CN101669977A - 罗布麻叶胶囊的质量检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种罗布麻叶胶囊的质量检测方法，所述质量检测方法包括性状、鉴别、含量测定，其中，鉴别包括理化鉴别和以罗布麻叶药材为对照品的薄层鉴别，含量测定包括以卢丁为对照品用紫外-可见分光光度法测定胶囊剂中总黄酮的含量和以槲皮素为对照品用高效液相色谱法测定胶囊剂中槲皮素的含量，为罗布麻叶胶囊的质量控制提供了一个可行的标准，有效保证了药品的质量和疗效，并且经实验证明，该质量检测方法稳定、可靠。

Description

罗布麻叶胶囊的质量检测方法

技术领域

本发明涉及药品技术领域，特别是涉及一种由罗布麻叶制成的罗布麻叶胶囊的质量检测方法。

背景技术

罗布麻叶为夹竹桃科植物罗布麻Apocynum venetum L.的干燥叶，夏季采收，属清热利水药，味甘、苦，性凉，归肝经，主要用于高血压、头晕、心悸、失眠等症。现已有以罗布麻叶为原料制成的冲剂与片剂，即罗布麻叶冲剂与罗布麻叶片。罗布麻叶胶囊是在罗布麻叶片剂的基础上改剂而成：

【处方】罗布麻叶714g，制成1000粒(每粒装0.32g)。

【制法】取143g罗布麻叶粉碎成细粉，另取药材571g加水热浸二次(80～90℃)，第一次2小时，第二次1小时，合并浸液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度1.35～1.40(50℃)的清膏。加入上述细粉，混匀、减压干燥，粉碎成细粉，制成颗粒，干燥，分装成胶囊1000粒，即得。

现有的药品标准中有罗布麻叶片的质量控制标准，但罗布麻叶胶囊属于新改剂药物，由于剂型的改变，原有罗布麻叶片的质量控制标准并不适合新的剂型，所以，需要研究和起草新的罗布麻叶胶囊的质量检测方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供罗布麻叶胶囊的质量检测方法，为罗布麻叶胶囊的质量监控提供一个可行的标准，以保证药品质量和疗效。

为了解决上述技术问题，本发明采用如下的技术方案：

本发明罗布麻叶胶囊的质量检测方法包括性状、鉴别、含量测定，其中，鉴别包括用镁粉和浓盐酸进行的理化鉴别和以罗布麻叶药材为对照品的薄层鉴别，含量测定包括以卢丁为对照品用分光光度法测定胶囊剂中总黄酮的含量和以槲皮素为对照品用高效液相色谱法测定胶囊剂中槲皮素的含量。

上述的理化鉴别和薄层色谱鉴别分别为：

理化鉴别：取本品内容物2g，加甲醇20ml，加热回流提取30分钟，滤过，取滤液1ml，加少量镁粉，加浓盐酸4～5滴，置沸水浴加热，即呈红色；

薄层色谱鉴别：取本品内容物1g，加甲醇10ml，超声处理10分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取罗布麻叶对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照药材溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷∶甲醇∶水∶甲酸＝9∶2.5∶0.1∶0.2(体积)的溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铝乙醇溶液，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

前述罗布麻叶胶囊的质量检测方法中的含量测定包括紫外-可见分光光度法测定总黄酮含量和液相色谱法测定槲皮素含量，紫外-可见分光光度法如下：

对照品溶液的制备：精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品30mg，置50ml量瓶中，加70％乙醇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置100ml量瓶中，加70％乙醇至刻度，摇匀，即得；

标准曲线的制备：精密量取对照品溶液1.0ml、2.0ml、2.5ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml，分别置20ml具塞试管中，各加70％乙醇至5ml，加0.1mol/l的三氯化铝溶液3ml及1mol/l的醋酸钾溶液5ml，摇匀，放置40分钟，以相应溶液为空白对照，照紫外-可见分光光度法试验，在415nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；

