CN113791147B - 穿破石的质量检测方法 - Google Patents
穿破石的质量检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113791147B CN113791147B CN202111008764.1A CN202111008764A CN113791147B CN 113791147 B CN113791147 B CN 113791147B CN 202111008764 A CN202111008764 A CN 202111008764A CN 113791147 B CN113791147 B CN 113791147B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- peak
- cudrania
- methanol
- sample
- tricuspidata
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241000218211 Maclura Species 0.000 title claims abstract description 47
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 24
- 241001523380 Maclura tricuspidata Species 0.000 claims abstract description 49
- 235000010918 Cudrania tricuspidata Nutrition 0.000 claims abstract description 41
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 claims abstract description 36
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims abstract description 26
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 24
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 108
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 55
- REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N Quercetin Chemical compound C=1C(O)=CC(O)=C(C(C=2O)=O)C=1OC=2C1=CC=C(O)C(O)=C1 REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 42
- IYRMWMYZSQPJKC-UHFFFAOYSA-N kaempferol Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=C(O)C=C(O)C=C2O1 IYRMWMYZSQPJKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 42
- MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N kaempferol Natural products OC1=C(C(=O)c2cc(O)cc(O)c2O1)c3ccc(O)cc3 MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 42
- UXOUKMQIEVGVLY-UHFFFAOYSA-N morin Natural products OC1=CC(O)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 UXOUKMQIEVGVLY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 42
- CXQWRCVTCMQVQX-LSDHHAIUSA-N (+)-taxifolin Chemical compound C1([C@@H]2[C@H](C(C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)=O)O)=CC=C(O)C(O)=C1 CXQWRCVTCMQVQX-LSDHHAIUSA-N 0.000 claims description 30
- QNVSXXGDAPORNA-UHFFFAOYSA-N Resveratrol Natural products OC1=CC=CC(C=CC=2C=C(O)C(O)=CC=2)=C1 QNVSXXGDAPORNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- LUKBXSAWLPMMSZ-OWOJBTEDSA-N Trans-resveratrol Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1\C=C\C1=CC(O)=CC(O)=C1 LUKBXSAWLPMMSZ-OWOJBTEDSA-N 0.000 claims description 30
- 229940016667 resveratrol Drugs 0.000 claims description 30
- 235000021283 resveratrol Nutrition 0.000 claims description 30
- FFWOKTFYGVYKIR-UHFFFAOYSA-N physcion Chemical compound C1=C(C)C=C2C(=O)C3=CC(OC)=CC(O)=C3C(=O)C2=C1O FFWOKTFYGVYKIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 26
- PKUBGLYEOAJPEG-UHFFFAOYSA-N physcion Natural products C1=C(C)C=C2C(=O)C3=CC(C)=CC(O)=C3C(=O)C2=C1O PKUBGLYEOAJPEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 23
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 23
- FTVWIRXFELQLPI-ZDUSSCGKSA-N (S)-naringenin Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1[C@H]1OC2=CC(O)=CC(O)=C2C(=O)C1 FTVWIRXFELQLPI-ZDUSSCGKSA-N 0.000 claims description 21
- UBSCDKPKWHYZNX-UHFFFAOYSA-N Demethoxycapillarisin Natural products C1=CC(O)=CC=C1OC1=CC(=O)C2=C(O)C=C(O)C=C2O1 UBSCDKPKWHYZNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- YXOLAZRVSSWPPT-UHFFFAOYSA-N Morin Chemical compound OC1=CC(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=C(O)C=C(O)C=C2O1 YXOLAZRVSSWPPT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- ZVOLCUVKHLEPEV-UHFFFAOYSA-N Quercetagetin Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=C(O)C(O)=C(O)C=C2O1 ZVOLCUVKHLEPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- HWTZYBCRDDUBJY-UHFFFAOYSA-N Rhynchosin Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=CC(O)=C(O)C=C2O1 HWTZYBCRDDUBJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- 235000008777 kaempferol Nutrition 0.000 claims description 21
