CN102068553B

CN102068553B - 一种治疗气滞血瘀所致乳癖制剂的hplc指纹图谱的构建方法

Info

Publication number: CN102068553B
Application number: CN2010105765798A
Authority: CN
Inventors: 董迪; 陈维; 张剑; 朱丹妮; 余伯阳
Original assignee: TAIHUA PHARMACEUTICAL CO Ltd HARBIN
Current assignee: TAIHUA PHARMACEUTICAL CO Ltd HARBIN
Priority date: 2010-12-07
Filing date: 2010-12-07
Publication date: 2013-02-20
Anticipated expiration: 2030-12-07
Also published as: CN102068553A

Abstract

本发明涉及一种乳癖消制剂的HPLC指纹图谱的构建方法，包括供试品溶液的制备、对照品溶液的制备、各原料药与成品之间的相关性的测定；用高效液相色谱仪测定，以对照品的色谱峰相对保留时间和峰面积为1，计算供试品相对保留时间和相对峰面积，即得到乳癖消制剂HPLC标准指纹图谱。并由此方法所得到的乳癖消制剂HPLC标准指纹图谱在203nm下归属于芍药的指纹图谱具有2个共有峰；归属于玄参的指纹图谱具有4个共有峰；归属于三七的指纹图谱具有6个共有峰；归属于夏枯草的指纹图谱具有1个共有峰；归属于红花的指纹图谱具有3个共有峰；归属于木香的指纹图谱具有5个共有峰；归属于连翘的指纹图谱具有2个共有峰。

Description

一种治疗气滞血瘀所致乳癖制剂的HPLC指纹图谱的构建方法

技术领域

本发明涉及一种乳癖消制剂的检测方法，特别涉及通过HPLC指纹图谱对乳癖消制剂进行检测的方法。本发明还涉及了乳癖消制剂的HPLC标准指纹图谱。

背景技术

中药指纹图谱是指某种或几种中药材中所共有的，具有特征性的某类成分的色谱或光谱的图谱。当前，中药指纹图谱质量控制技术作为控制中药质量均一性和稳定性的检测手段，是中药现代化的关键技术之一，这对有效地控制中药材的质量有重要意义。色谱指纹图谱质量控制技术是当前中药质量研究的亮点。对于成份复杂的中药，过去那种以单一有效成分作为其质量控制指标的做法是不全面的，用“盲人摸象”做比喻是再贴切不过的了。而色谱指纹图谱质量控制模式则以色谱分析为手段，从中获取反映中药内在质量的信息，通过对指纹特征的分析比较，评价中药内在质量的真实性、一致性和稳定性，这是现阶段综合评价中药质量的最优技术，国家药品监督管理局已要求中药制剂实施指纹图谱质量控制。据报道，日本汉方药主要生产企业在于20世纪80年代就已经在企业内部采用液相指纹图谱控制质量，美国、德国、法国等国家亦对植物草药采用指纹图谱质量控制技术。随着中医中药的推广应用，指纹图谱作为中草药及其提取物质量控制方法，目前已为国际所共识。但目前中药植物的指纹图谱往往采用单一植物，对多种中药材合成的中成药复方制剂的质量图谱研究仍处于起步阶段。

乳癖消制剂是纯中药制剂，由鹿角、昆布、鸡血藤、赤芍、漏芦、玄参、夏枯草、红花、蒲公英、天花粉、三七、海藻、木香、丹皮、连翘十五味药材制成，具有活血化瘀，软坚散结的功效，用于治疗气滞血瘀所致乳癖，乳腺小叶增生，卵巢囊肿，子宫肌瘤。在中国专利CN 1360932A，CN1621047A中都公开了同样配方的乳癖消制剂。2005版中国药典第一部也公开了一种治疗乳腺疾病的乳癖消片，也是由上述药物制备而成的。

