CN101797277B - 金感胶囊的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗感冒的胶囊剂的检测方法，该胶囊剂是由金银花、穿心莲、板蓝根、蒲公英、对乙酰氨基酚、盐酸金刚烷胺和马来酸氯苯那敏制备而成。本发明在现有质量标准基础上增加了盐酸金刚烷胺、金银花和蒲公英的含量测定，改进了对乙酰氨基酚的含量测定方法。可以对金感胶囊的主要药物成分进行更有效控制，使得金感胶囊的质量监控水平有了很大的提高。本发明的应用，既更有利于生产厂家和监督管理部门对产品质量的监测，也可以为医疗部门和患者的治疗提供更好的保障。

Description

金感胶囊的检测方法

技术领域

本发明涉及一种胶囊剂的检测方法，特别是一种用于治疗感冒的胶囊剂(通用名称或药品名称金感胶囊)的检测方法，属于制药技术领域。

背景技术

金感胶囊是一种比较受市场欢迎的产品，具有清热解毒，疏风解表的功效，可用于流行性感冒，外感风热症，能治疗头痛，鼻塞，流涕，咳嗽和咽痛等症状。金感胶囊配方中的金银花、穿心莲、蒲公英、对乙酰氨基酚和盐酸金刚烷胺分别是金感胶囊的特征性指标成份。在现有的金感胶囊质量标准中，不包含金银花、蒲公英、盐酸金刚烷胺的含量检测方法，而且对乙酰氨基酚的含量检测方法也有不足，因此对产品质量的控制存在不足。为了更进一步保证该产品的质量及更有利于对该产品质量的监督、管理，所以有必要对该产品的检测进行改进，从而更进一步保证该产品的质量和疗效。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于，提供一种金感胶囊的检测方法。它在现有质量检测基础上增加了对盐酸金刚烷胺、金银花和蒲公英的含量测定，改进了对乙酰氨基酚的含量测定方法；可以对金感胶囊的主要药物成分进行更有效控制。

本发明的目的可通过下列技术方案来实现：金感胶囊的检测方法，按照重量份计，所述胶囊剂是用金银花250g、穿心莲250g、板蓝根250g、蒲公英250g、对乙酰氨基酚250g、盐酸金刚烷胺50g和马来酸氯苯那敏1.0g制备成1000粒胶囊剂；其特征在于，该检测方法包括以下步骤：

性状：本品为胶囊剂，内容物为棕黄色至棕褐色的颗粒及粉末；气微，味苦；

鉴别：(1)取本品(金感胶囊)内容物1g，研细，用水湿润，加入乙酸乙酯20ml，超声处理5分钟，弃去乙酸乙酯液，残渣自“加乙酸乙酯20ml”起同法重复处理1次，残渣加1mol/L盐酸溶液5滴，加乙酸乙酯20ml，超声处理5分钟，取乙酸乙酯液，残渣自“加乙酸乙酯20ml”起同法重复处理2次，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取金银花对照药材1g，同法制成对照药材溶液，再取绿原酸对照品，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各1μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上使成条状，以1∶15∶1∶1∶2的甲苯-乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm波长的紫外灯光下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的萤光斑点；

(2)取本品内容物2g，研细，加稀乙醇20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干。残渣加稀乙醇1ml使溶解。作为供试品溶液；另取板蓝根对照药材1g，同法制成对照药材溶液，再取精氨酸对照品，加稀乙醇制成1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各1～2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以19∶5∶5的正丁醇-冰醋酸-水为展开剂，展开，取出，热风吹干，喷以茚三酮试液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显示相同颜色的斑点；

(3)取本品内容物1g，研细，加甲醇5ml使溶解，超声处理10分钟，滤过，滤液作为供试品溶液，另取马来酸氯苯那敏对照品、盐酸金刚烷胺对照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2～4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以9∶1∶5∶1∶0.1的三氯甲烷-甲醇-丙酮-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显示相同颜色的斑点；

上述的治疗感冒的胶囊剂检测方法还包括：

检查：水份不得超过12.0％，其他应符合胶囊剂项下有关的各项规定；

含量测定：

(1)穿心莲，照高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以54∶46∶1的甲醇-水-冰醋酸为流动相；检测波长为251nm，理论板数按脱水穿心莲内酯峰计算应该不低于2000；

对照品溶液的制备：精密称取脱水穿心莲内酯对照品10mg，置10ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；

供试品溶液的制备：取装量差异项下的本品内容物，研细，取1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，加甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，续滤液用0.45μm的微孔滤膜滤过，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品每粒含穿心莲以脱水穿心莲内酯计，不得少于0.2mg；

