CN110954644B - 一种清肺散的质量控制方法 - Google Patents

一种清肺散的质量控制方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种清肺散的质量控制方法，所述质量控制方法以优选的方法薄层色谱法鉴别散剂中板蓝根、南葶苈子、浙贝母、桔梗和甘草的含量，同时采用HPLC测定散剂中贝母素甲、贝母素乙以及(R，S)‑告依春的精确含量。结合本发明提供的检测方法，检测结果稳定可靠、专属性强、重现性好，能全面有效地控制清肺散的质量，有利于市场中产品质量的稳定，确保兽用药安全、有效，更好地满足市场的需要。

Description

一种清肺散的质量控制方法
技术领域
本发明涉及质量检测领域，尤其涉及的是一种清肺散的质量检测方法。
背景技术
清肺散是一种由板蓝根、南葶苈子、浙贝母、桔梗和甘草五位中药组成的纯中药制剂，具有清肺热、止咳喘的功效。临床上应用清肺散防止鸡传染性喉气管炎等畜禽呼吸系统疾病已有二十年的历史，其临床疗效确切，副作用小。
在兽药典2015版中的清肺散记载，取本品，置显微镜下观察：种皮下表皮细胞黄色，多角形或长多角形，壁稍厚。淀粉粒卵圆形，直径35～48μm，脐点点状、人字状或马蹄状，位于较小端，层纹细密。联结乳管直径14～25μm，含淡黄色颗粒状物。木纤维多成束，淡黄色，多碎断，直径14～25μm，微木化，纹孔及孔沟较明显。纤维束周围薄壁细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维。是利用显微镜的技术进行的鉴定，对于其中有效成分的含有量以及含量难以确定，在现有技术中发现：
中国专利201611151480.7公开了一种清肺散的质量检测方法，所述方法包括：采用显微鉴定和薄层色谱法对清肺散样品中的黄芩、大黄、枇杷叶和甘草进行定性鉴别，采用高效液相色谱法对清肺散样品中的主要成分黄芩的含量进行测定；通过上述方法对清肺散样品的组成成分分别进行检测，可有效控制清肺散样品的质量，使清肺散更安全、可靠、有效的应用于临床。但是成分与本发明有很大的差别，仅仅含有相同的成分甘草一味中药，不能进行简单的替换使用。
随着社会对于兽类用药的重视，以及在申报兽药的过程中，需要对药品质量检测做出可信的方案，而现有技术并没有系统完整的对清肺散的质量进行检测的方法。
因此，现有技术对于清肺散的质量检测不统一，没有行之有效的标准，还有待于改进和发展。
发明内容
鉴于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种清肺散的质量检测方法，旨在解决现有技术缺少对清肺散质量进行系统完整检测的问题。
具体而言，本发明的技术方案如下：
一种清肺散的质量控制方法，该方法以薄层色谱法鉴别制剂中的板蓝根、葶苈子、浙贝母、桔梗、甘草，同时采用高效液相色谱法测定制剂中的(R，S)-告依春、贝母素甲、贝母素乙、含量。
所述薄层色谱法鉴别制剂中的板蓝根包括以下步骤：
1)供试品溶液制备：取清肺散内容物适量，研细，加甲醇30mL超声处理30分钟，滤过，滤蒸干，残渣加水10mL溶散，加正丁醇80mL混匀，置分液漏斗中，用5％三乙胺溶液洗涤2次，每次30mL，弃去碱液，再用正丁醇饱和的水洗至pH值为6.5-7.5，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液；
2)对照品溶液制备：取精氨酸对照品，加甲醇制成每1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液；
3)点样、展开：吸取上述两种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以四氯化碳：甲醇：水＝13：2：0.5的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，254nm置紫外光灯下检视，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
所述薄层色谱法鉴别制剂中的南葶苈子包括以下步骤：
1)供试品溶液制备：取清肺散内容物适量，研细，加甲醇30mL超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10mL溶散，加正丁醇80mL混匀，置分液漏斗中，用5％氢氧化钠溶液洗涤3次，每次30mL，弃去碱液蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，加氧化铝1g拌匀，挥干溶剂，加于中性氧化铝柱上，用水30mL洗脱，洗脱液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液；
2)对照品溶液制备：槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷对照品，加30％甲醇制成每1ml含90μg的溶液，作为对照品溶液；
3)点样、展开：吸取上述两种溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿：甲醇：甲酸＝25：20：4为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点。
