CN103156893B - 紫金砂及其提取物的新用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了紫金砂提取物的新用途。发明人通过实验证实,不同剂量紫金砂提取物口服预先给药后,可有效阻止或缓解心肌缺血再灌注所导致的心肌损伤。
Description
技术领域
本发明涉及一种植物提取物的用途,特别是涉及一种紫金砂及其提取物在制备用于治疗或缓解以心肌缺血再灌注损伤为主的心肌缺血性疾病的新用途。
背景技术
紫金砂来源于伞形科植物当归属植物白根独活(AngelicapolymorphaMaxim)的根,具有温中散寒,理气止痛的作用。主要含有香豆素、色原酮、挥发油等成分。既往实验证实紫金砂具有良好的抑制胃肠平滑肌痉挛、镇痛、抗溃疡、保护胃黏膜等作用。
以心肌梗死、冠状动脉狭窄为代表的缺血性心肌病是现今主要致死原因之一,据世界卫生组织报告,到2020年急性冠脉闭塞将会成为世界上的主要死因。通过溶栓、经皮冠状动脉成形术或搭桥术使缺血区早期再灌是缺血心肌存活的必要前提。然而,再灌注被认为是双刃剑,会导致比单纯缺血更为严重的损伤,即所谓的缺血再灌注损伤。因此,寻找对心肌缺血再灌注损伤具明确治疗作用药物,是今后心血管治疗药物领域研究重点。
目前,尚未发现紫金砂及其提取物应用于心肌缺血及心肌缺血再灌注的专利申请及文献报道。发明人研究发现紫金砂提取物预先给药后,可显著缓解和抑制心肌缺血再灌注损伤,可以用于治疗以心肌缺血再灌注损伤为代表的心肌缺血性疾病。
发明内容
本发明的目的是提供一种治疗或缓解心肌缺血性疾病的药物。
本发明人通过实验证实,一定剂量的紫金砂提取物预先口服给药后,对心肌缺血再灌注损伤具有确切治疗效果,可以用于心肌梗塞等缺血性心肌病的治疗。
为此,本发明提供一种紫金砂及其提取物在制备用于治疗心肌缺血性疾病的产品和/或药物中的用途。其中所述的心肌缺血性疾病为心肌梗死、缺血再灌注损伤、再狭窄、冠状动脉心脏病、各种原因引发的冠状动脉狭窄及痉挛。
优选地,所述的心肌缺血性疾病为心肌缺血再灌注损伤。所述的心肌缺血再灌注损伤,系指缺血心肌在恢复血液灌流后,出现心肌结构破坏及功能障碍反而加重的现象。能够引发心肌缺血再灌注损伤的疾病主要包括心肌梗死、冠状动脉心脏病、各种原因引发的冠状动脉狭窄及痉挛等。
本发明所述的紫金砂及其提取物中含有香豆素类和色原酮类成分,优选地,所述香豆素类成分为选自水合氧化前胡素内酯、栓翅芹烯醇、异欧前胡素、奥斯索、佛手柑内酯、欧前胡素、二氢欧山芹素、异虎耳草素、氧化前胡素乙基醚中的一种或多种,所述色原酮类成分为3’R-(+)-亥茅酚、3’-O-乙酰基亥茅酚、拐芹色原酮、ledebouriellol的一种或多种。
其中所述的香豆素类、色原酮类成分含量总和占总提取物的重量百分比为10-90%,优选的重量百分比为20-80%,进一步优选的重量百分为25-78%,更优选的重量百分比26.3-78%,特别优选的重量百分比为29.4%、26.3%、33.5%、59.38%、78%、38.61%。
上述水合氧化前胡素内酯、栓翅芹烯醇、3’(R)-+-亥茅酚、3’-O-乙酰基亥茅酚、异欧前胡素五种主要成分的总含量占总提取物的重量百分比为0.5-40%,优选的重量百分比为5-35%,进一步优选的重量百分比为10-30%,更优选的重量百分比为10.25-29.4%,特别优选的重量百分比为11.65%、10.25%、14.82%、21.98%、29.4%、14.17%。
优选地,水合氧化前胡素内酯、栓翅芹烯醇、3’(R)-+-亥茅酚、3’-O-乙酰基亥茅酚、异欧前胡素五种主要成分在紫金砂总提取物中的重量百分比含量分别为5-25%、0.5-2%、0.2-1.2%、0.2-1.2%、1.2-3.5%,优选的重量百分比含量分别为7.37-23.9%、0.63-1.8%、0.31-1.06%、0.33-0.98%、1.54-3.29%。
本发明所述的紫金砂提取物,其制备方法可以用溶剂提取法、溶剂萃取法、醇沉法、柱色谱法、大孔吸附树脂法、液-液逆流分配色谱法或CO2超临界萃取法等方法中的任意一种,或者是这些方法的任意组合。优选的柱色谱为硅胶G柱色谱、大孔树脂柱色谱,优选的大孔树脂为AB-8大孔树脂。
在一个优选的实施例中,本发明所述的溶剂提取法可包括以下步骤,1)将紫金砂药材粉碎;2)用合适的溶剂提取1-5次,优选提取2-3次,优选的溶剂是乙醇、甲醇、丙酮、丙醇、异丙醇、乙醇水溶液或甲醇的水溶液等,提取方式可以是加热回流、微波提取、超声提取、冷浸提取等方式;3)合并提取液,浓缩至干,获得紫金砂提取物,优选的浓缩方式为减压浓缩。
在一个优选的实施例中,上述溶剂提取法获得的提取物还可用大孔吸附树脂进一步提取,具体地包括以下步骤:
4)将步骤3)中获得的紫金砂提取物在水中分散,再用合适的溶剂萃取1-6次,优选提取2-5次,进一步优选提取3次,分别合并萃取液后,浓缩至干;
5)将步骤4)中获得的紫金砂粗提物加入水,超声分散,再加入合适的溶剂萃取1-6次,优选提取2-5次,进一步优选提取3次,将水层蒸干,加入乙醇,优选加入5-20%的乙醇水溶液,进一步优选加入8-15%的乙醇水溶液,特别优选加入10%的乙醇水溶液,溶散,然后上大孔树脂柱,树脂柱径高比为1∶8~1∶12,优选的树脂柱径高比为1∶9~1∶11,更优选的树脂柱径高比为1∶10,上样后用6-10倍BV(床容积,bedvolume,BV)的乙醇洗去杂质,优选用6-10倍BV的5-20%的乙醇水溶液,进一步优选用6-10倍BV的8-15%的乙醇水溶液,特别优选用8倍BV的10%的乙醇水溶液;再用8-12倍BV的70-90%乙醇洗脱,优选用10倍BV的85%乙醇洗脱,收集后者洗脱部分,浓缩至干,得到紫金砂提取物,
其中优选的溶剂为石油醚,优选的浓缩方式为减压浓缩,优选的大孔树脂为AB-8大孔树脂。
在另一个具体的实施例中,本发明所述的溶剂提取法获得的提取物还可用柱色谱法进一步提取,具体地包括以下步骤:
4)将步骤3)中获得的紫金砂提取物用纯乙醇溶散均匀后,以硅胶G拌样,上硅胶G柱,树脂柱径高比1∶6~1∶10,优选的树脂柱径高比为1∶9~1∶11,更优选的树脂柱径高比1∶8,上样后用合适的有机溶剂洗脱1-3次,优选地用石油醚洗脱1次后,再用乙酸乙酯/丙酮(1∶1)洗脱,收集乙酸乙酯/丙酮(1∶1)洗脱液,减压浓缩至干,得到洗脱物。