(2)盐酸金刚烷胺和对乙酰氨基酚，采用HPLC-ELSD法测定。

色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以1.0％醋酸胺(pH＝3.6)-甲醇(75∶25)的溶液为流动相；蒸发光散射检测器漂移管温度为105℃，雾化气体为N₂，流速2.85L/min，检测波长249nm。

对照品溶液的制备：取盐酸金刚烷胺对照品25mg与对乙酰氨基酚对照品60mg，精密称定，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，取续滤液，即得；

供试品溶液的制备：取本品胶囊剂样品20粒，研细内容物，精密称取细粉适量(约相当于盐酸金刚烷胺50mg)，置50ml量瓶中，加甲醇使其溶解并稀释至刻度，超声提取20分钟，摇匀，滤过，精密吸取续滤液5ml，置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；

测定法：分别精密吸取对照品及供试品各20ul，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品每粒含对盐酸金刚烷胺应为标示量的85％～115％；每粒含对乙酰氨基酚应为标示量的90.0％～110.0％；

(3)金银花和蒲公英，照高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适应性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.5％磷酸溶液为流动相，梯度洗脱：流动相甲醇-0.5％磷酸溶液(0～20min，85∶15；20～25min，25∶75；25～30min，25∶75)；检测波长为327nm；流速：1mL/min

对照品溶液制备，精密称取绿原酸对照品1.0mg，置50mL棕色量瓶中，加50％甲醇40mL，超声溶解，加50％甲醇至刻度，摇匀，即得。

供试品溶液制备，取本品内容物0.1g，至25mL棕色量瓶中，甲醇定容，超声处理10min，摇匀后过滤，即得。

测定法，分别精密吸取绿原酸对照液以及供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以外标法计算绿原酸含量；

本品每粒含金银花和蒲公英以金银花和蒲公英总提取物-绿原酸(C₁₆H₁₈O₉)计，不得少于2.0mg。

前述的治疗感冒的胶囊剂检测方法中，治疗感冒的胶囊剂是按照下述方法制成的：

a、将穿心莲切制成12mm的段，得A品；

b、将板蓝根切制成12mm的段，得B品；

c、将金银花用水蒸气蒸馏、分离，得C品，药渣作为C1品备用；

d、将A品用85％乙醇提取2次，第一次加乙醇量为药材量的8倍，时间为2小时；第二次加乙醇量为药材量的6倍，时间为2小时，合并两次煎液，回收乙醇，浓缩成相对密度为1.35的浸膏，测量温度为55℃，得D品；

e、将B品、C1品与蒲公英混匀，加水煎煮两次，第一次加水量为药材量的7倍，时间为1.5小时；第二次加水量为药材量的5倍，时间为1.5小时，合并两次煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.15的浸膏，测量温度为55℃，得E品；将D品、E品混匀，与对乙酰氨基酚、盐酸金刚烷胺、马来酸氯苯那敏、混合制软材，用切割刀切割成14～20目的颗粒，并以90kg为一锅投入沸腾干燥机中，设置进风温度65～75℃，出风温度40～55℃，干燥2.5～3.0小时，将干燥的颗粒粉碎成20目的颗粒，并以270kg为一箱投入热风循环烘箱，设定干燥温度90℃，待温度上升达65～70℃保持干燥5.5～6.5小时，在干燥后的颗粒中喷入C品，总混，充填胶囊，包装，即得。

本发明在现有检测基础上增加了对盐酸金刚烷胺、金银花和蒲公英的含量测定；可以对金感胶囊的主要药物成分进行更有效控制，使得金感胶囊的质量监控水平有了很大的提高。既更有利于生产厂家和监督管理部门对产品质量的监测，也可以为医疗部门和患者的治疗提供更好的保障。

为了验证本发明检测方法的合理性，申请人对该方法进行了试验研究和筛选。

盐酸金刚烷胺和对乙酰氨基酚：

1、仪器：Agilent 1200系列高效液相色谱仪(美国Agilent公司)，美国公司、蒸发光散射检测仪(美国Alltech-500型)，AG-135电子天平(METTLER)；中兴伟业数显电热恒温水浴锅，超声清洗仪。

2、试药：甲醇为色谱纯(美国Fisher化学试剂公司)；水为双蒸水(自制)，其余试剂均为分析纯。金感胶囊由本公司提供(批号：20100122)；对乙酰氨基酚对照品(批号：100018-200408，供含量测定用)，盐酸金刚烷胺(批号：100426-200409)，均由中国药品生物制品检定所提供。

3、色谱条件：Aichrom C₁₈柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：1.0％醋酸胺(pH＝3.6)-甲醇(75∶25)；蒸发光散射检测器漂移管温度为105℃，雾化气体为N₂，流速2.85L/min，检测波长249nm。

