CN102707006A - 穿破石配方颗粒的质量检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一种穿破石配方颗粒的质量检测方法，旨在提供一种测量结果准确，灵敏度高，精密度、稳定性好的质量检测方法；其技术要点是：该方法依次包括下述步骤：1）薄层色谱鉴别成分；2）高效液相色谱测定含量；其中，步骤1）所述的薄层色谱鉴别成分：分别制备供试品溶液和对照药材溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，置紫外光灯下检视；步骤2）所述的高效液相含量测定，分别制备对照品溶液和供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液3μl、供试品溶液10μl，注入液相色谱仪检测；属于化学检测技术领域。

Description

穿破石配方颗粒的质量检测方法
技术领域
本发明涉及一种检测方法，具体的说，是穿破石配方颗粒的质量检测方法，属于化学检测领域。
背景技术
穿破石配方颗粒是桑科植物小柘树的根经加工制成的颗粒，味淡，性凉，具有祛风利湿，活血通经之功效，主要用于治疗风湿关节疼痛，黄疸，淋浊，蛊胀，闭经，劳伤咳血，跌打损伤，疔疮痈肿等。与传统的中药煎剂相比，其具有免煎易服，易储存，携带方便等优点。《中国药典》2010年版一部并未收载穿破石药材品种，而中药配方颗粒经过一系列工序的加工后已不具药材的外形特征，性状鉴别亦明显不适用于中药配方颗粒。薄层色谱法操作简单，方便，适用于中药材及各种中药制剂的定性鉴别，高效液相色谱法则适用于各种制剂的含量测定。穿破石配方颗粒中含黄酮类化合物，其中有槲皮素和山奈素，本发明旨在建立一种穿破石配方颗粒的薄层色谱鉴别方法及同时测定槲皮素与山奈素含量的高效液相色谱方法，该方法可用于穿破石配方颗粒的质量控制，对保证产品质量的稳定性及临床用药的有效性与安全性具有重要意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种穿破石配方颗粒的质量检测方法，先采用薄层色谱鉴别成分，再采用高效液相色谱测定含量，该方法准确，灵敏度高，精密度、稳定性好。
本发明的技术方案是这样的：一种穿破石配方颗粒的质量检测方法，依次包括下述步骤：1）薄层色谱鉴别成分；2）高效液相色谱测定含量；
其中，步骤1）所述的薄层色谱鉴别：取本品粉末0.5g，加乙醚30ml，加热回流25～35分钟；滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取穿破石对照药材5g，加水50ml，煮沸30分钟，滤过，滤液加乙醚30ml振摇提取，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，置紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的蓝色、绿色荧光斑点；
步骤2）所述的高效液相含量测定：首先制备对照品溶液，分别精密称取槲皮素对照品、山奈素对照品适量，加甲醇制成每l ml含槲皮素16μg、山奈素38μg的混合溶液，即得；再制备供试品溶液，取本品粉末约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定方法：分别精密吸取对照品溶液3μl，供试品溶液l0μl，注入液相色谱仪，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.4％磷酸为流动相，DAD检测器检测，检测波长：367nm，柱温：30℃，流速：1ml/min；测定。
上述的一种穿破石配方颗粒的质量检测方法，其中，步骤1）所述的甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸的质量比为：14﹕4﹕1﹕2。
上述的一种穿破石配方颗粒的质量检测方法，其中，步骤2）所述的甲醇与0.4％磷酸的质量比为53﹕47。
与现有技术相比，本发明的优点在于：该方法简单、准确，灵敏度高，精密度、稳定性好，采用HPLC法同时测定穿破石配方颗粒中槲皮素和山奈素的含量，峰形好，分离度高，可作为穿破石配方颗粒的质量控制和考察工艺稳定性的有效技术手段，对提高产品质量具有重要意义。
附图说明
图1是本发明的穿破石配方颗粒薄层色谱图；
图2是本发明的穿破石配方颗粒高效液相色谱图。
其中：对照药材试验薄层色谱图A1；供试品第一次试验薄层色谱图B2；供试品第二次试验薄层色谱图C3；供试品第三次试验薄层色谱图D4；供试品第四次试验薄层色谱图E5；点样点11；绿色点22；蓝色点31；对照品HPLC色谱图A；供试品HPLC色谱图B；槲皮素峰1；山奈素峰2。
具体实施方式
下面结合具体实施方式，对本发明做进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制，任何人在本发明的权利要求范围内所做出的非实质性改变，仍在本发明的权利要求保护范围内。
本发明的所提供的穿破石配方颗粒的质量检测，依次包括下述步骤：1）薄层色谱鉴别成分；2）高效液相色谱测定含量；
薄层鉴别方法：本品粉末0.5g，加乙醚30ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取穿破石对照药材5g，加水50ml，煮沸30分钟，滤过，滤液加乙醚30ml振摇提取，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（14:4:1:2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm）下检视，参阅图1，在供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的蓝色、绿色荧光斑点，其中，对照药材检测结果是：对照药材试验薄层色谱图A1；供试品第一次试验薄层色谱图B2；供试品第二次试验薄层色谱图C3；供试品第三次试验薄层色谱图D4；供试品第四次试验薄层色谱图E5；点样点11；绿色点22；蓝色点31。
含量测定：照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录VID)测定。参阅图2，其中，A对照品HPLC色谱图；B供试品HPLC色谱图；槲皮素峰1；山奈素峰2：
1、仪器与试药
(1)仪器：Agilent 1100高效液相色谱仪，DAD检测器，四元梯度泵，G2170AA数据处理系统。
(2)试药：甲醇为色谱纯试剂（一级），水为双蒸水，其它试剂均为分析纯。槲皮素对照品（批号：100081-200406）、山奈素对照品（批号110861-200808）购于中国药品生物制品检定所。
2、实验条件
色谱条件：色谱柱：Agilent Zorbax Eclipse Cl8(4.6mm×250mm，5μm)柱；流动相：甲醇-0.4％磷酸(53：47)；检测波长：367nm；柱温：30℃，流速：1ml/min。
3、方法学考察
(1)线性范围的考察
分别精密吸取混合对照品溶液（每l ml含槲皮素16.06μg、山奈素38.74μg）lμl、2μl、3μl、4μl、5μl，注入液相色谱仪进行色谱测定，按上述色谱条件测定峰面积，并以峰面积(Y)对进样量(X)进行线性回归，得标准曲线。
槲皮素Y=3926.00975X+1.3622482，r=0.99998；
山奈素Y=3944.48166X+1.6999878，r=0.99998；
表明槲皮素在16.06～80.30ng、山奈素在38.74～193.70ng范围内呈线性关系，结果见表1-2。
表1槲皮素对照品测定结果
进样量（ng）   16.06   32.12   48.18   64.24   80.30
  峰面积   64.30   127.37   190.43   254.48   316.00
表2山奈素对照品测定结果
进样量（ng）   38.74   77.48   116.22   154.96   193.70
  峰面积   153.79   307.29   461.58   612.98   764.99
(2)精密度试验：精密吸取对照品溶液3μl，重复进样6次，测得峰面积积分值RSD均<2％，结果见表3。
表3精密度试验结果
  试验次数   槲皮素峰面积积分值   山奈素峰面积积分值
  1   190.32   465.12
  2   192.41   468.13
  3   193.11   460.60
  4   189.50   460.80
  5   193.43   469.90
  6   195.62   475.50
  RSD（%）   1.15   1.23
(3)稳定性试验：取同一供试品（批号：101001）溶液10μl，按含量测定项下方法测定5次，结果槲皮素、山奈素峰面积积分值的RSD(n=5)均<2％，表明8小时内稳定，结果见表4。
表4稳定性试验结果。
 时间（h）   槲皮素峰面积积分值   山奈素峰面积积分值
  0   155.64   430.12
  2   156.32   428.37
  4   156.45   434.05
  6   157.38   430.75
  8   153.20   435.61
  RSD（%）   1.01   0.69
(4)重复性试验：按拟定的含量测定方法，对同一批样品（批号：101001）分别制备5份供试液，测得槲皮素峰面积并计算含量，RSD<2％，结果见表5。
表5样品重复性试验(n=2)
Figure BDA00001701278300051
拟定的含量测定方法，对同一批样品（批号：101001）分别制备5份供试液，测得山奈素峰面积并计算含量，RSD<2％，结果见表6。
表6样品重现性试验(n=2)
Figure BDA00001701278300052
(5)加样回收率实验：取已知含量的样品（批号101001），分别精密加入一定量的槲皮素、山奈素对照品，按样品制备与测定方法，平行做6组，结果见表7-8。
表7槲皮素回收率测定结果
Figure BDA00001701278300061
表8山奈素回收率测定结果
Figure BDA00001701278300062
6.样品测定
取本品粉末约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。分别精密吸取对照品溶液3μl，样品供试液l0μl，按照上述色谱条件测定，结果见表9。
表9样品含量测定结果（n=2）
  批号 槲皮素含量（mg/g） 山奈素含量（mg/g） 总量（mg/g）
  101001   0.1946   0.5349   0.7295