中国药典2005年版一部所载的乳癖消片质量标准采用薄层色谱法鉴别三七皂苷R1和人参皂苷Rb1及Rg1，没有含量测定项，不利于药品的质量控制。CN101700306A中公开了一种乳癖消制剂的检测方法，使用薄层色谱法测定三七、芍药和玄参的有效成分，再结合HPLC法测定乳癖消制剂中三七中的三七皂苷R1、人参皂苷Rb1及Rg1的含量，其不足之处在于：

1.CN101700306A采用的检测方法需要既进行薄层色谱法定性，又要采用HPLC定量，步骤繁琐，而且乳癖消制剂含有十五味药材的有效成分，仅仅测定其中的3个药材不足以全面对该复方制剂的质量进行控制，没有对其中主要多味药材中的化学成分进行全面、系统的检测。

2.不能全面监控中间体，成品的质量。

综上所述，现有技术中对乳癖消制剂的检测方法存在检测方法繁琐，定量、定性的有效成分少，不能快速、全面地对乳癖消制剂进行检测和鉴定等缺陷。

发明内容

本发明提供一种通过HPLC指纹图谱对乳癖消制剂进行检测的方法，其目的是克服上述现有技术中的不足之处以达到对乳癖消制剂进行快速、稳定地质量控制。该方法采用HPLC线性梯度洗脱在一个流动相系统首次同时检出复方中七味药材成分，从色谱峰的特征和相似度结果判断乳癖消制剂样品的合格与否，从整体上全面反映乳癖消制剂所用药材内在质量，不仅能全面反映乳癖消制剂成品的质量，还可依据成品、半成品的指纹图谱的变化来追根溯源寻找工艺操作中的问题。本发明还提供了乳癖消制剂的标准指纹图谱。

本发明的通过HPLC指纹图谱对乳癖消制剂进行检测的方法包括如下步骤：

(1)供试品溶液的制备：取乳癖消制剂10g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，超声的功率250W、频率33kHz，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，弃取初滤液，精密量取续滤液25ml，置蒸发皿中蒸干，残渣加水15ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液30ml充分洗涤，弃去氨试液，再用正丁醇饱和的水30ml洗涤，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

(2)对照品溶液的制备：精密称取羟基红花黄色素A、芍药苷、哈巴俄苷、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、连翘苷、熊果酸、去氢木香内酯适量，加甲醇使溶解，分别制成对照品溶液；各对照品浓度分别为(mg·mL^-1)：羟基红花黄色素A(0.13)，芍药苷(0.125)，哈巴俄苷(0.12)，熊果酸(0.06)，人参皂苷Rg1(1.2)，人参皂苷Rb1(0.8)，三七皂苷R1(0.3)，去氢木香内酯(0.02)，连翘苷(0.07)。

(3)乳癖消制剂HPLC指纹图谱的测定：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各70μl，进样，用高效液相色谱仪测定，以对照品的色谱峰相对保留时间和峰面积为1，计算供试品的相对保留时间和相对峰面积，即得乳癖消制剂HPLC指纹图谱；

其中所述高效液相色谱仪中的色谱柱，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；色谱柱：AlltimaC₁₈分析柱(4.6×250mm，5μm，Alltech，USA)；流动相：乙腈(A)一水(B)，其配比为乙腈10-95％，水90-5％；线性梯度洗脱；时间：0-108min；

梯度洗脱程序如下：

检测波长：203nm；柱温：30℃；流速：1.0ml·min^-1

其中供试品指纹图谱采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》进行评价，各检测波长下的相似度均大于0.80。