4、系统适用性试验：分别取对乙酰氨基酚对照品溶液、盐酸金刚烷胺对照品溶液、供试品溶液、缺对乙酰氨基酚、盐酸金刚烷胺阴性供试品溶液(样品制备方法见下)注入液相色谱仪，记录色谱。本试验条件下，供试品溶液对乙酰氨基酚峰、盐酸金刚烷胺峰与其他成分能达到基线分离，阴性供试品溶液在对乙酰氨基酚、盐酸金刚烷胺出峰处无干扰。理论塔板数以对乙酰氨基酚、盐酸金刚烷胺峰计，应不低于1500。

5、对照品溶液的制备：精密称取盐酸金刚烷胺对照品约125mg与对乙酰氨基酚对照品约300mg，置25ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，备用。

6、盐酸金刚烷胺和对乙酰氨基酚线性关系考察：精密吸取上述对照品溶液2.0ml、2.5ml、3.0ml、3.5ml、4.0ml、4.5ml、5.0ml分别置于50ml量瓶中，，加水稀释至刻度，摇匀，在上述色谱条件下进样20μl，以进样量(μg)的对数为横坐标，以峰面积的对数为纵坐标，绘制标准曲线，得到盐酸金刚烷胺和对乙酰氨基酚的回归方程分别为：lgY＝1.743+2.056lgX，r＝0.9995；lgY＝2.245+1.805lgX，r＝0.9997。盐酸金刚烷胺和对乙酰氨基酚分别在4.0～10.0μg，9.6～24.0μg范围内线性关系良好，结果见表1和表2。

表1盐酸金刚烷胺线性关系考察

序号	1	2	3	4	5	6	7
								峰面积积分值(mAu·s)	128.16	152.08	179.96	214.64	245.32	271.70	300.78
盐酸金刚烷胺含量(μg)	4.0	5.0	6.0	7.0	8.0	9.0	10.0

序号	1	2	3	4	5	6	7
								峰面积积分值(mAu·s)	920.21	1144.05	1368.33	1602.13	1825.18	2044.87	2279.99
对乙酰氨基酚含量(μg)	9.6	12.0	14.4	16.8	19.2	21.6	24.0

表2对乙酰氨基酚线性关系考察

6、供试品提取方法的考察：

6.1提取溶剂的考察：取本品胶囊剂样品20粒，研细内容物，精密称取细粉适量(约相当于盐酸金刚烷胺50mg)，置50ml量瓶中，分别加入不同溶剂定溶至刻度，超声处理20min，摇匀，滤过，取续滤液进样，测定盐酸金刚烷胺和对乙酰氨基酚的含量，结果见表3。

表3不同提取溶剂的比较(n＝2)

提取溶剂	40％甲醇	60％甲醇	80％甲醇	甲醇	乙醇
						盐酸金刚烷胺含量(％)	99.93	99.48	99.10	99.67	82.12
对乙酰氨基酚含量(％	91.22	95.15	96.22	99.74	84.23

以上结果表明，采用40％甲醇、60％甲醇、80％甲醇、甲醇提取后得到的盐酸金刚烷胺、对乙酰氨基酚的含量都较乙醇提取的高；但是对乙酰氨基酚经甲醇提取的含量高于采用40％甲醇、60％甲醇、80％甲醇提取的，综合两种成分的含量，采用甲醇作为提取溶剂。

6.2提取时间的考察：取本品胶囊剂样品20粒，研细内容物，精密称取细粉适量(约相当于盐酸金刚烷胺50mg)，置50ml量瓶中，加甲醇并稀释至刻度，分别超声处理不同时间，摇匀，滤过，取续滤液进样，测定盐酸金刚烷胺、对乙酰氨基酚的含量，结果见表4。

表4不同超声处理时间的比较(n＝2)

超声时间(min)	5	10	20	30
					盐酸金刚烷胺含量(％)	87.28	89.22	98.97	99.17
对乙酰氨基酚含量(％)	84.12	87.02	99.42	99.28

表中显示，所考察时间内，超声处理20min，30min得到含量都较高，但是从考虑节约成本以及缩短检验周期考虑，确定超声处理时间为20min。

6.3提取方法的考察：取本品胶囊剂样品20粒，研细内容物，精密称取细粉适量(约相当于盐酸金刚烷胺50mg)，置50ml量瓶中，加甲醇并稀释至刻度，分别用不同的提取方法提取20min，提取完毕后，摇匀，滤过，取续滤液进样，测定盐酸金刚烷胺、对乙酰氨基酚含量，结果见表5。

表5不同提取方法的比较(n＝2)

提取方法	超声	回流	振摇提取
				盐酸金刚烷胺含量(％)	99.37	99.40	94.49
对乙酰氨基酚含量(％)	99.87	99.21	90.74

结果显示，超声处理法与回流提取法得到的盐酸金刚烷胺、对乙酰氨基酚含量差异并不显著，且超声处理方法相对简便易行，同时回流提取中供试品液有固体物成团块现象，所以确定提取方法为超声处理。

