CN113960186A - 清肺排毒颗粒中枳实有效成分的定量方法 - Google Patents

清肺排毒颗粒中枳实有效成分的定量方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及医药技术领域，具体公开了清肺排毒颗粒中枳实有效成分的定量方法。本发明采用高效液相色谱法，色谱条件包括：以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填充剂，以乙腈为流动相A，以0.1～0.2％v/v磷酸溶液或相应浓度的甲酸溶液为流动相B，进行梯度洗脱；所述梯度洗脱过程为：0～30min内，流动相A和流动相B的体积比从16:84匀速渐变至18:82；30～40min内，流动相A和流动相B的体积比从18:82匀速渐变至20:80。本发明所提供的方法重复性好，精密度高，在不同的高效液相色谱仪和不同的色谱柱上的测定结果没有显著差异，说明本发明的方法适用性和重现性好，适于普遍推广。

Description

清肺排毒颗粒中枳实有效成分的定量方法
技术领域
本发明涉及医药技术领域，尤其涉及一种中成药中枳实有效成分 的定量方法。
背景技术
清肺排毒汤，是经过临床验证、由经方演化而来，由麻杏石甘汤、 小柴胡汤、五苓散和射干枳实汤4个经典名方组成。药物组方有宣、 有清、有健脾、有和胃，方子涵盖面广，考虑到了寒、热、燥以及胃 肠问题，经过临床验证疗效确切后加以推广，该方也可用于普通感冒 和流感患者。
清肺排毒颗粒，是一种在清肺排毒汤中药复方的基础上改良而成 的颗粒剂，解决了汤剂存放、使用和携带不便的问题，利于所述中药 复方的推广应用。
在清肺排毒颗粒的制备过程中，需用到枳实、炙甘草、燀苦杏仁、 石膏、桂枝、泽泻、猪苓、白术、茯苓、柴胡、黄芩、姜半夏、生姜、 紫苑、款冬花、射干、细辛、山药、麻黄、陈皮、广藿香等二十一味 药材。
其中，为芸香科柑橘属植物酸橙及其栽培变种或甜橙的干燥幼 果。枳实中的有效成分包括柚皮苷和新橙皮苷：柚皮苷是一种双氢黄 酮类化合物，具有抗炎、抗病毒、抗癌、抗突变、抗过敏、抗溃疡、 镇痛、降血压活性；新橙皮苷具有治愈毛细血管的脆性和血浆中蛋白 质通透性过高的作用。二者作为清肺排毒颗粒主要的功能性成分，其 含量的测定与控制将对清肺排毒颗粒药物的质量控制起到不可忽视 的关键作用。
发明内容
为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供清肺排毒 颗粒中枳实有效成分的定量方法。
为了实现本发明目的，本发明的技术方案如下：
本发明提供一种清肺排毒颗粒中枳实有效成分的定量方法，采用 高效液相色谱法，对供试品和对照品制备的供试品溶液和对照品溶液 进行色谱测定，根据测定结果计算供试品中枳实有效成分的含量；
色谱条件包括：以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填充剂，以 乙腈为流动相A，以0.1～0.2％v/v磷酸溶液或相应浓度的甲酸溶液为 流动相B，进行梯度洗脱；
所述梯度洗脱过程为：
0～30min内，流动相A和流动相B的体积比从16:84匀速渐变至 18:82；
30～40min内，流动相A和流动相B的体积比从18:82匀速渐变至 20:80；
流速：0.8～1.2mL/min；
检测波长：283～284nm；
柱温：30～35℃；
进样量：2～20μL。
其中，所测定的枳实有效成分为柚皮苷和新橙皮苷，相应地， 以柚皮苷和新橙皮苷作为对照品。
作为优选，所使用的色谱柱选自如下色谱柱的一种：
YMC Triart C18 TA12S05-1546WT 4.6*150mm 5μm；
YMC J'sphere ODS-H80 JH08S04-1546WT 4.6*150mm 5μm；
菲罗门GeminiC18110A 4.6*250mm 5μm；
SilGreen GH0525046C18A 4.6*250mm 5μm。
更为优选，在测定前进行柱平衡程序，具体程序如下表：
时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％)
0-30 16-18 84-82
30-40 18-20 82-80
40.01-50 100 0
50.01-65 16 84。
进一步优选，以0.2％v/v磷酸溶液为流动相B。
进一步优选，所述检测波长为284nm。
进一步优选，所述柱温为30℃。
进一步优选，所述进样量为2～5μL。
进一步地，本发明所述定量方法，在制备供试品溶液时，采用 50～100％甲醇溶液作为提取溶剂，对供试品中的枳实有效成分进行 提取。