测定法：取罗布麻叶胶囊内容物1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加70％乙醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，滤过，精密量取续滤液3ml，置10ml量瓶中，加70％乙醇至刻度，摇匀，作供试品溶液；精密取供试品溶液1ml置于20ml具塞试管中，加70％乙醇至5ml，加0.1mol/l的三氯化铝溶液3ml及1mol/l的醋酸钾溶液5ml，摇匀，放置40分钟，另取供试品溶液1ml加70％乙醇4ml和水8ml做空白对照，照分光光度法，在415nm波长处测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的重量，计算，即得。

本品每粒含总黄酮以芦丁(C₂₇H₃₀O₁₆)计，不得少于8mg。

高效液相色谱法为：

色谱条件：色谱柱以十八烷基键合硅胶为填充剂，以甲醇∶0.4％磷酸溶液＝50∶50为流动相，柱温30℃，检测波长360nm，理论塔板数以槲皮素峰计应不低于4000；

对照品溶液的制备：精密称取槲皮素对照品适量，加80％甲醇制成每1ml含30μg槲皮素的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取本品内容物0.3g，精密称定，精密加入80％甲醇50ml，称定重量，密塞，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用80％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，加盐酸1ml，加热回流60分钟，取出立即冷却，转移至25ml容量瓶中，加80％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得；

含量测定：精密吸取对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品每粒含槲皮素不得少于3mg。

前述罗布麻叶胶囊的质量检测方法中的性状为：本品为硬胶囊，内容物为黄褐色粉末和颗粒，气微，味微苦。

罗布麻叶胶囊的质量检测方法研究：

药品来源：罗布麻叶胶囊来源：成都市高新区药工医药生物技术研究所研制

批号：031208    031209    031210

规格：每粒装0.32g

芦丁对照品：中国药品生物制品检定所编号：0080-9705

一、性状

罗布麻叶提取物为棕褐色清膏，加入生药材细粉干燥，粉碎后，制粒，装成胶囊，内容物为黄褐色颗粒，味微苦。

1、内容物吸湿性研究

在五只已恒重的扁称瓶中，分别称取031208批颗粒约1g，精密称定，分别置于用不同浓度硫酸控制的不同相对湿度的密闭容器中，放置72小时，取出精密称定重量，计算百分吸湿率，结果见表1：

表1内容物吸湿性测定结果

相对湿度	10％	30％	50％	70％	90％
						吸湿率	-3.55％	-3.29％	-2.37％	1.31％	12.78％

以相对湿度为横坐标，吸湿率为纵坐标作图，临界相对湿度为65.8％。

2、内容物堆密度测定

取三支洁净量筒，称重，装入已制粒的干颗粒轻轻振动，使均匀，称重，读取体积，计算堆密度，为制剂中胶囊型号选样提供依据。三批样品堆密度测定结果如表2：

表2内容物堆密度测定结果

批号	031208	031209	031210
				堆密度(g/cm3)	0.46	0.46	0.45

本品堆密度平均值为0.46g/cm³。

3、内容物流动性测定

采用固定漏斗法，测定三批样品的休止角，以确定样品流动性，测定结果如表3：

表3流动性测定结果

批号	031208	031209	031210
				a	31.9°	32.1°	32.5°

结果表明，本品休止角平均值为32.2°，内容物流动性较好，可以满足胶囊剂填充的要求。

二、鉴别

参照《中华人民共和国卫生部药品标准》1994年版中药成方制剂第七册收载罗布麻叶片质量标准。

1、薄层色谱鉴别

参照罗布麻叶片质量标准中薄层方法。

薄层条件考察：取罗布麻叶胶囊内容物颗粒1g，加甲醇10ml，超声处理10分钟，过滤，滤液作为供试品溶液。另取罗布麻叶对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水-甲酸(9∶2.5∶0.1∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铝乙醇溶液，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显颜色相同的荧光斑点。