- 235000007708 morin Nutrition 0.000 claims description 21
- WGEYAGZBLYNDFV-UHFFFAOYSA-N naringenin Natural products C1(=O)C2=C(O)C=C(O)C=C2OC(C1)C1=CC=C(CC1)O WGEYAGZBLYNDFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- 229940117954 naringenin Drugs 0.000 claims description 21
- 235000007625 naringenin Nutrition 0.000 claims description 21
- 235000005875 quercetin Nutrition 0.000 claims description 21
- 229960001285 quercetin Drugs 0.000 claims description 21
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 20
- KQNGHARGJDXHKF-UHFFFAOYSA-N dihydrotamarixetin Natural products C1=C(O)C(OC)=CC=C1C1C(O)C(=O)C2=C(O)C=C(O)C=C2O1 KQNGHARGJDXHKF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 14
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 claims description 14
- UGNZSMZSJYOGNX-UHFFFAOYSA-N Isoviocristine Natural products O=C1C=C(C)C(=O)C2=CC3=CC(OC)=CC(O)=C3C(O)=C21 UGNZSMZSJYOGNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- WLXGUTUUWXVZNM-UHFFFAOYSA-N anthraglycoside A Natural products C1=C(C)C=C2C(=O)C3=CC(OC)=CC(O)=C3C(=O)C2=C1OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O WLXGUTUUWXVZNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- CJIJXIFQYOPWTF-UHFFFAOYSA-N 7-hydroxycoumarin Natural products O1C(=O)C=CC2=CC(O)=CC=C21 CJIJXIFQYOPWTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical group CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- ORHBXUUXSCNDEV-UHFFFAOYSA-N umbelliferone Chemical compound C1=CC(=O)OC2=CC(O)=CC=C21 ORHBXUUXSCNDEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- HFTAFOQKODTIJY-UHFFFAOYSA-N umbelliferone Natural products Cc1cc2C=CC(=O)Oc2cc1OCC=CC(C)(C)O HFTAFOQKODTIJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- VWDXGKUTGQJJHJ-UHFFFAOYSA-N Catenarin Natural products C1=C(O)C=C2C(=O)C3=C(O)C(C)=CC(O)=C3C(=O)C2=C1O VWDXGKUTGQJJHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 239000010282 Emodin Substances 0.000 claims description 11
- RBLJKYCRSCQLRP-UHFFFAOYSA-N Emodin-dianthron Natural products O=C1C2=CC(C)=CC(O)=C2C(=O)C2=C1CC(=O)C=C2O RBLJKYCRSCQLRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- YOOXNSPYGCZLAX-UHFFFAOYSA-N Helminthosporin Natural products C1=CC(O)=C2C(=O)C3=CC(C)=CC(O)=C3C(=O)C2=C1O YOOXNSPYGCZLAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- NTGIIKCGBNGQAR-UHFFFAOYSA-N Rheoemodin Natural products C1=C(O)C=C2C(=O)C3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C2=C1O NTGIIKCGBNGQAR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- RHMXXJGYXNZAPX-UHFFFAOYSA-N emodin Chemical compound C1=C(O)C=C2C(=O)C3=CC(C)=CC(O)=C3C(=O)C2=C1O RHMXXJGYXNZAPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- VASFLQKDXBAWEL-UHFFFAOYSA-N emodin Natural products OC1=C(OC2=C(C=CC(=C2C1=O)O)O)C1=CC=C(C=C1)O VASFLQKDXBAWEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 11
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 10
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 9
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 claims description 9
- 239000012088 reference solution Substances 0.000 claims description 9
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 claims description 9
- JKLISIRFYWXLQG-UHFFFAOYSA-N Epioleonolsaeure Natural products C1CC(O)C(C)(C)C2CCC3(C)C4(C)CCC5(C(O)=O)CCC(C)(C)CC5C4CCC3C21C JKLISIRFYWXLQG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- YBRJHZPWOMJYKQ-UHFFFAOYSA-N Oleanolic acid Natural products CC1(C)CC2C3=CCC4C5(C)CCC(O)C(C)(C)C5CCC4(C)C3(C)CCC2(C1)C(=O)O YBRJHZPWOMJYKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- MIJYXULNPSFWEK-UHFFFAOYSA-N Oleanolinsaeure Natural products C1CC(O)C(C)(C)C2CCC3(C)C4(C)CCC5(C(O)=O)CCC(C)(C)CC5C4=CCC3C21C MIJYXULNPSFWEK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 8
