溶液滤过，备用，挥发油用β-环糊精包结，包结物低温干燥。

剩余的酒大黄等其余四味，分别加水10倍量，煎煮3次，每次1小时，滤过，合并滤液和上述蒸馏后的水溶液，浓缩至相对密度为1.05～1.10（50℃），静置16小时，离心（2500转／分），取上清液浓缩成清膏，和上述醇提清膏混合后继续浓缩至相对密度为1.15～1.20（50℃）的清膏，取90%左右的清膏喷雾干燥，其余清膏继续浓缩至1.35～1.38（50℃）的稠膏，将喷雾干燥粉和适量酒大黄细粉、β-环糊精包结物混合后，加入适量糊精混匀，用9～12%混合粉量的55%～75%浓度的乙醇合坨、塑制成丸粒，再取剩余酒大黄细粉、适量稠膏将丸滚圆，干燥，用剩余稠膏、适量滑石粉和活性炭包衣，虫白蜡打光，制成1000丸，即得。

该药为中药复方制剂，其处方与制备方法在此之前未有公开，其质量的控制方法未见报道。

本发明的技术方案是：

 本发明治疗乳腺增生病的浓缩丸剂的检测方法：包括性状、浸出物检查、鉴别、丸剂常规检查、含量测定5个步骤，具体为：

a、性状为：本品为黑色炭衣浓缩丸，丸芯为黑褐色；气芳香，味微咸苦。

b、浸出物检查为：取重量差异项下的本品约4g，研细，精密称定，置锥形瓶中，加甲醇l00ml，密塞，称定重量，置水浴上回流1小时，放置至室温，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液50ml，蒸干，残渣加l0％氢氧化钠溶液5ml使溶解，并转移至分液漏斗中，加水25ml洗涤蒸发皿，洗液并入同一分液漏斗中，摇匀，用水饱和的正丁醇提取4次，每次30ml，合并正丁醇提取液，加水洗涤2次，每次40ml，弃去水液，正丁醇液置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量，计算，即得；本品含正丁醇浸出物不得少于1.2％； 

c、鉴别为：

（1）柴胡的薄层色谱鉴别：取浸出物检查项下的正丁醇浸出物，加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液；另取柴胡对照药材0.5g，加甲醇20ml超声处理20分钟，滤过，滤液浓缩至约5ml，作为对照药材溶液。再取柴胡皂苷a对照品，加甲醇制成每lml含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法；试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-乙醇-水8:2:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％对二甲氨基苯甲醛的40％硫酸溶液，在60℃加热至斑点显色清晰，置日光及紫外光灯365 nm下检视供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑点

（2）香附的薄层色谱鉴别：取本品10g，研细，置园底烧瓶中，加水250ml，连接挥发油测定器与回流冷凝管，再加入2ml乙酸乙酯，回流10分钟，放置至室温，取乙酸乙酯层作为供试品溶液另取α-香附酮，加乙酸乙酯制成每1m1含lmg的溶液作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸92:5:5为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯254 nm下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；喷以二硝基苯肼试液，放置片刻，斑点渐变为橙红色；

（3）大黄的薄层色谱鉴别：取本品0.3g，研细，加甲醇20m1，超声处理15分钟，滤过，取滤液5m1，蒸干，残渣加水10ml使溶解，再加盐酸1ml，加热回流30分钟，立即冷却，用乙醚分2次振摇提取，每次20m1，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷1m1使溶解，作为供试品溶液；另取大黄对照药材0.1g，同法制成对照药材溶液；再取大黄酸对照品，加甲醇制成每1m1含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸15:5:1的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365 nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的五个橙黄色荧光主斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点，置氨蒸气中熏后，斑点变为红色；

（4）青皮的薄层色谱鉴别：取本品2g，研细，加甲醇20ml，加热回流20分钟，滤过，取滤液10ml，蒸干，残渣加水2ml使溶解，通过D10l大孔吸附树脂柱内径1.5cm，长9cm，柱上端加1g中性氧化铝，先以水100m1洗脱，弃去，再以2％吡啶甲醇50m1洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法；试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一用硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水100:27:13为展开剂，展至约3cm，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水20:10:1:1的上层溶液为展开剂，展至约8cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

