CN103823000A - 一种芭蕉根的质量检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种芭蕉根质量检测方法，使用超高效液相色谱法分别测定芭蕉根中羽扇豆酮和β-谷甾醇的含量。采用本发明的方法，能有效检测芭蕉根中的活性成分，对于控制芭蕉根的药材质量具有十分重要的意义。

Description

一种芭蕉根的质量检测方法

技术领域

本发明属于中药原材料技术领域，具体而言，涉及一种芭蕉根的质量检测方法。

背景技术

糖尿病是一种由于胰岛素分泌缺陷及(或)其生物学作用障碍引起的以高血糖为特征的代谢性疾病，糖尿病已经成为世界上继肿瘤、心脑血管病之后第三位严重危害人类健康的慢性疾病。因此应以积极预防为主，其中芭蕉根具有良好的抗糖尿病的作用。

但芭蕉根药材如果没有严格的质量标准，得到的产品不能确保其质量，结果必将影响该药物的临床疗效；所以为控制芭蕉根的治疗糖尿病作用，确保用药的安全、有效及产品质量的稳定，制定一个严格可靠的检测方法成为保证药品质量的基本要求。目前有测定芭蕉根中多糖及皂苷的含量报道，而本专利中检测的羽扇豆酮和β-谷甾醇均为抗糖尿病的活性成分，通过检测芭蕉根药材中羽扇豆酮和β-谷甾醇的含量，从而确保芭蕉根药材的质量，目前未见研究报道。此外，由于芭蕉根中的成分复杂，如何采用合适的条件来检测羽扇豆酮和β-谷甾醇的含量也存在技术上的难题。

发明内容

本发明的目的是提供一种芭蕉根质量检测方法，为了实现本发明的目的，拟采用如下技术方案。

本发明一方面涉及一种芭蕉根质量检测方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）对照品溶液的制备：分别精密称取羽扇豆酮对照品和β-谷甾醇对照品，加甲醇制成每1mL各含0.4032mg和0.4480.mg的对照品溶液；

（2）供试品溶液的制备：取芭蕉根粉末1.0g，精密称定，置100mL圆底烧瓶中，加甲醇溶液50mL，回流提取90分钟，过滤，再加甲醇50mL，加热回流90min，过滤，合并滤液，放冷，水浴蒸干，残余物加甲醇使溶解，转移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；

（3）测定：分别精密吸取对照品溶液0.5μL与供试品溶液1μL，注入超高效液相色谱仪，测定；色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，AgilentC18column(2.1mm×100mm，1.8μm)；以甲醇：0.1%乙酸水=100：4为流动相；流速0.1mL·min^-1；检测波长为206nm；柱温为50℃。

在本发明的一个优选实施方式中，所述的检测是定量检测。

采用本发明的方法，能有效检测芭蕉根中的活性成分，对于控制芭蕉根的药材质量具有十分重要的意义。

具体实施方式

实施例1：

芭蕉根药材中羽扇豆酮和β-谷甾醇的检测

（1）仪器与试药

仪器：超高效液相色谱仪（安捷伦1290）、HH-6数显恒温水浴锅(常州澳华仪器有限公司)、天平（AB204-S）。

试剂：乙腈（美国TEDIA公司）色谱纯、甲醇（美国TEDIA公司）色谱纯、娃哈哈纯净水。

对照品：羽扇豆酮对照品（经高效液相法检测纯度大于98%）；β-谷甾醇对照品（上海源叶生物科技有限公司，批号为20120214，纯度大于98%）。

样品：本发明药材（芭蕉根，贵阳中医学院生药实验室自行采集）。

（2）对照品溶液的制备

分别精密称取羽扇豆酮对照品和β-谷甾醇对照品，加甲醇制成每1mL各含0.4032mg和0.4480mg的对照品溶液。

（3）色谱条件优选

色谱波长的优选：分别比较210nm、206nm、204nm、254nm等波长下芭蕉根中羽扇豆酮和β-谷甾醇的分离度和理论塔板数及其峰面积，结果证明在波长206nm处，芭蕉根中羽扇豆酮和β-谷甾醇的分离度最好，峰面积最大，干扰因素最小。

色谱柱温度的优选：本实验比较了25℃、35℃、45℃、50℃、55℃等柱温对芭蕉根中羽扇豆酮和β-谷甾醇的影响，实验结果表明50℃柱温条件下，分离度好，保留时间短，理论塔板数高。