更为具体地，本发明所述定量方法为：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充 剂；以乙腈为流动相A，以0.2％v/v磷酸溶液为流动相B，按以下规 定进行梯度洗脱；检测波长为284nm；流速为1.0mL/min；柱温为 30℃；理论板数按柚皮苷峰计算应不低于6000；
所述梯度洗脱过程为：
0～30min内，流动相A和流动相B的体积比从16:84匀速渐变至 18:82；
30～40min内，流动相A和流动相B的体积比从18:82匀速渐变至20:80；
对照品溶液的制备：取柚皮苷对照品和新橙皮苷对照品适量，精 密称定，加85％甲醇制成每lmL各含0.1mg柚皮苷与新橙皮苷的混合溶 液，即得；
供试品溶液的制备：取本品，研细，取约1.0g，精密称定，置50 mL具塞锥形瓶中，精密加入85％甲醇25mL，密塞，称定重量，超声 处理15分钟，取出，放冷，再称定重量，用85％甲醇补足减失的重量， 摇匀，微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取供试品溶液2～5μL、对照品溶液5μL，注 入液相色谱仪，测定，即得；
本品每袋含枳实以柚皮苷(C27H32O14)计，应为21.60～101.79mg； 以新橙皮苷(C28H34O15)计，应为15.26～132.02mg。
作为优选，制备供试品溶液时，采用超声处理的方式进行枳实 有效成分的提取，超声处理的功率为200-600W，频率为40-50kHz， 提取时间为15～60min。
本发明涉及到的原料或试剂均为普通市售产品，涉及到的操作如 无特殊说明均为本领域常规操作。
在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可以相互组合， 得到具体实施方式。
本发明的有益效果在于：
本发明首次基于高效液相法实现了对清肺排毒颗粒中柚皮苷和 新橙皮苷的分离与测定，且不受清肺排毒颗粒中其他药物成分的干 扰，为清肺排毒颗粒中枳实有效成分的含量测定和质量评价提供了有 效的科学方法。
依据本发明方法，柚皮苷在0.103μg-1.03μg、新橙皮苷在0.1228 μg-1.228μg范围内线性良好；回归方程分别为：y＝8×106x+3502.8，R2＝0.9999；y＝9×106x+3789.7，R2＝0.9999。
本发明所提供的方法重复性好，精密度高，在不同的高效液相色 谱仪和不同的色谱柱上的测定结果没有显著差异，说明本发明的方法 适用性和重现性好，适于普遍推广。
附图说明
此处的附图被并入说明书中并构成本说明书的一部分，示出了符 合本发明的实施例，并与说明书一起用于解释本发明的原理。
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面 将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而 易见地，对于本领域普通技术人员而言，在不付出创造性劳动性的前 提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为柚皮苷、新橙皮苷光谱图；
图2为HPLC不同进样量考察色谱图；
图3为柚皮苷校正曲线；
图4为新橙皮苷校正曲线；
图5为柚皮苷对照品HPLC图谱；
图6为新橙皮苷对照品HPLC图谱；
图7为柚皮苷-新橙皮苷混合标准品HPLC图谱；
图8为清肺排毒颗粒HPLC图谱；
图9为清肺排毒颗粒及枳实阴性制剂HPLC图谱；
图10为空白溶剂(85％甲醇)HPLC图谱；
图11为YMC Triart C18 TA12S05-1546WT(柱号：108YA60114) HPLC色谱图(岛津LC2030C 3D)；
图12为YMC Triart C18 TA12S05-1546WT(柱号：108YA60114) HPLC色谱图(岛津LC-20AT)；
图13为YMC Triart C18 TA12S05-1546WT(柱号：108YA60114) HPLC色谱图(Angilent 1200)；
图14为YMC Triart C18 TA12S05-1546WT(柱号：0415187081 (W))HPLC色谱图(岛津LC-2030C 3D)；
图15为YMC Triart C18 TA12S05-1546WT(柱号：0415173358 (W))HPLC色谱图(岛津LC-2030C 3D)；
图16为YMC Triart C18 TA12S05-1546WT(柱号：115ZA60167) HPLC色谱图(岛津LC-2030C 3D)；
图17为YMC J'sphere ODS-H80 JH08S04-1546WT(柱号： 0415172900(W))HPLC色谱图(岛津LC-2030C 3D)；
