CN107586312A

CN107586312A - 一种芭蕉根中提取高纯度羽扇豆酮的方法

Info

Publication number: CN107586312A
Application number: CN201710612201.0A
Authority: CN
Inventors: 胡志林
Original assignee: Guizhou Weikang Pharmaceutical Ltd By Share Ltd Subsidiary
Current assignee: Guizhou Weikang Pharmaceutical Ltd By Share Ltd Subsidiary
Priority date: 2017-07-25
Filing date: 2017-07-25
Publication date: 2018-01-16

Abstract

本发明提供了一种芭蕉根中提取高纯度羽扇豆酮的方法，芭蕉根水提得芭蕉根水提物，芭蕉根水提物干燥粉碎成粉末，萃取后，旋转蒸发仪减压浓缩，得到乙酸乙酯萃取层浸膏，乙酸乙酯层浸膏分离，得到羽扇豆酮。用该方法从芭蕉根提取物中分离有效成分时，得到的有效成分纯度高，特别是羽扇豆酮的纯度达99%以上，能作为芭蕉根单体对照品使用，有利于对芭蕉根药材及其制剂的开发和质量控制。

Description

一种芭蕉根中提取高纯度羽扇豆酮的方法

技术领域

本发明涉及芭蕉根中有效成分的提取方法，具体涉及一种芭蕉根中提取高纯度羽扇豆酮的方法。

背景技术

芭蕉根为芭蕉科植物芭蕉（Musa basjoo Sied．et Zucc．）的干燥根茎。为贵州省少数民族用药，具有清热解毒、止渴、利尿等功效，用于风热头痛，水肿脚气，血淋，肌肤肿痛，丹毒治疗。以芭蕉根为组成药之一的复方制剂，如肿痛舒喷雾剂、骨康胶囊已广泛用于临床，具有显著的消肿止痛、舒筋通络的作用。

因此，对芭蕉根的深入研究具有十分重要的意义并成为国内外的一个研究热点。国外对于芭蕉根的研究大多数倾向于药理研究。而我国国内，对于芭蕉根的研究就比较全面，但都不深入。对于芭蕉根的研究主要包括其性状研究、生产环境研究、药理研究以及活性筛选研究。目前的还没有芭蕉根单体对照品，主要原因是：现有方法对芭蕉根进行提取分离时，得到的有效成分纯度低，不能作为芭蕉根单体对照品。限制了对芭蕉根药材及其制剂的开发和质量控制。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种芭蕉根中提取高纯度羽扇豆酮的方法，用该方法从芭蕉根提取物中分离有效成分时，得到的有效成分纯度高，特别是羽扇豆酮的纯度达99%以上，能作为芭蕉根单体对照品使用，有利于对芭蕉根药材及其制剂的开发和质量控制。

本发明采用如下技术方案实现：一种芭蕉根中提取高纯度羽扇豆酮的方法，包括以下步骤：

（1）芭蕉根水提得芭蕉根水提物；

（2）芭蕉根水提物干燥粉碎成粉末，萃取后，旋转蒸发仪减压浓缩，得到乙酸乙酯萃取层浸膏；

（3）乙酸乙酯层浸膏分离，得到羽扇豆酮。

前述的芭蕉根中提取高纯度羽扇豆酮的方法中，步骤（1）中，所述的芭蕉根水提得芭蕉根水提物；是芭蕉根加4-8倍量水煎煮2-3次，每次50-90min，合并煎液，滤过，滤液浓缩至60-65℃下相对密度为1.31-1.35的浸膏。

前述的芭蕉根中提取高纯度羽扇豆酮的方法中，所述的芭蕉根水提得芭蕉根水提物；是芭蕉根加6倍量水煎煮3次，每次70min，合并煎液，滤过，滤液浓缩至60-65℃下相对密度为1.31-1.35的浸膏。