2、化学鉴别

取本品1g，加乙醇10ml，冷浸10分钟，滤过，滤液1ml，加少量镁粉及盐酸2-3滴，显红色。结果见表4

表4罗布麻叶胶囊内容物颗粒化学鉴别结果

批号	031208	031209	031210
				盐酸-镁粉反应	红色	红色	红色

三、含量测定

1、紫外-可见分光光度法

参照《中华人民共和国卫生部药品标准》1994年版中药成方制剂第九册收载罗布麻叶冲剂质量标准即分光光度法测定总黄酮含量。前处理方法参照罗布麻叶药材含量测定。

1.1标准曲线及线性关系

对照品溶液的制备：精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品30mg，置50ml量瓶中，加70％乙醇使溶解，并稀释至刻度，摇匀。精密量取10ml，置100ml量瓶中，加70％乙醇至刻度，摇匀，即得(每1ml中含无水芦丁60μg)。

标准曲线的制备：精密量取对照品溶液1.0ml、2.0ml、2.5ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml，分别置20ml具塞试管中，各加70％乙醇至5ml，加三氯化铝溶液(0.1mol/L)3ml及醋酸钾溶液(1mol/L)5ml，摇匀，放置40分钟，以相应溶液为空白。照分光光度法(中国药典2000年版一部附录V B)，在415nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。见表11：

表11标准曲线的制备

浓度μg/ml	4.585	9.169	11.462	13.754	18.338	22.923
							吸收度A	0.124	0.279	0.368	0.431	0.583	0.739

标准曲线：Y＝0.03334×C-0.02516，r＝0.999678。表明在4.585μg～22.923μg/ml范围内线性良好。

1.2供试品溶液的制备及测定方法

参照罗布麻叶冲剂含量测定方法。

取031208批罗布麻叶内容物颗粒1g，精密称定，置烧瓶中，加70％乙醇50ml，加热回流1小时，放冷，过滤，取续滤液3ml，置10ml量瓶中，加70％乙醇至刻度，作供试品溶液，取1ml供试品溶液置于具塞试管中，加70％乙醇4ml，照含量测定中“加三氯化铝溶液”起，操作，依法测定吸收度，取1ml供试品溶液加4ml70％乙醇和8ml水做空白，从标准曲线上读出供试品溶液中总黄酮的含量，计算即得。

1.3加样回收率试验

取已知含量的罗布麻叶胶囊内容物颗粒，分别加入芦丁对照品溶液，照含量测定方法项操作，结果如表12：

表12回收率试验

试验号	胶囊内容物(g)	样品中总黄酮量(mg)	对照品加入量(mg)	测得量(mg)	回收率(％)	X	RSD(％)
								1	0.3262	10.85	11.02	21.68	98.25
2	0.3241	10.78	11.02	21.59	98.05
								3	0.3190	10.61	11.02	21.54	99.18	98.35	0.69
4	0.3379	11.24	11.02	22.13	98.83

5

0.3136

10.43

11.02

21.17

97.45

回收率为98.35％。

1.4含量测定重复性

取罗布麻叶胶囊内容物颗粒，批号031208，照含量测定方法，重复测定6次，结果见表13。

表13含量测定重复性试验结果

次数	1	2	3	4	5	6	X	RSD(％)
									含量(％)	3.323	3.369	3.274	3.377	3.305	3.310	3.326	1.19

可见，此含量测定方法重复性较好。

1.5溶液放置稳定性

取含量测定重复性试验项下的样品溶液，放置0、1、3、5、8小时后，分别测定吸收度，见表14。

表14溶液放置稳定性试验结果

放置时间(小时)	0	1	3	5	8	X	RSD(％)
								吸收度	0.380	0.384	0.386	0.375	0.383	0.382	1.12

可见，溶液放置8小时基本稳定。

1.6含量测定

照紫外分光光度法《中国药典》2000年版一部附录V A测定。

对照品溶液的制备：精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品30mg，置50ml量瓶中，加70％乙醇使溶解，并稀释至刻度，摇匀。精密量取10ml，置100ml量瓶中，加70％乙醇至刻度，摇匀，即得(每1ml中含无水芦丁60μg)。