在一个优选的实施例中,本发明所述的CO2超临界萃取法包括以下步骤:1)将紫金砂药材粉碎;2)在萃取温度40-50℃、萃取压力30-40MPa时超临界萃取2-5小时,优选在萃取温度45℃、萃取压力35MPa时萃取3小时,优选的超临界萃取装置为HA121-50-01超临界萃取装置,优选以无水乙醇作夹带剂;3)将萃取物减压蒸干,得到超临界萃取提取物,优选将萃取物于40℃减压蒸干。
根据需要,本发明的紫金砂及其提取物可以和一种或多种药学上可接受的载体制成药物组合物。优选的药物载体包括药学领域常规的稀释剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂、香味剂、甜味剂。任选地,该药物组合物还可以包含其他活性物质,优选的其他活性物质为延胡素生物碱提取物或DL-四氢巴马汀。所述的药物组合物可以制成片剂、胶囊、粉剂、颗粒、锭剂、栓剂,或口服液等多种药物形式。上述不同剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。
发明的有益效果
本发明提供了紫金砂及其提取物在用于治疗心肌缺血性疾病的用途。在大鼠及兔上的药效学试验结果表明,紫金砂提取物在缺血前预防给药,连续7天,可有效降低心肌梗死面积,显著提升机体抗氧化能力,有效减少脂质过氧化产物的产生,其作用与公认阳性治疗药物复方丹参滴丸基本相当,表明紫金砂及其提取物在治疗心肌缺血再灌注损伤上具良好应用前景。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述,但是本领域技术人员将会理解,下列实施例仅用于说明本发明,而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者,按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1紫金砂提取物1的制备
取紫金砂药材500g粉碎后,用80%乙醇加热回流提取2次,每次提取2小时,溶剂用量为4000ml,合并提取液,减压浓缩至干,得乙醇提取物96g。称取乙醇提取物适量,用紫外可见分光光度测得总香豆素类、色原酮类成分含量总和为29.4%。用高效液相法测得水合氧化前胡素内酯、栓翅芹烯醇、3’(R)-+-亥茅酚、3’-O-乙酰基亥茅酚、异欧前胡素含量分别为8.24%、0.68%、0.41%、0.43%、1.89%。
实施例2紫金砂提取物2的制备
取紫金砂药材50g粉碎后,用甲醇超声提取3次,每次提取0.5小时,溶剂用量为400ml,合并提取液,减压浓缩至干,得甲醇提取物4.2g。称取甲醇提取物适量,用紫外可见分光光度测得香豆素类、色原酮类成分含量总和为26.3%。用高效液相法测得水合氧化前胡素内酯、栓翅芹烯醇、3’(R)-+-亥茅酚、3’-O-乙酰基亥茅酚、异欧前胡素含量分别为7.37%、0.63%、0.31%、0.33%、1.61%。
实施例3紫金砂提取物3的制备
取紫金砂药材100g粉碎后,用丙酮冷浸提取2次,每次提取24小时,溶剂用量为1000ml,合并提取液,减压浓缩至干,得丙酮提取物9.2g。称取丙酮提取物适量,用紫外可见分光光度测得香豆素类、色原酮类成分含量总和为33.5%。用高效液相法测得水合氧化前胡素内酯、栓翅芹烯醇、3’(R)-+-亥茅酚、3’-O-乙酰基亥茅酚、异欧前胡素含量分别为9.73%、1.04%、0.86%、0.88%、2.31%。
实施例4紫金砂提取物4的制备
取紫金砂药材100g粉碎后,选用HA121-50-01超临界萃取装置,以200ml无水乙醇作夹带剂,在萃取温度45℃、萃取压力35MPa时提取3小时。将萃取物于40℃减压蒸干,得到超临界萃取提取物5.2g。称取提取物适量,用紫外可见分光光度测得香豆素类、色原酮类成分含量总和为59.38%。用高效液相法测得水合氧化前胡素内酯、栓翅芹烯醇、3’(R)-+-亥茅酚、3’-O-乙酰基亥茅酚、异欧前胡素含量分别为15.37%、1.28%、1.06%、0.98%、3.29%。
实施例5紫金砂提取物5的制备
取实施例1的乙醇提取物25g在50ml水中分散,再用150ml石油醚萃取三次,分别合并萃取液后,减压浓缩至干。称取紫金砂粗提物10g,加入15ml水超声分散,再加入50ml石油醚萃取3次,将水层蒸干,加入10%乙醇溶散,然后上AB-8大孔树脂柱,树脂柱径高比1∶10,上样后用8倍BV的10%乙醇洗去杂质,再用10倍BV的85%乙醇洗脱,收集后者洗脱部分,减压浓缩至干,得到紫金砂提取物。测定香豆素类、色原酮类成分含量总和为78%;水合氧化前胡素内酯、栓翅芹烯醇、3’R-(+)-亥茅酚、3’-O-乙酰基亥茅酚、异欧前胡素含量(重量%)分别为23.9%、1.8%、0.8%、0.6%、2.3%。
实施例6紫金砂提取物6的制备
取实施例1的乙醇提取物10g用纯乙醇溶散均匀后以15g硅胶G拌样,上60g硅胶G柱,树脂柱径高比1∶8,上样后先用300ml石油醚洗脱,再用500ml的乙酸乙酯/丙酮(1∶1)洗脱,分别收集这两部分洗脱液,减压浓缩至干,得到石油醚洗脱物0.56g、乙酸乙酯/丙酮(1∶1)洗脱物0.85g。称取乙酸乙酯/丙酮(1∶1)洗脱物适量,用紫外可见分光光度测定香豆素类、色原酮类成分含量总和为38.61%。用高效液相法测定水合氧化前胡素内酯、栓翅芹烯醇、3’(R)-+-亥茅酚、3’-O-乙酰基亥茅酚、异欧前胡素的含量含量分别为10.31%,1.14%,0.68%,0.50%,1.54%。
本发明所述的紫金砂提取物的质量控制方法可包括以下含量测定方法中的一种或两种:
1.香豆素类、色原酮类成分总含量测定(紫外分光光度法)
对照品溶液的配制:精密称取水合氧化前胡素内酯对照品3.0mg,置于10ml量瓶中,加甲醇使其完全溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液。
标准曲线的制备:精密吸取对照品溶液2.5ml至25ml容量瓶中,定容。分别吸取2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、6.7ml,用甲醇稀释定容到10ml量瓶中,摇匀,在307nm波长处测定吸光度。以水合氧化前胡素内酯对照品浓度为横坐标,吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
