CN105259264A

CN105259264A - 消栓通络片中多种活性成分的含量测定方法

Info

Publication number: CN105259264A
Application number: CN201510676644.7A
Authority: CN
Inventors: 穆滨; 何林; 刘晓凤
Original assignee: HARBIN KANGLONG PHARMACEUTICAL CO Ltd
Current assignee: HARBIN KANGLONG PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date: 2015-10-13
Filing date: 2015-10-13
Publication date: 2016-01-20

Abstract

本发明属于中药领域，具体涉及一种消栓通络片中主要活性成分的含量测定方法。所述测定方法通过HPLC法可同时对消栓通络片中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1进行含量测定，根据色谱条件，将对照品混合溶液和供试品溶液分别注入液相色谱仪，对照品混合溶液进样量分别为10μL，供试品液进样量为5μL，记录色谱峰面积，外标法计算含量。同时，所述测定方法通过ELSD法对黄芪甲苷进行含量测定，根据色谱条件，将对照品混合溶液和供试品溶液分别注入液相色谱仪，对照品进样量分别为5μL、10μL，供试品液进样量为10～20μL，记录色谱峰面积，外标两点法对数方程计算含量。

Description

消栓通络片中多种活性成分的含量测定方法

技术领域

本发明属于中药领域，具体涉及一种消栓通络片中主要活性成分的含量测定方法。

背景技术

消栓通络片由川芎、丹参、黄芪、泽泻、三七、槐花、郁金、桂枝、木香、冰片和山楂组成。其具有活血化瘀、温经通络功能，用于血脂增高、脑血栓引起的精神呆滞、舌质发硬、言语迟涩、发音不清、手足发凉、活动疼痛等病症。该制剂收载于中国药典2010年版一部。研究表明其具有能改善心血管功能，化瘀而不伤正的特点而广泛应用于临床治疗。

现阶段的中药质量控制模式基本上是借鉴化学药品质量控制的模式，含量测定作为中药质量标准中的要害内容之一，对于有效成分制剂而言，可在很大程度上控制药品质量，但对于复方制剂采用多种不同提取方式或多条提取路线的工艺以及多个有效部位制成的新药而言，仅建立某单一成分的含量测定在很大程度上带有较大的片面性。虽然研究者越来越熟悉到中药新药工艺过程的控制对于质量控制的重要性，但是多数制剂的质量标准仍然不能全面反映制剂的过程控制结果，即难以全面控制中药制剂的质量。因此，从中药质量标准的技术要求方面，全面提高质量标准仍然有很大的发展空间。因此，从中药研究的技术要求方面，将来的新药研究有必要在质量标准中建立多指标含量测定，目的之一是实现对多数成份指标的控制，并将对中药制剂工艺过程的控制直接在质量标准中得到体现。即处方中含有多个明确有效成分的，或者处方中药味分别按不同路线提取等各种不同情况下，均有必要研究建立多个指标的含量测定。但是，这就对质量控制的效率带来了挑战，如果均采用快捷的薄层扫描定量，则准确度会较差，如果均采用色谱法测定，则非常耗费时间并且显著增加质量控制的成本，在同一色谱系统中同时测定几种成分，则是比较理想的质量控制方法。

在中国药典2010年版一部中，对消栓通络片的质量控制指标单一，仅是针对该制剂中三七中的人参皂苷Rg1进行检测。有文献表明以HPLC法测定其中丹参酮IIA、黄芪甲苷、三七皂苷R1及芦丁的含量，另有文献表明以电化学检测器测定其中酚酸含量。但是正如上面所述，作为中成药制剂，对其控制应从多成分多角度出发。因此，在同一色谱系统中同时测定几种消栓通络片中的主要活性成分为本领域技术人员所需。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种消栓通络片中多种活性成分的含量测定方法，所述测定方法可同时对消栓通络片中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1及三七皂苷R1进行含量测定，方法简便可行、测定结果可靠。