标准曲线的制备：精密量取对照品溶液1.0ml、2.0ml、2.5ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml，分别置20ml具塞试管中，各加70％乙醇至5ml，加三氯化铝溶液(0.1mol/L)3ml及醋酸钾溶液(1mol/L)5ml，摇匀，放置40分钟，以相应溶液为空白。照分光光度法(中国药典2000年版一部附录V B)，在415nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

供试品溶液的制备：取罗布麻叶胶囊内容物颗粒1g，精密称定，置烧瓶中，加70％乙醇50ml，加热回流1小时，放冷，过滤，取续滤液3ml，置10ml量瓶中，加70％乙醇至刻度，作供试品溶液。取供试品溶液1ml置于具塞试管中，加70％乙醇4ml，照含量测定中“加三氯化铝溶液”起，操作，依法测定吸收度，取1ml供试品溶液加4ml70％乙醇和8ml水做空白，从标准曲线上读出供试品溶液中总黄酮的含量，计算即得。

取中试十批样品照含量测定方法测定总黄酮含量，结果如表15。

表15中试样品含量测定结果

批号(％)	每粒含量(％)	每粒含量(％)	平均总黄酮含量(％)
				031201	3.34	3.44	3.39
031202	2.98	3.04	3.02
				031203	3.30	3.41	3.36
031204	3.54	3.42	3.49
				031205	3.90	3.82	3.86
031206	3.21	3.28	3.25
				031207	3.56	3.47	3.52
031208	3.07	3.17	3.12
				031209	3.45	3.39	3.42
031210	3.24	3.29	3.27

从十批中试样品测定结果可以看出，含总黄酮以芦丁计均大于3.0％，每粒均大于9mg。因此，将含量限度定为每粒含总黄酮以芦丁计不少于8mg。

2、液相色谱法

仪器岛津LC-10Avp高效液相色谱仪系列，WML色谱工作站(广西威玛龙色谱科技公司)。

试药甲醇(色谱纯)；盐酸(分析纯)；磷酸(分析纯)；水为二次重蒸水；槲皮素对照品(中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用，批号：10081-9905)

色谱条件色谱柱：C₁₈；流动相∶甲醇-0.4％磷酸溶液(50∶50)；流速：1.0ml/min；温度：30℃；检测波长：360nm。

系统适用性试验分别取槲皮素对照品溶液、供试品溶液及同时缺罗布麻叶药材的阴性对照液注入液相色谱仪，记录色谱。从色谱图中可见，槲皮素的保留时间(t_R)约为10.4分钟，即本试验条件下及其他组分分离完全，阴性对照无干扰。理论塔板数以槲皮素峰计算为4500，故定理论塔板数以槲皮素峰计，应不低于4000。

检测波长的选定根据《中国药典》2005年版一部罗布麻叶项下的试验方法及试验结果，槲皮素在360nm下检测，图谱分离较好，且杂质无干扰，故选定360nm为槲皮素的检测波长。

线性关系考察

1对照品溶液的制备精密称取槲皮素对照品14.80mg，置10ml容量瓶中，加80％甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得每1ml含1.480mg的对照品储备液溶液。分别精密吸取对照品储备液，用80％甲醇稀释，摇匀，配制得每1ml含槲皮素7.4、14.8、29.6、35.52、59.2μg的系列对照品溶液。

2标准曲线的绘制分别精密吸取上述系列对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱，以峰面积Y和进样量X(μg)进行线性回归计算，得线性回归方程：Y＝28474X-60563，γ＝0.9995，拟合为过坐标原点的直线方程为Y＝26974X。将每1ml含槲皮素29.6μg的对照品溶液进样所得的峰面积分别代入上两式方程计算，结果的相对偏差为2.05％，由此可视截距近似为零，故正文采用外标一点法计算含量。线性范围：7.4～59.2μg。