图18为菲罗门GeminiC18110A 4.6*250mm 5μm(柱号：55200185) HPLC色谱图(岛津LC-2030C 3D)；
图19为YMC Triart C18 TA12S05-1546WT(柱号：0415187081 (W))HPLC色谱图(岛津LC-20AT)；
图20为SilGreen GH0525046C18A 4.6*250mm 5μm(柱号： GH15000104)HPLC色谱图(Agilent 1200)；
图21为菲罗门GeminiC18110A 4.6*250mm 5μm(柱号：55200185) HPLC色谱图(Agilent 1260)。
具体实施方式
为了能够更清楚地理解本发明的上述目的、特征和优点，下面将 对本发明的方案进行进一步描述。需要说明的是，在不冲突的情况下， 本发明的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但 本发明还可以采用其他不同于在此描述的方式来实施；显然，说明书 中的实施例只是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。
下面将结合实施例对本发明的优选实施方式进行详细说明。需要 理解的是以下实施例的给出仅是为了起到说明的目的，并不是用于对 本发明的范围进行限制。本领域的技术人员在不背离本发明的宗旨和 精神的情况下，可以对本发明进行各种修改和替换。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方 法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商 业途径得到。
实施例1
照高效液相色谱法(中国药典2020年版通则0512)测定。
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充 剂；以乙腈为流动相A，以0.2％磷酸溶液为流动相B，按以下规定进 行梯度洗脱；检测波长为284nm；流速为1.0mL/min；柱温为30℃； 理论板数按柚皮苷峰计算应不低于6000；
Figure BDA0003153987010000071
对照品溶液的制备：取柚皮苷对照品、新橙皮苷对照品适量，精 密称定，加85％甲醇制成每lmL各含0.1mg的混合溶液，即得。
供试品溶液的制备：取装量差异项下的本品适量，研细，取约 1.0g，精密称定，置50mL具塞锥形瓶中，精密加入85％甲醇25mL， 密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)15分钟，取出， 放冷，再称定重量，用85％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续 滤液，即得。
测定法：分别精密吸取供试品溶液2～5μL、对照品溶液5μL，注 入液相色谱仪，测定，即得。
本品每袋含枳实以柚皮苷(C27H32O14)计，应为21.60～101.79mg； 以新橙皮苷(C28H34O15)计，应为15.26～132.02mg。
实验例1
本实验例用于说明本发明所述定量方法的确定过程。
一、仪器与试药
仪器：HPLC:日本岛津LC-2030C 3D(228-45202-46)高效液相 色谱仪；Labsolutions工作站；KQ-250B型数控超声波清洗器(昆山市 超声仪器有限公司)；梅特勒METTLER TOLEDO XA105，ML-104/02 分析天平，梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司；
色谱柱：YMC Triart C18 4.6×150mm 5μm 12nm
试剂：乙腈、甲醇色谱纯(Fisher Scientific)，磷酸(10015418， 国药集团化学试剂有限公司)、甲酸(99％，ROE)、娃哈哈纯净水。
对照品：柚皮苷(110722-200309)、新橙皮苷(99.4％， 111857-201804)购自中国食品药品检定研究院。
样品来源：清肺排毒颗粒由漳州片仔癀药业股份有限公司以及华 润三九药业股份有限公司提供，批号分别为：2004007、2004008、 2004009、2004010、2002001、2009001、2009002、2009003(片仔癀 提供)；2003903、2007901、2007902、2007903、2009902、2009903、2009904(华润三九提供)。
二、实验方法与结果
参照《中国药典》枳壳的含量测定条件以及相关文献中的测定条 件，同时结合本品特征图谱研究基础进行实验。