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 8
- 229940100243 oleanolic acid Drugs 0.000 claims description 8
- HZLWUYJLOIAQFC-UHFFFAOYSA-N prosapogenin PS-A Natural products C12CC(C)(C)CCC2(C(O)=O)CCC(C2(CCC3C4(C)C)C)(C)C1=CCC2C3(C)CCC4OC1OCC(O)C(O)C1O HZLWUYJLOIAQFC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- MIJYXULNPSFWEK-GTOFXWBISA-N 3beta-hydroxyolean-12-en-28-oic acid Chemical compound C1C[C@H](O)C(C)(C)[C@@H]2CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@@]5(C(O)=O)CCC(C)(C)C[C@H]5C4=CC[C@@H]3[C@]21C MIJYXULNPSFWEK-GTOFXWBISA-N 0.000 claims description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 7
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 claims description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 claims description 6
- 235000014466 Douglas bleu Nutrition 0.000 claims description 5
- 235000005386 Pseudotsuga menziesii var menziesii Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 5
- 238000007689 inspection Methods 0.000 claims description 5
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 5
- 239000004575 stone Substances 0.000 claims description 5
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 4
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 claims description 3
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 claims description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 3
- 238000002372 labelling Methods 0.000 claims description 2
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 claims description 2
- PDHAOJSHSJQANO-OWOJBTEDSA-N Oxyresveratrol Chemical compound OC1=CC(O)=CC=C1\C=C\C1=CC(O)=CC(O)=C1 PDHAOJSHSJQANO-OWOJBTEDSA-N 0.000 claims 6
- 240000001416 Pseudotsuga menziesii Species 0.000 claims 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 3
- 241000218231 Moraceae Species 0.000 abstract description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 abstract description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 abstract description 2
- 238000012795 verification Methods 0.000 abstract description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 7
- 241000218683 Pseudotsuga Species 0.000 description 4
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 4
- MUKYLHIZBOASDM-UHFFFAOYSA-N 2-[carbamimidoyl(methyl)amino]acetic acid 2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanoic acid Chemical compound NC(=N)N(C)CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O MUKYLHIZBOASDM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000819233 Tribulus <sea snail> Species 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 229940047183 tribulus Drugs 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 201000000736 Amenorrhea Diseases 0.000 description 1
- 206010001928 Amenorrhoea Diseases 0.000 description 1
- 208000006820 Arthralgia Diseases 0.000 description 1
- 241001633683 Centipeda <firmicute> Species 0.000 description 1
- 206010008909 Chronic Hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 206010017886 Gastroduodenal ulcer Diseases 0.000 description 1
- 206010023126 Jaundice Diseases 0.000 description 1
- 240000003664 Maclura cochinchinensis Species 0.000 description 1
- 208000008469 Peptic Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 208000004880 Polyuria Diseases 0.000 description 1
- 208000025747 Rheumatic disease Diseases 0.000 description 1