前述的芭蕉根中提取高纯度羽扇豆酮的方法中，步骤（2）中，所述的萃取；是芭蕉根水提物粉末用1-2倍量水分散后，装入分液漏斗中，用乙酸乙酯萃取2-3次。

前述的芭蕉根中提取高纯度羽扇豆酮的方法中，所述的萃取；是芭蕉根水提物粉末用1.5倍量水分散后，装入分液漏斗中，用乙酸乙酯萃取3次。

前述的芭蕉根中提取高纯度羽扇豆酮的方法中，步骤（3）中，所述的取乙酸乙酯层浸膏分离；是乙酸乙酯层浸膏用氯仿溶解，加0.5-1.5倍量的硅胶拌匀，挥干溶剂；另取浸膏量28-32倍量的硅胶干法装入常压色谱柱中；采用常压硅胶柱色谱法进行分离，将浸膏装入常压硅胶柱中，并覆盖上一层0.2-3cm厚的硅胶；以石油醚-丙酮（9：1-6：1）系统进行洗脱，每个梯度洗3个柱体积，每个流分400ml，共收集得到18个流分；最后甲醇冲柱，减压回收溶剂；Fr(2-15)合并；将合并Fr(2-15)的液体挥干后用常规量的甲醇反复重结晶。

前述的芭蕉根中提取高纯度羽扇豆酮的方法中，所述的取乙酸乙酯层浸膏分离；是乙酸乙酯层浸膏用氯仿溶解，加1.0倍量的硅胶拌匀，挥干溶剂；另取浸膏量30倍量的硅胶干法装入常压色谱柱中；采用常压硅胶柱色谱法进行分离，将浸膏装入常压硅胶柱中，并覆盖上一层0.5cm厚的硅胶；以石油醚-丙酮（9：1-6：1）系统分为6个梯度进行洗脱，每个梯度洗3个柱体积，每个流分400ml，共收集得到18个流分；最后甲醇冲柱，减压回收溶剂Fr(2-15)合并；将合并Fr(2-15) 的液体挥干后用常规量的甲醇反复重结晶。

前述的芭蕉根中提取高纯度羽扇豆酮的方法中，所述梯度为：石油醚-丙酮=9:1、8.5:1、8:1、7.5:1、7:1或6.5:1。

申请人对芭蕉根进行了大量的实验研究，部分如下：

实验例1：芭蕉根指标成分确定及化学对照品的研制

1考察工艺

1.1本发明工艺，见图1，具体包括以下步骤：

（1）芭蕉根加6倍量水煎煮3次，每次60min，合并煎液，滤过，滤液浓缩至60-65℃下相对密度为1.31-1.35的浸膏，浸膏干燥后粉碎成粉末，粉末350g用1.5倍量的水分散后装入5L的分液漏斗中，用乙酸乙酯萃取数次，旋转蒸发仪减压浓缩，得到乙酸乙酯萃取层浸膏，取乙酸乙酯层浸膏备用。

（2）取以上乙酸乙酯层浸膏，用氯仿溶解，加1.0倍量的硅胶拌匀，挥干溶剂；另取浸膏量30倍量的硅胶干法装入常压色谱柱中；采用常压硅胶柱色谱法进行分离，将浸膏装入常压硅胶柱中，并覆盖上一层0.5cm厚的硅胶；以石油醚-丙酮系统分为6个梯度进行洗脱，每个梯度洗3个柱体积，每个流分400ml，共收集得到18个流分；最后甲醇冲柱，减压回收溶剂Fr(2-15)合并；将合并Fr(2-15)液挥干后用常规量的甲醇反复重结晶；得到化合物BJ-2；所述梯度为：石油醚-丙酮=9:1、8.5:1、8:1、7.5:1、7:1或6.5:1。

1.2对比工艺

包括以下步骤：芭蕉加6倍量水煎煮3次，每次60min，合并煎液，滤过，滤液浓缩至60-65℃下相对密度为1.31-1.35的浸膏，得芭蕉水提物；芭蕉水提物干燥粉碎成粉末，粉末(过4号筛 )500g，精密称定，置150 m L 的带塞锥形瓶中，加人70％甲醇5 mL，冷浸1h ，超声处理30 m in，滤过，残渣再超声提取1次，合并提取液，旋转蒸发仪减压浓缩，得到乙酸乙酯萃取层浸膏，取乙酸乙酯层浸膏备用；取以上乙酸乙酯层，用氯仿溶解，加与样品重量1倍量的硅胶（100-200目）拌匀，挥干溶剂。另取样品量30倍量的硅胶（200~300目）干法装入常压色谱柱中。采用常压硅胶柱色谱法进行分离，将样品装入常压硅胶柱中，并覆盖上一层0.5cm厚的硅胶；以石油醚-丙酮系统分为6个梯度进行洗脱，每个梯度洗3个柱体积，每个流分400ml，共收集得到18个流分；最后甲醇冲柱，减压回收溶剂Fr(2-15)合并；将合并Fr(2-15)液挥干后用常规量的甲醇反复重结晶；得到化合物BJ-2-0；所述梯度为：石油醚-丙酮=9:1、8.5:1、8:1、7.5:1、7:1或6.5:1。