（5）浙贝母的薄层色谱鉴别：取本品10g，研细，加浓氨试液2ml与三氯甲烷50m1，放置过夜，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇lml使溶解，拌入少许中性氧化铝，水浴上拌匀干燥，加于中性氧化铝柱（100-200目，2g，内径约15mm）上，用乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙醇lml使溶解，作为供试品溶液。另取贝母素甲对照品，加乙醇制成每lml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录ⅥB）；试验，吸取对照品溶液2μl、供试品溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液17:2:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

（6）白芍的薄层色谱鉴别：取本品2g，研细，加甲醇20ml，加热回流20分钟，滤过，取滤液l0ml，蒸干，残渣加水2ml使溶解，通过D101大孔吸附树脂柱内径1.5cm，长9cm，柱上端加lg中性氧化铝，先以水l00ml洗脱，弃去，再以2％吡啶甲醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加乙醇制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸40:5:10:0.2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

d、丸剂常规检查为：应符合中国药典丸剂项下有关的各项规定；

e、含量测定 

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-冰醋酸75:25:1为流动相；检测波长254nm；理论板数按大黄素峰计算应不低于3000； 

对照品溶液的制备：精密称取芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品适量，加甲醇分别制成每lml含大黄酸、大黄素、大黄酚各150μg，芦荟大黄素、大黄素甲醚各75μg的溶液；分别精密量取上述对照品溶液各2ml，混匀，即得每lml含大黄酸、大黄素、大黄酚各30μg，芦荟大黄素、大黄素甲醚各15μg；

供试品溶液的制备：取重量差异项下的本品，研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，置50ml烧瓶中，挥去甲醇，加水10ml，盐酸lml，加热回流30分钟，立即冷却，并转移至分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，以三氯甲烷提取5次，每次30ml，合并三氯甲烷液，以水50ml洗涤一次，弃去水液，三氯甲烷液蒸干，残渣加甲醇定量转移至10ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，即得；

测定法：分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各5μ1，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品每丸含酒大黄以芦荟大黄素C₁₅H₁₀O₅、大黄酸C₁₅H₈0₆、大黄素C₁₅H₁₀0₅、大黄酚C₁₅H₁₀O₄和大黄素甲醚C₁₆H₁₂O₅的总量计，不得少于0.6mg。

本发明的优点是对该药建立了较高的能保证成品的质量的检测方法。由于本品所含药味较多，成分复杂，检测方法是经过多次试验摸索才建立起来的，除丸剂的常规检验项外，建立了君药柴胡的浸出物含量测定、臣药大黄的高效液相含量测定，建立了柴胡、香附、大黄、青皮、浙贝母、芍药6味中药的薄层色谱鉴别，鉴别药味占全部中药的50%以上。该检测方法标准较高，其各个步骤密不可分，可完全保证成品质量的目的。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步描述：

实施例一：浓缩丸剂的制备

浓缩丸剂配方为：柴胡125g、香附125g、大黄（酒炙）83.4g、青皮83.4g、川芎83.4g、莪术83.4g、土鳖虫83.4g、浙贝母83.4g、当归125g、白芍125g、王不留行83.4g，制成1000丸。

取处方量二分之一量的酒大黄粉碎成细粉，备用。

浙贝母、王不留行加70％乙醇5倍量，回流提取2次，每次2小时，滤过，合并滤液，静置16小时，滤过，滤液回收乙醇并浓缩成清膏，备用。

香附、青皮、川芎、莪术和当归水蒸汽蒸馏6小时，提取挥发油，蒸馏后的水溶液滤过，备用，挥发油用β-环糊精包结，包结物低温干燥。

剩余的酒大黄等其余四味，分别加水10倍量，煎煮3次，每次1小时，滤过，合并滤液和上述蒸馏后的水溶液，浓缩至相对密度为1.05～1.10（50℃），静置16小时，离心（2500转／分），取上清液浓缩成清膏，和上述醇提清膏混合后继续浓缩至相对密度为1.15～1.20（50℃）的清膏，取90%左右的清膏喷雾干燥，其余清膏继续浓缩至1.35～1.38（50℃）的稠膏，将喷雾干燥粉和适量酒大黄细粉、β-环糊精包结物混合后，加入适量糊精混匀，用9～12%混合粉量的55%～75%浓度的乙醇合坨、塑制成丸粒，再取剩余酒大黄细粉、适量稠膏将丸滚圆，干燥，用剩余稠膏、适量滑石粉和活性炭包衣，虫白蜡打光，制成1000丸，即得。