流动相的选择：本实验参照2010版《中国药典》方法比较甲醇-乙腈、乙腈-0.1%醋酸、甲醇-水等不同组分、不同比例的流动相，芭蕉根中羽扇豆酮和β-谷甾醇都不能达到完全分离。而本实验设计甲醇-1%醋酸水的等度洗脱，可达到两个成分间的完全分离。最终确定最佳的色谱条件为：甲醇：0.1%乙酸水=100：4为流动相，流速为0.1mL·min^-1，检测波长为206nm，柱温为50℃。

（4）系统适应性试验

供试品溶液的制备：取芭蕉根粉末1.0g，精密称定，置100mL圆底烧瓶中，加甲醇溶液50mL，回流提取90分钟，过滤，再加甲醇50mL，加热回流90min，过滤，合并滤液，放冷，水浴蒸干，残余物加甲醇使溶解，转移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；

空白溶液的制备：于100mL圆底烧瓶中，加甲醇溶液50mL，回流提取90分钟，过滤，再加甲醇50mL，加热回流90min，过滤，合并滤液，放冷，水浴蒸干，残余物加甲醇使溶解，转移至10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定方法：分别精密吸取对照品溶液0.5μL、供试品溶液1μL、空白溶液1μL，注入超高效液相色谱仪，测定，即得。

由图谱可知，在上述色谱条件下进样分析，羽扇豆酮和β-谷甾醇与相邻色谱峰的分离度均大于1.5。理论塔板数以羽扇豆酮和β-谷甾醇峰计算不低于6000。

（5）供试品溶液的制备方法选择

A.提取溶剂的选择

分别取经干燥芭蕉根药材粉末约1.0g，精密称定，置于2个100mL圆底烧瓶中，分别加入甲醇、无水乙醇、50%甲醇和50%乙醇和各50mL回流提取90min，滤过，再分别加甲醇、无水乙醇、50%甲醇和50%乙醇各50mL，再次回流90min，滤过，合并滤液，水浴蒸干，残余物分别加甲醇使溶解，转移至10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。结果见表1。

B.提取方式的选择

分别取经干燥芭蕉根药材粉末约1.0g，精密称定，置于2个100mL圆底烧瓶中，分别超声提取和回流提取1.5h，滤过，再分别加甲醇各50mL，回流提取90min，滤过，分别合并滤液，水浴蒸干，残余物分别加甲醇使溶解，转移至10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。结果见表1。

表1不同溶剂和提取方式的提取效率

结论：比较甲醇、无水乙醇、50%甲醇和50%乙醇四种提取溶剂，我们发现甲醇提取效率较高，故选择甲醇作为提取溶剂。超声和回流提取两种方式，发现超声提取，有物质干扰β-谷甾醇的检测。从提取效率和较好的同时检测羽扇豆酮和β-谷甾醇的角度综合考虑，故选择甲醇为提取溶剂回流提取。

C.提取次数的选择

取芭蕉根药材粉末约1.0g，精密称定，100mL圆底烧瓶中，加甲醇溶液50mL，加热回流提取90min（提取次数按表2操作），滤过，水浴蒸干，残余物分别加甲醇使溶解，转移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。结果见表2。

表2不同回流提取次数的提取效率（mg/g）

结论：回流2次、3次较回流1次，羽扇豆酮和β-谷甾醇含量有较大的增加；而回流2次相对回流3次，羽扇豆酮和β-谷甾醇含量并无显著性差异，综合考虑选择，提取回流2次为最佳提取次数。

（6）线性关系的考察

分别按（2）项下精密吸取羽扇豆酮和β-谷甾醇对照品溶液0.1μL、0.5μL、1μL、1.5μL、2.5μL、3.5μL、7μL，注入仪器，分别按（3）项下的色谱条件进样，测定峰面积，以浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，进行线性回归得到线性方程(n=7)：

羽扇豆酮y=3.0869x-29.669(R=0.9996)；

β-谷甾醇y=2.7337x-10.873(R=0.9995)；

证明羽扇豆酮和β-谷甾醇对照品的质量浓度分别在5.76μg/mL-403.2μg/mL和6.4μg/mL-448.0μg/mL范围内具有良好的线性关系。

（7）精密度试验

取同一批号样品，按（4）项下的供试品溶液制备方法操作，吸取供试品溶液1μL，注入超高效液相色谱仪，按（3）项下所述的色谱条件测定峰面积，重复进样6次，以羽扇豆酮和β-谷甾醇峰面积进行计算，求出相对标准偏差RSD（%），结果见表3、表4。