6.4结论：从上述试验结果得出，选择用甲醇超声处理20min作为供试品的提取方法较为适宜。

7、供试品溶液的制备：取本品胶囊剂(批号：20100122)样品20粒，研细内容物，精密称取细粉适量(约相当于盐酸金刚烷胺50mg)，置50ml量瓶中，加甲醇使其溶解并稀释至刻度，超声提取20分钟，摇匀，滤过，精密吸取续滤液5ml，置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，用0.45mm滤膜滤过，即得。

8、阴性对照品溶液的制备：另取不含盐酸金刚烷胺、对乙酰氨基酚的群药，按制备工艺制备阴性对照样品。取阴性对照样品适量，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照液。

9、精密度试验：精密吸取样品测定项下盐酸金刚烷胺、对乙酰氨基酚对照品溶液(0.2507mg/ml、0.6121mg/ml)，重复进样5次，每次20μlml，测定盐酸金刚烷胺、对乙酰氨基酚峰面积，RSD分别为0.64％、0.41％.，结果见表6。

表6精密度试验结果

序号	1	2	3	4	5	平均	RSD(％)
								盐酸金刚烷胺峰面积	154.78	156.37	155.04	155.11	159.45	156.15	0.64
对乙酰氨基酚峰面积	1139.78	1142.10	1149.03	1150.71	1142.27	1144.78	0.41

10、稳定性试验：精密吸取同一供试品(批号：20100122)溶液20μl，每隔2小时测定盐酸金刚烷胺、对乙酰氨基酚峰面积，结果见表7，表明供试品溶液中盐酸金刚烷胺、对乙酰氨基酚在8小时内稳定性良好。

表7稳定性试验

进样时间(h)	0	2	4	6	8	平均	RSD(％)
								盐酸金刚烷胺峰面积	147.98	143.53	146.44	149.29	150.04	147.46	1.75
对乙酰氨基酚峰面积	948.23	951.21	960.02	958.68	963.19	956.27	0.66

11、重复性试验：取本品胶囊剂样品20粒，研细内容物，精密称取细粉适量(约相当于盐酸金刚烷胺50mg)，按供试品溶液的制备方法平行制备5份供试品溶液，同等色谱条件测定盐酸金刚烷胺、对乙酰氨基酚峰面积，计算，结果见表8：

表8重复性试验

测定次数	1	2	3	4	5	平均值(％)	RSD(％)
								盐酸金刚烷胺(％)	98.78	98.28	99.71	99.99	97.20	98.79	1.14
对乙酰氨基酚(％)	100.23	100.85	99.06	99.70	101.28	100.22	0.88

12、回收率试验：称取已测定含量的制剂或其内容物(盐酸金刚烷胺平均含量为标示量的98.79％，对乙酰氨基酚平均含量为标示量的100.22％)，分别加入盐酸金刚烷胺、对乙酰氨基酚对照品适量，按供试品溶液的制备方法制备6份供试液，分别进样，测定盐酸金刚烷胺、对乙酰氨基酚峰面积，计算盐酸金刚烷胺、对乙酰氨基酚的平均回收率，结果见表9、表10：

表9供试品中盐酸金刚烷胺的回收率试验

表10供试品中对乙酰氨基酚的回收率试验

13、样品含量测定：取10批中试样品，按供试品溶液的制备方法分别制备供试液，同法测定，计算盐酸金刚烷胺、对乙酰氨基酚含量，结果见表11、表12。

表11本发明制剂中盐酸金刚烷胺的含量

表12本发明制剂中对乙酰氨基酚的含量

根据结果，根据十批样品中对盐酸金刚烷胺、乙酰氨基酚含量测定结果，规定本品中每粒含对盐酸金刚烷胺应为标示量的85％～115％；每粒含对乙酰氨基酚应为标示量的90.0％～110.0％。

金银花和蒲公英：

1、仪器：Agilent 1200系列高效液相色谱仪(美国Agilent公司)，TU-1800紫外分光光度计(北京普析)，AG-135电子天(METTLER)；中兴伟业数显电热恒温水浴锅，超声清洗仪。

2、试药：甲醇为色谱纯(美国Fisher化学试剂公司)；水为双蒸水(自制)，其余试剂均为分析纯。金感胶囊由本公司提供(批号：20100122)；绿原酸对照品(批号：110753-200413，供含量测定用)，由中国药品生物制品检定所提供。

3.检测波长的测定：取绿原酸对照品适量，以50％甲醇制成每1mL含0.025mg的溶液，置紫外分光光度计上扫描，波长扫描范围270-360nm，结果在327nm处有最大吸收。以此作为绿原酸含量测定的检测波长。