1、色谱条件的选择
流动相：分别考察了甲醇、乙腈作为有机相，由于乙腈基线较稳， 选择乙腈；水相分别尝试了水、0.2％甲酸水、0.1％磷酸水以及0.2％ 磷酸水，结果发现磷酸水分离效果较好，磷酸浓度对峰型略有影响， 选择0.2％磷酸水作为水相。
柱温：分别考察了35℃和30℃，结果在35℃情况下拖尾因子难以 达到0.95-1.05的范围，最终选择30℃作为分析柱温；
检测波长：通过对柚皮苷和新橙皮苷的光谱扫描，其二者的最大 吸收波长分别为283nm和284nm,见图1。
最终确定使用色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂； 以乙腈为流动相A，以0.2％磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进 行梯度洗脱；流速：1.0mL/min，检测波长284nm。理论板数按柚 皮苷峰计算应不低于6000。
时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％)
0-30 16-18 84-82
30-40 18-20 82-80
需要说明的是，在此流动相条件下，供试品色谱在60分钟范围内 不能达到基线平稳，也就是说反复进样情况下可能会有杂质影响，因 此在测定时建议设置柱平衡程序，见下表1。
表1.流动相梯度洗脱表
时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％)
0-30 16-18 84-82
30-40 18-20 82-80
40.01-50 100 0
50.01-65 16 84
2、实验条件的选择
(1)提取溶剂的选择：
取本品0.5g，精密称定，置锥形瓶中，分别精密加入50％甲醇溶 液、70％甲醇、85％甲醇、100％甲醇溶液各25mL，称定重量，超声 提取30分钟，按本发明方法依次制成供试品溶液，测定结果见表2。
表2.提取溶剂的选择试验结果
提取溶剂考察 柚皮苷％ 新橙皮苷％
50％ 0.2523 0.2994
70％ 0.2538 0.3015
85％ 0.2542 0.3016
100％ 0.2443 0.2897
结果表明，50％、70％及85％甲醇提取的供试品中柚皮苷与新橙 皮苷趋势相同，含量相近，考虑到过滤难易及选择最大值，决定本发 明采用85％甲醇提取。
(2)提取溶剂倍数的选择：
分别取本品0.1、0.5、1.0、2.0g，精密称定，置锥形瓶中，分别 精密加入85％甲醇25mL，称定重量，超声处理30分钟，按本发明方 法依次制成供试品溶液，测定结果见表3。
表3.提取溶剂倍数的选择试验结果
称样量mg 倍数 柚皮苷％ 新橙皮苷％
108.6 250 0.2519 0.2939
509.9 50 0.2567 0.3051
1002.9 25 0.2602 0.3058
2006.6 12.5 0.2591 0.3055
结果表明，各倍数提取率相近，本发明采用25倍溶剂量进行提取。
(3)提取时间的选择：
取本品1.0g，精密称定，置锥形瓶中，分别精密加入85％甲醇25 mL，称定重量，分别超声提取15分钟、30分钟、45分钟、60分钟； 按本发明方法制成供试品溶液，测定结果见表4。
表4.提取时间的选择试验结果
Figure BDA0003153987010000111
结果表明各超声时间含量近似，从节约能源角度考虑，选择超声 处理15分钟作为本发明提取时间。
(4)进样量的确定
选择本发明记载方法，对供试品分别进样2、5、10、20μL，考 察其色谱情况，见图2，最终认为，本供试品5μL进样时色谱状况较 好，选择5μL作为进样量。
3.线性关系考察
分别精密称取柚皮苷对照品5.15mg、新橙皮苷6.14mg，置于同 一25mL量瓶中，加85％甲醇超声溶解至刻度，分别精密移取上述溶 液1、2、4、6、8、10mL至10mL容量瓶，加85％甲醇稀释至刻度， 摇匀，制成一系列对照品溶液。分别吸取上述各溶液5μL注入液相 色谱仪，每个浓度连续进样3次，测定峰面积，以对照品浓度为横坐 标，对照品峰面积为纵坐标进行回归处理，绘制标准曲线，结果表明 柚皮苷在0.103μg-1.03μg、新橙皮苷在0.1228μg-1.228μg范围内线性 良好。其回归方程分别为：y＝8×106x+3502.8，R2＝0.9999；y＝ 9×106x+3789.7，R2＝0.9999。结果见表5-6、图3-4。
表5.柚皮苷线性试验数据结果
序号 柚皮苷(mg/mL) 平均峰面积
1 0.0206 179731
2 0.0412 349704.7
3 0.0824 700253.7
4 0.1236 1037854
