CN104237422B

CN104237422B - 复方木尼孜其制剂的指纹图谱检测方法

Info

Publication number: CN104237422B
Application number: CN201410555722.3A
Authority: CN
Inventors: 田芳; 苏海娣; 程雪梅; 马璇; 刘腊才; 刘子甲; 王长虹
Original assignee: XINJIANG UIGUR PHARMACEUTICAL CO Ltd
Current assignee: XINJIANG UIGUR PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date: 2014-10-17
Filing date: 2014-10-17
Publication date: 2015-11-18
Anticipated expiration: 2034-10-17
Also published as: CN104237422A

Abstract

本发明公开了一种复方木尼孜其制剂的指纹图谱检测方法，该方法取复方木尼孜其颗粒作为供试品溶液，再取哈马林作对照品溶液；分别取对照品溶液与供试品溶液注入高效液相色谱仪，记录60分钟内的色谱图，用指纹图谱软件对图谱进行处理，通过对比所得复方木尼孜其制剂的指纹图谱，确定共有峰9个，得到标准指纹图谱。本发明所述方法建立的复方木尼孜其制剂HPLC指纹图谱与对照图谱的相似度均大于0.9，能有效的表征其质量，有利于全面监控产品的质量；避免了复方木尼孜其制剂质量控制的单一性和片面性，减少了人为处理产品质量达标的可能性。该方法简便、稳定、精密度高、重现性好，能从整体特征面貌上控制复方木尼孜其制剂的质量，为复方木尼孜其制剂的质量控制提供科学的依据。

Description

复方木尼孜其制剂的指纹图谱检测方法

技术领域

本发明涉及一种复方木尼孜其制剂的指纹图谱检测方法及其指纹图谱，属于中药检测领域。

背景技术

复方木尼孜其制剂收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》维吾尔药分册。标准号为WS₃-BW-0161-98。本方剂收载于维吾尔族古籍著名药典《卡日巴丁卡德尔》，至今已有1500年的历史。复方木尼孜其制剂处方由茴香根皮、洋甘菊、芹菜根、骆驼蓬子、茴芹果等药材组成。用于调节体液及气质，为四种异常体液的成熟剂。复方木尼孜其制剂为多组分复杂体系，因此评价其质量应采用与之相适应的，能提供丰富鉴别信息的检测方法，但现行的显微鉴别、理化鉴别等方法都不足以解决这一问题，建立指纹图谱将能较为全面地反映其所含化学成分的种类与数量，进而对药品质量进行整体描述和评价，为控制和保证产品质量的稳定性提供保障。

目前，对复方木尼孜其制剂的鉴定，往往是选取复方木尼孜其制剂的一两种中药成分进行鉴定，比如其现行标准中使用骆驼蓬子对照药材对其进行鉴别；还有文献公开了复方木尼孜其制剂中甘草酸铵HPLC含量测定方法。

复方木尼孜其制剂是由茴香根皮、洋甘菊、芹菜根等制成的，临床报道其可以治疗痤疮、湿疹等症，其治疗效果已经得到临床的验证，并且在不断发掘其效果，能够保证药物的质量以及复方木尼孜其制剂中有效成分含量，是决定复方木尼孜其制剂疗效的基础。如果用一两种成分的活性成分来说明复方木尼孜其制剂的内在质量，具有一定的片面性，指纹图谱作为中草药及其提取物的质量控制方法，目前已经成为国际共识。如何能更全面地以复方木尼孜其制剂中化学成分为指标建立宏观指纹图谱的方法却未见报道。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种复方木尼孜其制剂的指纹图谱检测方法，该方法是由取复方木尼孜其颗粒加入水，加热溶解，冷却，采用水饱和正丁醇萃取，合并萃取液，蒸干后加入甲醇溶解过滤，作为供试品溶液；再取哈马林对照品溶液；分别取对照品溶液与供试品溶液注入高效液相色谱仪，记录60分钟内的色谱图，用指纹图谱软件对图谱进行处理，即得复方木尼孜其制剂的指纹图谱。通过对比所得复方木尼孜其制剂的指纹图谱，确定共有峰9个，得到标准指纹图谱。本发明所提供的方法建立的复方木尼孜其制剂HPLC指纹图谱与对照图谱的相似度均大于0.9，能有效的表征其质量，有利于全面监控产品的质量；本发明建立了复方木尼孜其制剂HPLC特征指纹图谱共有模式，标定了9个共有峰，并成功的表征了复方木尼孜其制剂中所含3种药材(骆驼蓬子、甘草、黑种草子)的特征成分，建立的指纹图谱技术含量高，避免了复方木尼孜其制剂质量控制的单一性和片面性，减少了人为处理产品质量达标的可能性。该方法简便、稳定、精密度高、重现性好，能从整体特征面貌上控制复方木尼孜其制剂的质量，保证其质量稳定、可控，从而确保复方木尼孜其制剂的安全性和有效性，为复方木尼孜其制剂的质量控制提供科学的依据。