4、色谱条件的确定：Diamonsil ODS柱(4.6mm×250mm，5ìm)，迪马公司；流动相：甲醇-0.5％磷酸溶液；检测波长327nm。在以上色谱条件下，以样品液进样检测，采用梯度洗脱的方法，令绿原酸保留时间在10min左右，且初定全部成分在40min内洗脱完毕并使基线平衡以进下一针，以此调整确定合适的梯度。经过反复实验，筛选出以下较为适合的流动相洗脱梯度：

表13：流动相梯度洗脱表

时间	甲醇(％)	0.4％磷酸溶液(％)	流速(ml/min)
				20	85	15	1
25	25	75	1

30

25

75

1

5、阴性对照品溶液的制备：另取不含金银花、蒲公英的群药，按制备工艺制备阴性对照样品。取阴性对照样品适量，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照液。

6、系统适用性试验：取绿原酸对照品溶液、供试品溶液、缺金银花和蒲公英药材的阴性供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱。本试验条件下，供试品溶液绿原酸峰与其他成分能达到基线分离，阴性供试品溶液在绿原酸出峰处无干扰。理论塔板数以绿原酸峰计，应不低于1500。

7、对照品溶液的制备：精密称取绿原酸对照品10.0mg，置50ml棕色量瓶中，加50％甲醇40ml，超声溶解，加50％甲醇至刻度，得0.20mg/ml对照品溶液，备用。

8、绿原酸线性关系考察：精密吸取上述对照品溶液1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml、8.0ml、10.0ml分别置于50ml棕色量瓶中，甲醇定容至刻度，摇匀，吸取10μl，照以上色谱条件检测。以峰面积为横坐标，进样量为纵坐标做直线回归，得回归方程为Y＝0.0005X-0.0581，r＝0.9999，即在进样量为0.040μg～0.40μg内，色谱峰面积与进样量呈现良好的线性关系。结果见表14。

表14绿原酸线性关系考察

序号	1	2	3	4	5	6	7
								峰面积积分值(mAu·s)	193.21	278.36	359.03	425.58	516.45	743.96	916.20
盐酸金刚烷胺含量(μg)	0.04	0.08	0.12	0.16	0.20	0.32	0.40

9、供试品提取方法的考察：

9.1提取溶剂的考察：取本品胶囊剂样品20粒，研细内容物，精密称取细粉0.1g，置25ml棕色量瓶中，分别加入不同溶剂定溶至刻度，超声处理10min，摇匀，滤过，取续滤液进样，测定绿原酸的含量，结果见表15。

表15不同提取溶剂的比较(n＝2)

提取溶剂	50％甲醇	80％甲醇	甲醇	水	乙醇
						绿原酸含量(mg/g)	4.84	478	4.75	-	3.96

以上结果表明，采用50％甲醇、80％甲醇、甲醇提取后得到的绿原酸含量较高；而以水作为溶剂，目标峰受到干扰，无法测定；此外，采用50％、80％甲醇作为提取溶剂所得的色谱峰其峰形较差，对测定结果有一定的影响，综合考虑，采用甲醇作为提取溶剂较为适宜。

9.2提取时间的考察：取本品胶囊剂样品20粒，研细内容物，精密称取细粉0.1g，置25ml棕色量瓶中，加甲醇并稀释至刻度，分别超声处理不同时间，摇匀，滤过，取续滤液进样，测定绿原酸的含量，结果见表16。

表16不同超声处理时间的比较(n＝2)

超声时间(min)	5	10	20	30
					绿原酸含量(mg/g)	4.25	4.68	4.70	4.74

表中显示，所考察时间内，超声处理10min、20min、30min得到含量都较高，且差异并不显著，说明超声处理10min已基本提取完全，结合考虑节约成本以及缩短检验周期，故确定超声处理时间为10min。

9.3提取方法的考察：取本品胶囊剂样品20粒，研细内容物，精密称取细粉0.1g，置25ml棕色量瓶中，加甲醇并稀释至刻度，分别用不同的提取方法提取10min，提取完毕后，摇匀，滤过，取续滤液进样，测定绿原酸含量，结果见表17。

表17不同提取方法的比较(n＝2)

提取方法	超声	回流	振摇提取
				绿原酸暖含量(mg/g)	4.69	3.69	3.45

结果显示，超声处理法得到的绿原酸含量明显高于其他两种提取方法，且超声处理方法相对简便易行，所以确定提取方法为超声处理。

9.4结论：从上述试验结果得出，选择用甲醇超声处理10min作为供试品的提取方法较为适宜。

10、供试品溶液的制备：取本品胶囊剂(批号：20100122)样品20粒，研细内容物，精密称取细粉0.1g，置25ml棕色量瓶中，加甲醇使其溶解并稀释至刻度，超声提取10分钟，摇匀，滤过，用0.45mm滤膜滤过，即得。

