CN102178725A - 黄花草木犀总皂苷及其制备方法和药物用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及黄花草木犀总皂苷及其制备方法和药物用途，属于中药领域。取黄花草木犀干燥全草，加入40～90%有机溶剂提取2～4次，每次0.5～3小时，合并提取液，提取液浓缩，干燥，得提取物；将此提取物以水溶解，通过大孔树脂柱，先用水洗至中性，再以10%～20%乙醇洗脱，至洗脱液无色，再用50%～80%乙醇洗脱，收集50%～80%乙醇洗脱液，浓缩干燥，得含量20%～90%黄花草木犀总皂苷。本发明在制备抗炎、消肿、止血、抗肿瘤药物中的应用。本发明填补了制备草木犀总皂苷的空白并扩展了其在医药领域的应用范围。

Description

黄花草木犀总皂苷及其制备方法和药物用途

技术领域

本发明属于中药领域，涉及一种从黄花草木犀中提取获得的总皂苷，及该总皂苷制备方法和其药物用途。

技术背景

黄花草木犀(Melilotus.officinalis.L.)是豆科草木犀属的一年生或二年生草本植物，又名黄香草木犀。目前，对黄花草木犀中香豆素类化合物研究较多，并就富含香豆素类化合物的草木犀提取物及富含黄酮、多酚和香豆素类物质的草木犀提取物在镇痛、止血及消炎等方面申报了专利。皂苷(saponins)是一类以三萜或甾体为苷元具有较高分子量的糖苷类化合物，皂苷类化合物广泛分布于植物之中，是许多中药的重要生物活性成分，已成国内外研究的热门课题。而目前国内外对黄花草木犀总皂苷类化学成分分离纯化技术及药理活性研究的还是空白。

发明内容

本发明提供一种黄花草木犀总皂苷及其制备方法和药物用途。

本发明黄花草木犀总皂苷是由下列制法得到的：

(1)取黄花草木犀干燥全草，加入40～90％有机溶剂提取2～4次，每次0.5～3小时，合并提取液，提取液浓缩，干燥，得提取物；

(2)将此提取物以水溶解，通过大孔树脂柱，先用水洗至中性，再以10％～20％乙醇洗脱，至洗脱液无色，再用50％～80％乙醇洗脱，收集50％～80％乙醇洗脱液，浓缩干燥，得含量20％～90％黄花草木犀总皂苷。

有机溶剂采用乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮；

提取方法包括：加热回流法、超声提取法、超临界提取法、浸渍法、微波法；

大孔树脂采用SP825、D201、DS401、DS100、AB8、HPD600、HPD100、D101、DM301、DM130。

本发明在制备抗炎、消肿、止血、抗肿瘤药物中的应用。

本发明所指的肿瘤是乳腺癌、前列腺癌、腮腺癌、肺癌、肠癌及骨肉瘤。

本发明还提供用本发明的草木犀总皂苷以及药学上可接受的载体或赋形剂制备的药物制剂。这些药物制剂选自以下剂型：片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、泡腾片剂、舌下片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、微囊剂、微球剂、颗粒剂、丸剂、滴丸剂、散剂、膏剂、口服液、混悬剂、溶液剂、气雾剂、注射剂，注射乳剂、冻干粉针，还可以根据需要制备成缓释或控释制剂。

本发明的含有草木犀总皂苷的药物制剂，在制备药物制剂时可加入药物可接受的载体，所述药物可接受的载体来自：抗氧剂、鏊合剂、表面活性剂、填充剂、崩解剂、湿润剂、溶剂、缓释材料、肠溶材料、pH调节剂、矫味剂、色素等，常用载体如：甘露糖醇、右旋糖苷、乳糖、葡萄糖、山梨醇、木糖醇、注射用水、注射用乙醇、氯化钠、硅衍生物、纤维素、纤维素衍生物、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、吐温80、琼脂、碳酸钙、聚乙二醇、环糊精、磷脂类材料、滑石粉、硬脂酸镁、硬脂酸钙等。

本发明通过对黄花草木犀各有效部位的研究，发现富含总皂苷的草木犀提取物：总皂苷含量为20％～90％，具有较好的抗炎、消肿、止血、抑制肿瘤：乳腺癌、前列腺癌、腮腺癌、肺癌、肠癌及骨肉瘤活性。