表16槲皮素线性关系考察

浓度(μg/ml)	槲皮素峰面积
		7.4	175415
14.8	344393
		29.6	773941
35.52	936791
		59.2	1638655

供试品溶液的制备

1供试品槲皮素提取方法的考察制剂中罗布麻叶药材是以原生粉和提取物形式存在，用适当的溶剂溶解即可，根据槲皮素易溶解于甲醇的性质，试验采用了80％甲醇为溶剂，超声处理和回流，结果见表17。

表17超声和回流提取对制剂中槲皮素含量的影响

	超声提取	回流提取
			含量(％)	0.017％	0.035％

从表17中可见，回流提取的结果高于超声提取的结果，因此，选择回流提取。

2供试品溶液的制备制剂经80％甲醇50ml，加热回流提取1小时后，放冷，用80％甲醇补足减失的重量，取续滤液加盐酸回流60分钟，立即冷却，用80％甲醇溶解、定容，得供试液，如此处理后，HPLC测定杂质无干扰，回收率好。

3阴性对照液的制备取缺罗布麻叶药材的阴性制剂，按供试品制备方法制备阴性对照样液。

精密度试验取一供试品，按制剂质量标准中供试液的制备方法制备供试液，重复进样5次，测定峰面积，平均峰面积为818159.8，RSD＝1.74％。

表18制剂供试品溶液中槲皮素的精密度试验

进样次数	1	2	3	4	5	平均	RSD(％)
								峰面积	818532	808763	839834	821051	802619	818159.8	1.74

重复性试验取供试品，按制剂质量标准草案中供试液的制备方法制备5份供试液，分别进样，测定峰面积，计算结果列入表，平均含量1.456％，RSD＝1.49％。

表19制剂供试品中槲皮素的重复性试验

样号	1	2	3	4	5	平均	RSD(％)
								含量(％)	1.43	1.49	1.46	1.45	1.45	1.456	1.49

稳定性试验取供试品，按制剂质量标准中供试液的制备方法制备供试液，按规定的时间测定，结果表明供试品溶液中槲皮素在30小时内稳定。

表20供试品中槲皮素稳定性试验

时间(h)	0	3	5	6	30	平均	RSD(％)
								峰面积	818532	821051	839834	840062	802619	824419.6	1.92

回收率试验称取已测定含量的制剂(平均含量1.37％)9份，精密加入槲皮素对照品适量，按制剂质量标准制备9份供试液，分别进样，测定峰面积，计算结果列入表，槲皮素的平均回收率为98.2％，RSD＝2.9％。

表21  制剂供试品中槲皮素的回收率试验

实验次数

样品量(g)

含槲皮素(mg)

加入槲皮素(mg)

测得量(mg)

回收率(％)

平均回收率(％)

RSD(％)

123456789

0.15960.15320.15980.15020.14960.14870.15870.15610.1573

2.186522.098842.189262.057742.049522.037192.174192.138572.15501

1.481.481.482.962.962.964.444.444.44

3.644033.565753.723964.846864.956394.834616.575266.446166.57484

98.599.1103.794.298.294.599.197.099.5

98.3

2.9

范围试验

精密称取不同量的供试品各3份(80％、100％、120％)，按照含量测定项下方法，制备供试品溶液，进行含量测定，含量测定平均值为1.37％，RSD＝2.5％。

范围试验含量测定结果(％)

序号	1	2	3	均值	RSD％
						80％取样量	1.33	1.33	1.38	1.37	2.5
100％取样量	1.38	1.37	1.36
						120％取样量	1.42	1.43	1.37

样品测定按质量标准制备供试液和对照品溶液，分别进样，记录色谱，测定峰面积，按下式计算含量：

式中：C_对：槲皮素对照品溶液浓度(mg/ml)

      A_对：供试品溶液浓度

      A_样：槲皮素对照品峰面积

W_i：平均粒重(g)