供试品溶液的配置:取紫金砂提取物适量,加甲醇溶解定容至25ml量瓶中,摇匀。精密吸取1ml,加甲醇定容至10ml量瓶中,摇匀。
测定法:取供试品溶液在307nm波长处测定吸光度,按标准曲线法计算样品中香豆素、色原酮类成分总含量,即得。
2.水合氧化前胡素内酯、栓翅芹烯醇、3’(R)-+-亥茅酚、3’-O-乙酰基亥茅酚、异欧前胡素含量测定(高效液相色谱法)
色谱条件:色谱柱:用十八烷基键合硅胶为填充剂;流动相:甲醇-水;流速:1.0ml/mim;柱温:室温。洗脱条件如表1所示。
表1:梯度洗脱条件
(1)水合氧化前胡素内酯标准曲线的制备
对照品溶液的配制:精密称取水合氧化前胡素内酯对照品25.1mg,置25ml量瓶中,加甲醇使其完全溶解并稀释至刻度,摇匀。
标准曲线的制备:分别精密吸取对照品溶液0.2、1.5、3.0、5.0、7.0ml,用甲醇稀释定容到10ml量瓶中,摇匀。精密吸取20μl上述对照品溶液注入液相色谱仪,按上述色谱条件,测定312nm下色谱峰峰面积。以对照品浓度为横坐标,色谱峰峰面积为纵坐标绘制标准曲线。
(2)栓翅芹烯醇标准曲线的制备
对照品溶液的配制:精密称取栓翅芹烯醇对照品10.0mg,置于25ml量瓶中,加甲醇使其完全溶解并稀释至刻度,摇匀。
标准曲线的制备:分别精密吸取对照品溶液0.5、1.5、3.0、5.0、7.0ml,用甲醇稀释定容到10ml量瓶中,摇匀。精密吸取20μl上述对照品溶液注入液相色谱仪,按上述色谱条件,测定306nm下色谱峰峰面积。以对照品浓度为横坐标,色谱峰峰面积为纵坐标绘制标准曲线。
(3)3’R-(+)-亥茅酚标准曲线的制备
对照品溶液的配制:精密称取3’R-(+)-亥茅酚对照品5.0mg,置于25ml量瓶中,加甲醇使其完全溶解并稀释至刻度,摇匀。
标准曲线的制备:分别精密吸取对照品溶液0.2、1.5、3.0、5.0、7.0ml,用甲醇稀释定容到10ml量瓶中,摇匀。精密吸取20μl上述对照品溶液注入液相色谱仪,按上述色谱条件,测定300nm下色谱峰峰面积。以对照品浓度为横坐标,色谱峰峰面积为纵坐标绘制标准曲线。
(4)3’-O-乙酰基亥茅酚标准曲线的制备
对照品溶液的配制:精密称取3’-O-乙酰基亥茅酚对照品5.1mg,置于25ml量瓶中,加甲醇使其完全溶解并稀释至刻度,摇匀。
标准曲线的制备:分别精密吸取对照品溶液0.2、1.5、3.0、5.0、7.0ml,用甲醇稀释定容到10ml量瓶中,摇匀。精密吸取20μl上述对照品溶液注入液相色谱仪,按上述色谱条件,测定294nm下色谱峰峰面积。以对照品浓度为横坐标,色谱峰峰面积为纵坐标绘制标准曲线。
(5)异欧前胡素标准曲线的制备
对照品溶液的配制:精密称取3’-O-乙酰基亥茅酚对照品15.0mg,置于25ml量瓶中,加甲醇使其完全溶解并稀释至刻度,摇匀。
标准曲线的制备:分别精密吸取对照品溶液0.2、1.5、3.0、5.0、7.0ml,用甲醇稀释定容到10ml量瓶中,摇匀。精密吸取20μl上述对照品溶液注入液相色谱仪,按上述色谱条件,测定310nm下色谱峰峰面积。以对照品浓度为横坐标,色谱峰峰面积为纵坐标绘制标准曲线。
(6)样品含量测定
取紫金砂提取物适量,加甲醇溶解定容至25ml量瓶中,摇匀,作为供试品溶液。精密吸取1ml,加甲醇定容至10ml量瓶中,摇匀。精密吸取供试品溶液20μl,注入液相色谱仪,分别在312、306、300、294、310nm下测定水合氧化前胡素内酯、栓翅芹烯醇、3’R-(+)-亥茅酚、3’-O-乙酰基亥茅酚、异欧前胡素的色谱峰峰面积,并根据标准曲线法计算含量,即得。
实施例7紫金砂中化学成分的分离和结构鉴定
取紫金砂药材5kg,用实施例1方法提取,提取物用水分散悬浮后分别用石油醚、氯仿、正丁醇萃取得到石油醚、氯仿、正丁醇萃取物。将氯仿萃取物用硅胶柱层析,石油醚-乙酸乙酯(0∶100-100∶0)梯度洗脱,划分成F1-F20段。F4段用硅胶柱层析,石油醚-乙酸乙酯10∶1洗脱,再将F4-2反复用凝胶柱层析(氯仿甲醇1∶1洗脱),得到单体化合物异欧前胡素、osthol。F5段经硅胶柱层析,石油醚-乙酸乙酯(10∶1-7∶1)梯度洗脱,再将F5-1段经RP-18柱,甲醇-水(20∶80-80∶20)梯度洗脱,得到欧前胡素、佛手柑内酯;F5-2段经RP-18柱,甲醇-水(20∶80-80∶20)梯度洗脱,得到二氢欧山芹素。F-7段经硅胶柱层析,石油醚-乙酸乙酯(8∶1)洗脱,再将F7-3段经RP-18柱,甲醇-水(20∶80-80∶20)梯度洗脱,得到拐芹色原酮、谷甾醇;F7-4段反复用凝胶柱层析(氯仿甲醇1∶1洗脱),得到氧化前胡素乙基醚。F-8段经硅胶柱层析,石油醚-乙酸乙酯(6∶1)洗脱,再将F8-2段经RP-18柱,甲醇-水(30∶70-80∶20)梯度洗脱,再经过凝胶柱层析(氯仿甲醇1∶1洗脱)得到栓翅芹烯醇、ledebouriellol;F8-3段反复用凝胶柱层析(氯仿甲醇1∶1洗脱),再经过RP-18柱,甲醇-水(40∶60-80∶20)梯度洗脱,得到豆甾醇。F10段经硅胶柱层析,石油醚-乙酸乙酯(3∶1)洗脱,再将F10-2段经RP-18柱,甲醇-水(30∶70-80∶20)梯度洗脱,再经过凝胶柱层析(氯仿甲醇1∶1洗脱)得到3’(R)-+-亥茅酚;F10-3段经过RP-18柱,甲醇-水(40∶60-80∶20)梯度洗脱,得到3’-O-乙酰基亥茅酚、isopimpinellin。F-14段经硅胶柱层析石油醚-乙酸乙酯(1∶2)洗脱,F14-6段重结晶得到水合氧化前胡素内酯。
以下为单体化合物的理化性质及波谱特征:
异欧前胡素:淡黄色块状结晶,mp109℃,ESI-MSm/z:271[M+H]+,293[M+Na]+。1H-NMR(CDCl3,400MHZ)δ:8.16(1H,d,J=9.8Hz,H-4),7.60(1H,d,J=2.4Hz,H-2′),7.14(1H,s,H-8),6.96(1H,d,J=2.4Hz,H-3′),6.28(1H,d,J=9.8Hz,H-3),5.40(1H,t-like,J=7.2Hz,H-2″),4.93(2H,d,J=7.2Hz,H-1″),1.81(3H,s,Me-3″),1.71(3H,s,Me-3″)。13C-NMR(CDCl3,100MHZ)δ:161.3(C-2),112.4(C-3),139.6(C-4),148.6(C-5),114.0(C-6),158.1(C-7),94.1(C-8),152.6(C-9),107.4(C-10),144.8(C-2′),105.0(C-3′),69.6(C-1″),119.0(C-2″),139.8(C-3″),18.2(Me-3″),25.8(Me-3″)。