上述方法制得的浓缩丸（以下称浓缩丸）对乳腺体积和乳腺重量的影响(结果见表1)

由表1可见，模型组家兔乳腺增生，乳腺体积明显增大，乳腺重量明显增加：与模型组比较，浓缩丸4g生药／kg、2g生药／kg剂量组家兔乳腺体积均明显减小(P<O.05)，乳腺重量亦均明显减轻(P<O.05)，浓缩丸 1g生药／kg剂量组家兔乳腺体积、乳腺重量与模型组比较均无明显差异：与模型组比较，乳疾灵颗粒组家兔乳腺体积明显减小(P<O.05)，乳腺重量亦明显减轻(P<O.05))。

表1．浓缩丸对乳腺体积和乳腺重量的影响（                                                

±SD，n=8)

注：与模型组比较*p<O.05

1．浓缩丸对乳腺组织影响的镜下观察

家兔乳腺组织镜下观察：正常对照组家兔乳腺无增生性病变，小叶不明显，腺泡极少，脂肪和结缔组织较多，腺导管腔无扩张，处于静息期状态；模型组家兔乳腺增生呈弥漫性，乳腺腺泡和小叶数目显著增加，腺泡腔和腺导管腔明显扩张，腺泡腔内含分泌物及脱落的细胞，间质减少(见表2)。浓缩丸4g生药／kg、2g生药／kg剂量组及乳疾灵颗粒组乳腺组织上述变化均有明显改善，浓缩丸lg生药／kg剂量组乳腺组织上述变化无明显改善(见表3)。与模型组比较，浓缩丸4g生药／kg、2g生药／kg剂量组乳腺小叶数、乳腺腺泡数均明显减少(P<O.05～0.01)，浓缩丸4g生药／kg剂量组腺泡腔直径有减小趋势，浓缩丸lg生药／kg剂量组家兔乳腺小叶数、腺泡数及腺泡腔直径与模型组比较均无明显差异；与模型组比较，乳疾灵颗粒组家兔乳腺小叶数、乳腺腺泡数亦均明显减少(P<O.05)；浓缩丸三个剂量组和乳疾灵颗粒组家兔的腺导管直径与模型组比较均无明显差异。    

表2．浓缩丸对小叶、腺泡及腺导管的影响(

±SD，n=8)

注：与模型组比较*p<0.05，**p<0.01

实施例二：治疗乳腺增生病的浓缩丸剂的检测方法包括以下步骤，具体为：

a、性状 ：按大生产样品的实际状态描述为本品为黑色炭衣浓缩丸，丸芯为黑褐色；气芳香，味微咸苦。

、浸出物检查为：取重量差异项下的本品约4g，研细，精密称定，置锥形瓶中，加甲醇l00ml，密塞，称定重量，置水浴上回流1小时，放置至室温，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液50ml，蒸干，残渣加l0％氢氧化钠溶液5ml使溶解，并转移至分液漏斗中，加水25ml洗涤蒸发皿，洗液并入同一分液漏斗中，摇匀，用水饱和的正丁醇提取4次，每次30ml，合并正丁醇提取液，加水洗涤2次，每次40ml，弃去水液，正丁醇液置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量，计算，即得。本品含正丁醇浸出物均大于1.2％。

、鉴别（1）柴胡的薄层色谱鉴别

对照品的制备：取柴胡皂苷a对照品（购自中国药品生物制品鉴定所，批号为：110777-200406），加甲醇制成每lml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。取柴胡对照药材0.5g（购自中国药品生物制品鉴定所，批号为：120992-200705），加甲醇20ml超声处理20分钟，滤过，滤液浓缩至约5ml，作为对照药材溶液。