W：供试品称样量(g)

125：供试品稀释体积(ml)

3批中试样品中槲皮素含量测定结果

样品槲皮素含量限度从3批中试样品测定结果可见，各批号样品槲皮素提取率均在70％以上，故制剂中槲皮素提取率按不低于70％计。样品中槲皮素含量限度计算如下：槲皮素含量限度＝制剂含罗布麻叶药材(g/g)×罗布麻叶药材含槲皮素限度×槲皮素提取率＝714g×0.60％×70％×1000/1000粒＝3.0mg/粒。

本发明提供了罗布麻叶胶囊的质量检测方法，为罗布麻叶胶囊的质量控制提供了一个可行的标准，有效保证了药品的质量和疗效，并且经实验证明，该质量检测方法稳定、可靠。

具体实施方式

【处方】罗布麻叶714g，制成1000粒(每粒装0.32g)。

【制法】取143g罗布麻叶粉碎成细粉，另取药材571g加水热浸二次(80～90℃)，第一次2小时，第二次1小时，合并浸液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度1.35～1.40(50℃)的清膏。加入上述细粉，混匀、减压干燥，粉碎成细粉，制成颗粒，干燥，分装成胶囊1000粒，即得。

【功能与主治】降压。用于高血压头晕，心悸。

【用法与用量】口服，一次4粒，一日3次。

【规格】每粒装0.32g。

【贮藏】密封。

质量检测方法：

【性状】本品为硬胶囊，内容物为黄褐色粉末和颗粒，气微，味微苦。

【鉴别】(1)理化鉴别：取本品内容物2g，加甲醇20ml，加热回流提取30分钟，滤过，取滤液1ml，加少量镁粉，加浓盐酸4～5滴，置沸水浴加热，即呈红色；

(2)薄层色谱鉴别：取本品内容物1g，加甲醇10ml，超声处理10分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取罗布麻叶对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照药材溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷∶甲醇∶水∶甲酸＝9∶2.5∶0.1∶0.2(体积)的溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铝乙醇溶液，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

【检查】应符合中国药典2000年版一部附录I L胶囊剂项下的各项规定。

【含量测定】

(1)总黄酮含量测定：

对照品溶液的制备：精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品30mg，置50ml量瓶中，加70％乙醇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置100ml量瓶中，加70％乙醇至刻度，摇匀，即得；

标准曲线的制备：精密量取对照品溶液1.0ml、2.0ml、2.5ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml，分别置20ml具塞试管中，各加70％乙醇至5ml，加0.1mol/l的三氯化铝溶液3ml及1mol/l的醋酸钾溶液5ml，摇匀，放置40分钟，以相应溶液为空白对照，照紫外-可见分光光度法试验，在415nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；

测定法：取罗布麻叶胶囊内容物1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加70％乙醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，滤过，精密量取续滤液3ml，置10ml量瓶中，加70％乙醇至刻度，摇匀，作供试品溶液；精密取供试品溶液1ml置于20ml具塞试管中，加70％乙醇至5ml，加0.1mol/l的三氯化铝溶液3ml及1mol/l的醋酸钾溶液5ml，摇匀，放置40分钟，另取供试品溶液1ml加70％乙醇4ml和水8ml做空白对照，照分光光度法，在415nm波长处测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的重量，计算，即得。

本品每粒含总黄酮以芦丁(C₂₇H₃₀O₁₆)计，不得少于8mg。

(2)槲皮素含量测定：

色谱条件：色谱柱以十八烷基键合硅胶为填充剂，以甲醇∶0.4％磷酸溶液＝50∶50为流动相，柱温30℃，检测波长360nm，理论塔板数以槲皮素峰计应不低于4000；

对照品溶液的制备：精密称取槲皮素对照品适量，加80％甲醇制成每1ml含30μg槲皮素的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取本品内容物0.3g，精密称定，精密加入80％甲醇50ml，称定重量，密塞，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用80％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，加盐酸1ml，加热回流60分钟，取出立即冷却，转移至25ml容量瓶中，加80％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得；