本发明中所述的一种复方木尼孜其制剂的指纹图谱检测方法，该方法以哈马林对照品为参照，采用高效液相色谱法测定其指纹图谱，具体操作按下列步骤进行：

a、供试品溶液的制备：取复方木尼孜颗粒15g，精密称定，加入10-30ml水，加热溶解，冷却，采用水饱和正丁醇萃取2-3次，每次10-40ml，合并萃取液，蒸干后加入浓度为30-70％甲醇5ml溶解过滤，过0.22μm的微孔滤膜，取续滤液，作为供试品溶液；

b、对照品溶液的制备：取哈马林对照品，精密称定，加入甲醇制成每lml含哈马林0.3mg的溶液，过0.22μm的微孔滤膜，取续滤液作为对照品溶液；

c、测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5-15μl，注入高效液相色谱仪，记录60分钟内的色谱图，用指纹图谱软件对图谱进行处理，即得复方木尼孜其颗粒的指纹图谱。

步骤c中高效液相色谱测定的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以含0.6％乙酸的0.68％乙酸铵缓冲盐溶液为流动相B，梯度洗脱，流动相A、B的比例变化为：0-5min，A相5％，B相95％；5-25min，A相18％，B相82％；25-30min，A相18％，B相82％；30-45min，A相32％，B相68％；45-60min，A相70％，B30％；流速0.5-1.5ml·min-1，柱温28-42℃，采用蒸发光散射检测器温度55-65℃，理论塔板数按哈马林峰计算应不低于2000。

步骤c中得到的复方木尼孜其制剂的指纹图谱中有9个共有峰，由这9个共有峰构成复方木尼孜其制剂的指纹特征，作为复方木尼孜其制剂成分的标准指纹图谱。

本发明所述的复方木尼孜其制剂由茴香根皮、骆驼蓬子、茴芹果、洋甘菊、芹菜根、菊苣子、黑种草子、菊苣根、香茅、香青兰子、甘草、罗勒子和蜀葵子十三种干药材按重量之比2∶2∶2∶1∶1∶1∶1∶1∶1∶1∶1∶1∶1的比例称取后水提煎煮三次，第一次2小时、第二次1.5小时，第三次1小时，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至在温度50℃下相对密度为1.32-1.35的清膏，该清膏即为复方木尼孜其提取物，再加入常用医学制药的适量辅料，制备成复方木尼孜其颗粒。

本发明与现有技术相比，具有以下优点：

1.本发明所提供的复方木尼孜其制剂的指纹图谱检测方法，建立的复方木尼孜其制剂HPLC指纹图谱与对照图谱的相似度均大于0.9，能有效的表征其质量，有利于全面监控产品的质量；

2.本发明建立了复方木尼孜其制剂HPLC特征指纹图谱共有模式，标定了9个共有峰，建立的指纹图谱技术含量高，9个共有峰中1号、5号、6号峰为药材骆驼蓬子的特征性成分，分别为鸭嘴花碱、哈马林、哈明；4号、9号峰为药材甘草的特征性成分，其中4号峰为甘草苷；8号峰为药材黑种草子的特征性成分；避免了复方木尼孜其制剂质量控制的单一性和片面性，减少了人为处理产品质量达标的可能性；

3.由于指纹图谱不是为了测定某个成分的精确含量，而是要充分反映化学成分的信息，其出峰较多，反映的信息较完全；各个峰吸收值良好，基线平稳，也避免了近紫外杂质峰较大吸收情况；

4.本发明所述复方木尼孜其制剂的指纹图谱检测方法，所得复方木尼孜其制剂指纹图谱的峰多，峰形好，易于鉴别，相似性高，准确可靠。

5.本发明所述复方木尼孜其制剂的指纹图谱检测方法，以复方木尼孜其颗粒为例，原因是市售的复方木尼孜其制剂仅有复方木尼孜其颗粒一种制剂类型。若出现其他复方木尼孜其制剂类型，因药物的物质基础没有改变，所含化学成分无差异，因此，本发明所述的复方木尼孜其制剂HPLC指纹图谱检测方法仍适用。