所述薄层色谱法鉴别制剂中的浙贝母包括以下步骤：
1)供试品溶液的制备：取清肺散内容物适量，研细，加甲醇50mL，超声提取30分钟，时加振摇，滤过，滤液蒸干，残渣加水20mL使溶解，用稀盐酸调pH值至1-2，用乙醚提取2次，每次20mL，提取后的水液用乙酸乙酯提取3次，每次20mL，提取后的水液用氨试液调pH值至10-11，用三氯甲烷20mL提取1次，三氯甲烷液蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液；
2)对照品溶液的制备：取贝母素甲对照品、贝母素乙对照品对照品，加甲醇制成每1mL含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；
3)点样、展开：吸取供试品溶液、对照品溶液各5μL，分别点于同一用硅胶G薄层板上，以三氯甲烷：甲醇：氨水＝5：0.6：0.2的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
所述薄层色谱法鉴别制剂中的桔梗包括以下步骤：
1)供试品溶液的制备：取清肺散内容物适量研细，加甲醇50mL，超声提取30分钟，时加振摇，滤过，滤液蒸干，残渣加水20mL使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，乙酸乙酯液用无水硫酸镁脱水，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。
2)对照品溶液的制备：对照品溶液的制备取桔梗皂苷D对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。
3)点样、展开：吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-四氯化碳-乙酸乙酯(15：5：0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
所述薄层色谱法鉴别制剂中的甘草包括以下步骤：
1)供试品溶液的制备：取清肺散内容物适量研细，加甲醇50mL，超声提取30分钟，时加振摇，滤过，滤液蒸干，残渣加7％硫酸乙醇-水(1：5)混合溶液35ml，加热回流3小时，放冷，用稀盐酸调pH值至1-2，用乙醚提取2次，每次20mL，合并乙醚液，低温挥干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液；
2)对照品溶液的制备：再取甘草酸单铵盐对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。
3)点样、展开：吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一用1％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-正丁醇-水(15：2：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点。
本发明采用高效液相色谱法测定散剂中板蓝根中的(R，S)-告依春，浙贝母中的贝母素甲、贝母素乙含量包括以下步骤：
1)供试品溶液的制备：精密量取本品5g，研细，取5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇：水(1：9)50mL，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，离心，精密吸取上清液10mL置分液漏斗中，用乙酸乙酯提取2次，每次20mL，弃去乙酸乙酯液，水液置蒸发皿中，用少量水洗涤分液漏斗，一并合并于蒸发皿中，水浴加热挥至无乙酸乙酯，放冷，转移至25mL量瓶中，定容，摇匀，即得；
2)对照品溶液的制备：取(R，S)-告依春、贝母素甲对照品、贝母素乙对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含(R，S)-告依春对照品0.04mg，1ml含贝母素甲0.2mg、贝母素乙0.15mg的混合溶液，即得；
3)HPLC色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.3％磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为245nm-254nm；进样量5μL；流速1mL/min；柱温为35℃。
Figure BDA0002195218500000031
4)测定方法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液5μL，注入液相色谱仪，按照步骤3)所述色谱条件测定，即得。
优选地，高效液相色谱法步骤3)波长切换程序为：
时间(min) 检测波长(nm)
0 245
15 254
30 254
波长切换，0-26min，245nm，检测(R，S)-告依春；26min-39min，254nm，检测贝母素甲、贝母素乙。