2化合物的结构鉴定

2.1 BJ-2和BJ-2-0的结构鉴定

2.1.1 BJ-2的结构鉴定

化合物BJ-2：白色粉末，mp171～172℃，溶于氯仿，Liebermann-Burchard反应呈阳性，提示该化合物为三萜类化合物。在¹H-NMR(400MHz,CDCl3)图谱中，在高场区δ0.7-1.8间有8个很强的甲基峰，δ4.68（1H,s）、δ4.57（1H,s）示烯碳H。¹³CNMR（100MHz，CDCl₃）δppm：36.01(1-C)，32.9(2-C)，213.6(3-C=O)，46.0(4- C)，52.2(5-C)，19.2(6-C)，32.7(7-C)，41.0(8-C)，50.0(9-C)，36.1(10-C)，20.3(11- C)，24.9(12-C)，35.4(13-C)，41.6(14-C)，28.1(15-C)，35.3(16-C)，45.3(17-C)，48.7(18-C)，47.1(19-C)，150.2(20-C)，29.2(21-C)，41.0(22-C)，27.0(23-C)，20.2(24-C)，18.6(18-C)，18.3(26-C)，17.9(27-C)，18.4(28-C)，109.4(29-C)，19.1(30-C)。因此，该化合物被鉴定为羽扇豆酮（lupeone）。见图2至图4。

2.2.2 BJ-2-0的结构鉴定

化合物BJ-2-0：白色粉末，mp171-172℃，溶于氯仿，Liebermann-Burchard反应呈阳性，提示该化合物为三萜类化合物。在¹H-NMR(400MHz,CDCl3)图谱中，在高场区δ0.7-1.8间有8个很强的甲基峰，δ4.68（1H,s）、δ4.57（1H,s）示烯碳H。¹³CNMR（100MHz，CDCl₃）δppm：36.01(1-C)，32.9(2-C)，213.6(3-C=O)，46.0(4- C)，52.2(5-C)，19.2(6-C)，32.7(7-C)，41.0(8-C)，50.0(9-C)，36.1(10-C)，20.3(11- C)，24.9(12-C)，35.4(13-C)，41.6(14-C)，28.1(15-C)，35.3(16-C)，45.3(17-C)，48.7(18-C)，47.1(19-C)，150.2(20-C)，29.2(21-C)，41.0(22-C)，27.0(23-C)，20.2(24-C)，18.6(18-C)，18.3(26-C)，17.9(27-C)，18.4(28-C)，109.4(29-C)，19.1(30-C)。因此，该化合物被鉴定为羽扇豆酮（lupeone）。

3纯度测定

3.1 羽扇豆酮的纯度测定

3.1.1 BJ-2的纯度测定

薄层条件：GF预制薄层板；实验方法：取BJ-2的样品5 mg溶解于10 ml甲醇中，配制成每1ml甲醇含羽扇豆酮0.5 mg的溶液，按照薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部附录VIB）试验，点于同一硅胶GF薄层板上，以两种不同的溶剂系统为展开剂，展开，取出，晾干，喷硫酸乙醇显色剂，加热检视，除样品只有淡红色暗斑外，没有其他斑点。

展开剂1：石油醚-乙酸乙酯= 4: 1;结果见图5；

展开剂2：石油醚-丙酮= 5: 1;结果见图6。

色谱条件：色谱柱：DiamonsilC₁₈柱(4.6 mm×250mm，5μm)；流动相：甲醇-水98：2；流速：1mL/min；检测波长：205nm；柱温：室温。精密称取羽扇豆酮样品2.03mg置于10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，制成含有羽扇豆酮0.203mg/mL的对照品溶液，精密吸取上述溶液10µL注入液相色谱仪，测定其纯度。结果见图7。保留时间24.5min，色谱纯度99.5%。

3.1.2BJ-2-0的纯度测定

薄层条件：GF预制薄层板；实验方法：取BJ-2-0的样品5 mg溶解于10 ml甲醇中，配制成每1ml甲醇含羽扇豆酮0.5 mg的溶液，按照薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部附录VIB）试验，点于同一硅胶GF薄层板上，以两种不同的溶剂系统为展开剂，展开，取出，晾干，喷硫酸乙醇显色剂，加热检视，除样品只有淡红色暗斑外，没有其他斑点。