其成分之一的芍药、玄参、三七、夏枯草、红花、木香、连翘七味药材的HPLC指纹图谱的构建方法，与乳癖消制剂具有相同的检测条件并分别得到各自药材的指纹图谱。

乳癖消制剂的剂型是任何一种药剂学上所说的剂型。

本发明乳癖消制剂HPLC指纹图谱的构建方法得到的HPLC指纹图谱，其特殊之处在于，所述乳癖消制剂HPLC指纹图谱在203nm下归属于芍药的指纹图谱具有2个特征峰；归属于玄参的指纹图谱具有4个特征峰；归属于三七的指纹图谱具有6个特征峰；归属于夏枯草的指纹图谱具有1个特征峰；归属于红花的指纹图谱具有3个特征峰；归属于木香的指纹图谱具有5个特征峰；归属于连翘的指纹图谱具有2个特征峰；所述图谱的图形如说明书附图中图1、图2和/或图6中的所示的图谱。

本发明的目的还可以通过以下措施来达到：这种上述乳癖消制剂HPLC指纹图谱的构建方法得到的HPLC指纹图谱，其特殊之处在于：

所述乳癖消制剂HPLC指纹图谱203nm的共有峰为(1)、(2)、(3)、(4)、(5)、(6)、(7)、(8)、(9)、(10)、(11)、(12)、(13)、(14)、(15)、(16)、(17)、(18)、(19)、(20)、(21)、(22)22个峰；其中，归属于芍药的共有峰为(1)、(2)2个峰；归属于玄参的共有峰为(7)、(15)、(19)、(20)4个峰；归属于三七的共有峰为(3)、(5)、(10)、(11)、(13)、(18)6个峰；归属于夏枯草的共有峰为(21)1个峰；归属于红花的共有峰为(8)、(19)、(22)3个峰；归属于木香的共有峰为(4)、(9)、(14)、(16)、(17)5个峰；归属于连翘的共有峰为(6)、(12)2个峰；所述图谱的图形如说明书附图中图1、图2和/或图6所示的图谱。

利用标准品对HPLC指纹图谱中主要峰进行比较确定：2号峰为芍药苷、3号峰为三七皂苷R1、5号峰为人参皂苷Rg1、6号峰为连翘苷、7号峰为哈巴俄苷、10号峰为人参皂苷Rb1、16号峰为去氢木香内酯、21号峰为熊果酸。

本发明相比现有技术具有如下优点：

1、本发明选用HPLC作为乳癖消制剂的检测方法，以超声法作为提取方法，以萃取作为纯化方法，该方法和条件简便，具有良好的可操作性，易于推广。

2、本发明采用的HPLC线性梯度洗脱条件在一个流动相系统首次同时检出乳癖消制剂中7味药材，不仅包括了现有技术中乳癖消制剂质量控制的所有指标，而且比它们有所提高，能更准确、全面地表达该产品的特征。

3、本发明的乳癖消制剂指纹图谱中所检测的7味药材的色谱峰互不干扰，专属性好。

4、本发明的乳癖消制剂的检测方法，其测定的精密度试验、重复性试验、稳定性试验的相似度评价都表明，该方法检测结果准确、稳定性高。

5、本发明的乳癖消制剂的检测方法对有效成分即能定性又能定量，可适用于监控癖消制剂的原料药材、中间体和成品的质量以及生产工艺的质量控制，适用范围广。

附图说明

图1是乳癖消颗粒203nm的HPLC参照指纹图谱。

图2是混标203nm的HPLC指纹图谱。

图3是乳癖消颗粒精密度(203nm)试验相似度评价结果示意图。

图4是乳癖消颗粒重复性(203nm)试验相似度评价结果示意图。

图5是乳癖消颗粒稳定性(203nm)试验相似度评价结果示意图。

图6是乳癖消颗粒指纹图谱各成分峰归属图谱；

该图中字母分别代表：a芍药；b玄参；c三七；d夏枯草；e红花；f木香；g连翘。

图7是乳癖消颗粒批间(203nm)相似度评价结果示意图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详述：

乳癖消制剂由鹿角、昆布、鸡血藤、赤芍、漏芦、玄参、夏枯草、红花、蒲公英、天花粉、三七、海藻、木香、丹皮、连翘十五味药材制成，其剂型包括：胶囊剂、颗粒剂、片剂或贴剂等药学上常见的剂型。