供试品的制备：取浸出物检查项下的正丁醇浸出物，加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液。

照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-乙醇-水（8:2:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％对二甲氨基苯甲醛的40％硫酸溶液，在60℃加热至斑点显色清晰，置日光及紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑点。

（2）香附的薄层色谱鉴别

对照品的制备：取α-香附酮对照品（购自中国药品生物制品鉴定所，批号为：110748-200608），加乙酸乙酯制成每1m1含lmg的溶液作为对照品溶液。

供试品的制备：取本品l0g，研细，置园底烧瓶中，加水250ml，连接挥发油测定器与回流冷凝管（自测定器上端加水使充满刻度），再加入2ml乙酸乙酯，回流10分钟，放置至室温，取乙酸乙酯层作为供试品溶液。

照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸（92:5:5）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；喷以二硝基苯肼试液，放置片刻，斑点渐变为橙红色。

（3）大黄的薄层色谱鉴别

对照品的制备：取大黄酸对照品（购自中国药品生物制品鉴定所，批号为：110757-200206），加甲醇制成每1m1含1mg的溶液，作为对照品溶液。取大黄对照药材（购自中国药品生物制品鉴定所，批号为：121249-200402）0.1g，加甲醇20m1，超声处理15分钟，滤过，取滤液5m1，蒸干，残渣加水10ml使溶解，再加盐酸1ml，加热回流30分钟，立即冷却，用乙醚分2次振摇提取，每次20m1，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷1m1使溶解，作为成对照药材溶液。

供试品的制备：取本品0.3g，研细，加甲醇20m1，超声处理15分钟，滤过，取滤液5m1，蒸干，残渣加水10ml使溶解，再加盐酸1ml，加热回流30分钟，立即冷却，用乙醚分2次振摇提取，每次20m1，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷1m1使溶解，作为供试品溶液。

照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述三种溶液各5μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15:5:1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的五个橙黄色荧光主斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点，置氨蒸气中熏后，斑点变为红色。

（4）青皮的薄层色谱鉴别

对照品的制备：取橙皮苷对照品（购自中国药品生物制品鉴定所，批号为：110721-200613），加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液。

供试品的制备：取本品2g，研细，加甲醇20ml，加热回流20分钟，滤过，取滤液10ml，蒸干，残渣加水2ml使溶解，通过D101大孔吸附树脂柱（内径1.5cm，长9cm，柱上端加1g中性氧化铝），先以水100ml洗脱，弃去，再以2％吡啶甲醇50m1洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。

照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一用硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水（100:27:13）为展开剂，展至约3cm，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水（20:10:1:1）的上层溶液为展开剂，展至约8cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

（5）浙贝母的薄层色谱鉴别

对照品的制备：取贝母素甲对照品（购自中国药品生物制品鉴定所，批号为：110750-200608），加乙醇制成每lml含2mg的溶液，作为对照品溶液。

供试品的制备：取本品10g，研细，加浓氨试液2ml与三氯甲烷50m1，放置过夜，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇lml使溶解，拌入少许中性氧化铝，水浴上拌匀干燥，加于中性氧化铝柱（100-200目，2g，内径约15mm）上，用乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙醇lml使溶解，作为供试品溶液。

照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录ⅥB）试验，吸取对照品溶液2μ1、供试品溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液（17:2:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

（6）白芍的薄层色谱鉴别

对照品的制备：取芍药苷对照品（购自中国药品生物制品鉴定所，批号为：110736-200833），加乙醇制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液。

供试品的制备：取本品2g，研细，加甲醇20ml，加热回流20分钟，滤过，取滤液l0ml，蒸干，残渣加水2ml使溶解，通过D101大孔吸附树脂柱（内径1.5cm，长9cm，柱上端加lg中性氧化铝），先以水l00ml洗脱，弃去，再以2％吡啶甲醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。

照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40:5:10:0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

d、丸剂常规检查： 本品为浓缩丸，按中国药典附录ⅠA丸剂中的浓缩丸项下的有关规定进行检测，包括重量差异、装量差异、水分、溶散时限、活螨、细菌数、霉菌和酵母菌、大肠埃希菌、大肠菌群、沙门菌等检验，结果各项均符合药典规定。