本发明所述的清肺散含有板蓝根、南葶苈子、浙贝母、桔梗、甘草。各药的性味归经如下：
板蓝根：性味苦，寒。
归经：归心、胃经。
功能主治：清热解毒，凉血利咽。用于温毒发斑，舌绛紫暗，痄腮，喉痹，烂喉丹痧，大头瘟疫，丹毒，痈肿。
南葶苈子：性味辛、苦，大寒。
归经：归肺、膀胱经。
功能主治：泻肺平喘，行水消肿。用于痰涎壅肺，喘咳痰多，胸胁胀满，不得平卧，胸腹水肿，小
便不利；肺原性心脏病水肿。
浙贝母：性味苦，寒。
归经：归肺、心经。
桔梗：性味苦、辛，平。
归经：归肺经。
功能主治：宣肺，利咽，祛痰，排脓。用于咳嗽痰多，胸闷不畅，咽痛，音哑，肺痈吐脓，疮疡脓
成不溃。
甘草：性味甘，平。
归经：归心、肺、脾、胃经。
功能主治：补脾益气，清热解毒，祛痰止咳，缓急止痛，调和诸药。用于脾胃虚弱，倦怠乏力，心
悸气短，咳嗽痰多，脘腹、四肢挛急疼痛，痈肿疮毒，缓解药物毒性、烈性。
进一步的，本发明提供一种提高浙贝母中的贝母素甲、贝母素乙含量的方法，所述的板蓝根、南葶苈子、浙贝母、桔梗、甘草的用量，以重量用量比计算，板蓝根50-150份、南葶苈子10-50份、浙贝母10-50份、桔梗10-50份、甘草15-40份；进一步优选为板蓝根90份、南葶苈子30份、浙贝母30份、桔梗30份、甘草20g份。
本发明的针对每种中药材的特性分析，提供了一种保证有效成分含量较高的清肺散制备方法，具体为：
(1)药材粉碎工艺：按重量份称取板蓝根、浙贝母净制、晾干后放于50-60℃的烘箱内用热风干燥处理0.5-1.5小时，将干燥好的浙贝母普通粉碎，得粗粉，过24目筛；
(2)制剂工艺：将板蓝根、南葶苈子、桔梗、甘草粉碎，并与步骤A粗粉混合，干燥过20目筛，加入处方量的蔗糖，混合即得。
与现有技术相比，本发明建立了清肺散的升级版质量检测方法，该方法采用薄层色谱法分别对制剂中板蓝根、南葶苈子、浙贝母、桔梗和甘草全方位的进行定性鉴别，达到多成分联合控制，提高了质量可控性；同时采用HPLC定量测定制剂中的(R，S)-告依春、贝母素甲、贝母素乙含量，能够进一步有效控制清肺散的质量，实现对制剂质量进行全面地评价。
为了简化操作，提高HPLC法含量测定的检测效率，发明人通过长时间的探索和反复的试验，通过梯度洗脱程序并联合波长切换法成功地将制剂中的(R，S)-告依春、贝母素甲和贝母素乙含量3种成分的HPLC含量测定合而为一，提供一种更加全面、准确、便捷的检测清肺散质量的新方法。本发明质量检测方法稳定可靠、专属性强、重现性好，能全面有效地控制清肺散胶囊的质量，有利于稳定产品的质量，确保兽药用药安全性和有效性，更好地满足市场的需要。
附图说明
图1为清肺散中板蓝根的薄层色谱图，按从左到右的顺序，其中1是板蓝根对照品，2是缺白术的阴性制剂样品，3是样品,4是板蓝根对照药品；
图2为清肺散中南葶苈子的薄层色谱图，按从左到右的顺序，其中1、4是槲皮素对照品，2是缺南葶苈子的阴性制剂样品，3是样品；
图3为为清肺散中浙贝母的薄层色谱图，按从左到右的顺序，其中1、4是贝母素甲对照品，2是样品，3是样品是缺贝母素甲、贝母素乙的阴性制剂样品，5是贝母素乙对照品；
图4为清肺散中桔梗的薄层色谱图，按从左到右的顺序，其中1、4、是桔梗皂苷D对照品，2是缺桔梗的阴性制剂样品，3是供试品；
图5为为清肺散中甘草的薄层色谱图，按从左到右的顺序，其中1、4甘草酸单铵盐对照品，2是样品，3是缺甘草的阴性制剂样品；
图6为对照品HPLC色谱图，色谱峰从左到右依次为(R，S)-告依春、贝母素甲、贝母素乙；
图7为供试品HPLC色谱图；
图8为缺板蓝根阴性对照HPLC色谱图；
图9为缺浙贝母阴性对照HPLC色谱图。
具体实施例
实施例仅是本发明的优选实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理及构思的前提下，还可以做出若干修饰和改进，这些都属于本发明的保护范围。
实施例1：(R，S)-告依春对照品、贝母素甲对照品、贝母素乙的HPLC测定方法学研究
1)药品与试剂：(R，S)-告依春对照品(111753-201607，中国药品生物制品检定所)，贝母素甲对照品(110750-201312，中国药品生物制品检定所)，贝母素乙对照品(1107501-201703，中国药品生物制品检定所)，乙腈、甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为重蒸馏水。
2)仪器：AgiLent 1100高效液相色谱仪，DAD检测器。
3)色谱条件：色谱柱：KromasiL C18色谱柱(5.6mm×250mm，5μm)以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.3％磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为283nm-355nm；进样量5μL；流速1mL/min；柱温为35℃。
Figure BDA0002195218500000061
波长切换程序为：
时间(min) 检测波长(nm)
0 245
15 254
30 254
波长切换，0-26min，245nm，检测(R，S)-告依春；26min-39min，254nm，检测贝母素甲、贝母素乙。
4)溶液制备