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 231100000540 amenorrhea Toxicity 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000035619 diuresis Effects 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 229940124600 folk medicine Drugs 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 231100000029 gastro-duodenal ulcer Toxicity 0.000 description 1
- 241000411851 herbal medicine Species 0.000 description 1
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 231100000535 infertility Toxicity 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000000414 obstructive effect Effects 0.000 description 1
- 125000000955 oleanolic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 210000002997 osteoclast Anatomy 0.000 description 1
- 210000003101 oviduct Anatomy 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 208000008128 pulmonary tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 1
- 238000013441 quality evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000552 rheumatic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 1
- 229940126680 traditional chinese medicines Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
- G01N30/14—Preparation by elimination of some components
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/16—Injection
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
- G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
- G01N30/30—Control of physical parameters of the fluid carrier of temperature
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
- G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
- G01N30/32—Control of physical parameters of the fluid carrier of pressure or speed
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
- G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
- G01N30/34—Control of physical parameters of the fluid carrier of fluid composition, e.g. gradient
-
- G01N30/482—
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
- G01N30/74—Optical detectors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/86—Signal analysis
- G01N30/8675—Evaluation, i.e. decoding of the signal into analytical information
- G01N30/8686—Fingerprinting, e.g. without prior knowledge of the sample components
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/90—Plate chromatography, e.g. thin layer or paper chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/90—Plate chromatography, e.g. thin layer or paper chromatography
- G01N30/94—Development
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
- G01N2030/062—Preparation extracting sample from raw material
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
- G01N2030/065—Preparation using different phases to separate parts of sample
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
- G01N30/12—Preparation by evaporation
- G01N2030/126—Preparation by evaporation evaporating sample
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
- G01N30/14—Preparation by elimination of some components
- G01N2030/146—Preparation by elimination of some components using membranes
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
- G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
- G01N30/30—Control of physical parameters of the fluid carrier of temperature
- G01N2030/3007—Control of physical parameters of the fluid carrier of temperature same temperature for whole column
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
- G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
- G01N30/32—Control of physical parameters of the fluid carrier of pressure or speed
- G01N2030/324—Control of physical parameters of the fluid carrier of pressure or speed speed, flow rate
-
- G01N2030/484—