展开剂1：石油醚-乙酸乙酯= 4: 1。

展开剂2：石油醚-丙酮= 5: 1。

色谱条件：色谱柱：DiamonsilC₁₈柱(4.6 mm×250mm，5μm)；流动相：甲醇-水98：2；流速：1mL/min；检测波长：205nm；柱温：室温。精密称取羽扇豆酮样品2.03mg置于10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，制成含有羽扇豆酮0.203mg/mL的对照品溶液，精密吸取上述溶液10µL注入液相色谱仪，测定其纯度。保留时间24.5min，色谱纯度78.9%。

4小结

本发明将芭蕉根水提取粉末用水分散均匀后，乙酸乙酯萃取，从乙酸乙酯萃取部分分离纯化得到了羽扇豆酮，其纯度达99%以上，可作为芭蕉根对照品使用，有利于对芭蕉根药材及其制剂的开发和质量控制。

与现有技术相比，用本发明方法从芭蕉根提取物中分离有效成分时，得到的有效成分纯度高，特别是羽扇豆酮的纯度达99%以上，能作为芭蕉根单体对照品使用，有利于对芭蕉根药材及其制剂的开发和质量控制。

附图说明

图1是芭蕉根提取分离流程图；

图2 是10¹HNMR Spectrum of BJ2(400MHz, CDCl₃)图；

图3 是13CNMR Spectrum of BJ2(400MHz, CDCl3)图；

图4 是羽扇豆酮结构式；

图5是羽扇豆酮薄层图（展开剂1：石油醚-乙酸乙酯= 4: 1）；

图6是羽扇豆酮薄层图（展开剂2：石油醚-丙酮= 5: 1）；

图7是羽扇豆酮液相图。

具体实施方式

实施例1。

一种芭蕉根中提取高纯度羽扇豆酮的方法：芭蕉根加6倍量水煎煮3次，每次60min，合并煎液，滤过，滤液浓缩至60-65℃下相对密度为1.31-1.35的浸膏，浸膏干燥粉碎成粉末，粉末用1.5倍量水分散后，装入分液漏斗中，用乙酸乙酯萃取数次，得到乙酸乙酯萃取层浸膏，乙酸乙酯层浸膏用氯仿溶解，加1.0倍量的硅胶拌匀，挥干溶剂；另取浸膏量28-32倍量的硅胶干法装入常压色谱柱中；采用常压硅胶柱色谱法进行分离，将浸膏装入常压硅胶柱中，并覆盖上一层0.5cm厚的硅胶；以石油醚-丙酮（9：1-6：1）系统分为6个梯度进行洗脱，每个梯度洗3个柱体积，每个流分400ml，共收集得到18个流分；最后甲醇冲柱，减压回收溶剂Fr(2-15)合并；将合并Fr(2-15)液挥干后用常规量的甲醇反复重结晶，得到羽扇豆酮；所述梯度为：石油醚-丙酮=9:1；8.5:1；8:1；7.5:1；7:1或6.5:1。得到的羽扇豆酮的纯度为99.5%。

实施例2。

一种芭蕉根中提取高纯度羽扇豆酮的方法：芭蕉根加7倍量水煎煮3次，每次70min，合并煎液，滤过，滤液浓缩至60-65℃下相对密度为1.31-1.35的浸膏，浸膏干燥粉碎成粉末，粉末用2倍量水分散后，装入分液漏斗中，用乙酸乙酯萃取数次，得到乙酸乙酯萃取层浸膏，乙酸乙酯层浸膏用氯仿溶解，加1.5倍量的硅胶拌匀，挥干溶剂；另取浸膏量32倍量的硅胶干法装入常压色谱柱中；采用常压硅胶柱色谱法进行分离，将浸膏装入常压硅胶柱中，并覆盖上一层2cm厚的硅胶；以石油醚-丙酮（9：1-6：1）系统分为6个梯度进行洗脱，每个梯度洗3个柱体积，每个流分400ml，共收集得到18个流分；最后甲醇冲柱，减压回收溶剂Fr(2-15)合并；将合并Fr(2-15)液挥干后用常规量的甲醇反复重结晶，得到羽扇豆酮；所述梯度为：石油醚-丙酮=9:1；8.5:1；8:1；7.5:1；7:1或6.5:1。得到的羽扇豆酮的纯度为99.6%。