水合氧化前胡素内酯:淡黄色块状结晶,mp131~132℃,ESI-MSm/z:305[M+H]+,303[M-H]-。1H-NMR(CD3OD,400MHz)δ:8.27(1H,d,J=9.6Hz,H-4),7.60(1H,d,J=2.0Hz,H-2′),7.12(1H,d,J=2.0Hz,H-3′),7.00(1H,s,H-8),6.16(1H,d,J=9.6Hz,H-3),4.73(1H,dd,J=9.8,2.4Hz,H-1″),4.33(1H,dd,J=9.6,8.4Hz,H-1″),3.80(1H,dd,J=8.4,2.4Hz,H-2″),1.29(3H,s,Me-3″),1.24(3H,s,Me-3″)。13C-NMR(CD3OD,100MHz)δ:162.9(C-2),112.4(C-3),141.2(C-4),150.2(C-5),114.5(C-6),159.3(C-7),94.0(C-8),153.3(C-9),107.6(C-10),146.3(C-2′),106.0(C-3′),75.1(C-1″),77.7(C-2″),72.3(C-3″),24.5(Me-3″),27.0(Me-3″)。
3’-O-乙酰基亥茅酚:白色无定形粉末,mp198~200℃,ESI-MSm/z:277[M+H]+。1H-NMR(CDCl3,400MHZ)δ:13.02(1H,s,OH-5),6.37(1H,s,H-8),6.00(1H,s,H-3),5.12(1H,t,J=5.4Hz,H-3′),3.05(1H,dd,J=17.3,5.0Hz,H-4′),2.70(1H,dd,J=17.2,5.6Hz,H-4′),2.33(3H,s,Me-2),2.05(3H,s,OAc),1.36(3H,s,Me-2′),1.35(3H,s,Me-2′)。13C-NMR(CDCl3,100MHZ)δ:166.8(C-2),108.4(C-3),182.4(C-4),159.6(C-5),102.5(C-6),158.9(C-7),94.8(C-8),156.2(C-9),104.3(C-10),20.5(Me-2),76.8(C-2′),69.8(C-3′),22.6(C-4′),23.0(Me-2′),24.7(Me-2′),21.1(CH 3 CO),170.1(CH3 CO)。
栓翅芹烯醇:白色晶体,mp137~138℃,ESI-MSm/z:287[M+H]+。1H-NMR(CDCl3,400MHZ)δ:8.20(1H,d,J=9.7Hz,H-4),8.00(1H,d,J=2.4Hz,H-2′),7.20(1H,s,H-8),7.16(1H,d,J=2.4Hz,H-3′),6.25(1H,d,J=9.7Hz,H-3),5.12(1H,d,J=9.7Hz,H-4″),5.03(1H,d,J=5.0Hz,H-4″),4.56(2H,J=8.0Hz,H-1″),4.44(1H,m,H-2″),1.21(3H,s,Me-3″)。13C-NMR(CDCl3,100MHZ)δ:161.9(C-2),113.4(C-3),139.2(C-4),146.5(C-5),114.2(C-6),158.0(C-7),94.7(C-8),152.7(C-9),112.9(C-10),145.2(C-2′),105.3(C-3′),75.0(C-1″),72.7(C-2″),144.8(C-3″),112.9(C-4″),18.9(Me-3″)。
3’(R)-+-亥茅酚:白色无定形粉末,mp198~200℃,ESI-MSm/z:277[M+H]+。1H-NMR(CDCl3,400MHZ)δ:12.95(1H,s,OH-5),6.30(1H,s,H-8),6.00(1H,s,H-3),3.86(1H,t,J=4.8Hz,H-3′),2.95(1H,dd,J=16.8,5.0Hz,H-4′),2.74(1H,dd,J=17.2,5.6Hz,H-4′),2.33(3H,s,Me-2),1.40(3H,s,Me-2′),1.35(3H,s,Me-2′)。13C-NMR(CDCl3,100MHZ)δ:166.8(C-2),108.2(C-3),182.4(C-4),159.6(C-5),102.8(C-6),158.9(C-7),94.8(C-8),156.1(C-9),104.2(C-10),20.5(Me-2),78.4(C-2′),68.6(C-3′),25.3(C-4′),22.1(Me-2′),24.8(Me-2′)。
奥斯索(Osthol):白色羽状结晶,mp89℃,ESI-MSm/z:245[M+H]+,267[M+Na]+。1H-NMR(CDCl3,400MHz)δ:7.62(1H,d,J=9.6Hz,H-4),7.29(1H,d,J=8.4Hz,H-5),6.83(1H,d,J=8.4Hz,H-6),6.23(1H,d,J=9.4Hz,H-3),5.22(1H,t-like,J=7.6Hz,H-2′),3.93(3H,s,OMe),3.53(2H,d,J=7.6Hz,H-1′),1.84(3H,s,Me-3′),1.67(3H,s,Me-3′)。13C-NMR(CDCl3,100MHZ)δ:161.4(C-2),112.9(C-3),143.8(C-4),126.2(C-5),107.3(C-6),160.1(C-7),96.9(C-8),152.7(C-9),117.8(C-10),21.9(C-1′),121.0(C-2′),132.6(C-3′),17.9(Me-3′),25.8(Me-3′),56.0(OMe)。