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Library & Information Science (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明公开了穿破石的质量检测方法，该方法包括以下：步骤1、穿破石供试品溶液的制备；步骤2、混合对照品溶液的制备：步骤3、标准曲线的建立：步骤4、色谱图的测定：步骤5、指纹图谱的建立。本发明根据穿破石中所含的活性成分的结构性质特点，通过大量实验筛选出最佳的流动相组成，梯度洗脱程序、流速，检测波长、色谱柱，柱温等分析条件，经多次实验验证表明,本发明提供的穿破石的含量测定方法与指纹图谱检测方法，可以全面、客观、准确的检测和评价来源为桑科柘属植物柘树的穿破石质量，为保证穿破石疗效具有重要意义。且建立的标准曲线方程，具有方法简便、稳定、精密度高、重现性好等优点。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药的检测方法，具体涉及穿破石的质量检测方法。
背景技术
穿破石属于民间常用药、民族药和草药，出自《岭南采药录》，其来源为桑科柘属植物构棘Cudrania cochinchinensis(Lour.)Kudo et Masam或柘树Cudrania tricuspidata(Carr.)Bur et Lavallee[Maclura tricuspidata carr]的干燥根。穿破石具有祛风通络，利湿，活血通经，解毒消肿，清除湿热等功效，用于治疗风湿关节疼痛，黄疸，闭经，肺结核，胃十二指肠溃疡等，常用于急慢性肝炎的治疗,也用于治疗输卵管阻塞性不孕，糖尿病，抑制破骨细胞分化等研究。其药材标准始收录于《中国药典》1977年版一部，在多个地方标准如《湖南省中药材标准》(2009年版)、《陕西省药材标准》(2015年版)、《贵州省中药、民族药药材标准》(2019年版第一册)等中均有收录，并在多省的《中药饮片炮制规范》中也有收录。虽然穿破石在多个地方标准及省级炮制规范中有收载，但是关于穿破石的含量测定项却没有提及，在文献报道中，关于穿破石的薄层色谱法及含量测定项的相关研究较少。本发明采用高效液相色谱法和薄层色谱法建立穿破石的标志性有效成分的含量测定方法和指纹图谱检测方法，为穿破石的成分鉴别、质量评价以及质量标准的制定具有重要的意义。
发明内容
发明目的：本发明的目的是解决现有技术的不足，提供一种穿破石的标志性有效成分的含量测定方法和指纹图谱检测方法，该检测方法可以客观、全面、准确的评价穿破石的质量，对控制穿破石的质量和保证临床疗效具有重要意义。
技术方案：为了实现上述目的，本发明采取的技术方案为：
一种穿破石的质量检测方法，包括以下步骤：
步骤1，穿破石供试品溶液的制备：
取穿破石粉末，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，称定重量，超声30min，放冷，滤过，滤液蒸干，用甲醇复溶，转移至10mL容量瓶，并用甲醇定容，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；
步骤2，混合对照品溶液的制备：
精密称取对照品白藜芦醇、花旗松素、槲皮素、桑色素、伞形花内酯、柚皮素、山奈酚、齐墩果酸、大黄素、大黄素甲醚、氧化白藜芦醇，加甲醇制得一定浓度的混合对照品溶液；
步骤3，标准曲线的建立：
取步骤2的混合对照品溶液依次稀释5倍，然后取10μL注入高效液相色谱仪，以对照品进样量X(μg)为横坐标，峰面积Y为纵坐标，绘制标准曲线方程；
步骤4，色谱图的测定：
分别精密吸取步骤1供试品溶液和步骤2混合对照品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图；
步骤5，指纹图谱的建立：
将步骤4中获得的穿破石供试品溶液的指纹图谱导出，并导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012A；选择不同批次穿破石的色谱图中均存在的色谱峰作为共有峰；用平均值计算法生成穿破石的对照指纹图谱，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积；并根据混合对照品溶液色谱图的保留时间标注对照指纹图谱中峰的化学成分。
作为优选方案，以上所述的穿破石的质量检测方法，步骤1穿破石供试品溶液制备方法为：精密称定基源为柘树类穿破石不同批次的样品1～5克，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，称定重量，超声30min，放冷，滤过，滤液蒸干，用甲醇复溶，转移至10mL容量瓶，并用甲醇定容，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得基源为柘树类穿破石不同批次的供试品溶液。
作为优选方案，以上所述的穿破石的质量检测方法，步骤2混合对照品溶液的制备：分别精密称取对照品白藜芦醇、花旗松素、槲皮素、桑色素、伞形花内酯、柚皮素、山奈酚、齐墩果酸、大黄素、大黄素甲醚、氧化白藜芦醇，加甲醇制得浓度为0.0622mg/mL、0.2950mg/mL、0.0375mg/mL、0.1540mg/mL、0.1630mg/mL、0.1120mg/mL、0.0303mg/mL、0.0458mg/mL、0.0470mg/mL、1.1635m/mL的混合对照品溶液。
作为优选方案，以上所述的穿破石的质量检测方法，步骤3中，液相色谱条件为：YMC-PackODS-AC18色谱柱，规格为4.6mm×250mm，5μm；流动相为乙腈为A相-0.1％磷酸水为B相，梯度洗脱：0～10min，5％～5％A；10～20min，5％～10％A；20～30min，10％～10％A；30～50min，10％～20％A；50～60min，20％～20％A；60～90min，20％～35％A；90～120min，35％～55％A；120～170min，55％～55％A；170～195min，55％～90％A；195～200min，90％～5％A；200～205min，5％～5％A；；流速1mL/min；柱温30℃；进样量10μL；检测波长230nm、255nm、260nm、280nm。
作为优选方案，以上所述的穿破石的质量检测方法，对照品的标准曲线方程为：
花旗松素：y＝36672x+139866，R＝0.9998，柚皮素：y＝32981x+18734，R＝0.9999，山奈酚：y＝37294x+211.21，R＝0.9999，桑色素：y＝41247x+19904，R＝0.9999，槲皮素：y＝44324x+1387.5，R＝0.9998，大黄素：y＝28020x+2737.9，R＝0.9999，大黄素甲醚：y＝12044x-10397，R＝0.9999，白藜芦醇：y＝42175x+10911，R＝0.9999，伞形花内酯：y＝15544x+13100，R＝0.9999，氧化白藜芦醇：y＝32981x+18734。
作为优选方案，所述的穿破石的质量检测方法，共鉴定18个指纹，保留时间分别为：1号峰28.237min，2号峰43.439min，3号峰53.76min，4号峰54.901min，5号峰73.787min，6号峰115.818min，7号峰121.981min，8号峰140.092min，9号峰153.089min，10号峰175.499min，11号峰185.882min，12号峰57.957min，13号峰88.053min，14号峰91.314min，15号峰80.693min，16号峰148.782min，17号峰46.848min，18号峰70.981min。
作为优选方案，所述的穿破石的质量检测方法，共鉴定18个指纹，其中3号峰为花旗松素，5号峰为桑色素，7号峰为大黄素，11号峰为齐墩果酸，12号峰为氧化白藜芦醇，13号峰为柚皮素，14号峰为山奈酚，15号峰为槲皮素，16号峰为大黄素甲醚，17号峰为伞形花内酯，18号峰为白藜芦醇。
一种穿破石的质量检测方法，还包括薄层色谱法鉴别：
(1)各取基源为柘树类穿破石药材粉末，精密称定，置具塞锥形瓶，精密加入甲醇,超声，放冷，滤过，滤液蒸干，甲醇复溶，转移至容量瓶，甲醇定容，即得基源为柘树类穿破石样品溶液；
(2)精密称取花旗松素、氧化白藜芦醇、桑色素、槲皮素、柚皮素、山奈酚，加甲醇制得混合对照品溶液；
(3)分别吸取步骤(1)基源为柘树类穿破石样品溶液和步骤(2)混合对照品溶液，分别点于同一块硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯检视；
在基源为柘树类穿破石供试品色谱中，具有与对照品花旗松素、氧化白藜芦醇、桑色素、槲皮素、柚皮素、山奈酚，相应的Rf位置上，显相同颜色的荧光斑点；
作为优选方案，以上所述的穿破石的质量检测方法，其特征在于，还包括薄层色谱法鉴别：