附图说明

图1为本发明测得的复方木尼孜其颗粒的共有模式图谱；

图2为本发明复方木尼孜其颗粒精密度HPLC指纹图谱；

图3为本发明复方木尼孜其颗粒重复性HPLC指纹图谱；

图4为本发明复方木尼孜其颗粒稳定性HPLC指纹图谱；

图5为本发明12个批次复方木尼孜其颗粒指纹图谱叠加图。

具体实施方式

实施例1(选择复方木尼孜颗粒)

a、供试品溶液的制备：取复方木尼孜颗粒15g，精密称定，加入10ml水，加热溶解，冷却，采用水饱和正丁醇萃取2次，每次10ml，合并萃取液，蒸干后加入体积浓度为30％甲醇5ml溶解，过滤，过0.22μm的微孔滤膜，取续滤液，作为供试品溶液；

c、测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入高效液相色谱仪，高效液相色谱测定的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以含0.6％乙酸的0.68％乙酸铵缓冲盐溶液为流动相B，梯度洗脱，流动相A、B的比例变化为：0-5min，A相5％，B相95％；5-25min，A相18％，B相82％；25-30min，A相18％，B相82％；30-45min，A相32％，B相68％；45-60min，A相70％，B30％；流速0.5-1.5ml·min-1，柱温28-42℃，采用蒸发光散射检测器温度55℃，理论塔板数按哈马林峰计算应不低于2000，记录60分钟内的色谱图，用指纹图谱软件对图谱进行处理，即得复方木尼孜其颗粒的指纹图谱中有9个共有峰，由这9个共有峰构成复方木尼孜其制剂的指纹特征，作为复方木尼孜其制剂成分的标准指纹图谱。

实施例2(选择复方木尼孜颗粒)

a、供试品溶液的制备：取复方木尼孜颗粒15g，精密称定，加入20ml水，加热溶解，冷却，采用水饱和正丁醇萃取3次，每次20ml，合并萃取液，蒸干后加入体积浓度为50％甲醇5ml溶解，过滤，过0.22μm的微孔滤膜，取续滤液，作为供试品溶液；

c、测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，高效液相色谱测定的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以含0.6％乙酸的0.68％乙酸铵缓冲盐溶液为流动相B，梯度洗脱，流动相A、B的比例变化为：0-5min，A相5％，B相95％；5-25min，A相18％，B相82％；25-30min，A相18％，B相82％；30-45min，A相32％，B相68％；45-60min，A相70％，B30％；流速0.5-1.5ml·min-1，柱温28-42℃，采用蒸发光散射检测器温度60℃，理论塔板数按哈马林峰计算应不低于2000，记录60分钟内的色谱图，用指纹图谱软件对图谱进行处理，即得复方木尼孜其颗粒的指纹图谱中有9个共有峰，由这9个共有峰构成复方木尼孜其制剂的指纹特征，作为复方木尼孜其制剂成分的标准指纹图谱。

实施例3(选择复方木尼孜颗粒)

a、供试品溶液的制备：取复方木尼孜颗粒15g，精密称定，加入30ml水，加热溶解，冷却，采用水饱和正丁醇萃取3次，每次40ml，合并萃取液，蒸干后加入体积浓度为70％甲醇5ml溶解，过滤，过0.22μm的微孔滤膜，取续滤液，作为供试品溶液；

c、测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各15μl，注入高效液相色谱仪，高效液相色谱测定的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以含0.6％乙酸的0.68％乙酸铵缓冲盐溶液为流动相B，梯度洗脱，流动相A、B的比例变化为：0-5min，A相5％，B相95％；5-25min，A相18％，B相82％；25-30min，A相18％，B相82％；30-45min，A相32％，B相68％；45-60min，A相70％，B30％；流速0.5-1.5ml·min-1，柱温28-42℃，采用蒸发光散射检测器温度65℃，理论塔板数按哈马林峰计算应不低于2000，记录60分钟内的色谱图，用指纹图谱软件对图谱进行处理，即得复方木尼孜其颗粒的指纹图谱中有9个共有峰，由这9个共有峰构成复方木尼孜其制剂的指纹特征，作为复方木尼孜其制剂成分的标准指纹图谱。

实施例4

供试品溶液的制备：取复方木尼孜颗粒15g，精密称定，加入30ml水，加热溶解，冷却，采用水饱和正丁醇萃取3次，每次40ml，合并萃取液，蒸干后加入体积浓度为70％甲醇5ml溶解，过滤，过0.22μm的微孔滤膜，取续滤液，作为供试品溶液；

精密度试验：取复方木尼孜其颗粒1份，制备供试品溶液，连续进样6次，分别对共有峰的相对保留时间及峰面积比值进行考察，结果各共有峰相对保留时间RSD小于0.24％，相对峰面积比值RSD小于1.35％，利用中国药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价系统A版”，将HPLC图谱导入，经多点校正和数据匹配，以平均数法生成对照图谱，相似度分别为0.989、0.995、0.997、0.997、0.989、0.997，见图3；