本发明的有益效果填补了制备草木犀总皂苷的空白并扩展了其在医药领域的应用范围，从而提高了该类制剂在国际市场的况竞争力。

口服一次200mg～600mg，每日两次。

附图说明

图1是样品最大吸收图；

图2是标准曲线图；

图3是CMX-Sa对MCF-7细胞增殖的抑制作用图；

图4是CMX-Sa对PC3M细胞增殖的抑制作用图；

图5是CMX-Sa对ACC细胞增殖的抑制作用图；

图6A是乳腺癌MCF-7对照组细胞形态图；

图6B是乳腺癌MCF-7经CMX组作用后细胞形态图；

图7A是腮腺癌ACC对照组细胞形态图；

图7B是腮腺癌ACC经CMX组作用后细胞形态图；

图8A是前列腺癌PC3M对照组细胞形态图；

图8B是前列腺癌PC3M经CMX组作用后细胞形态图；

图9A是肠癌SW620对照组细胞形态图；

图9B是肠癌SW620经CMX组作用后细胞形态图；

图10A是肺癌A549对照组细胞形态图；

图10B是肺癌A549经CMX组作用后细胞形态图。

具体实施方式

实施例1

(1)取黄花草木犀干燥全草，加入40％乙醇加热回流提取2次，每次3小时，合并提取液，提取液浓缩，干燥，得提取物；

(2)将此提取物以水溶解，通过大孔树脂D101，先用水洗至中性，再以10％乙醇洗脱，至洗脱液无色，再用50％乙醇洗脱，最后收集50％乙醇洗脱液浓缩干燥，得到含量20％～90％的黄花草木犀总皂苷。

实施例2

(1)取黄花草木犀干燥全草，加入65％乙醇加热回流提取3次，每次2小时，合并提取液，提取液浓缩，干燥，得提取物；

(2)将此提取物以水溶解，通过大孔树脂D201，先用水洗至中性，再以15％乙醇洗脱，至洗脱液无色，再用65％乙醇洗脱，最后收集65％乙醇洗脱液浓缩干燥，得到含量20％～90％的黄花草木犀总皂苷。

实施例3

(1)取黄花草木犀干燥全草，加入90％乙醇加热回流提取4次，每次0.5小时，合并提取液，提取液浓缩，干燥，得提取物，

(2)将此提取物以水溶解，通过大孔树脂AB8，先用水洗至中性，再以20％乙醇洗脱，至洗脱液无色，再用80％乙醇洗脱，最后收集80％乙醇洗脱液浓缩干燥，得到含量20％～90％的黄花草木犀总皂苷。

在实施例中，有机溶剂还可选取甲醇、乙酸乙酯、丙酮，提取方法采取超声提取法、超临界提取法、浸渍法、微波法，大孔树脂选取SP825、DS401、DS100、HPD600、HPD100、DM301、DM130。

下面通过实验例对本发明作进一步说明。

实验例一、黄花草木犀总皂苷的提取方法的研究

实验仪器与材料

超声提取器(KQ-250B型)、超临界萃取器(HA420-40-96-EX型)、渗漉器、电子天平(DT100型)、UV-1700(日本岛津)、HWC3L-1型微波萃取器(天水华圆制药设备广州分公司)、圆底烧瓶、冷凝管、其余试剂均为分析级。

实验方法

1、总皂苷提取方法的研究

(1)加热回流提取法

取黄花草木犀干燥全草(粉碎2～4cm)4份，每份各50g，分别加入40～90％有机溶剂(乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮)250～350ml(溶剂量为药材量的5～7倍)，加热回流提取2～4次，每次0.5～3小时。合并提取液，60～80℃回收溶剂，60～80℃减压干燥得干品，计算收率，结果见表1。

(2)超声法提取法

取黄花草木犀干燥全草(粗粉)4份，每份各50g，分别加入40～90％有机溶剂(乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮等)250～350ml(溶剂量为药材量的5～7倍)，超声(30～60KHZ)提取2～4次，每次0.5～1小时。合并提取液，60～80℃回收溶剂，60～80℃减压干燥得干品，计算收率，结果见表2。

(3)超临界提取法

取黄花草木犀干燥全草(粗粉)50g，投入萃取釜中，设置分离釜I温度40℃、分离釜I压力7.0MPa、分离釜II压力6MPa，温度35℃，在萃取压力20～50Mpa，萃取温度30～50℃，萃取时间1～3小时，CO2流量20～30L·h，萃取级数1～2，乙醇夹带剂浓度25～70％条件提取总皂苷。萃取达到预定时间后，收集提取物，除去水分称其质量，计算得率，结果见表3。