4.1)供试品溶液的制备
精密量取本品5g，研细，取5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇：水(1：9)50mL，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，离心，精密吸取上清液10mL置分液漏斗中，用乙酸乙酯提取2次，每次20mL，弃去乙酸乙酯液，水液置蒸发皿中，用少量水洗涤分液漏斗，一并合并于蒸发皿中，水浴挥至无乙酸乙酯，放冷，转移至25mL量瓶中，定容，摇匀，即得；
4.2)对照品溶液的制备
精密称取(R，S)-告依春对照品、贝母素甲、贝母素乙对照品适量，加甲醇制成每1mL含0.04mg、0.2mg、0.15mg的混合溶液。
4.3)阴性对照溶液的制备
分别取不含(R，S)-告依春对照品的阴性对照、不含贝母素甲的阴性对照、不含贝母素乙的阴性对照，照供试品溶液的制备项下同法操作，制成阴性对照溶液，从色谱图可以看出，在对照品、贝母素甲、贝母素乙位置处无干扰。
6)线性关系考察
精密称取对照品适量，加甲醇配成下列浓度，在上述色谱条件下进行测定，分别进样5μL，测定峰面积。结果见表3、4、5。
表3 (R，S)-告依春线性关系考察结果
Figure BDA0002195218500000071
(R，S)-告依春测定，以测得峰面积为纵坐标，对照品浓度(mg/mL)为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程y＝32794x-670.6，R2＝0.99992，即(R，S)-告依春浓度在0.009983～0.049910mg/mL范围内线性良好。
表4 贝母素甲线性关系考察结果
Figure BDA0002195218500000072
贝母素甲测定，以测得峰面积为纵坐标，对照品浓度(mg/mL)为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程y＝387690x–13169，R2＝0.9996，即贝母素甲浓度在0.019924～0.100012mg/mL范围内线性良好。
表5 贝母素乙线性关系考察结果
Figure BDA0002195218500000073
贝母素乙测定，以测得峰面积为纵坐标，对照品浓度(mg/mL)为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程y＝295841x–14839，R2＝0.9998，即贝母素乙浓度在0.015241～0.075224mg/mL范围内线性良好。
7)精密度试验
精密吸取对照品溶液，重复进样6次，每次5μL，峰面积RSD<2％，表明仪器精密度良好。结果见表7。
表7 精密度试验结果
Figure BDA0002195218500000081
8)稳定性试验
取同一样品溶液，分别于配制后0，2，4，6，8h测定，结果表明样品在8h内稳定。结果见表8。
表8 稳定性试验结果
Figure BDA0002195218500000082
9)重复性试验
分别取同一批号(20190125-3)的样品6份，照“样品测定”项下的样品制备方法操作，分别测定，计算含量。结果见表9、10、11。
表9 (R，S)-告依春重复性试验结果
Figure BDA0002195218500000091
表10 贝母素甲重复性试验结果
Figure BDA0002195218500000092
表11 贝母素乙重复性试验结果
Figure BDA0002195218500000093
10)回收率试验
精密称取已知含量的样品6份，分别精密加入(R，S)-告依春对照品0.04mg/ml、贝母素甲0.2mg/ml、贝母素乙0.15mg/ml，同“供试品溶液的制备”项下的制备方法测定。结果见表13、14、15。
表13 (R，S)-告依春回收率试验结果
Figure BDA0002195218500000094
Figure BDA0002195218500000101
表14 贝母素甲回收率试验结果
Figure BDA0002195218500000102
表15 贝母素乙回收率试验结果
Figure BDA0002195218500000103
实施例2清肺散中板蓝根薄层色谱鉴别包括以下步骤：
1)供试品溶液制备：取清肺散内容物适量，研细，加甲醇30mL超声处理30分钟，滤过，滤蒸干，残渣加水10mL溶散，加正丁醇80mL混匀，置分液漏斗中，用5％三乙胺溶液洗涤2次，每次30mL，弃去碱液，再用正丁醇饱和的水洗至pH值为6.5-7.5，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液；
2)对照品溶液制备：取精氨酸对照品，加甲醇制成每1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液；
3)点样、展开：吸取上述两种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以四氯化碳：甲醇：水＝13：2：0.5的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，254nm置紫外光灯下检视，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例3清肺散中南葶苈子薄层色谱鉴别包括以下步骤：