重复性试验：精密称取同一批复方木尼孜其颗粒6份，制备供试品溶液，分别进样，对共有峰的相对保留时间及峰面积比值进行考察，结果各共有峰相对保留时间RSD小于0.28％，相对峰面积比值RSD小于2.87％，利用中国药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价系统A版”，将HPLC图谱导入，经多点校正和数据匹配，以平均数法生成对照图谱，相似度分别为0.977、0.986、0.993、0.994、0.983、0.991，见图4；

稳定性试验：精密称取复方木尼孜其颗粒1份，制备供试品溶液，分别在时间0、2、4、8、12、24、36、48h进样分析，对共有峰的相对保留时间及峰面积比值进行考察，结果各共有峰相对保留时间RSD小于0.49％，相对峰面积比值RSD小于2.74％，利用中国药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价系统A版”，将HPLC图谱导入，经多点校正和数据匹配，以平均数法生成对照图谱，相似度分别为0.994、0.992、0.992、0.989、0.985、0.985、0.967、0.993，见图5。

实施例5

分别称取12批复方木尼孜其颗粒各15g，加入10ml水，加热溶解，冷却，采用水饱和正丁醇萃取3次，每次30ml，合并正丁醇液蒸干后加体积浓度70％甲醇5ml溶解，过滤，进样，对共有峰的相对保留时间及峰面积比值进行考察，结果见表1、表2；利用中国药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价系统A版”，将12批复方木尼孜其颗粒HPLC图谱导入，经多点校正和数据匹配，以平均数法生成对照图谱，15批相似度分别为0.989、0.989、0.991、0.987、0.991、0.988、0.986、0.994、0.979、0.990、0.967；

表1复方木尼孜其颗粒指纹对照图谱12批次共有峰相对保留时间

由表1可以看出，对12个批次复方木尼孜其颗粒共有峰的相对保留时间比值进行考察，结果各共有峰相对保留时间比值的RSD值小于1.30％。

表2复方木尼孜其颗粒指纹对照图谱12批次共有峰相对峰面积

由表2可以看出，对12个批次复方木尼孜其颗粒共有峰的相对峰面积比值进行考察，结果各共有峰相对峰面积比值的RSD值较大，说明这12批次复方木尼孜其颗粒中个别批次的成分含量具有一定的差异。

本发明所述的复方木尼孜其制剂的指纹图谱检测方法，该方法梯度洗脱过程中，流动相A、B的比例。

变化为：0-5min，A相5％，B相95％；5-25min，A相18％，B相82％；25-30min，A相18％，B相82％；30-45min，A相32％，B相68％；45-60min，A相70％，B30％；即梯度洗脱程序如下表：

表3复方木尼孜其颗粒指纹图谱梯度洗脱程序

结果表明，通过表3中流动相的梯度洗脱程序所得高效液相色谱图基线平稳，各色谱峰分离效果良好，峰形佳。

Claims

1.一种复方木尼孜其颗粒的指纹图谱检测方法，其特征在于该方法以哈马林对照品为参照，采用高效液相色谱法测定其指纹图谱，具体操作按下列步骤进行：

a、供试品溶液的制备：取复方木尼孜颗粒15g，精密称定，加入10-30ml水，加热溶解，冷却，采用水饱和正丁醇萃取2-3次，每次10-40ml，合并萃取液，蒸干后加入浓度为30-70%甲醇5ml溶解过滤，过0.22μm的微孔滤膜，取续滤液，作为供试品溶液；

c、测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5-15μl，注入高效液相色谱仪，高效液相色谱测定的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以含0.6%乙酸的0.68%乙酸铵缓冲盐溶液为流动相B，梯度洗脱，流动相A、B的比例变化为：0-5min，A相5%，B相95%；5-25min，A相18%，B相82%；25-30min，A相18%，B相82%；30-45min，A相32%，B相68%；45-60min，A相70%，B30%；流速0.5-1.5ml·min-1，柱温28-42℃，采用蒸发光散射检测器温度55-65℃，理论塔板数按哈马林峰计算应不低于2000，记录60分钟内的色谱图，用指纹图谱软件对图谱进行处理，即得复方木尼孜其颗粒的指纹图谱。

2.根据权利要求1所述的复方木尼孜其颗粒的指纹图谱检测方法，其特征在于步骤c中得到的复方木尼孜其制剂的指纹图谱中有9个共有峰，由这9个共有峰构成复方木尼孜其制剂的指纹特征，作为复方木尼孜其制剂成分的标准指纹图谱，其中9个共有峰中1号、5号、6号峰为药材骆驼蓬子的特征性成分，分别为鸭嘴花碱、哈马林、哈明；4号、9号峰为药材甘草的特征性成分，其中4号峰为甘草苷；8号峰为药材黑种草子的特征性成分。