、含量测定

（1）仪器与试药

仪器：岛津高效液相色谱仪（LC-20AT溶剂输送泵、SPD-10A紫外检测器、N-2000色谱工作站；岛津CTO-10ASVP柱温箱）。

试药：甲醇为色谱纯，超纯水，其余试剂均为分析纯，对照品（芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚为中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用，批号：110795-200806、110757-200206、110756-200110、110796-200716、110758-200611。

（2）色谱条件

色谱柱：Phenomenex Gemini 5μ C18 110A （250×4.60mm 5 micron）；柱温：35℃；流动相：甲醇-水-冰醋酸（75:25:1）；流速：1.0 ml/min；检测波长254nm。进样量5μ1。在此色谱条件下，对照品色谱峰与相邻峰达到基线分离，分离度大于1.5，理论板数按大黄素峰计算应不低于3000。

（3）对照品溶液的制备

精密称取芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品适量，加甲醇分别制成每lml含大黄酸、大黄素、大黄酚各150μg，芦荟大黄素、大黄素甲醚各75μg的溶液；分别精密量取上述对照品溶液各2ml，混匀，即得（每lml含大黄酸、大黄素、大黄酚各30μg，芦荟大黄素、大黄素甲醚各15μg）。

（4）供试品溶液的制备

取重量差异项下的本品，研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，置50ml烧瓶中，挥去甲醇，加水10ml，盐酸lml，加热回流30分钟，立即冷却，并转移至分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，以三氯甲烷提取5次，每次30ml，合并三氯甲烷液，以水50ml洗涤一次，弃去水液，三氯甲烷液蒸干，残渣加甲醇定量转移至10ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。

（5）测定法

分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各5μ1，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品每丸含酒大黄以芦荟大黄素（C₁₅H₁₀O₅）、大黄酸（C₁₅H₈0₆）、大黄素（C₁₅H₁₀0₅）、大黄酚（C₁₅H₁₀O₄）和大黄素甲醚（C₁₆H₁₂O₅）的总量计，不得少于0.6mg。按上法对3批产品的测定结果为，0.88、0.87、0.88 mg/丸，均符合规定。

上述各步骤作为本丸剂的检测方法的组成部分，密不可分，符合以上所有检查项的成品即为合格产品。

Claims (1)

1.一种治疗乳腺增生病的浓缩丸剂的检测方法，包括性状、浸出物检查、鉴别、丸剂常规检查、含量测定五个步骤，

a、性状为：本品为黑色炭衣浓缩丸，丸芯为黑褐色；气芳香，味微咸苦；

b、浸出物检查为：取重量差异项下的本品约4g，研细，精密称定，置锥形瓶中，加甲醇l00ml，密塞，称定重量，置水浴上回流1小时，放置至室温，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液50ml，蒸干，残渣加l0％氢氧化钠溶液5ml使溶解，并转移至分液漏斗中，加水25ml洗涤蒸发皿，洗液并入同一分液漏斗中，摇匀，用水饱和的正丁醇提取4次，每次30ml，合并正丁醇提取液，加水洗涤2次，每次40ml，弃去水液，正丁醇液置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量，计算，即得；本品含正丁醇浸出物不得少于1.2％； 

c、鉴别为：

（1）柴胡的薄层色谱鉴别：取浸出物检查项下的正丁醇浸出物，加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液；另取柴胡对照药材0.5g，加甲醇20ml超声处理20分钟，滤过，滤液浓缩至约5ml，作为对照药材溶液；再取柴胡皂苷a对照品，加甲醇制成每lml含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法；试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-乙醇-水8:2:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％对二甲氨基苯甲醛的40％硫酸溶液，在60℃加热至斑点显色清晰，置日光及紫外光灯365 nm下检视供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑点；