11、精密度试验：精密吸取样品测定项下绿原酸对照品溶液(0.0192mg/ml)，重复进样5次，每次10μl，测定绿原酸峰面积，RSD为0.73％，结果见表18。

表18精密度试验结果

序号

1

2

3

4

5

平均

RSD(％)

绿原酸峰面积

509.36

510.17

500.96

505.28

507.59

506.67

0.73

12、稳定性试验：精密吸取同一供试品(批号：20100122)溶液10μl，每隔2小时测定绿原酸峰面积，结果见表19：

表19供试品中绿原酸稳定性试验

进样时间(h)	0	2	4	6	8	平均	RSD(％)
								绿原酸峰面积	652.38	642.43	643.21	659.69	665.74	652.69	1.56

表明供试品溶液中绿原酸在8小时内稳定性良好。

13、重复性试验：精密称取本品20粒，研细内容物，精密称取细粉0.1g，置25ml棕色量瓶中，按供试品溶液的制备方法平行制备5份供试品溶液，同等色谱条件测定绿原酸峰面积，计算，结果见表20：

表20供试品中绿原酸的重复性试验

测定次数	1	2	3	4	5	平均值(％)	RSD(％)
								绿原酸含量(mg/g)	6.72	6.69	6.78	6.71	6.64	6.71	0.76

14、回收率试验：称取已测定含量的制剂或其内容物(绿原酸含量6.71mg/g)，分别加绿原酸对照品适量，按供试品溶液的制备方法制备6份供试液，分别进样，测定绿原酸峰面积，计算绿原酸的平均回收率为100.17％、RSD为0.85％，结果见表21：

表21供试品中绿原酸的回收率试验

15、样品含量测定：取10批中试样品，按供试品溶液的制备方法分别制备供试液，同法测定，计算绿原酸含量(平均粒重0.45g)，结果见表22。

表22本发明制剂中绿原酸的含量

根据结果，根据十批样品中绿原酸含量平均值为3.051mg/粒，按均值下限20％定限度，计算得0.2441(mg/粒)，故暂定本品每粒含金银花和蒲公英以金银花和蒲公英总提取物-绿原酸(C₁₆H₁₈O₉)计，不得少于2.0mg。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的说明。

实施例：

一种治疗感冒的胶囊剂检测方法，按照重量份计，所述胶囊剂是用金银花250g、穿心莲250g、板蓝根250g、蒲公英250g、对乙酰氨基酚250g、盐酸金刚烷胺50g和马来酸氯苯那敏1.0g制备成1000粒胶囊剂；其特征在于，该检测方法包括以下步骤：

性状：本品为胶囊剂，内容物为棕黄色至棕褐色的颗粒及粉末；气微，味苦；

鉴别：(1)取本品内容物1g，研细，用水湿润，加入乙酸乙酯20ml，超声处理5分钟，弃去乙酸乙酯液，残渣自“加乙酸乙酯20ml”起同法重复处理1次，残渣加1mol/L盐酸溶液5滴，加乙酸乙酯20ml，超声处理5分钟，取乙酸乙酯液，残渣自“加乙酸乙酯20ml”起同法重复处理2次，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取金银花对照药材1g，同法制成对照药材溶液，再取绿原酸对照品，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各1μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上使成条状，以1∶15∶1∶1∶2的甲苯-乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm波长的紫外灯光下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的萤光斑点；

(2)取本品内容物2g，研细，加稀乙醇20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干。残渣加稀乙醇1ml使溶解。作为供试品溶液；另取板蓝根对照药材1g，同法制成对照药材溶液，再取精氨酸对照品，加稀乙醇制成1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各1～2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以19∶5∶5的正丁醇-冰醋酸-水为展开剂，展开，取出，热风吹干，喷以茚三酮试液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显示相同颜色的斑点；

(3)取本品内容物1g，研细，加甲醇5ml使溶解，超声处理10分钟，滤过，滤液作为供试品溶液，另取马来酸氯苯那敏对照品、盐酸金刚烷胺对照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2～4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以9∶1∶5∶1∶0.1的三氯甲烷-甲醇-丙酮-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显示相同颜色的斑点；

该检测方法还包括：

检查：水份不得超过12.0％，其他应符合胶囊剂项下有关的各项规定；

含量测定：

(1)穿心莲，照高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以54∶46∶1的甲醇-水-冰醋酸为流动相；检测波长为251nm，理论板数按脱水穿心莲内酯峰计算应该不低于2000；

对照品溶液的制备：精密称取脱水穿心莲内酯对照品10mg，置10ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；