实施例3。

一种芭蕉根中提取高纯度羽扇豆酮的方法：芭蕉根加5倍量水煎煮2次，每次50min，合并煎液，滤过，滤液浓缩至60-65℃下相对密度为1.31-1.35的浸膏，浸膏干燥粉碎成粉末，粉末用1倍量水分散后，装入分液漏斗中，用乙酸乙酯萃取数次，得到乙酸乙酯萃取层浸膏，乙酸乙酯层浸膏用氯仿溶解，加0.5倍量的硅胶拌匀，挥干溶剂；另取浸膏量28倍量的硅胶干法装入常压色谱柱中；采用常压硅胶柱色谱法进行分离，将浸膏装入常压硅胶柱中，并覆盖上一层0.2cm厚的硅胶；以石油醚-丙酮（9：1-6：1）系统分为6个梯度进行洗脱，每个梯度洗3个柱体积，每个流分400ml，共收集得到18个流分；最后甲醇冲柱，减压回收溶剂Fr(2-15)合并；将合并Fr(2-15)液挥干后用常规量的甲醇反复重结晶，得到羽扇豆酮；所述梯度为：石油醚-丙酮=9:1；8.5:1；8:1；7.5:1；7:1或6.5:1。得到的羽扇豆酮的纯度为99.7%。

Claims

1.一种芭蕉根中提取高纯度羽扇豆酮的方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）芭蕉根水提得芭蕉根水提物；

（3）乙酸乙酯层浸膏分离，得到羽扇豆酮。

2.如权利要求1所述的芭蕉根中提取高纯度羽扇豆酮的方法，其特征在于：步骤（1）中，所述的芭蕉根水提得芭蕉根水提物；是芭蕉根加4-8倍量水煎煮2-3次，每次50-90min，合并煎液，滤过，滤液浓缩至60-65℃下相对密度为1.31-1.35的浸膏。

3.如权利要求2所述的芭蕉根中提取高纯度羽扇豆酮的方法，其特征在于：所述的芭蕉根水提得芭蕉根水提物；是芭蕉根加6倍量水煎煮3次，每次70min，合并煎液，滤过，滤液浓缩至60-65℃下相对密度为1.31-1.35的浸膏。

4.如权利要求1所述的芭蕉根中提取高纯度羽扇豆酮的方法，其特征在于：步骤（2）中，所述的萃取；是芭蕉根水提物粉末用1-2倍量水分散后，装入分液漏斗中，用乙酸乙酯萃取2-3次。

5.如权利要求4所述的芭蕉根中提取高纯度羽扇豆酮的方法，其特征在于：所述的萃取；是芭蕉根水提物粉末用1.5倍量水分散后，装入分液漏斗中，用乙酸乙酯萃取3次。

6.如权利要求1所述的芭蕉根中提取高纯度羽扇豆酮的方法，其特征在于：步骤（3）中，所述的取乙酸乙酯层浸膏分离；是乙酸乙酯层浸膏用氯仿溶解，加0.5-1.5倍量的硅胶拌匀，挥干溶剂；另取浸膏量28-32倍量的硅胶干法装入常压色谱柱中；采用常压硅胶柱色谱法进行分离，将浸膏装入常压硅胶柱中，并覆盖上一层0.2-3cm厚的硅胶；以石油醚-丙酮（9：1-6：1）系统进行洗脱，每个梯度洗3个柱体积，每个流分400ml，共收集得到18个流分；最后甲醇冲柱，减压回收溶剂；Fr(2-15)合并；将合并Fr(2-15)的液体挥干后用常规量的甲醇反复重结晶。

7.如权利要求6所述的芭蕉根中提取高纯度羽扇豆酮的方法，其特征在于：所述的取乙酸乙酯层浸膏分离；是乙酸乙酯层浸膏用氯仿溶解，加1.0倍量的硅胶拌匀，挥干溶剂；另取浸膏量30倍量的硅胶干法装入常压色谱柱中；采用常压硅胶柱色谱法进行分离，将浸膏装入常压硅胶柱中，并覆盖上一层0.5cm厚的硅胶；以石油醚-丙酮（9：1-6：1）系统分为6个梯度进行洗脱，每个梯度洗3个柱体积，每个流分400ml，共收集得到18个流分；最后甲醇冲柱，减压回收溶剂Fr(2-15)合并；将合并Fr(2-15) 的液体挥干后用常规量的甲醇反复重结晶。

8.如权利要求6所述的芭蕉根中提取高纯度羽扇豆酮的方法，其特征在于：所述梯度为：石油醚-丙酮=9:1、8.5:1、8:1、7.5:1、7:1或6.5:1。