实施例1：乳癖消颗粒HPLC指纹图谱的构建方法及乳癖消颗粒HPLC指纹图谱

1、仪器与试药

1.1仪器

Agilent1100高效液相色谱仪(包括HPG1322A在线脱气、HPG1311A四元泵、HPG1316A柱温箱、HPG1314A VWD紫外检测器及chemstation色谱工作站)；3104LOT I.D.手动进样器(Rheodyne，USA)；超纯水器(Millipore，France)；PB303-N电子精密天平(Mettler-Toledo，Switzerland)；HH-2数显恒温水浴锅(常州国华电器有限公司)；KH-250DB超声波清洗器(昆山禾创超声仪器有限公司)色谱柱：AlltimaC18分析柱(4.6×250mm，5μm，Alltech，USA)。

1.2试药

对照品

对照药材：对照药材芍药、玄参、三七、夏枯草、红花、木香、连翘均购自南京传统中医门诊部。

乳癖消颗粒：哈尔滨泰华药业股份有限公司产品，国药准字Z19990028，为颗粒剂，每袋装8g，相当于原药材6g。

2、方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：AlltimaC₁₈分析柱(4.6×250mm，5μm，Alltech，USA)

流动相：乙腈(A)-水(B)，梯度洗脱，洗脱程序见表1

检测波长：203nm；柱温：30℃；流速：1.0ml·min^-1

表1梯度洗脱的程序

2.2指纹图谱制备

2.2.1供试品溶液的制备：取乳癖消颗粒装量差异项下的内容物，研细，取10g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率33kHz)30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，弃取初滤液，精密量取续滤液25ml，置蒸发皿中蒸干，残渣加水15ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液30ml充分洗涤，弃去氨试液，再用正丁醇饱和的水30ml洗涤，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，0.45μm滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.2.2对照品溶液的制备：精密称取羟基红花黄色素A、芍药苷、哈巴俄苷、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、连翘苷、熊果酸、去氢木香内酯适量，加甲醇使溶解，分别制成对照品溶液；各对照品浓度分别为(mg·mL^-1)：羟基红花黄色素A(0.13)，芍药苷(0.125)，哈巴俄苷(0.12)，熊果酸(0.06)，人参皂苷Rg1(1.2)，人参皂苷Rb1(0.8)，三七皂苷R1(0.3)，去氢木香内酯(0.02)，连翘苷(0.07)；

2.2.3乳癖消颗粒HPLC指纹图谱的测定：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各70μl，进样，用高效液相色谱仪测定，即得乳癖消颗粒HPLC指纹图谱见附图1，混标的指纹图谱见附图2。

2.2.4主要峰的定性：通过与对照品比较确定，2号峰为芍药苷、3号峰为三七皂苷R1、5号峰为人参皂苷Rg1、6号峰为连翘苷、7号峰为哈巴俄苷、10号峰为人参皂苷Rb1、16号峰为去氢木香内酯、21号峰为熊果酸。

2.3指纹图谱精密度试验

2.3.1取同一个乳癖消颗粒溶液，连续进样6次，检测指纹图谱，采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》软件进行数据处理：以6批供试品溶液指纹图谱作为样本集，经软件系统生成对照图谱(Standard Chromatographie Project，采用中位数法，时间窗宽度：0.1)，以此为基准，计算样本图谱与对照图谱的相似度，结果显示仪器精密度良好，相似度均大于0.80，见表2，附图3。

表2指纹图谱精密度试验的相似度结果

2.4指纹图谱重现性试验

2.4.1取同一批乳癖消颗粒6份，按药材样品溶液制备项下方法制备，分别进样，采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》软件进行数据处理：以6批供试品溶液指纹图谱作为样本集，经软件系统生成对照图谱(Standard Chromatographie Project，采用中位数法，时间窗宽度：0.1)，以此为基准，计算样本图谱与对照图谱的相似度，结果显示样品重复性良好，相似度均大于0.80，见表3，附图4。