Claims (3)

1.一种穿破石配方颗粒的质量检测方法，其特征在于，依次包括下述步骤：1）薄层色谱鉴别成分；2）高效液相色谱测定含量；
其中，步骤1）所述的薄层色谱鉴别成分：取本品粉末0.5g，加乙醚30ml，加热回流25～35分钟；滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取穿破石对照药材5g，加水50ml，煮沸30分钟，滤过，滤液加乙醚30ml振摇提取，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，置紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的蓝色、绿色荧光斑点；
步骤2）所述的高效液相含量测定，首先制备对照品溶液，分别精密称取槲皮素对照品、山奈素对照品适量，加甲醇制成每1ml含槲皮素16μg、山奈素38μg的混合溶液，即得；再制备供试品溶液：取本品粉末约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定方法：分别精密吸取对照品溶液3μl、供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.4％磷酸为流动相，DAD检测器检测，检测波长：367nm，柱温：30℃，流速：1ml/min；测定。
2.根据权利要求1所述的穿破石配方颗粒的质量检测方法，其特征在于，步骤1）所述的甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸的质量比为：14：4：1：2。
3.根据权利要求1所述的穿破石配方颗粒的质量检测方法，其特征在于，步骤2）所述的甲醇与0.4％磷酸的质量比为53：47。
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