(4)浸渍提取法

取黄花草木犀干燥全草(20～60目)4份，每份各50g，分别加入40～90％有机溶剂(乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮等)250～350ml(溶剂量为药材量的5～7倍)，浸泡提取2～4次，每次12～48小时。合并提取液，60～80℃回收溶剂，60～80℃减压干燥得干品，计算收率，结果见表4。

(5)渗漉提取法

取黄花草木犀干燥全草(40～100目)4份，每份各50g，分别加入40～90％有机溶剂(乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮等)50～100ml(溶剂量为药材量的1～2倍)浸泡2～4小时，装入渗漉器中，缓缓从渗漉器顶部加40～90％有机溶剂(乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮等)250～350ml(溶剂量为药材量的5～7倍)，放置24～48小时后打开下口开关，使渗漉液缓缓流出。60～80℃回收溶剂，60～80℃减压干燥得干品，计算收率，结果见表5。

(6)微波提取法

取黄花草木犀干燥全草(40～100目)4份，每份各50g，分别加入40～90％有机溶剂(乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮等)4000～5000ml使用微波提取器提取，微波功率(190～250W)提取2～4次，每次5～25min。合并提取液，过滤，60～80℃回收溶剂，60～80℃减压干燥得干品，计算收率，结果见表6。

2、测定方法

(1)最大吸收波长的确定

①标准品溶液的制备

精密称取黄花草木犀苷A对照品(自制)4.40mg于25ml量瓶中，加甲醇超声使其完全溶解，并定容至刻度，使浓度为0.176mg/ml。

②样品溶液的制备

取加热回流提取法所得干膏1.0g，精密称定，用50ml水使其充分溶解，过滤，滤液置分液漏斗中，用等量的水饱和正丁醇萃取三次，合并萃取液，水浴蒸干，残渣用甲醇溶解并定容至100ml容量瓶中，定容至刻度，为样品溶液。

③最大吸收波长的测定

分别取上述标准品溶液及样品溶液各0.5ml，分别置于10ml具塞试管中，沸水浴中挥干，依次加入新配制的5％香草醛-冰醋酸溶液0.4ml，高氯酸1.6ml，密塞，于65℃水浴中加热20min，取出，冰水浴中冷却后加入冰醋酸8ml，混匀，分别为对照品与样品液。以相应试剂为空白，在400～900nm波长范围内测定其吸收波长。结果显示，标准品与样品溶液在541nm处均有最大吸收，所以将测定波长设为541nm，结果见图1。

(2)标准曲线的绘制

精密量取上述标准品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml于10ml具塞试管中，沸水浴中挥干，照2.2.3项下自“加入新配制的5％香草醛-冰醋酸溶液0.4ml，”起，在541nm下测定其吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线。得芦丁标准曲线为：Y＝15.602x+0.0877，r＝0.9995(n＝5)。表明黄花草木犀苷A在0.0088～0.044mg/ml范围内与吸光度呈良好的线形关系。结果见图2。

(3)总皂苷含量测定

取上述样品溶液各0.3ml，置于10ml具塞试管中，沸水浴中挥干，依次加入新配制的5％香草醛-冰醋酸溶液0.4ml，高氯酸1.6ml，密塞，于65℃水浴中加热20min，取出，冰水浴中冷却后加入冰醋酸8ml，混匀，以相应的试剂为空白对照，在541nm处测定吸光度，计算。

计算公式：

式中：C：通过标准曲线计算出的皂苷浓度；V1：样品体积，V2：取样体积，V3：最后稀释体积，M：药材总重量，m1为干膏重，m2取样量；

实验结果

表1加热回流提取法

表2超声提取法

表3超临界提取法

表4浸渍提取法

表5渗漉提取法

表6微波提取法

结果表明：加热回流提取法所提取的总皂苷粗提物出膏率变化不大，总皂苷含量测定表明含量差异也较小；超声提取法随着超声频率的加大，总皂苷粗提物出膏率与总皂苷含量均有所增加，但变化不大；微波提取法与超声提取法结果相近，渗漉法总皂苷粗提物出膏率略高于浸渍法，但低于其他几种方法，总皂苷含量与其它方法相近；同时实验表明超临界提取法不论从出膏率及总皂苷含量两方面均反映出其是提取黄花草木犀总皂苷的好方法。