拐芹色原酮:白色无定形粉末,mp177~178℃,ESI-MSm/z:341[M+Na]+。1H-NMR(CDCl3,400MHZ)δ:12.75(1H,s,OH-5),6.34(1H,s,H-8),6.24(1H,s,H-3),6.22(1H,overlap,H-3″),5.04(2H,s,CH2-2),4.78(1H,t,J=9.0Hz,H-2′),3.18(1H,dd,J=15.9,9.2Hz,H-3′),3.10(1H,dd,J=15.7,8.1Hz,H-3′),2.04(1H,dd,J=7.0,1.2Hz,Me-3″),1.96(3H,t,J=1.2Hz,Me-2″),1.36(3H,s,Me-4′),1.23(3H,s,Me-4′)。13C-NMR(CDCl3,100MHZ):157.9(C-2),108.0(C-3),182.3(C-4),166.1(C-5),106.0(C-6),163.3(C-7),89.1(C-8),156.6(C-9),109.3(C-10),61.0(CH2-2),91.8(C-2′),26.7(C-3′),71.8(C-4′),23.8(Me-4′),25.9(Me-4′),166.4(C-1″),126.5(C-2″),141.0(C-3″),20.5(Me-2″),16.0(Me-3″)。
佛手柑内酯:白色羽状结晶,mp188~189℃,ESI-MSm/z:217[M+H]+,239[M+Na]-。1H-NMR(CDCl3,400MHZ)δ:8.16(1H,d,J=9.8Hz,H-4),7.59(1H,d,J=2.2Hz,H-2′),7.13(1H,s,H-8),7.02(1H,d,J=2.2Hz,H-3′),6.27(1H,d,J=9.8Hz,H-3),4.28(3H,s,MeO)。13C-NMR(CDCl3,100MHZ)δ:160.5(C-2),112.5(C-3),139.3(C-4),149.5(C-5),121.0(C-6),158.1(C-7),93.7(C-8),153.4(C-9),106.1(C-10),144.8(C-2′),105.0(C-3′),65.0(OMe)。
欧前胡素:白色羽状结晶,mp102℃,ESI-MSm/z:271[M+H]+,269[M-H]-。1H-NMR(CDCl3,400MHZ)δ:7.77(1H,d,J=9.4Hz,H-4),7.69(1H,d,J=2.4Hz,H-2′),7.36(1H,s,H-5),6.85(1H,d,J=2.4Hz,H-3′),6.36(1H,d,J=9.4Hz,H-3),5.61(1H,t-like,J=7.2Hz,H-2″),5.00(2H,d,J=7.2Hz,H-1″),1.74(3H,s,Me-3″),1.72(3H,s,Me-3″)。13C-NMR(CD3OD,100MHz)δ:160.5(C-2),113.1(C-3),146.6(C-4),114.6(C-5),125.8(C-6),148.5(C-7),131.5(C-8),143.7(C-9),116.4(C-10),144.4(C-2′),106.7(C-3′),70.1(C-1″),119.6(C-2″),139.8(C-3″),18.1(Me-3″),25.8(Me-3″)。
Ledebouriellol:白色无定形粉末,mp98~100℃,ESI-MSm/z:375[M+H]+。1H-NMR(CDCl3,400MHZ)δ:12.81(1H,s,OH-5),6.346.33(each1H,s,H-3andH-8),6.09(1H,q,J=7.0Hz,H-3″),5.17(1H,t,J=5.2Hz,H-3′),4.54(2H,s,CH2-2),3.03(1H,dd,J=17.2,4.8Hz,H-4′),2.79(1H,dd,J=17.2,5.0Hz,H-4′),1.90(3H,d,J=7.0Hz,Me-3″),1.85(3H,s,Me-2″),1.38,(6H,s,(Me-2′)2)。13C-NMR(CDCl3,100MHZ):168.6(C-2),106.1(C-3),182.6(C-4),159.1(C-5),102.8(C-6),159.4(C-7),94.8(C-8),155.8(C-9),104.6(C-10),61.2(CH2-2),76.7(C-2′),69.4(C-3′),22.6(C-4′),23.0(Me-2′),24.8(Me-2′),167.0(C-1″),127.3(C-2″),139.2(C-3″),20.5(Me-2″),15.7(Me-3″)。
二氢欧山芹素:白色无定形粉末,mp119~120℃,ESI-MSm/z:329[M+H]+,327[M-H]-。1H-NMR(CDCl3,400MHZ)δ:7.64(1H,d,J=9.2Hz,H-4),7.27(1H,d,J=8.0Hz,H-5),6.75(1H,d,J=8.4Hz,H-6),6.21(1H,d,J=9.6Hz,H-3),5.98(1H,dq-like,H-3″),5.12(1H,dd,J=9.6,8.0Hz,H-2′),3.38(2H,m,H-1′),1.89(3H,dd,J=7.2,1.6Hz,Me-3″),1.67(3H,t,J=1.6Hz,Me-2″),1.64(3H,s,Me-4′),1.60(3H,s,Me-4′)。13C-NMR(CDCl3,100MHZ):161.1(C-2),112.1(C-3),144.0(C-4),128.8(C-5),106.6(C-6),163.9(C-7),113.0(C-8),151.2(C-9),113.5(C-10),89.2(C-2′),27.6(C-3′),82.0(C-4′),21.2(Me-4′),22.2(Me-4′),167.1(C-1″),128.5(C-2″),137.8(C-3″),20.5(Me-2″),15.6(Me-3″)。
异虎耳草素(Isopimpinellin):白色羽状结晶,mp151℃,ESI-MSm/z:247[M+H]+,269[M+Na]+。1H-NMR(CDCl3,400MHZ)δ:8.13(1H,d,J=9.6Hz,H-4),7.63(1H,d,J=2.4Hz,H-2′),7.01(1H,d,J=2.0Hz,H-3′),6.29(1H,d,J=9.6Hz,H-3),4.18(6H,s,(MeO)2)。13C-NMR(CDCl3,100MHZ)δ:160.6(C-2),112.8(C-3),139.4(C-4),144.3(C-5),114.7(C-6),150.0(C-7),128.1(C-8),143.6(C-9),107.5(C-10),145.1(C-2′),105.1(C-3′),61.7(OMe),60.8(OMe)。