表3指纹图谱重现性试验的重复性结果

2.5指纹图谱稳定性试验

2.5.1取一个编号的乳癖消颗粒样品溶液，分别在0、2、4、8、12、24小时进样，检测指纹图谱，采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》软件进行数据处理：以6批供试品溶液指纹图谱作为样本集，经软件系统生成对照图谱(Standard ChromatographieProject，采用中位数法，时间窗宽度：0.1)，以此为基准，计算样本图谱与对照图谱的相似度，结果显示样品稳定性良好，相似度均大于0.80，见表4，附图5。

表4指纹图谱稳定性试验结果

2.6成品与各原料药材的相关性及特征峰归属

2.6.1供试品溶液的制备：将芍药、玄参、三七、夏枯草、红花、木香、连翘这七味药材分别剪碎研碎，各取3克，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率33kHz)30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，弃取初滤液，精密量取续滤液25ml，置蒸发皿中蒸干，残渣加水15ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液30ml充分洗涤，弃去氨试液，再用正丁醇饱和的水30ml洗涤，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，0.45μm滤膜滤过，取续滤液，即得；

2.6.2各原药材HPLC指纹图谱的测定：分别精密吸取各原药材溶液70μl，进样，用高效液相色谱仪测定，即得，见表5，附图6。

表5各特征峰的归属

PF：芍药苷；R1：三七皂苷R1；Rg1：人参皂苷Rg1；PH：连翘苷；Ha：哈巴俄苷；Rb1：人参皂苷Rb1；Dl：去氢木香内酯；UA：熊果酸

所述乳癖消制剂HPLC指纹图谱203nm的共有峰为(1)、(2)、(3)、(4)、(5)、(6)、(7)、(8)、(9)、(10)、(11)、(12)、(13)、(14)、(15)、(16)、(17)、(18)、(19)、(20)、(21)、(22)22个峰；其中，归属于芍药的共有峰为(1)、(2)2个峰；归属于玄参的共有峰为(7)、(15)、(19)、(20)4个峰；归属于三七的共有峰为(3)、(5)、(10)、(11)、(13)、(18)6个峰；归属于夏枯草的共有峰为(21)1个峰；归属于红花的共有峰为(8)、(19)、(22)3个峰；归属于木香的共有峰为(4)、(9)、(14)、(16)、(17)5个峰；归属于连翘的共有峰为(6)、(12)2个峰。

2.7批间相似度评价

2.7.1供试品溶液的制备：取10批不同批号的乳癖消颗粒，各精密称取10克，按药材样品溶液制备项下方法制备，分别进样，采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》软件进行数据处理：以10批供试品溶液指纹图谱作为样本集，经软件系统生成对照图谱，以此为基准，计算样本图谱与对照图谱的相似度，评价批次间稳定性，结果显示10批样品的相似度良好，均在0.80以上，见表7，附图7。

2.7.2指纹图谱条件：

色谱柱：AlltimaC₁₈分析柱(4.6×250mm，5μm，Alltech，USA)

流动相：乙腈(A)-水(B)，梯度洗脱，洗脱程序见表6

检测波长：203nm；柱温：30℃；流速：1.0ml·min^-1

表6梯度洗脱的程序

表7批间相似度结果

除上述实施例外，本发明还可以有其他实施方式。凡采用等同替换或等效变换形成的技术方案，均落在本发明要求的保护范围。

Claims

1.一种治疗气滞血瘀所致乳癖的制剂的HPLC指纹图谱的构建方法，其特征是它包括以下步骤：

所述制剂是纯中药制剂，由鹿角、昆布、鸡血藤、赤芍、漏芦、玄参、夏枯草、红花、蒲公英、天花粉、三七、海藻、木香、丹皮、连翘十五味药材制成，

(1)供试品溶液的制备：取上述制剂10g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声功率250W，频率33kHz处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，弃取初滤液，精密量取续滤液25ml，置蒸发皿中蒸干，残渣加水15ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液30ml充分洗涤，弃去氨试液，再用正丁醇饱和的水30ml洗涤，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