(1)各取基源为柘树类穿破石药材粉末，精密称定，置具塞锥形瓶，精密加入甲醇50mL,超声30min，放冷，滤过，滤液蒸干，甲醇复溶，转移至10mL容量瓶，甲醇定容，即得基源为柘树类穿破石类样品溶液；
(2)精密称取花旗松素、氧化白藜芦醇、桑色素、槲皮素、柚皮素、山奈酚加甲醇制得浓度为1.2028mg/mL、1.1733mg/mL、1.2360mg/mL、1.2493mg/mL、1.6435mg/mL、1.0114mg/mL的混合对照品溶液；
(3)分别吸取步骤(1)基源为柘树类穿破石样品溶液和步骤(2)混合对照品溶液各5～10μL，分别点于同一块硅胶G薄层板上，以体积比10：4：1的甲苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯检视；
在基源为柘树类穿破石供试品色谱中，具有与对照品白藜芦醇、桑色素、槲皮素、柚皮素、山奈酚相应的Rf位置上，显相同颜色的荧光斑点。
有益效果：
1、本发明根据穿破石中所含的活性成分的结构性质特点，通过大量实验筛选出最佳的流动相组成，梯度洗脱程序、流速，检测波长、色谱柱，柱温等分析条件，经多次实验验证表明，本发明提供的穿破石指纹图谱检测方法，可以全面、客观、准确的检测和评价基源为柘树类穿破石的质量，为保证穿破石疗效具有重要意义。
2、用本发明所提供的方法所建立的穿破石指纹图谱，能有效地表征穿破石的质量，能客观体现各个构成指纹特征峰的前后顺序和相互关系，注重整体面貌特征，既可避免因测定个别化学成分而判定穿破石质量的片面性，又可减少为质量达标而人为处理的可能性。
附图说明
图1为基源为柘树类穿破石HPLC指纹图谱图。
图2为基源为柘树类穿破石样品4的HPLC色谱图。
图3为基源为柘树类穿破石样品和对照品薄层色谱图。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
以下实施例用到的仪器与试剂如下：
实验器材
1.1仪器
LC-20AT型高效液相色谱仪(SPD-M20A二极管阵列检测器)(日本岛津公司)，XL-10B 500克密封型粉碎机(广州市旭朗机械设备有限公司)，DHG-9140A电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)，Linomat5半自动点样仪，CAMAG TLC-III型薄层扫描仪，KQ5200DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，HH-6数显恒温水浴锅(常州国华电器有限公司)，SX2-4-10A型箱式电阻炉(郑州鑫涵仪器设备有限公司)，SHZ-D(III)循环水式真空泵(巩义市予华仪器有限责任公司)，BP211D型万分之一电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)，FN1004N型十万分之一电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)，硅胶板试剂(200×100mm，G板，青岛海洋化工有限公司)，硅胶板试剂(100×100mm，G板，青岛海洋化工有限公司)。
1.2药物与试剂
氧化白藜芦醇对照品(批号1932，纯度98.1％)均购自上海诗丹德标准服务有限公司；白藜芦醇对照品(批号PS011367，纯度≥98.0％)、大黄素甲醚对照品(批号PS020626，纯度≥98.0％)、花旗松素对照品(批号PS012235，纯度≥98.0％)、大黄素对照品(批号PS010625，纯度≥99.0％)、槲皮素对照品(批号PS012093，纯度≥99.0％)、齐墩果酸对照品(批号PS012022，纯度≥98.5％)、桑色素对照品(批号PS012570，纯度≥98.0％)、伞形花内酯对照品(PS1412-0100，纯度≥98.0％)、柚皮素(批号PS011961，纯度≥98.0％)、山奈酚对照品(批号PS011676，纯度≥98.0％)均购自成都普思生物科技有限公司；乙腈为色谱纯，水为纯化水，其他试剂均为分析纯。穿破石柘树根对照药材(批号660029-201901)均购自中国食品药品检定研究院。所用穿破石样品为来源为市售。
8批次样品信息如下：
实施例1一种穿破石的质量检测方法，包括以下步骤：
步骤1，穿破石供试品溶液的制备：
分别精密称定基源为柘树类穿破石的不同批次的穿破石样品1克，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，称定重量，超声30min，放冷，滤过，滤液蒸干，用甲醇复溶，转移至10mL容量瓶，并用甲醇定容，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得基源为柘树类穿破石不同批次的供试品溶液。
步骤2，混合对照品溶液的制备：
分别精密称取对照品白藜芦醇、花旗松素、槲皮素、桑色素、伞形花内酯、柚皮素、山奈酚、齐墩果酸、大黄素、大黄素甲醚、氧化白藜芦醇，加甲醇制得浓度为0.0622mg/mL、0.2950mg/mL、0.0375mg/mL、0.1540mg/mL、0.1630mg/mL、0.1120mg/mL、0.0303mg/mL、1.2086mg/mL、0.0458mg/mL、0.0470mg/mL、1.1635m/mL的混合对照品溶液；
步骤3，标准曲线的建立：
取步骤2的混合对照品溶液依次稀释5倍，然后取10μL注入高效液相色谱仪，以对照品进样量X(μg)为横坐标，峰面积Y为纵坐标，绘制标准曲线方程：各化合物标准曲线方程为：花旗松素：y＝36672x+139866，R＝0.9998，柚皮素：y＝32981x+18734，R＝0.9999，山奈酚：y＝37294x+211.21，R＝0.9999，桑色素：y＝41247x+19904，R＝0.9999，槲皮素：y＝44324x+1387.5，R＝0.9998，大黄素：y＝28020x+2737.9，R＝0.9999，大黄素甲醚：y＝12044x-10397，R＝0.9999，白藜芦醇：y＝42175x+10911，R＝0.9999，伞形花内酯：y＝15544x+13100，R＝0.9999。氧化白藜芦醇：y＝32981x+18734。
步骤4，色谱图的测定：
分别精密吸取步骤1基源为柘树类穿破石供试品溶液和步骤2混合对照品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图；
液相色谱条件为：YMC-Pack ODS-A C18色谱柱，规格为4.6mm×250mm，5μm；流动相为乙腈为A相-0.1％磷酸水为B相，梯度洗脱：0～10min，5％～5％A；10～20min，5％～10％A；20～30min，10％～10％A；30～50min，10％～20％A；50～60min，20％～20％A；60～90min，20％～35％A；90～120min，35％～55％A；120～170min，55％～55％A；170～195min，55％～90％A；195～200min，90％～5％A；200～205min，5％～5％A；；流速1mL/min；柱温30℃；进样量10μL；检测波长230nm、255nm、260nm、280nm。
步骤5，指纹图谱的建立：
将步骤4中获得的基源为柘树类穿破石供试品溶液的指纹图谱导出，并导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012A；选择不同批次穿破石的色谱图中均存在的色谱峰作为共有峰；用平均值计算法生成穿破石的对照指纹图谱如图1，样品4基源为柘树类穿破石供试品溶液的HPLC图谱见图2，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积。共鉴定18个指纹，保留时间分别为：1号峰28.237min，2号峰43.439min，3号峰53.76min，4号峰54.901min，5号峰73.787min，6号峰115.818min，7号峰121.981min，8号峰140.092min，9号峰153.089min，10号峰175.499min，11号峰185.882min，12号峰57.957min，13号峰88.053min，14号峰91.314min，15号峰80.693min，16号峰148.782min，17号峰46.848min，18号峰70.981min。其中3号峰为花旗松素，5号峰为桑色素，7号峰为大黄素，11号峰为齐墩果酸，12号峰为氧化白藜芦醇，13号峰为柚皮素，14号峰为山奈酚，15号峰为槲皮素，16号峰为大黄素甲醚，17号峰为伞形花内酯，18号峰为白藜芦醇。