氧化前胡素乙基醚:淡黄色块状结晶,mp95℃,ESI-MSm/z:333[M+H]+,331[M-H]-。1H-NMR(CD3Cl,400MHZ)δ:8.24(1H,d,J=9.6Hz,H-4),7.60(1H,d,J=2.4Hz,H-2′),7.15(1H,s,H-8),7.02(1H,d,J=2.0Hz,H-3′),6.27(1H,d,J=9.6Hz,H-3),4.59(1H,dd,J=10.1,2.8Hz,H-1″),4.40(1H,dd,J=10.1,7.8Hz,H-1″),3.94(1H,dd,J=8.0,2.8Hz,H-2″),3.26(2H,q,J=7.2Hz,CH 2 CH3),1.28(3H,s,Me-3″),1.25(3H,s,Me-3″),1.19(3H,t,J=7.2Hz,CH2 CH 3 )。13C-NMR(CDCl3,100MHZ)δ:161.3(C-2),112.7(C-3),139.5(C-4),148.8(C-5),113.9(C-6),158.1(C-7),94.3(C-8),152.5(C-9),107.2(C-10),145.0(C-2′),104.9(C-3′),74.2(C-1″),76.1(C-2″),75.7(C-3″),21.3(Me-3″),21.4(Me-3″),56.7(CH 2 CH3),16.0(CH2 CH 3 )。
实施例8紫金砂提取物片剂的制备
实施例1所得的紫金砂提取物100g
淀粉100g
上述组分混合均匀,加滑石粉适量,压制成1000片。
实施例9紫金砂提取物复方制剂的制备
实施例1所得的紫金砂提取物100g
延胡素生物碱提取物50g(主要含DL-四氢巴马汀,购自大兴安岭林格贝有机食品有限公司)
上述组分混合均匀,装入硬明胶胶囊中,共1000粒胶囊。
实验例1实施例1中制备的紫金砂提取物1对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用
本实验首先建立了经典的心肌缺血再灌注损伤模型,观察了含有不同剂量紫金砂提取物口服给药后对心肌缺血再灌注损伤的治疗效果,并与目前公认的、对心肌缺血性疾病具良好治疗作用的复方丹参滴丸进行了比较。证实紫金砂提取物口服给药后对心肌缺血性疾病的有效治疗作用,具体方法和结果如下:
1.实验方法
1.1实验分组
将SD大鼠随机分为6组,每组10只,灌胃给药。①假手术组(sham):冠状动脉左前降支(leftanteriordescendingcoronaryartery,LDA)只穿线不结扎;②缺血再灌注组(模型组,模型):LDA结扎30min,再灌注120min;③阳性药复方丹参滴丸组:连续三天灌胃给药0.125g·kg-1复方丹参滴丸,第四天灌胃给药30min后结扎30min,再灌注120min;④紫金砂大剂量组:紫金砂1g·kg-1;⑤紫金砂小剂量组:紫金砂0.5g·kg-1;⑥0.5%溶剂对照组:10ml·kg-1;④-⑥给药方式及给药时间同③。
1.2实验材料及实验方法
1.2.1实验动物、药品及实验仪器
1.2.1.1实验动物
清洁级SD大鼠,体重220~240g,由北京维通利华公司提供;动物许可证号:SCXK(京)2007-0001。
1.2.1.2实验药品及试剂
复方丹参滴丸由天津天士力制药股份有限公司生产,批号:20080709。氯化三苯基四氮唑(TTC)购自国药集团化学试剂有限公司。乳酸脱氢酶(lactatedehydrogenase,LDH)、肌酸激酶(creatinekinase,CK)试剂盒购于北京中生生物工程技术公司。丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)试剂盒购于南京建成生物工程研究所。
1.2.1.3实验仪器
低温离心机(德国Sigma公司型号:3-18K),紫外分光光度计(日本GBC公司型号:GZNtRA20),生物心电图记录仪(南京美易科技有限公司型号:Medlab-u/4CS),恒温槽(中国重庆银河试验仪器有限公司型号:WC/09-05),医学图像分析系统(美国Backman公司型号:HPIAS21000),图像分析仪(日本Nikon公司型号:MPIAS2500),人工呼吸机(冀星实验仪器技术开发有限公司型号:DW-2B)。
1.2.2实验方法
1.2.2.1大鼠心肌缺血再灌注损伤模型的建立
健康雄性SD大鼠,20%乌拉坦(1g·kg-1,即5mL·100g-1)ip麻醉,仰卧固定,常规记录肢体II导联。分离出气管,用于接小动物呼吸机,呼吸机频率60次·min-1。沿胸部中线纵切皮肤,暴露胸骨和软骨部分,沿左胸骨边缘切断2、3、4肋软骨,避免损伤胸膜和胸廓内血管,暴露心脏,剪开心包膜,在左心耳下缘2mm处寻找冠状动脉LDA,在LDA下穿线(5/0缝合线),LDA与缝合线之间放一直径为2mm左右乳胶管(便于再灌注)后结扎30min,再灌注120min。以心电图S-T段及T波明显抬高和结扎线以下心肌组织颜色由正常变苍白再变暗为心肌缺血标志。
1.2.2.2心电图检测
联接肢体II导联,在缺血前、缺血时、缺血10min、30min、再灌时、再灌5min、30min、60min及120min共9个时间点观察心电图T波及S-T段的变化。
1.2.2.3血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量测定
于再灌注120min时自颈总动脉取血,在4℃按4000r·min-1离心10min,取血清。按各检测试剂盒所附说明书常规检测LDH、CK、SOD酶活性及MDA含量。
1.2.2.4心肌梗死面积测定
各组分别于再灌注120min颈总动脉取血后处死动物,摘取心脏,切除主动脉和右心室,将左心室沿心脏纵轴均匀切成0.2cm薄片(5片),置于pH7.8、1%TTC的磷酸缓冲溶液中,于37℃水浴箱孵化5-10min,梗死区呈白色,未梗死区因含有完整的LDH而染成红色。待色差明显后,取出放入10%福尔马林中固定,24h内数码相机照相,MoticMed6.0数码医学图像分析系统测量每片心肌的面积及梗死区的面积,计算左心室总面积和梗死区总面积。计算梗死区占左心室的百分比。
1.2.2.5统计学处理
实验数据以表示,多组间比较采用SPSS16.0软件包的one-wayANOVA分析,方差齐者组间比较采用LSD检验,方差不齐者采用Games-Howell检验。