(2)对照品溶液的制备：精密称取羟基红花黄色素A、芍药苷、哈巴俄苷、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、连翘苷、熊果酸、去氢木香内酯适量，加甲醇使溶解，分别制成对照品溶液；各对照品浓度分别为：羟基红花黄色素A浓度为0.13mg·mL^-1，芍药苷浓度为0.125mg·mL^-1，哈巴俄苷浓度为0.12mg·mL^-1，熊果酸浓度为0.06mg·mL^-1，人参皂苷Rg1浓度为1.2mg·mL^-1，人参皂苷Rb1浓度为0.8mg·mL^-1，三七皂苷R1浓度为0.3mg·mL^-1，去氢木香内酯浓度为0.02mg·mL^-1，连翘苷浓度为0.07mg·mL^-1；

(3)所述制剂的HPLC指纹图谱的测定：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各70μl，进样，用高效液相色谱仪测定，以对照品的色谱峰相对保留时间和峰面积为1，计算供试品的相对保留时间和相对峰面积，即得所述制剂HPLC指纹图谱；

其中所述高效液相色谱仪中的色谱柱，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为乙腈∶水，其配比为乙腈10-95％，水90-5％；线性梯度洗脱；时间：0-108min；检测波长：203nm；柱温：30℃；流速：1.0ml·min^-1

其中供试品指纹图谱采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》进行评价，各检测波长下的相似度均大于0.80；

其中所述制剂的HPLC指纹图谱在203nm下归属于芍药的指纹图谱具有2个特征峰：1号峰和2号峰；归属于玄参的指纹图谱具有4个特征峰：7号峰、15号峰、19号峰和20号峰；归属于三七的指纹图谱具有6个特征峰：3号峰、5号峰、10号峰、11号峰、13号峰和18号峰；归属于夏枯草的指纹图谱具有1个特征峰：21号峰；归属于红花的指纹图谱具有3个特征峰：8号峰、19号峰和22号峰；归属于木香的指纹图谱具有5个特征峰：4号峰、9号峰、14号峰、16号峰和17号峰；归属于连翘的指纹图谱具有2个特征峰：6号峰和12号峰。

2.根据权利要求1所述的HPLC指纹图谱的构建方法，其中线性梯度洗脱的条件为：

0～6min时，流动相为10％乙腈和90％水；

6～10min时，流动相为12％乙腈和88％水；

10～30min时，流动相为29％乙腈和71％水；

30～50min时，流动相为34％乙腈和66％水；

50～55min时，流动相为42％乙腈和58％水；

55～108min时，流动相为95％乙腈和5％水。

3.根据权利要求1或2所述的HPLC指纹图谱的构建方法，其特征是：其成分之一的芍药、玄参、三七、夏枯草、红花、木香、连翘七味药材的HPLC指纹图谱的构建方法，与上述制剂具有相同的检测条件并分别得到各自药材的指纹图谱。

4.根据权利要求1或2所述的HPLC指纹图谱的构建方法，其特征是：在203nm波长检测下利用各标准品对主要峰进行比较确定：

2号峰为芍药苷、3号峰为三七皂苷R1、5号峰为人参皂苷Rg1、6号峰为连翘苷、7号峰为哈巴俄苷、10号峰为人参皂苷Rb1、16号峰为去氢木香内酯、21号峰为熊果酸。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的HPLC指纹图谱的构建方法，其特征是：上述制剂的剂型是任何一种药剂学上所说的剂型。

6.根据权利要求5所述的HPLC指纹图谱的构建方法，其特征是：上述制剂的剂型是颗粒剂。