表3羽扇豆酮精密度考察结果

表4β-谷甾醇精密度考察结果

结果：羽扇豆酮和β-谷甾醇的精密度相对标准偏差RSD（%）<3%（n=6），表明精密度良好。

（8）稳定性试验

取同一批号样品，按（4）项下的供试品溶液制备方法操作，吸取供试品溶液1μL，分别在0、2、4、8、12小时注入超高效液相色谱仪，按（3）项下的色谱条件测定峰面积，以羽扇豆酮和β-谷甾醇峰面积进行计算，求出相对标准偏差RSD（%），结果见表5、表6。

表5羽扇豆酮稳定性考察结果

表6β-谷甾醇稳定性考察结果

结论：上述稳定性结果表明，羽扇豆酮和β-谷甾醇在12小时内稳定性好，因此符合要求。

（9）重现性试验

取同一批号样品，按（4）项下的供试品溶液制备方法操作，吸取供试品溶液1μL，注入超高效液相色谱仪，按（3）项下的色谱条件测定峰面积，计算出各样品中羽扇豆酮和β-谷甾醇总含量，结果见表7。

表7重复性试验结果表

结果表明：该样品中羽扇豆酮和β-谷甾醇的RSD均小于3%，故重现性良好。

（10）加样回收率试验

取同一批号本样品，混匀，取约1.0g，9份，精密称定，置圆底烧瓶瓶中，每三份分别加入羽扇豆酮和β-谷甾醇单体，按（4）项下，供试品溶液制备方法操作，吸取对照品溶液和供试品溶液各0.5μL和1μL，注入超高效液相色谱仪，按（3）项下的色谱条件测定峰面积，按下式计算出回收率，计算式如下：

回收率=（C-A）/B×100%；

其中，A：样品中含对应对照品的量（mg）；

B：对照品加入量（mg）；

C：测得量（mg）。

结果见表8。

表8加样回收的结果

结论：羽扇豆酮和β-谷甾醇的平均回收率均在95%-105%之间分别为，RSD分别小于3%(n=9)，该结果表明回收率高。

（12）样品测定

取6批样品，按（5）项下供试品溶液制备方法操作，制备供试品溶液，测定6批芭蕉根样品中羽扇豆酮和β-谷甾醇的含量，测定结果见表9。

表96批样品含量测定结果

测定结果表明，在平均含量的基础上，总含量下浮20%制定本药材的含量限度，限定芭蕉根药材中羽扇豆酮和β-谷甾醇成分，分别不得低于0.149mg/g和0.093mg/g。

含量测定：

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，AgilentC18column(2.1mm×100mm，1.8μm)；以甲醇：0.1%乙酸水=100：4为流动相；流速0.1mL·min^-1；检测波长为206nm；柱温为50℃；理论塔板数以羽扇豆酮和β-谷甾醇峰计算不低于6000；

对照品溶液的制备：分别精密称取羽扇豆酮对照品和β-谷甾醇对照品，加甲醇制成每1mL各含0.4032mg和0.4480mg的对照品溶液；

供试品溶液的制备：取芭蕉根粉末1.0g，精密称定，置100mL圆底烧瓶中，加甲醇溶液50mL，回流提取90分钟，过滤，再加甲醇50mL，加热回流90min，过滤，合并滤液，放冷，水浴蒸干，残余物加甲醇使溶解，转移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；

测定法：分别精密吸取对照品溶液0.5μL与供试品溶液1μL，注入超高效液相色谱仪，测定，即得；

测定结果表明，在平均含量的基础上，总含量下浮20%制定本药材的含量限度，限定芭蕉根药材中羽扇豆酮和β-谷甾醇成分，分别不得低于0.149mg/g和0.093mg/g。

以上所述是本发明的优选实施例，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明所述原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (2)

1.一种芭蕉根质量检测方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）对照品溶液的制备：分别精密称取羽扇豆酮对照品和β-谷甾醇对照品，加甲醇制成每1mL各含0.4032mg和0.4480mg的对照品溶液；

（2）供试品溶液的制备：取芭蕉根粉末1.0g，精密称定，置100mL圆底烧瓶中，加甲醇溶液50mL，回流提取90分钟，过滤，再加甲醇50mL，加热回流90min，过滤，合并滤液，放冷，水浴蒸干，残余物加甲醇使溶解，转移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；

（3）测定：分别精密吸取对照品溶液0.5μL与供试品溶液1μL，注入超高效液相色谱仪，测定；色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，AgilentC18column(2.1mm×100mm，1.8μm)；以甲醇：0.1%乙酸水=100：4为流动相；流速0.1mL·min^-1；检测波长为206nm；柱温为50℃。

2.根据权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于所述的检测方法是定量检测。