1)供试品溶液制备：取清肺散内容物适量，研细，加甲醇30mL超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10mL溶散，加正丁醇80mL混匀，置分液漏斗中，用5％氢氧化钠溶液洗涤3次，每次30mL，弃去碱液蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，加氧化铝1g拌匀，挥干溶剂，加于中性氧化铝柱上，用水30mL洗脱，洗脱液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液；
2)槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷对照品，加30％甲醇制成每1ml含90μg的溶液，作为对照品溶液。
3)点样、展开：吸取上述两种溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿：甲醇：甲酸＝25：20：4为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点。
实施例4清肺散中浙贝母薄层色谱鉴别包括以下步骤：
1)供试品溶液的制备：取清肺散内容物适量，研细，加甲醇50mL，超声提取30分钟，时加振摇，滤过，滤液蒸干，残渣加水20mL使溶解，用稀盐酸调pH值至1-2，用乙醚提取2次，每次20mL，提取后的水液用乙酸乙酯提取3次，每次20mL，提取后的水液用氨试液调pH值至10-11，用三氯甲烷20mL提取1次，三氯甲烷液蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液；
2)对照品溶液的制备：取贝母素甲对照品、贝母素乙对照品对照品，加甲醇制成每1mL含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；
3)点样、展开：吸取供试品溶液、对照品溶液各5μL，分别点于同一用硅胶G薄层板上，以三氯甲烷：甲醇：氨水＝5：0.6：0.2的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例5清肺散中桔梗薄层色谱鉴别包括以下步骤：
1)供试品溶液的制备：取清肺散内容物适量研细，加甲醇50mL，超声提取30分钟，时加振摇，滤过，滤液蒸干，残渣加水20mL使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，乙酸乙酯液用无水硫酸镁脱水，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。
2)对照品溶液的制备：对照品溶液的制备取桔梗皂苷D对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。
3)点样、展开：吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-四氯化碳-乙酸乙酯(15：5：0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例6清肺散中甘草薄层色谱鉴别包括以下步骤：
1)供试品溶液的制备：取清肺散内容物适量研细，加甲醇50mL，超声提取30分钟，时加振摇，滤过，滤液蒸干，残渣加7％硫酸乙醇-水(1：5)混合溶液35ml，加热回流3小时，放冷，用稀盐酸调pH值至1-2，用乙醚提取2次，每次20mL，合并乙醚液，低温挥干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液；
2)对照品溶液的制备：再取甘草酸单铵盐对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。
3)点样、展开：吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一用1％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-正丁醇-水(15：2：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点。
实施例7一种清肺散，以重量比计算，成份含量如下
板蓝根90份、南葶苈子30份、浙贝母30份、桔梗30份、甘草20g份。
制备方法，具体为：
A、药材粉碎工艺：按重量份称取板蓝根、浙贝母净制、晾干后放于55℃的烘箱内用热风干燥处理1小时，将干燥好的浙贝母普通粉碎，得粗粉，过24目筛；
B、制剂工艺：将板蓝根、南葶苈子、桔梗、甘草粉碎，并与步骤A粗粉混合，干燥过20目筛，加入处方量的蔗糖，混合即得。
经检测和计算，本品每1g含板蓝根以(R，S)-告依春计，含量为0.399mg；每1g浙贝母中含贝母素甲1.992g、贝母素乙1.494g，含水量为1.3％，经过6个月的加速试验发现，每1g含板蓝根以(R，S)-告依春计，含量为0.376mg；每1g浙贝母中含贝母素甲1.902g、贝母素乙1.411g，含水量2.7％。