以上几种提取方法采用不同溶剂进行提取时，其总皂苷含量基本上为乙醇＞甲醇＞丙酮＞乙酸乙酯。

实验例二.黄花草木犀总皂苷的纯化研究

实验仪器与材料

超声提取器(KQ-250B型)、超临界萃取器(HA420-40-96-EX型)、渗漉器、电子天平(DT100型)、UV-1700(日本岛津)、日本岛津高效液相色谱仪；SHIMADZUSPD-20A可变波长紫外检测器、大孔树脂(SP825、D201、DS401、DS100、AB8、HPD600、HPD100、D101、DM301、DM130)、圆底烧瓶、冷凝管、其余试剂均为分析级。

实验方法与结果

1、树脂的选择

目前国内外使用的大孔吸附树脂种类众多，型号各异，性能差异较大，我们选择常用的几种树脂：SP825、D201、DS401、DS100、AB8、HPD600、HPD100、D101、DM301、DM130进行选择研究。

2、树脂的预处理

各树脂用95％乙醇浸泡24h后湿法装柱，柱子装好后用95％乙醇洗脱至流出液加水不呈现白色浑浊为止，细心拖速度以2BV/h为宜，然后用去离子水以同样的速度洗至无醇味；然后用2BV的0.5％HCl溶液以25ml/min流速通过树脂层，并浸泡2-4h后，用蒸馏水以同样的速度洗至流出液呈中性，最后用2BV2％NaOH以25ml/min流速通过树脂层，并浸泡2-4h后，用蒸馏水以相同的速度洗至流出液呈中性即可

3、树脂吸附量的测定

样品溶液的配制：取上述黄花草木犀总皂苷粗提物干膏适量，以3000ml蒸馏水充分溶解制成近饱和溶液(经测定其总皂苷含量为5.5mg/ml)，减压过滤，贮藏于冰箱中备用。

(1)对总皂苷吸附量的考察

取数根同一型号的树脂柱(内径：3.5cm，柱长：30cm)，分别取处理好的上述几种类型的树脂各约50ml，装柱。取上述样品溶液50ml，分别上样于树脂柱，以相同的上样流速(1ml/min)进行动态吸附，流出液每5ml接一份，以molish试剂检测显阴性为止。分别测定各树脂对总皂苷的吸附量。

按香草醛-冰醋酸显色法测定上样液中总皂苷的含量，并根据上样液的体积计算各树脂对总皂苷的吸附量，结果见下表7。

表7不同型号树脂的吸附量考察结果表

(2)总皂苷洗脱量的考察

精密称取各树脂洗脱物干膏(水洗物除外)分别全部置10ml量瓶中，加70％乙醇超声15min使其完全溶解，定容至刻度，摇匀即得样品溶液。精密吸取样品溶液0.5ml分别置10ml具塞试管中，按香草醛-冰醋酸显色法测定洗脱液中总皂苷的含量，并计算各树脂洗脱液中总皂苷的量，结果见下表8。

表8以不同型号树脂纯化总皂苷提取物的比较

通过比较以上型号树脂，结果表明总皂苷主要集中在50～90％乙醇洗脱部分，含量在50％以上有5种型号。其中D101，AB8效果最好。

实验例三、黄花草木犀总皂苷药理活性的研究

实验材料

1.1动物：Wistar大鼠，体重160g±10g雄性，昆明种小鼠，体重20±2g，雄性，由吉林大学实验动物中心提供，合格证号SCXK-(吉)2008-0005；自由摄食饮水。

1.2药物：黄花草木犀总皂苷，以下简称CMX-Sa，由长春中医药大学研发中心自制，试验前加适量蒸镏水制成混悬液灌胃给药；阿司匹林，由湖南新汇制药有限公司，批号：081101及神威药业有限公司生产，批号100513。