含量测定：精密吸取对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品每粒含槲皮素不得少于3mg。

Claims (7)

1.罗布麻叶胶囊的质量检测方法，其特征在于：所述质量检测方法包括性状、鉴别、含量测定，其中，鉴别包括用镁粉和浓盐酸进行的理化鉴别和以罗布麻叶药材为对照品的薄层鉴别，含量测定包括以卢丁为对照品用紫外-可见分光光度法测定胶囊剂中总黄酮的含量和以槲皮素为对照品用高效液相色谱法测定胶囊剂中槲皮素的含量。

2.按照权利要求1所述罗布麻叶胶囊的质量检测方法，其特征在于：所述鉴别为：

理化鉴别：取本品内容物2g，加甲醇20ml，加热回流提取30分钟，滤过，取滤液1ml，加少量镁粉，加浓盐酸4～5滴，置沸水浴加热，即呈红色；

薄层色谱鉴别：取本品内容物1g，加甲醇10ml，超声处理10分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取罗布麻叶对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照药材溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷∶甲醇∶水∶甲酸＝9∶2.5∶0.1∶0.2(体积)的溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铝乙醇溶液，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

3.按照权利要求1所述罗布麻叶胶囊的质量检测方法，其特征在于：所述用紫外-可见分光光度法测定胶囊剂中总黄酮的含量为：

对照品溶液的制备：精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品30mg，置50ml量瓶中，加70％乙醇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置100ml量瓶中，加70％乙醇至刻度，摇匀，即得；

标准曲线的制备：精密量取对照品溶液1.0ml、2.0ml、2.5ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml，分别置20ml具塞试管中，各加70％乙醇至5ml，加0.1mol/l的三氯化铝溶液3ml及1mol/l的醋酸钾溶液5ml，摇匀，放置40分钟，以相应溶液为空白对照，照紫外-可见分光光度法试验，在415nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；

测定法：取罗布麻叶胶囊内容物1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加70％乙醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，滤过，精密量取续滤液3ml，置10ml量瓶中，加70％乙醇至刻度，摇匀，作供试品溶液；精密取供试品溶液1ml置于20ml具塞试管中，加70％乙醇至5ml，加0.1mol/l的三氯化铝溶液3ml及1mol/l的醋酸钾溶液5ml，摇匀，放置40分钟，另取供试品溶液1ml加70％乙醇4ml和水8ml做空白对照，照分光光度法，在415nm波长处测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的重量，计算，即得。

4.按照权利要求3所述罗布麻叶胶囊的质量检测方法，其特征在于：本品每粒含总黄酮以芦丁(C27H30016)计，不得少于8mg。

5.按照权利要求1所述罗布麻叶胶囊的质量检测方法，其特征在于：所述用高效液相色谱法测定胶囊剂中槲皮素的含量为：

色谱条件：色谱柱以十八烷基键合硅胶为填充剂，以甲醇∶0.4％磷酸溶液＝50∶50为流动相，柱温30℃，检测波长360nm，理论塔板数以槲皮素峰计应不低于4000；

对照品溶液的制备：精密称取槲皮素对照品适量，加80％甲醇制成每1ml含30μg槲皮素的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取本品内容物0.3g，精密称定，精密加入80％甲醇50ml，称定重量，密塞，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用80％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，加盐酸1ml，加热回流60分钟，取出立即冷却，转移至25ml容量瓶中，加80％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得；

含量测定：精密吸取对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，即得。

6.按照权利要求5所述罗布麻叶胶囊的质量检测方法，其特征在于：本品每粒含槲皮素不得少于3mg。

7.按照权利要求1所述罗布麻叶胶囊的质量检测方法，其特征在于：所述性状为：本品为硬胶囊，内容物为黄褐色粉末和颗粒，气微，味微苦。