实施例8一种清肺散，以重量比计算，成份含量如下
板蓝根50份、南葶苈子10份、浙贝母10份、桔梗10份、甘草15份
制备方法，具体为：
A、药材粉碎工艺：按重量份称取板蓝根、浙贝母净制、晾干后放于50℃的烘箱内用热风干燥处理1.5小时，将干燥好的浙贝母普通粉碎，得粗粉，过24目筛；
B、制剂工艺：将板蓝根、南葶苈子、桔梗、甘草粉碎，并与步骤A粗粉混合，干燥过20目筛，加入处方量的蔗糖，混合即得。
经检测和计算，本品每1g含板蓝根以(R，S)-告依春计，含量为0.345mg；每1g浙贝母中含贝母素甲1.857g、贝母素乙1.364g，含水量为1.1％，经过6个月的加速试验发现，每1g含板蓝根以(R，S)-告依春计，含量为0.328mg；每1g浙贝母中含贝母素甲1.799g、贝母素乙1.211g，含水量2.2％。
实施例9一种清肺散，以重量比计算，成份含量如下
板蓝根150份、南葶苈子50份、浙贝母50份、桔梗50份、甘草40份
制备方法，具体为：
A、药材粉碎工艺：按重量份称取板蓝根、浙贝母净制、晾干后放于60℃的烘箱内用热风干燥处理0.5小时，将干燥好的浙贝母普通粉碎，得粗粉，过24目筛；
B、制剂工艺：将板蓝根、南葶苈子、桔梗、甘草粉碎，并与步骤A粗粉混合，干燥过20目筛，加入处方量的蔗糖，混合即得。
经检测和计算，本品每1g含板蓝根以(R，S)-告依春计，含量为0.347mg；每1g浙贝母中含贝母素甲1.846g、贝母素乙1.371g，含水量为1.7％，经过6个月的加速试验发现，每1g含板蓝根以(R，S)-告依春计，含量为0.321mg；每1g浙贝母中含贝母素甲1.784g、贝母素乙1.209g，含水量2.9％。
实施例10市售清肺散
经检测和计算，本品每1g含板蓝根以(R，S)-告依春计，含量为0.252mg；每1g浙贝母中含贝母素甲1.012g、贝母素乙0.870g，含水量为1.4％，经过6个月的加速试验发现，每1g含板蓝根以(R，S)-告依春计，含量为0.183mg；每1g浙贝母中含贝母素甲0.784g、贝母素乙0.509g，含水量3.3％。
实施例10一种清肺散，以重量比计算，成份含量如下
板蓝根90份、南葶苈子30份、浙贝母30份、桔梗30份、甘草20g份。
制备方法，具体为：
将板蓝根、南葶苈子、桔梗、甘草、板蓝根、浙贝母粉碎，并与步骤A粗粉混合，干燥过20目筛，加入处方量的蔗糖，混合即得。
经检测和计算，本品每1g含板蓝根以(R，S)-告依春计，含量为0.251mg；每1g浙贝母中含贝母素甲1.127g、贝母素乙0.860g，含水量为1.3％，经过6个月的加速试验发现，每1g含板蓝根以(R，S)-告依春计，含量为0.197mg；每1g浙贝母中含贝母素甲0.749g、贝母素乙0.511g，含水量3.2％。
以上进行的分析原料均采用实施例7制备获得的散剂，在同等条件下，使用实施例8和实施例9制备获得散剂进行相关的分析实验，依然获得类似的数据，由于篇幅限制，不在赘余。

Claims (4)

1.一种板蓝根清肺散的质量控制方法，其特征在于，所述的板蓝根清肺散含有板蓝根、南葶苈子、浙贝母、桔梗、甘草；所述的质量控制方法，以薄层色谱法鉴别制剂中的板蓝根、南葶苈子、浙贝母、桔梗、甘草，同时采用高效液相色谱法测定制剂中的(R，S)-告依春、贝母素甲、贝母素乙的含量；
所述薄层色谱法鉴别制剂中的板蓝根包括以下步骤：
1)供试品溶液制备：取板蓝根清肺散内容物适量，研细，加甲醇30mL超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10mL溶散，加正丁醇80mL混匀，置分液漏斗中，用5％三乙胺溶液洗涤2次，每次30mL，弃去碱液，再用正丁醇饱和的水洗至pH值为6.5-7.5，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液；
2)对照品溶液制备：取精氨酸对照品，加甲醇制成每1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液；
3)点样、展开：吸取上述两种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以四氯化碳：甲醇：水＝13：2：0.5的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，254nm置紫外光灯下检视，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
所述薄层色谱法鉴别制剂中的南葶苈子包括以下步骤：
1)供试品溶液制备：取板蓝根清肺散内容物适量，研细，加甲醇30mL超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10mL溶散，加正丁醇80mL混匀，置分液漏斗中，用5％氢氧化钠溶液洗涤3次，每次30mL，弃去碱液蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，加氧化铝1g拌匀，挥干溶剂，加于中性氧化铝柱上，用水30mL洗脱，洗脱液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液；