（2）香附的薄层色谱鉴别：取本品10g，研细，置园底烧瓶中，加水250ml，连接挥发油测定器与回流冷凝管，再加入2ml乙酸乙酯，回流10分钟，放置至室温，取乙酸乙酯层作为供试品溶液另取α-香附酮，加乙酸乙酯制成每1m1含lmg的溶液作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸92:5:5为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯254 nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；喷以二硝基苯肼试液，放置片刻，斑点渐变为橙红色；

（3）大黄的薄层色谱鉴别：取本品0.3g，研细，加甲醇20m1，超声处理15分钟，滤过，取滤液5m1，蒸干，残渣加水10ml使溶解，再加盐酸1ml，加热回流30分钟，立即冷却，用乙醚分2次振摇提取，每次20m1，合并乙醚液，蒸干，残渣加三氯甲烷1m1使溶解，作为供试品溶液；另取大黄对照药材0.1g，同法制成对照药材溶液；再取大黄酸对照品，加甲醇制成每1m1含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以30～60℃石油醚-甲酸乙酯-甲酸15:5:1的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365 nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的五个橙黄色荧光主斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点，置氨蒸气中熏后，斑点变为红色；

（4）青皮的薄层色谱鉴别：取本品2g，研细，加甲醇20ml，加热回流20分钟，滤过，取滤液10ml，蒸干，残渣加水2ml使溶解，通过D10l大孔吸附树脂柱内径1.5cm，长9cm，柱上端加1g中性氧化铝，先以水100m1洗脱，弃去，再以2％吡啶甲醇50m1洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法；试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一用硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水100:27:13为展开剂，展至约3cm，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水20:10:1:1的上层溶液为展开剂，展至约8cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

（5）浙贝母的薄层色谱鉴别：取本品10g，研细，加浓氨试液2ml与三氯甲烷50m1，放置过夜，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇lml使溶解，拌入少许中性氧化铝，水浴上拌匀干燥，加于中性氧化铝柱上，100-200目，2g，内径约15mm，用乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙醇lml使溶解，作为供试品溶液；另取贝母素甲对照品，加乙醇制成每lml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法；试验，吸取对照品溶液2μl、供试品溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液17:2:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

（6）白芍的薄层色谱鉴别：取本品2g，研细，加甲醇20ml，加热回流20分钟，滤过，取滤液l0ml，蒸干，残渣加水2ml使溶解，通过D101大孔吸附树脂柱内径1.5cm，长9cm，柱上端加lg中性氧化铝，先以水l00ml洗脱，弃去，再以2％吡啶甲醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加乙醇制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸40:5:10:0.2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

d、丸剂常规检查为：应符合中国药典丸剂项下有关的各项规定；

e、含量测定 ：

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-冰醋酸75:25:1为流动相；检测波长254nm；理论板数按大黄素峰计算应不低于3000； 

对照品溶液的制备：精密称取芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品适量，加甲醇分别制成每lml含大黄酸、大黄素、大黄酚各150μg，芦荟大黄素、大黄素甲醚各75μg的溶液；分别精密量取上述对照品溶液各2ml，混匀，即得每lml含大黄酸、大黄素、大黄酚各30μg，芦荟大黄素、大黄素甲醚各15μg；

供试品溶液的制备：取重量差异项下的本品，研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，置50ml烧瓶中，挥去甲醇，加水10ml，盐酸lml，加热回流30分钟，立即冷却，并转移至分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，以三氯甲烷提取5次，每次30ml，合并三氯甲烷液，以水50ml洗涤一次，弃去水液，三氯甲烷液蒸干，残渣加甲醇定量转移至10ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，即得；

测定法：分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各5μ1，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品每丸含酒大黄以芦荟大黄素C₁₅H₁₀O₅、大黄酸C₁₅H₈0₆、大黄素C₁₅H₁₀0₅、大黄酚C₁₅H₁₀O₄和大黄素甲醚C₁₆H₁₂O₅的总量计，不得少于0.6mg；

其中所述治疗乳腺增生病的浓缩丸剂是由11味中药组成，具体组方为：

柴胡125g、香附125g、酒炙大黄83.4g、青皮83.4g、川芎83.4g、莪术83.4g、土鳖虫83.4g、浙贝母83.4g、当归125g、白芍125g、王不留行83.4g，制成1000丸。