2.实验结果
2.1紫金砂对心肌缺血再灌注损伤大鼠心电图T波及S-T段变化的影响
结果如表2所示,缺血前各组大鼠T波与S-T段之间无明显差异;结扎后,与假手术组比较,模型组缺血与再灌后各时间点T波与S-T段显著抬高,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,紫金砂及复方丹参滴丸各给药组在各个时间点T波与S-T段均无明显变化,差异无统计学意义。
表2:紫金砂对心肌缺血再灌注损伤大鼠心电图T波及S-T段的影响(n=10)
n=10;**P<0.01,与假手术组比较
2.2紫金砂对心肌缺血再灌注损伤大鼠梗死面积百分比的影响
结果如表3所示,与模型组比较,复方丹参滴丸与紫金砂各给药组的心肌梗死面积明显减小;各给药组组间比较,复方丹参滴丸与紫金砂高剂量组对心肌梗塞面积的抑制作用基本相当,但均显著优于紫金砂低剂量组;此外,溶剂对照组与模型组心肌梗塞面积百分比基本相当,二者组间比较无显著差异,表明溶剂对心肌缺血再灌注损伤无明显抑制作用。
表3紫金砂对心肌缺血再灌注损伤大鼠梗死面积的影响
n=10;**P<0.01,与模型组比较;##P<0.01,与紫金砂500mg·kg-1给药组比较
2.3紫金砂对心肌缺血再灌注损伤大鼠血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量的影响
结果如表4所示,溶剂对照组及模型组动物血清CK、LDH、SOD及MDA组间比较无显著差异;与模型组比较,紫金砂与复方丹参滴丸各给药组动物血清CK及LDH值明显降低,且紫金砂高剂量及复方丹参滴丸给药组动物血清CK及LDH值明显低于紫金砂低剂量给药组,但二者组间比较无显著差异。
与模型组比较,紫金砂与复方丹参滴丸各给药组动物血清MDA含量明显降低但SOD活性显著升高,且紫金砂高剂量及复方丹参滴丸给药组动物血清MDA值明显低于紫金砂低剂量给药组,但SOD活性显著高于紫金砂低剂量组;紫金砂高剂量及复方丹参滴丸给药组动物组间比较,二者无显著差异。
表4:紫金砂对心肌缺血再灌注损伤大鼠血清中肌酸激酶(CK)、
乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)的影响
n=10;**P<0.01,与模型组比较;##P<0.01,与紫金砂500mg·kg-1给药组比较.
实验例2实施例1中制备的紫金砂提取物1对家兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用
在实验例1的实验结果基础上,在家兔上进一步建立心肌缺血再灌注损伤模型,观察了含有不同剂量紫金砂提取物口服给药后对心肌缺血再灌注损伤的治疗效果,并与目前公认的、对心肌缺血性疾病具良好治疗作用的复方丹参滴丸进行了比较。证实紫金砂提取物口服给药后对心肌缺血性疾病的有效治疗作用,具体方法和结果如下:
1.实验方法
1.1实验分组
56只家兔共分7组,每组各8只动物,包括:①缺血再灌注组(I/R模型组):缺血30min,再灌注120min;②假手术组:只分离血管不阻断血流;③维拉帕米组:缺血前10min股静脉滴注VP0.2mg·kg-1;④阳性药复方丹参滴丸组:连续七天灌胃给药1g·kg-1复方丹参滴丸,第7天灌胃给药30min后进行实验;⑤紫金砂低剂量组:紫金砂-1(0.25g·kg-1);⑥紫金砂中剂量组:紫金砂-2(0.5g·kg-1);⑦紫金砂高剂量组:紫金砂-3(1g·kg-1),⑤⑥⑦给药方式同④。
1.2实验材料及实验方法
1.2.1实验动物、药品及实验仪器
1.2.1.1实验动物
大耳白兔,体重1.5~3.0kg,由北京科宇养殖中心提供。
1.2.1.2实验药品及试剂
维拉帕米注射液由上海和丰制药有限公司生产,批号:090901。其余实验药品、试剂同实验例1。
1.2.1.3实验仪器
同实验例1。
1.2.2实验方法
1.2.2.1家兔心肌缺血再灌注损伤模型的建立
新西兰大耳白兔,56只,清洁级,体重2.0~3.0kg,3%戊巴比妥钠(30mg·kg-1)静脉麻醉,连接肢体II导联心电图,开胸,分离第2与第3分支之间的冠状动脉左旋支,使其缺血30min,再灌注120min,缺血成功的标志是:心电图的T波和S-T段明显抬高及缺血区心肌颜色变灰暗;恢复血流成功再灌注的标志是:心电图和心肌颜色逐渐恢复。
1.2.2.2心肌梗死面积测定
各组分别于再灌120min后处死动物,分离心脏,切除主动脉、大血管和右心室,将左室沿心脏纵轴均匀切成0.2cm薄片(共5片)。置于pH7.4浓度1.0%TTC磷酸缓冲溶液中,37℃水浴箱孵化5~10min,梗死区呈白色,未梗死区因含有完整的乳酸脱氢酶而染成红色。Med6.0型医学图像分析系统测量每片心肌同侧的梗死区与非梗死区,计算心肌的梗死面积、心室总面积,最终得出梗死区占左心室总面积的百分比。
1.2.2.3血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量测定
于再灌注120min自心脏取血,在4℃按4000×r离心10min,取血清。根据试剂盒说明书来检测血清中CK,LDH,SOD活性及MDA含量的变化。
1.2.2.4统计学处理
实验数据以表示,多组间比较采用SPSS16.0软件包的onewayANOVA分析,方差齐者组间比较采用LSD检验,方差不齐者采用Games-Howell检验。
2.实验结果
2.1紫金砂对心肌缺血再灌注损伤家兔梗死面积百分比的影响
结果如表5所示,与模型组相比,各给药组心肌梗死面积均明显减小(P<0.01);各给药组组间比较,紫金砂高、中剂量组,复方丹参滴丸及维拉帕米组心肌梗死面积均明显低于紫金砂低剂量组(P<0.01),但上述各组组间比较无显著差别。
表5:紫金砂对心肌缺血再灌注损伤家兔心肌梗死面积百分比变化的影响(n=8)
模型组:缺血30min,再灌注120min;维拉帕米组:缺血前10min股静脉滴注维拉帕米0.2mg·kg-1;阳性药复方丹参滴丸组:连续七天灌胃给予复方丹参滴丸1000mg·kg-1,第七天灌胃给药30min后进行实验;紫金砂组:紫金砂(250,500及1000mg·kg-1),给药方式同复方丹参滴丸.**p<0.01,与模型组比较;##p<0.01,与复方丹参滴丸组比较;p<0.01,与紫金砂低剂量组比较.