2)对照品溶液制备：槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷对照品，加30％甲醇制成每1ml含90μg的溶液，作为对照品溶液；
3)点样、展开：吸取上述两种溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿：甲醇：甲酸＝25：20：4为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；
所述薄层色谱法鉴别制剂中的浙贝母包括以下步骤：
1)供试品溶液的制备：取板蓝根清肺散内容物适量，研细，加甲醇50mL，超声提取30分钟，时加振摇，滤过，滤液蒸干，残渣加水20mL使溶解，用稀盐酸调pH值至1-2，用乙醚提取2次，每次20mL，提取后的水液用乙酸乙酯提取3次，每次20mL，提取后的水液用氨试液调pH值至10-11，用三氯甲烷20mL提取1次，三氯甲烷液蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液；
2)对照品溶液的制备：取贝母素甲对照品、贝母素乙对照品对照品，加甲醇制成每1mL含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；
3)点样、展开：吸取供试品溶液、对照品溶液各5μL，分别点于同一用硅胶G薄层板上，以三氯甲烷：甲醇：氨水＝5：0.6：0.2的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
所述高效液相色谱法测定散剂中板蓝根中的(R，S)-告依春，浙贝母中的贝母素甲、贝母素乙含量包括以下步骤：
1)供试品溶液的制备：精密量取本品5g，研细，取5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积比为1：9的甲醇：水50mL，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，离心，精密吸取上清液10mL置分液漏斗中，用乙酸乙酯提取2次，每次20mL，弃去乙酸乙酯液，水液置蒸发皿中，用少量水洗涤分液漏斗，一并合并于蒸发皿中，水浴加热挥至无乙酸乙酯，放冷，转移至25mL量瓶中，定容，摇匀，即得；
2)对照品溶液的制备：取(R，S)-告依春、贝母素甲对照品、贝母素乙对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含(R，S)-告依春对照品0.04mg，1ml含贝母素甲0.2mg、贝母素乙0.15mg的混合溶液，即得；
3)HPLC色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.3％磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为245nm-254nm；进样量5μL；流速1mL/min；柱温为35℃；
Figure FDA0002631645740000021
4)测定方法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液5μL，注入液相色谱仪，按照步骤3)所述色谱条件测定，即得。
2.如权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于，所述的板蓝根清肺散，以重量比计算，板蓝根50-150份、南葶苈子10-50份、浙贝母10-50份、桔梗10-50份、甘草15-40份。
3.如权利要求2所述的质量控制方法，其特征在于，所述的板蓝根清肺散，以重量比计算，板蓝根90份、南葶苈子30份、浙贝母30份、桔梗30份、甘草20份。
4.如权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于，所述的板蓝根清肺散制备方法为：
A、药材粉碎工艺：按重量份称取板蓝根、浙贝母净制、晾干后放于50-60℃的烘箱内用热风干燥处理0.5-1.5小时，将干燥好的浙贝母普通粉碎，得粗粉，过24目筛；
B、制剂工艺：将板蓝根、南葶苈子、桔梗、甘草粉碎，并与步骤A粗粉混合，干燥过20目筛，加入处方量的蔗糖，混合即得。
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Denomination of invention: A quality control method of Qingfei powder

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Pledgee: Shandong Yishui Rural Commercial Bank Co., Ltd

Pledgor: Shandong Qi Kang Bio Technology Co.,Ltd.

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