供试品溶液的制备：取装量差异项下的本品内容物，研细，取1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，加甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，续滤液用0.45μm的微孔滤膜滤过，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品每粒含穿心莲以脱水穿心莲内酯计，不得少于0.2mg；

(2)盐酸金刚烷胺和对乙酰氨基酚，采用HPLC-ELSD法测定。

色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以1.0％醋酸胺(pH＝3.6)-甲醇(75∶25)的溶液为流动相；蒸发光散射器漂移管检测温度为105℃，雾化气体为N₂，流速2.85L/min，检测波长249nm。

对照品溶液的制备：取盐酸金刚烷胺对照品25mg与对乙酰氨基酚对照品60mg，精密称定，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，取续滤液，即得；

供试品溶液的制备：取本品胶囊剂样品20粒，研细内容物，精密称取细粉适量(约相当于盐酸金刚烷胺50mg)，置50ml量瓶中，加甲醇使其溶解并稀释至刻度，超声提取20分钟，摇匀，滤过，精密吸取续滤液5ml，置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液

测定法：分别精密吸取对照品及供试品各20ul，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品每粒含对盐酸金刚烷胺应为标示量的85％～115％；每粒含对乙酰氨基酚应为标示量的90.0％～110.0％。

(3)金银花和蒲公英，照高效液相色谱法测定；

金银花和蒲公英，照高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适应性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.4％磷酸溶液为流动相，梯度洗脱：流动相甲醇-0.4％磷酸溶液(0～20min，85∶15；20～25min，25∶75；25～30min，25∶75)；检测波长为327nm；流速：1mL/min

对照品溶液制备，精密称取绿原酸对照品1.0mg，置50mL棕色量瓶中，加50％甲醇40mL，超声溶解，加50％甲醇至刻度，摇匀，即得。

供试品溶液制备，取本品内容物0.1g，至25mL棕色量瓶中，甲醇定容，超声处理10min，摇匀后过滤，即得。

测定法，分别精密吸取绿原酸对照液以及供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以外标法计算绿原酸含量；

本品每粒含金银花和蒲公英以金银花和蒲公英总提取物-绿原酸(C₁₆H₁₈O₉)计，不得少于2.0mg。

所述的治疗感冒的胶囊剂是按照下述方法制成的：

a、将穿心莲切制成12mm的段，得A品；

b、将板蓝根切制成12mm的段，得B品；

c、将金银花用水蒸气蒸馏、分离，得C品，药渣作为C1品备用；

d、将A品用85％乙醇提取2次，第一次加乙醇量为药材量的8倍，时间为2小时；第二次加乙醇量为药材量的6倍，时间为2小时，合并两次煎液，回收乙醇，浓缩成相对密度为1.35的浸膏，测量温度为55℃，得D品；

e、将B品、C1品与蒲公英混匀，加水煎煮两次，第一次加水量为药材量的7倍，时间为1.5小时；第二次加水量为药材量的5倍，时间为1.5小时，合并两次煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.15的浸膏，测量温度为55℃，得E品；将D品、E品混匀，与对乙酰氨基酚、盐酸金刚烷胺、马来酸氯苯那敏、混合制软材，用切割刀切割成14～20目的颗粒，并以90kg为一锅投入沸腾干燥机中，设置进风温度65～75℃，出风温度40～55℃，干燥2.5～3.0小时，将干燥的颗粒粉碎成20目的颗粒，并以270kg为一箱投入热风循环烘箱，设定干燥温度90℃，待温度上升达65～70℃保持干燥5.5～6.5小时，在干燥后的颗粒中喷入C品，总混，充填胶囊，包装，即得。

Claims (1)

1.金感胶囊的检测方法，按照重量份计，所述金感胶囊是用金银花250g、穿心莲250g、板蓝根250g、蒲公英250g、对乙酰氨基酚250g、盐酸金刚烷胺50g和马来酸氯苯那敏1.0g制备成1000粒胶囊剂；其特征在于，所述的金感胶囊是按照下述方法制成的：

a、将穿心莲切制成12mm的段，得A品；

b、将板蓝根切制成12mm的段，得B品；

c、将金银花用水蒸气蒸馏、分离，得C品，药渣作为C1品备用；

d、将A品用85％乙醇提取2次，第一次加乙醇量为药材量的8倍，时间为2小时；第二次加乙醇量为药材量的6倍，时间为2小时，合并两次煎液，回收乙醇，浓缩成相对密度为1.35的浸膏，测量温度为55℃，得D品；

e、将B品、C1品与蒲公英混匀，加水煎煮两次，第一次加水量为药材量的7倍，时间为1.5小时；第二次加水量为药材量的5倍，时间为1.5小时，合并两次煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.15的浸膏，测量温度为55℃，得E品；将D品、E品混匀，与对乙酰氨基酚、盐酸金刚烷胺、马来酸氯苯那敏、混合制软材，用切割刀切割成14～20目的颗粒，并以每20万粒为一锅投入沸腾干燥机中，设置进风温度65～75℃，出风温度40～55℃，干燥2.5～3.0小时，将干燥的颗粒粉碎成20目的颗粒，并以270kg为一箱投入热风循环烘箱，设定干燥温度90℃，待温度上升达65～70℃保持干燥5.5～6.5小时，在干燥后的颗粒中喷入C品，总混，充填胶囊，包装，即得；