1.3仪器：不锈钢手提式压力蒸汽灭菌器，型号YXQ-SG46-280S，上海博迅实业有限公司医疗设备厂；OLYMPUS显微镜，日本产。

1.4试剂：二甲苯由中国沈阳试剂一厂生产，批号：20000102。冰醋酸北京北化精细化学品有限责任公司生产，批号：20021030。其它均为市售。

实验方法与结果

1、黄花草木犀总皂苷对醋酸所致小鼠扭体反应的影响

取雄性小鼠50只，随机分成五组，分别为对照组、阳性对照药阿斯匹林(0.3g/kg)、黄花草木犀总皂苷CMX-Sa高剂量组(0.8g/kg)、黄花草木犀总皂苷CMX-Sa中剂量组(0.4g/kg)、黄花草木犀总皂苷CMX-Sa低剂量组(0.2g/kg)三个剂量组，每天灌胃给药1次，连续5天，末次药后1小时，每只鼠腹腔注射0.6％醋酸溶液0.2ml/20g，5分钟后测10分钟内每只小鼠的扭体次数，结果见表9。

表9黄花草木犀总苷对醋酸所致小鼠扭体反应的影响(X±SD)

结果表明：黄花草木犀总皂苷高剂量组可减少醋酸所致小鼠的扭体反应次数，与对照组比较具有显著意义。

2、黄花草木犀总皂苷对大鼠角叉菜胶性足肿胀的影响

取大鼠50只，随机分为五组：对照组，0.2g/kg阳性药阿司匹林组，黄花草木犀总皂苷(CMX-Sa)三个给药组。连续给药5天，于末次给药1小时后于大鼠右后足腱膜下注入0.05％角叉菜胶0.15ml/只，然后于注射后1、2、3、4、5、6小时测其足肿胀(先于注射前测正常大鼠足周长)，以于正常足值之差作为肿胀度。结果见表10。

表10对大鼠角叉菜胶性足肿胀的影响

与对照组比较^*p＜0.05

结果表明：黄花草木犀总皂苷CMX-Sa高剂量组致炎后3～5小时、中剂量组4小时可明显抑制角叉菜所致大鼠足肿胀反应，与对照组比较均有显著意义，p＜0.05。

3、黄花草木犀总皂苷对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响

雄性小鼠50只，随机分成5组，分别为对照组(蒸馏水)、阳性对照药阿斯匹林(200mg/kg)组、黄花草木犀总皂苷CMX-Sa高剂量组(0.8g/kg)、CMX-Sa中剂量组(0.4g/kg)、CMX-Sa低剂量组(0.2g/kg)。每日灌胃给药1次，连续5天，对照组给等体积蒸馏水。末次药后1小时于鼠右耳涂抹二甲苯0.03ml/只，涂后2h处死小鼠，沿耳廓基线用直经为7mm的锋利打孔器在相同部位打下双耳片，分别称重，计算其差值作为肿胀度，结果见表11。

表11黄花草木犀总皂苷对对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响

与对照组比较^*p＜0.05 ^**p＜0.01 ^***p＜0.001

结果表明：黄花草木犀总皂苷高、中剂量组对二甲苯引起的小鼠耳肿胀有明显抑制作用，与对照组比较具有显著意义。

4、草木犀总皂苷对小鼠出血时间的影响

小鼠50只，随即分为5组，按表所示剂量灌胃给药，对照组给相同体积的蒸馏水，每日1次，连续7日。末次给药后1小时，用剪尾法观察出血时间，结果见表12。

表12对小鼠出血时间的影响(X

D)

与对照组比较^*p＜0.05 ^**p＜0.01 ^***p＜0.001

结果表明：草木犀总皂苷可明显缩短小鼠的出血时间，与对照组比较有显著意义。

5、采用CCK-8法检测草木犀总皂苷对MCF-7细胞增殖的影响

5.1仪器：

5.2试剂：

5.3实验方法

5.3.1细胞的培养、传代、冻存、复苏

细胞培养于含10％FCS的H-DMEM培养基中，于37℃、5％CO₂培养箱中孵育。即时换液，待细胞接近汇流80％时，0.25％胰酶-0.02％EDTA消化，以1∶3的比例传代培养。细胞冻存采用缓慢冷冻。冻存液中各成份比例为CS∶H-DMEM∶DMSO＝2∶7∶1，细胞浓度为5×10⁵～1×10⁶·mL^-1，细胞经过4℃30min，-20℃1h，-80℃过夜，置于液氮中长期保存。复苏采用速融法。将细胞在37℃水浴中迅速融化，离心1000rpm，5min，接种细胞于含10％FCS的H-DMEM培养基中。