本发明的含量测定方法如下：

色谱条件：色谱柱为C18柱，规格为250mm×4.6mm，流动相A为乙腈，B为水，洗脱梯度：0～20min，流动相A由0％增至20％；20～21min，流动相A由20％增至40％；21～26min，流动相A由40％降至20％；26～35min，流动相A保持20％；检测波长为203nm，流速：1.0mL/min，柱温：30-50℃；人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1及三七皂苷R1与各自相邻峰的分离度均大于1.5；

对照品溶液的配制：精密称取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品、三七皂苷R1对照品，加甲醇分别制成每1ml含人参皂苷Rg11.0mg，人参皂苷Rb11.0mg，三七皂苷R10.2mg的混合溶液，即得；

供试品溶液配制：取消栓通络片，除去包衣，精密称定，研细，充分混匀，取2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声(120W，频率60kHz)30min，放冷，用甲醇补足重量，摇匀，滤过，精密量取滤液25ml，蒸干，残渣用水20ml分次溶解，转移至分液漏斗中，用水饱和的正丁醇振摇提取4次(30ml，30ml，20ml，20ml)，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次25ml，弃去氨试液，再用正丁醇饱和的水25ml洗涤，正丁醇液蒸干，残渣用甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取滤液即得；

测定方法：将对照品混合溶液和供试品溶液分别注入液相色谱仪，对照品混合溶液进样量分别为10μL，供试品液进样量为5μL，记录色谱峰面积，外标法计算含量。

在本发明中，所述消栓通络片可以按照中国药典2010版一部中1035-1036页记载的内容进行制备，也可以通过商业渠道采购获得。

具体实施方式

下面将进一步的详细说明本发明。需要指出的是，以下说明仅仅是对本发明要求保护的技术方案的举例说明，并非对这些技术方案的任何限制。本发明的保护范围以所附权利要求书记载的内容为准。

实施例1方法学研究

1仪器与材料

高效液相色谱仪(Waterse2695)、紫外检测器(Waters2489)、KQ3200DE型医用数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)、人参皂苷Rg1对照品(中国药品生物制品检定所)、人参皂苷Rb1对照品(中国药品生物制品检定所)、三七皂苷R1对照品(中国药品生物制品检定所)，乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其余试剂为分析纯。消栓通络片购自哈尔滨市康隆药业有限责任公司方正分公司。

2方法与结果

2.1三七的含量测定

2.1.1色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：C18柱(AgilentExtendC18)，规格为250mm×4.6mm，流动相A为乙腈，B为水，洗脱梯度：0～20min，流动相A由0％增至20％；20～21min，流动相A由20％增至40％；21～26min，流动相A由40％降至20％；26～35min，流动相A保持20％；检测波长为203nm，流速：1.0mL/min，柱温：35℃；在此色谱条件下，得到三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、混合对照品色谱图及消栓通络片的供试品色谱图，三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的保留时间分别为12.31、16.10和22.65min，各自相邻峰的分离度均大于1.5。

2.1.2对照品溶液的制备

精密称取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品、三七皂苷R1对照品，加甲醇分别制成每1ml含人参皂苷Rg11.0mg，人参皂苷Rb11.0mg，三七皂苷R10.2mg的混合溶液，即得。

2.1.3供试品溶液的制备

供试品溶液配制：取消栓通络片，除去包衣，精密称定，研细，充分混匀，取2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声(120W，频率60kHz)30min，放冷，用甲醇补足重量，摇匀，滤过，精密量取滤液25ml，蒸干，残渣用水20ml分次溶解，转移至分液漏斗中，用水饱和的正丁醇振摇提取4次(30ml，30ml，20ml，20ml)，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次25ml，弃去氨试液，再用正丁醇饱和的水25ml洗涤，正丁醇液蒸干，残渣用甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取滤液即得。

2.1.4线性化范围试验

分别精密吸取人参皂苷Rg1(1.04mg/ml)，人参皂苷Rb1(1.01mg/ml)，三七皂苷R1(0.20mg/ml)对照品混合溶液各4、6、8、10、12、14μL注入液相色谱仪，记录色谱峰面积，以峰面积对进样量进行线性回归，结果见下表，可见该方法在试验范围内线性关系良好。