2.2紫金砂对心肌缺血再灌注损伤大鼠血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量的影响
结果如表6所示,与模型组比较,各给药组CK、LDH及MDA值明显降低(P<0.01)且SOD活性明显升高(P<0.01);各给药剂量组组间比较,除紫金砂高剂量组CK值明显低于紫金砂低剂量给药组外(P<0.05),其余所有各组各血清学指标(CK,LDH,SOD活性及MDA含量)组间比较均无统计学差别。
表6:紫金砂对家兔心肌缺血再灌注损伤血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量的影响(n=8)
模型组:缺血30min,再灌注120min;假手术组:只分离血管不阻断血流;维拉帕米组:缺血前10min股静脉滴注维拉帕米0.2mg·kg-1;阳性药复方丹参滴丸组:连续七天灌胃给予复方丹参滴丸1000mg·kg-1,第七天灌胃给药30min后进行实验;紫金砂组:紫金砂(250,500及1000mg·kg-1),给药方式同复方丹参滴丸.**P<0.01,与模型比较;p<0.05,与紫金砂低剂量组比较.
在大鼠及兔上的药效学试验结果表明,紫金砂提取物在缺血前预防给药,连续7天,可有效降低心肌梗死面积,显著提升机体抗氧化能力,有效减少脂质过氧化产物的产生,其作用与公认阳性治疗药物复方丹参滴丸基本相当,表明紫金砂及其提取物在治疗心肌缺血再灌注损伤上具良好应用前景。
Claims (21)
1.紫金砂提取物在制备用于治疗心肌缺血性疾病的产品或药物中的用途,
其中所述的提取物,其制备方法包括以下步骤,1)将紫金砂药材粉碎;2)用合适的溶剂提取1-5次,所述的合适的溶剂是乙醇水溶液,提取方式为加热回流;3)合并提取液,浓缩至干,获得紫金砂提取物,
所述的心肌缺血性疾病为心肌缺血再灌注损伤。
2.权利要求1的用途,其中所述提取物中含有香豆素类和色原酮类成分。
3.权利要求2的用途,其中所述香豆素类成分为选自水合氧化前胡素内酯、栓翅芹烯醇、异欧前胡素、奥斯索、佛手柑内酯、欧前胡素、二氢欧山芹素、异虎耳草素、氧化前胡素乙基醚中的一种或多种,所述色原酮类成分为3’R-(+)-亥茅酚、3’-O-乙酰基亥茅酚、拐芹色原酮、ledebouriellol的一种或多种。
4.权利要求2的用途,其中所述的香豆素类、色原酮类成分含量总和占总提取物的重量百分比为10-90%。
5.权利要求2的用途,其中所述的香豆素类、色原酮类成分含量总和占总提取物的重量百分比为20-80%。
6.权利要求2的用途,其中所述的香豆素类、色原酮类成分含量总和占总提取物的重量百分为25-78%。
7.权利要求2的用途,其中所述的香豆素类、色原酮类成分含量总和占总提取物的重量百分比26.3-78%。
8.权利要求2的用途,其中所述的香豆素类、色原酮类成分含量总和占总提取物的重量百分比为29.4%、26.3%、33.5%、59.38%、78%、38.61%。
9.权利要求3的用途,其中所述的水合氧化前胡素内酯、栓翅芹烯醇、3’(R)-+-亥茅酚、3’-O-乙酰基亥茅酚、异欧前胡素五种主要成分的总含量占总提取物的重量百分比为0.5-40%。
10.权利要求3的用途,其中所述的水合氧化前胡素内酯、栓翅芹烯醇、3’(R)-+-亥茅酚、3’-O-乙酰基亥茅酚、异欧前胡素五种主要成分的总含量占总提取物的重量百分比为5-35%。
11.权利要求3的用途,其中所述的水合氧化前胡素内酯、栓翅芹烯醇、3’(R)-+-亥茅酚、3’-O-乙酰基亥茅酚、异欧前胡素五种主要成分的总含量占总提取物的重量百分比为10-30%。
12.权利要求3的用途,其中所述的水合氧化前胡素内酯、栓翅芹烯醇、3’(R)-+-亥茅酚、3’-O-乙酰基亥茅酚、异欧前胡素五种主要成分的总含量占总提取物的重量百分比为10.25-29.4%。
13.权利要求3的用途,其中所述的水合氧化前胡素内酯、栓翅芹烯醇、3’(R)-+-亥茅酚、3’-O-乙酰基亥茅酚、异欧前胡素五种主要成分的总含量占总提取物的重量百分比为11.65%、10.25%、14.82%、21.98%、29.4%、14.17%。
14.权利要求3的用途,其中水合氧化前胡素内酯、栓翅芹烯醇、3’(R)-+-亥茅酚、3’-O-乙酰基亥茅酚、异欧前胡素五种主要成分在紫金砂总提取物中的重量百分比含量分别为5-25%、0.5-2%、0.2-1.2%、0.2-1.2%、1.2-3.5%。
15.权利要求3的用途,其中水合氧化前胡素内酯、栓翅芹烯醇、3’(R)-+-亥茅酚、3’-O-乙酰基亥茅酚、异欧前胡素五种主要成分在紫金砂总提取物中的重量百分比含量分别为7.37-23.9%、0.63-1.8%、0.31-1.06%、0.33-0.98%、1.54-3.29%。
16.权利要求1-15任一项的用途,步骤3)中,浓缩方式为减压浓缩。
17.权利要求1-15任一项的用途,其中所述的药物含有紫金砂提取物,和一种或多种药学上可接受的载体。
18.权利要求17的用途,其中所述的载体选自:稀释剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂、香味剂、甜味剂。
19.权利要求17的用途,其中所述的药物还包含其他活性物质。
20.权利要求19的用途,其中所述的其他活性物质为延胡素生物碱提取物或DL-四氢巴马汀。
21.权利要求17的用途,其中所述的药物为片剂、胶囊、粉剂、颗粒、锭剂、栓剂或口服液。
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