5.3.2采用CCK-8法检测药物对细胞增殖的影响

取对数生长期细胞，0.25％胰酶-0.02％EDTA消化，终止消化后，离心1000rpm，5min，细胞计数，调整细胞浓度为2×10⁴·mL^-1，接种于96孔板，100μL/孔。待细胞贴壁后，轻轻吸掉培养基开始加药。37℃、5％CO₂孵育72h后，轻轻吸掉培养基，每实验孔加10μLCCK-8试剂和100μL含10％FCS的H-DMEM培养基。同时，另设3个孔为空白对照，每孔仅加入10μLCCK-8试剂和100μL含10％FCS的H-DMEM培养基。37℃、5％CO₂孵育2.5h后，在Bio-red 550酶标仪上，在490nm波长，测定各孔的吸光度值(A值)。按照细胞存活率＝(加药组A值-空白对照A值)/(阴性对照A值-空白对照A值)×100％，计算出药物对细胞的细胞存活率，得出IC₅₀值。

5.3实验结果

5.3.1采用CCK-8法检测药物对多种肿瘤株的作用

(1)乳腺癌MCF-7

CCK-8试剂盒检测结果显示，CMX-Sa对MCF-7细胞的生长有抑制作用，且生长抑制作用随草木犀总皂苷浓度的升高而增大，IC₅₀值为0.43mg·mL^-1。见表13，图3。

表13CCK-8试剂盒检测CMX-Sa对MCF-7细胞生长的抑制作用

各组比较P＜0.05

(2)前列腺癌PC3M

CCK-8试剂盒检测结果显示，CMX对PC3M细胞的生长有抑制作用，且生长抑制作用随药物浓度的升高而增大，IC₅₀值为0.7683mg·mL^-1。见表14，图4。

表14CCK-8试剂盒检测药物对PC3M细胞生长的抑制作用

各组比较P＜0.05

(3)腮腺癌ACC细胞

CCK-8试剂盒检测结果显示，CMX对ACC细胞的生长有抑制作用，且生长抑制作用随药物浓度的升高而增大，IC₅₀值为1.05mg·mL^-1。见表15，图5。

表15CCK-8试剂盒检测药物对ACC细胞生长的抑制作用

各组比较P＜0.05

(4)此外，我们还观察了药物对肺癌A549，肠癌SW620，骨肉瘤U2OS。发现药物均有抑瘤作用。但对宫颈癌Hela却无此作用。

5.3.2细胞形态学观察

在检测药物对细胞增殖的影响的同时，制备相同条件24孔板，倒置显微镜观察细胞形态变化，照相。

倒置相差显微镜下观察药物作用后细胞形态学改变。结果见图6～10。

图6～10所有对照组细胞，呈三角形或多角形，粘附性好，折光性强(A图)。CMX组作用后细胞变园，死亡较多，粘附性减弱，折光性减弱(B图)。

Claims (7)

1.一种黄花草木犀总皂苷，其特征在于是由下列制法得到的：

（1）取黄花草木犀干燥全草，加入40～90%有机溶剂提取2～4次，每次0.5～3小时，合并提取液，提取液浓缩，干燥，得提取物；

（2）将此提取物以水溶解，通过大孔树脂柱，先用水洗至中性，再以10%～20%乙醇洗脱，至洗脱液无色，再用50%～80%乙醇洗脱，收集50%～80%乙醇洗脱液，浓缩干燥，得含量20%～90%黄花草木犀总皂苷。

2.根据权利要求1所述的黄花草木犀总皂苷，其特征在于：有机溶剂采用乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮。

3.根据权利要求1所述的黄花草木犀总皂苷，其特征在于：提取方法包括：加热回流法、超声提取法、超临界提取法、浸渍法或微波法。

4.根据权利要求1所述的黄花草木犀总皂苷，其特征在于：大孔树脂采用SP825、D201、DS401、DS100、AB8、HPD600、HPD100、D101、DM301或DM130。

5.如权利要求1所述的黄花草木犀总皂苷的制备方法。

6.如权利要求1所述的黄花草木犀总皂苷在制备抗炎、消肿、止血、抗肿瘤药物中的应用。

7.如权利要求6所述的黄花草木犀总皂苷在制备抗炎、消肿、止血、抗肿瘤药物中的应用，其特征在于：肿瘤是乳腺癌、前列腺癌、腮腺癌、肺癌、肠癌及骨肉瘤。

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