并通过计算不同批次的基源为柘树类穿破石(S1样品1，S2样品2，S3样品3，S4样品4，S5样品5，S6样品6，S7样品7，S8样品8)的相似度如下表1。
表1基源为柘树类穿破石指纹图谱相似度
并根据步骤3标准曲线方程计算基源为柘树类穿破石的不同批次样品中有效成分含量，如下表2。
表2基源为柘树类穿破石主要成分含量测定结果(mg/g)
步骤6，薄层色谱法鉴别：
(1)各取基源为柘树类穿破石药材粉末，精密称定，置具塞锥形瓶，精密加入甲醇50mL,超声30min，放冷，滤过，滤液蒸干，甲醇复溶，转移至10mL容量瓶，甲醇定容，即得基源为柘树类穿破石样品溶液；
(2)精密称取花旗松素、白藜芦醇、桑色素、槲皮素、柚皮素、山奈酚加甲醇制得浓度为1.2028mg/mL、1.1733mg/mL、1.2360mg/mL、1.2493mg/mL、1.6435mg/mL、1.0114mg/mL的混合对照品溶液；
(3)分别吸取步骤(1)基源为柘树类穿破石样品溶液和步骤(2)混合对照品溶液各5～10μL，分别点于同一块硅胶G薄层板上，以体积比10：4：1的甲苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯检视；
在基源为柘树类穿破石供试品色谱中，具有与对照品花旗松素、氧化白藜芦醇、桑色素、槲皮素、柚皮素、山奈酚，相应的Rf位置上，显相同颜色的荧光斑点；薄层色谱图见图3。图3中基源为柘树类穿破石样品，C1-样品4，C2-样品8，C3-样品1，C4-样品6，C5-样品17，C6-样品20，C7-样品10，C8-样品19，C9-穿破石对照药材(柘树根)；D1花旗松素，D2桑色素，D3柚皮素，D4山奈酚，D5槲皮素，D6氧化白藜芦醇。
实施例2指纹图谱检测的方法学研究
1、方法学考察
1、精密度试验
取4号样品，按按实施例1方法制备供试品溶液，按实施例1色谱条件连续进样6次，计算样4中各待测成分的保留时间和峰面积的RSD值，考察仪器的精密度。结果显示样品4中各待测成分的保留时间RSD值均小于1.5％，峰面积RSD值均小于3.0％。表明仪器的精密度良好。
2、重复性试验
分别取4号样品各6份，各约1g，精密称定，按实施例1方法制备供试品溶液，按实施例1下色谱条件依次进样测定，计算样品4中各待测成分含量的保留时间和含量的RSD值，考察方法的重复性。结果显示样品4中各待测成分的保留时间RSD值均小于1.5％，计算的含量的RSD值均小于3.0％，表明该方法的重复性良好。
3、稳定性试验
取4号样品，按实施例1方法制备供试品溶液，分别于制样后0，4，8，16，24h时按实施例1下色谱条件依次进样测定，计算样品4中各待测成分的保留时间和峰面积的RSD值，考察样品的稳定性。结果显示样品4中各待测成分的保留时间RSD值均小于1.5％，峰面积RSD值均小于3.0％。表明供试品溶液在制备24h内稳定。
4、加样回收率试验
分别取已知含量的样品粉末4号各3份，按其待测成分含量分别添加80％、100％、120％的混合对照品，按实施例1下色谱条件下进样，每份平行进样3针，计算样品4供试品中待测成分的平均加样回收率和RSD值，具体见表3。结果平均加样回收率在95％-105％之间，RSD值小于3％，表明准确性良好。
表3
以上实验结果表明，本发明提供的穿破石指纹图谱检测方法，稳定性好，精密度高，重复性好，能全面客观评价穿破石的质量，为保证临床疗效具有重要的意义。
以上实施例仅为本发明的示例性实施例，不用于限制本发明，本发明的保护范围由权利要求书限定。本领域技术人员可以在本发明的实质和保护范围内，对本发明做出各种修改或等同替换，这种修改或等同替换也应视为落在本发明的保护范围内。
Claims (6)
1.一种穿破石的质量检测方法，其特征在于，它包括指纹图谱检测和薄层色谱法鉴别；
所述的指纹图谱检测包括以下步骤：
步骤1、穿破石供试品溶液的制备：
取穿破石粉末，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，称定重量，超声30min，放冷，滤过，滤液蒸干，用甲醇复溶，转移至10mL容量瓶，并用甲醇定容，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；
步骤2、混合对照品溶液的制备：
精密称取对照品白藜芦醇、花旗松素、槲皮素、桑色素、伞形花内酯、柚皮素、山奈酚、齐墩果酸、大黄素、大黄素甲醚、氧化白藜芦醇，加甲醇制得一定浓度的混合对照品溶液；
步骤3、标准曲线的建立：
取步骤2的混合对照品溶液依次稀释5倍，然后取10μL注入高效液相色谱仪，以对照品进样量Xμg为横坐标，峰面积Y为纵坐标，绘制标准曲线方程；
步骤4、色谱图的测定：
分别精密吸取步骤1供试品溶液和步骤2混合对照品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图；
步骤5、指纹图谱的建立：
将步骤4中获得的穿破石供试品溶液的液相色谱图谱导出，并导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012A；选择不同批次穿破石的色谱图中均存在的色谱峰作为共有峰；用平均值计算法生成穿破石的对照指纹图谱，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积；并根据混合对照品溶液色谱图的保留时间标注对照指纹图谱中峰的化学成分；
所述的步骤3中，液相色谱条件为：YMC-Pack ODS-A C18色谱柱，规格为4.6mm×250mm，5μm；流动相为乙腈为A相-0.1％磷酸水为B相，梯度洗脱：0～10min，5％～5％A；10～20min，5％～10％A；20～30min，10％～10％A；30～50min，10％～20％A；50～60min，20％～20％A；60～90min，20％～35％A；90～120min，35％～55％A；120～170min，55％～55％A；170～195min，55％～90％A；195～200min，90％～5％A；200～205min，5％～5％A；流速1mL/min；柱温30℃；进样量10μL；检测波长230nm、255nm、260nm、280nm；
所述的薄层色谱法鉴别包括以下步骤：
(1)各取基源为柘树类穿破石药材粉末，精密称定，置具塞锥形瓶，精密加入甲醇50mL,超声30min，放冷，滤过，滤液蒸干，甲醇复溶，转移至10mL容量瓶，甲醇定容，即得基源为柘树类穿破石样品溶液；
(2)精密称取花旗松素、氧化白藜芦醇、桑色素、槲皮素、柚皮素、山奈酚加甲醇制得浓度为1.2028mg/mL、1.1733mg/mL、1.2360mg/mL、1.2493mg/mL、1.6435mg/mL、1.0114mg/mL的混合对照品溶液；
(3)分别吸取步骤(1)基源为柘树类穿破石样品溶液和步骤(2)混合对照品溶液各5～10μL，分别点于同一块硅胶G薄层板上，以体积比10：4：1的甲苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯检视；
在基源为柘树类穿破石供试品色谱中，具有与对照品花旗松素、氧化白藜芦醇、桑色素、槲皮素、柚皮素、山奈酚相应的Rf位置上，显相同颜色的荧光斑点。
2.根据权利要求1所述的穿破石的质量检测方法，其特征在于，步骤1穿破石供试品溶液制备方法为：精密称定基源为柘树类穿破石不同批次的样品1～5克，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，称定重量，超声30min，放冷，滤过，滤液蒸干，用甲醇复溶，转移至10mL容量瓶，并用甲醇定容，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得基源为柘树类穿破石不同批次的供试品溶液。
3.根据权利要求1所述的穿破石的质量检测方法，其特征在于，步骤2混合对照品溶液的制备：分别精密称取对照品白藜芦醇、花旗松素、槲皮素、桑色素、伞形花内酯、柚皮素、山奈酚、大黄素、大黄素甲醚、氧化白藜芦醇，加甲醇制得浓度为0.0622mg/mL、0.2950mg/mL、0.0375mg/mL、0.1540mg/mL、0.1630mg/mL、0.1120mg/mL、0.0303mg/mL、0.0458mg/mL、0.0470mg/mL、1.1635m/mL的混合对照品溶液。
4.根据权利要求1至3任一项所述的穿破石的质量检测方法，其特征在于，对照品的标准曲线方程为：