5 0.1648 1402754
6 0.206 1739871
表6.新橙皮苷线性实验数据结果
序号 新橙皮苷(mg/mL) 平均峰面积
1 0.02456 235805.7
2 0.04912 459781
3 0.09824 921635.3
4 0.14736 1366551
5 0.19648 1847213
6 0.2456 2290766
4.空白试验
阴性溶液的制备：按处方中药味比例，自配不枳实的群药，按其 工艺制成枳实阴性制剂，再按供试品溶液制备方法制备并测定，结果 枳实阴性溶液在与柚皮苷、新橙皮苷对照品及清肺排毒颗粒供试品相 同保留时间处未见色谱峰干扰。
空白溶剂试验：吸取85％甲醇5μL本发明所述液相方法测定，结 果显示空白溶剂对清肺排毒颗粒供试品无干扰。见附图5-10。
5.稳定性试验
取同一批样品按本发明方法制成供试品溶液，精密吸取同一供试 品溶液5μL，分别于配制后0、3、9、13、20、24、30小时依法测定， 计算柚皮苷及新橙皮苷峰面积RSD％。结果表明，供试品溶液在30小 时内基本稳定。结果见表7。
表7.稳定性试验试验结果
Figure BDA0003153987010000131
6.精密度试验
取同一批样品按本发明方法制成供试品溶液，精密吸取同一供试 品溶液，在所确定的HPLC条件下，进样5μL，重复进样6次，计算柚 皮苷及新橙皮苷峰面积RSD％，结果显示，本方法精密度良好，见表 8。
表8.精密度试验试验结果
Figure BDA0003153987010000141
7.重复性试验
按本发明方法，对同一批样品平行称取6份，按本发明方法制成 供试品溶液，在所确定的HPLC条件下，进行测定，结果显示，本方 法重复性良好，见表9。
表9.重复性试验试验结果
Figure BDA0003153987010000142
8.回收率试验
采用加样回收率测定法，称取已知含量的同一批号的样品(柚皮 苷含量0.27％，新橙皮苷含量0.32％)0.5g，共6份，精密称定；对照 品按照1:1浓度加入到样品中，按质量标准含量测定项下供试品溶液 的制备方法制备成供试品溶液，并按照该项下色谱条件，测定，按下 式计算回收率，经测定柚皮苷的平均回收率为99.52％，RSD为1.19％； 新橙皮苷的均回收率为100.78％，RSD为1.21％。实验结果表明，回收 率符合含量测定的要求，结果见表10。
Figure BDA0003153987010000151
表10.回收率试验试验结果
Figure BDA0003153987010000152
Figure BDA0003153987010000161
9.样品测定结果
按本发明收载方法测定清肺排毒颗粒中柚皮苷及新橙皮苷的含 量，结果见表11。
表11. 15批样品测定结果
Figure BDA0003153987010000162
根据上述2个企业提供的15批样品实际测定数据结果显示，柚皮 苷含量在颗粒剂中最低测定值：30.86mg/袋，最高测定值：78.30mg/ 袋，平均值：46.01mg/袋。新橙皮苷含量在颗粒剂中最低测定值：21.80 mg/袋，最高测定值：101.55mg/袋，平均值：53.50mg/袋。2种成分 的最高测定值与最低测定值相差很大。其原因可能为所用枳实药材为 未成熟的幼果，考虑到枳实药材含量的实际情况，制定颗粒剂上下限 量的样品批数较少，因此，暂时按照最高测定值与最低测定值上下浮 动30％计算颗粒剂中柚皮苷、新橙皮苷的限量。规定本品每袋含枳实 以柚皮苷(C27H32O14)计，在21.60～101.79mg之间。以新橙皮苷 (C28H34O15)计，在15.26～132.02mg之间。
10.系统适应性试验
(1)高效液相色谱仪选择本发明记载方法制成的同一供试品， 分别使用不同品牌高效液相色谱仪(岛津LC2030C、岛津LC-20AT、 Agilent 1200)，相同色谱柱(YMC TriartC18，TA12S05-1546WT， 108YA60114)进行测定，观察测定的分离情况(图11-14)。
(2)色谱柱使用相同品牌相同型号不同序号、相同品牌不同型 号以及不同品牌的多根色谱柱对同一样品进行测定，观察测定的分离 情况，见图15-21)。
仪器及色谱柱系统适应性数据见表12-13。
Figure BDA0003153987010000181
Figure BDA0003153987010000191
Figure BDA0003153987010000201
综上所述，本发明所提供的方法重复性好，精密度高，在不同的 高效液相色谱仪和不同的色谱柱上的测定结果没有显著差异，说明本 发明的方法适用性和重现性好，适于普遍推广。
以上所述仅是本发明的具体实施方式，使本领域技术人员能够理 解或实现本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的技术人员来说 将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精 神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限 制于本文所述的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖 特点相一致的最宽的范围。

Claims (10)

1.清肺排毒颗粒中枳实有效成分的定量方法，其特征在于，采用高效液相色谱法，对供试品和对照品制备的供试品溶液和对照品溶液进行色谱测定，根据测定结果计算供试品中枳实有效成分的含量；
色谱条件包括：以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填充剂，以乙腈为流动相A，以0.1～0.2％v/v磷酸溶液或相应浓度的甲酸溶液为流动相B，进行梯度洗脱；
所述梯度洗脱过程为：
0～30min内，流动相A和流动相B的体积比从16:84匀速渐变至18:82；
30～40min内，流动相A和流动相B的体积比从18:82匀速渐变至20:80；
流速：0.8～1.2mL/min；
检测波长：283～284nm；
柱温：30～35℃；
进样量：2～20μL；
其中，所测定的枳实有效成分为柚皮苷和新橙皮苷，相应地，以柚皮苷和新橙皮苷作为对照品。
2.根据权利要求1所述的定量方法，其特征在于，所使用的色谱柱选自如下色谱柱的一种：
YMC Triart C18 TA12S05-1546WT 4.6*150mm 5μm；
YMC J'sphere ODS-H80 JH08S04-1546WT 4.6*150mm 5μm；
菲罗门GeminiC18110A 4.6*250mm 5μm；
SilGreen GH0525046C18A 4.6*250mm 5μm。
3.根据权利要求1所述的定量方法，其特征在于，在测定前进行柱平衡程序，具体程序如下表：
时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％) 0-30 16-18 84-82 30-40 18-20 82-80 40.01-50 100 0 50.01-65 16 84。
4.根据权利要求1所述的定量方法，其特征在于，以0.2％v/v磷酸溶液为流动相B。
5.根据权利要求1所述的定量方法，其特征在于，所述检测波长为284nm。
6.根据权利要求1所述的定量方法，其特征在于，所述柱温为30℃。
7.根据权利要求1所述的定量方法，其特征在于，所述进样量为2～5μL。
8.根据权利要求1～7任一项所述的定量方法，其特征在于，制备供试品溶液时，采用50～100％甲醇溶液作为提取溶剂，对供试品中的枳实有效成分进行提取。
9.根据权利要求8所述的定量方法，其特征在于，所述定量方法具体为：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.2％v/v磷酸溶液为流动相B，按以下规定进行梯度洗脱；检测波长为284nm；流速为1.0mL/min；柱温为30℃；理论板数按柚皮苷峰计算应不低于6000；
所述梯度洗脱过程为：
0～30min内，流动相A和流动相B的体积比从16:84匀速渐变至18:82；
30～40min内，流动相A和流动相B的体积比从18:82匀速渐变至20:80；
对照品溶液的制备：取柚皮苷对照品和新橙皮苷对照品适量，精密称定，加85％甲醇制成每lmL各含0.1mg柚皮苷与新橙皮苷的混合溶液，即得；
供试品溶液的制备：取本品，研细，取约1.0g，精密称定，置50mL具塞锥形瓶中，精密加入85％甲醇25mL，密塞，称定重量，超声处理15分钟，取出，放冷，再称定重量，用85％甲醇补足减失的重量，摇匀，微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取供试品溶液2～5μL、对照品溶液5μL，注入液相色谱仪，测定，即得；
本品每袋含枳实以柚皮苷(C27H32O14)计，应为21.60～101.79mg；以新橙皮苷(C28H34O15)计，应为15.26～132.02mg。
10.根据权利要求9所述的定量方法，其特征在于，制备供试品溶液时，采用超声处理的方式进行枳实有效成分的提取，超声处理的功率为200-600W，频率为40-50kHz，提取时间为15～60min。
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