该检测方法包括以下步骤：

性状：本品为胶囊剂，内容物为棕黄色至棕褐色的颗粒及粉末；气微，味苦；

鉴别：(1)取本品内容物1g，研细，用水湿润，加入乙酸乙酯20ml，超声处理5分钟，弃去乙酸乙酯液，残渣自“加乙酸乙酯20ml”起同法重复处理1次，残渣加1mol/L盐酸溶液5滴，加乙酸乙酯20ml，超声处理5分钟，取乙酸乙酯液，残渣自“加乙酸乙酯20ml”起同法重复处理2次，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取金银花对照药材1g，同法制成对照药材溶液，再取绿原酸对照品，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各1μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上使成条状，以1∶15∶1∶1∶2的甲苯-乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm波长的紫外灯光下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的萤光斑点；

(2)取本品内容物2g，研细，加稀乙醇20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干。残渣加稀乙醇1ml使溶解。作为供试品溶液；另取板蓝根对照药材1g，同法制成对照药材溶液，再取精氨酸对照品，加稀乙醇制成1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各1～2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以19∶5∶5的正丁醇-冰醋酸-水为展开剂，展开，取出，热风吹干，喷以茚三酮试液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显示相同颜色的斑点；

(3)取本品内容物1g，研细，加甲醇5ml使溶解，超声处理10分钟，滤过，滤液作为供试品溶液，另取马来酸氯苯那敏对照品、盐酸金刚烷胺对照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2～4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以9∶1∶5∶1∶0.1的三氯甲烷-甲醇-丙酮-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显示相同颜色的斑点；

该检测方法还包括：

检查：水份不得超过12.0％，其他应符合胶囊剂项下有关的各项规定；

含量测定：

(1)穿心莲，照高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以54∶46∶1的甲醇-水-冰醋酸为流动相；检测波长为251nm，理论板数按脱水穿心莲内酯峰计算应该不低于2000；

对照品溶液的制备：精密称取脱水穿心莲内酯对照品10mg，置10ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；

供试品溶液的制备：取装量差异项下的本品内容物，研细，取1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，加甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，续滤液用0.45μm的微孔滤膜滤过，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品每粒含穿心莲以脱水穿心莲内酯计，不得少于0.2mg；

(2)盐酸金刚烷胺和对乙酰氨基酚，采用HPLC-ELSD法测定。

色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以75∶25的1.0％醋酸胺-甲醇溶液为流动相，其中1.0％醋酸胺的pH＝3.6；蒸发光散射检测器漂移管温度为105℃，雾化气体为N₂，流速2.85L/min，检测波长249nm。

对照品溶液的制备：取盐酸金刚烷胺对照品25mg与对乙酰氨基酚对照品60mg，精密称定，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，取续滤液，即得；

供试品溶液的制备：取本品胶囊剂样品20粒，研细内容物，精密称取相当于盐酸金刚烷胺50mg的细粉，置50ml量瓶中，加甲醇使其溶解并稀释至刻度，超声提取20分钟，摇匀，滤过，精密吸取续滤液5ml，置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；

测定法：分别精密吸取对照品及供试品各20ul，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品每粒含对盐酸金刚烷胺应为标示量的85％～115％；每粒含对乙酰氨基酚应为标示量的90.0％～110.0％；

(3)金银花和蒲公英，照高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适应性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.4％磷酸溶液为流动相，梯度洗脱：流动相甲醇-0.5％磷酸溶液的比例在0～20min时为85∶15；20～25min时为25∶75；25～30min时为25∶75；检测波长为327nm；流速：1mL/min；

对照品溶液制备，精密称取绿原酸对照品1.0mg，置50mL棕色量瓶中，加50％甲醇40mL，超声溶解，加50％甲醇至刻度，摇匀，即得；

供试品溶液制备，取本品内容物0.1g，至25mL棕色量瓶中，甲醇定容，超声处理10min，摇匀后过滤，即得；

测定法，分别精密吸取绿原酸对照液以及供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以外标法计算绿原酸含量；

本品每粒含金银花和蒲公英以金银花和蒲公英总提取物-绿原酸(C₁₆H₁₈O₉)计，不得少于2.0mg。