成分	回归方程	相关系数
			人参皂苷Rg1	Y＝1759156.80x-31314.24	0.9999
人参皂苷Rb1	Y＝2184321.23x-15763.59	0.9999
			三七皂苷R1	Y＝3096347.71x+25587.62	0.9999

2.1.5精密度试验

精密吸取同一供试品溶液5μL，连续注入液相色谱仪6次，按以上条件进行测定，记录色谱峰面积，结果人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1的RSD分别为0.4％、0.7％、0.6％，表明精密度良好。

2.1.6重复性试验

取同一批号消栓通络片，重复6次取样，精密称定，按“2.3”所述方法制备供试品溶液，进样5μL测定，计算含量，结果人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1的RSD分别为0.6％、0.5％、0.6％，表明重复性试验良好。

2.1.7稳定性试验

按“2.1.3”所述方法制备供试品溶液，在配制后0，4，8，12，16，20，24h进样5μL，分别记录4种成分的峰面积，结果人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1的RSD分别为0.9％、1.1％、0.8％，表明样品在24h基本稳定。

2.1.8加样回收率试验

取已知含量的样品6份，分别精密加入对照品溶液，按“2.1.3”所述方法制备供试品液，进样20μL，重复6次，计算4种成分的平均加样回收率，测定结果表明4种成分的平均回收率在99％-101％之间，RSD<1.0％。

2.1.9样品含量测定

取5批消栓通络片，按“2.1.3”所述方法制得供试品液，将对照品混合溶液和供试品液分别注入液相色谱仪，对照品溶液进样量10μL，供试品溶液进样量为5μL，记录色谱峰面积，外标法计算含量，测定结果见下表。

mg/片	人参皂苷Rg1	人参皂苷Rb1	三七皂苷R1
				批次1	3.2	3.7	0.4

批次2	3.4	3.9	0.5
				批次3	3.5	3.8	0.4
批次4	3.3	3.7	0.3
				批次5	3.4	3.8	0.3

本发明内容仅仅举例说明了要求保护的一些具体实施方案，其中一个或更多个技术方案中所记载的技术特征可以与任意的一个或多个技术方案相组合，这些经组合而得到的技术方案也在本申请保护范围内，就像这些经组合而得到的技术方案已经在本发明公开内容中具体记载一样。

Claims

1.一种消栓通络片中多种活性成分的含量测定方法，所述测定方法通过HPLC法可同时对消栓通络片中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1进行含量测定，根据色谱条件，将对照品混合溶液和供试品溶液分别注入液相色谱仪，对照品混合溶液进样量分别为10μL，供试品液进样量为5μL，记录色谱峰面积，外标法计算含量。

2.根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，HPLC的色谱条件：色谱柱为C18柱，规格为250mm×4.6mm，流动相A为乙腈，B为水，洗脱梯度：0～20min，流动相A由0％增至20％；20～21min，流动相A由20％增至40％；21～26min，流动相A由40％降至20％；26～35min，流动相A保持20％；检测波长为201nm，流速：1.0mL/min，柱温：30-50℃；人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1与各自相邻峰的分离度均大于1.5。

3.根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，对照品溶液的配制方法为：精密称取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品、三七皂苷R1对照品加甲醇分别制成每1ml含人参皂苷Rg11.0mg，人参皂苷Rb11.0mg，三七皂苷R10.2mg的混合溶液，即得。

4.根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，供试品溶液配制方法为：取消栓通络片，除去包衣，精密称定，研细，充分混匀，取2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声(120W，频率60kHz)30min，放冷，用甲醇补足重量，摇匀，滤过，精密量取滤液25ml，蒸干，残渣用水20ml分次溶解，转移至分液漏斗中，用水饱和的正丁醇振摇提取4次(30ml，30ml，20ml，20ml)，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次25ml，弃去氨试液，再用正丁醇饱和的水25ml洗涤，正丁醇液蒸干，残渣用甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取滤液即得。