花旗松素：y＝36672x+139866，R＝0.9998，柚皮素：y＝32981x+18734，R＝0.9999，山奈酚：y＝37294x+211.21，R＝0.9999，桑色素：y＝41247x+19904，R＝0.9999，槲皮素：y＝44324x+1387.5，R＝0.9998，大黄素：y＝28020x+2737.9，R＝0.9999，大黄素甲醚：y＝12044x-10397，R＝0.9999，白藜芦醇：y＝42175x+10911，R＝0.9999，伞形花内酯：y＝15544x+13100，R＝0.9999、氧化白藜芦醇：y＝32981x+18734。
5.根据权利要求1所述的穿破石的质量检测方法，其特征在于，共鉴定18个指纹，保留时间分别为：1号峰28.237min，2号峰43.439min，3号峰53.76min，4号峰54.901min，5号峰73.787min，6号峰115.818min，7号峰121.981min，8号峰140.092min，9号峰153.089min，10号峰175.499min，11号峰185.882min，12号峰57.957min，13号峰88.053min，14号峰91.314min，15号峰80.693min，16号峰148.782min，17号峰46.848min，18号峰70.981min。
6.根据权利要求1所述的穿破石的质量检测方法，其特征在于，共鉴定18个指纹，3号峰为花旗松素，5号峰为桑色素，7号峰为大黄素，11号峰为齐墩果酸，12号峰为氧化白藜芦醇，13号峰为柚皮素，14号峰为山奈酚，15号峰为槲皮素，16号峰为大黄素甲醚，17号峰为伞形花内酯，18号峰为白藜芦醇。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111008764.1A CN113791147B (zh) | 2021-08-31 | 2021-08-31 | 穿破石的质量检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111008764.1A CN113791147B (zh) | 2021-08-31 | 2021-08-31 | 穿破石的质量检测方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113791147A CN113791147A (zh) | 2021-12-14 |
| CN113791147B true CN113791147B (zh) | 2023-08-25 |
Family
ID=79182461
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202111008764.1A Active CN113791147B (zh) | 2021-08-31 | 2021-08-31 | 穿破石的质量检测方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN113791147B (zh) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1726962A (zh) * | 2005-07-27 | 2006-02-01 | 濮桂宝 | 一种柘木及其制剂的质量控制方法 |
| CN101239117A (zh) * | 2008-01-10 | 2008-08-13 | 王雨良 | 一种治疗妇科疾病的中药制剂的质量控制方法 |
| CN102707006A (zh) * | 2012-05-30 | 2012-10-03 | 涂瑶生 | 穿破石配方颗粒的质量检测方法 |
| KR20150062299A (ko) * | 2013-11-29 | 2015-06-08 | 재단법인 전남생물산업진흥원 | 초임계 추출을 이용한 식물 유래 β-시토스테롤의 분리방법 |
| KR101673302B1 (ko) * | 2015-12-18 | 2016-11-08 | 건국대학교 산학협력단 | 질량 분석법을 이용한 꾸지뽕의 재배 시기 판별 방법 및 그 조성물 |
-
2021
- 2021-08-31 CN CN202111008764.1A patent/CN113791147B/zh active Active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1726962A (zh) * | 2005-07-27 | 2006-02-01 | 濮桂宝 | 一种柘木及其制剂的质量控制方法 |
| CN101239117A (zh) * | 2008-01-10 | 2008-08-13 | 王雨良 | 一种治疗妇科疾病的中药制剂的质量控制方法 |
| CN102707006A (zh) * | 2012-05-30 | 2012-10-03 | 涂瑶生 | 穿破石配方颗粒的质量检测方法 |
| KR20150062299A (ko) * | 2013-11-29 | 2015-06-08 | 재단법인 전남생물산업진흥원 | 초임계 추출을 이용한 식물 유래 β-시토스테롤의 분리방법 |
| KR101673302B1 (ko) * | 2015-12-18 | 2016-11-08 | 건국대학교 산학협력단 | 질량 분석법을 이용한 꾸지뽕의 재배 시기 판별 방법 및 그 조성물 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 李正言等.拓木药材HPLC指纹图谱研究.《中药材》.2009,第32卷(第32期),1830-1833. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN113791147A (zh) | 2021-12-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN112730674B (zh) | 一种罗汉茶的质量检测方法 | |
| CN112578066B (zh) | 一种紫菀样品的质量评价方法 | |
| CN116183805B (zh) | 一种桑菊感冒颗粒成分的检测和评价方法 | |
| CN112014480B (zh) | 一种uplc-ms/ms检测降脂宁颗粒中有效成分含量的方法 | |
| CN116879424A (zh) | 生血宝制剂中特女贞苷含量测定方法 | |
| CN111855867B (zh) | 一种中药或中药组合物制剂的特征图谱建立方法与应用 | |
| CN115728409B (zh) | 一种夏桑菊颗粒定性和定量检测方法 | |
| CN113791147B (zh) | 穿破石的质量检测方法 | |
| CN114994220B (zh) | 一种七清败毒颗粒的指纹图谱的构建方法和其成分含量的测定方法及应用 | |
| CN114674947B (zh) | 一种快速全面控制半夏厚朴汤标准汤剂质量的检测方法 | |
| CN115356420A (zh) | 一种基于一测多评的蒲地蓝消炎片质量评价方法 | |
| CN115144507A (zh) | 桑仁清肺口服液中活性成分的同时测定方法 | |
| CN113759011B (zh) | 一种银柴胡及其制剂特征图谱的建立方法 | |
| CN111351883B (zh) | 一种槐芩软膏中芦丁的含量测定方法 | |
| CN110031577B (zh) | 一种中药或中药组合物制剂的质量检测方法与鉴别应用 | |
| CN114487240B (zh) | 茜草炭及其制剂的特征图谱及其构建方法和含量测定方法 | |
| CN110196301B (zh) | 一种蟾酥中多种化学成分的含量测定方法 | |
| CN115343388B (zh) | 一种利用一测多评法评价槐花颗粒质量的方法 | |
| CN114577970B (zh) | 一种血平片指纹图谱的建立方法及其指纹图谱 | |
| CN111830150B (zh) | 一测多评法测定新塔花中黄酮类成分含量的方法及其应用 | |
| CN110068640B (zh) | 基于hplc指纹图谱的蒙药紫檀香心药材质量检测方法 | |
| CN114689710B (zh) | 一种枇杷清肺饮提取物多成分质量检测方法 | |
| CN115015418B (zh) | 一种矮地茶汤剂质量检测方法 | |
| CN115420827B (zh) | 一种全面控制叶下珠质量的检测方法 | |
| CN115389654B (zh) | 一种鹅不食草的药物制剂的指纹图谱的构建方法及含量测试方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |