CN115343388B - 一种利用一测多评法评价槐花颗粒质量的方法 - Google Patents

一种利用一测多评法评价槐花颗粒质量的方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于中成药化学分析检测领域，具体公开了一种利用一测多评法评价槐花颗粒质量的方法。具体包括如下的步骤：a.制备供试品溶液；b.制备混合对照品溶液；c.色谱峰测定：将上述步骤a所制得的供试品溶液注入高效液相色谱仪，按照规定的色谱条件，测定供试液溶液，得到槐花颗粒中各自特征峰的保留时间；所述色谱条件为：色谱柱以十八烷基键合硅胶柱为填充剂，规格为4.6mm×250mm，5μm；流动相A为乙腈,流动相B为0.5％的磷酸溶液；梯度洗脱程序为：0～20min，10％～19％乙腈；20～30min，19％～20％乙腈；30～50min，20％～21％乙腈；50～85min，21％～60％乙腈，85～95min，10％乙腈；体积流量为0.8～1.2ml/min，检测波长为325～345nm，柱温为20～35℃，进样量为5～15μl；d.进行方法学考察试验。

Description

一种利用一测多评法评价槐花颗粒质量的方法
技术领域
本发明属于中成药化学分析检测领域，具体涉及一种利用一测多评法评价槐花颗粒质量的方法。
背景技术
槐花颗粒(粤药制备字Z20200038000)为广东省中山市中医院的院内制剂，处方由槐花、野菊花、甘草三味中药组成，主要含有绿原酸、芦丁、甘草苷、木犀草苷、蒙花苷、槲皮素、木犀草素等7种有效成分。本品具有凉血止血，清肝泻火之功效，主要用于治疗便血，痔血，血痢，崩漏，吐血，肝热目赤，头痛，眩晕等，在广东省中山市中医院临床上使用30余年，具显著的临床疗效，深受广大市民的青睐。
中药中有药理活性的化学成分众多，因而中药具有多成分共同作用的特点，这就使得仅仅通过测定其中单一有效成分的含量，难以全面反映中药产品的质量。因此，中药的多指标含量测定进行中药质量检测控制，已成为众多专家学者的共识。传统的多指标同步质量控制需要多种中药对照品，分离难度大，货源紧缺、价格高昂。
目前尚未发现有关制剂槐花颗粒质量控制方面的文献报道，现有槐花颗粒质量标准除一般颗粒剂的基础检测项目之外，并无含量测定这一项目，难以全面反映和控制产品的质量。因此，发明一种简便、高效、准确、成本低的质量检测方法能同时定性和定量测定槐花颗粒中多个有效组分尤为重要。
发明内容
本发明的目的是提供一种利用一测多评法评价槐花颗粒质量的方法，能同时测定槐花颗粒中7种有效成分含量，实现全面评价槐花颗粒质量。
本发明所述的槐花颗粒(粤药制备字Z20200038000)为广东省中山市中医院的院内制剂，其具体的处方由5～16份槐花、5～20份野菊花、1～8份甘草制备而成。
本发明提供的一种利用一测多评法评价槐花颗粒质量的方法，具体包括如下的步骤：
a.制备供试品溶液：称取槐花颗粒，以乙醇为提取溶剂，固液比为1:15～25，水浴加热提取3～6h，待提取液冷却至室温，过滤，将滤液水浴蒸干，残渣加甲醇溶解，定容，离心，取上清液加甲醇定容即可；
b.制备混合对照品溶液：精密称取绿原酸、芦丁、甘草苷、木犀草苷、蒙花苷、槲皮素、木犀草素对照品适量，加甲醇溶解并定容，配置混合对照品溶液；
c.色谱峰测定：将上述步骤a所制得的供试品溶液注入高效液相色谱仪，按照预设的色谱条件，测定供试液溶液，得到槐花颗粒中各自特征峰的保留时间；
所述色谱条件为：色谱柱以十八烷基键合硅胶柱为填充剂，规格为4.6mm×250mm，5μm；流动相A为乙腈,流动相B为0.5％的磷酸溶液；梯度洗脱程序为：0～20min，10％～19％乙腈；20～30min，19％～20％乙腈；30～50min，20％～21％乙腈；50～85min，21％～60％乙腈，85～95min，10％乙腈；体积流量为0.8～1.2ml/min，检测波长为325～345nm，柱温为20～35℃，进样量为5～15μl；
d.进行方法学考察试验。
本发明所述步骤a制备供试品溶液中，乙醇的浓度为70％，槐花颗粒与乙醇的固液比为1:20；所述所述水浴加热提取为索氏提取，水浴的温度为80℃，水浴提取时间为4h。
本发明所述步骤b的混合对照品溶液中，绿原酸的浓度为0.0205～0.0215mg/ml、芦丁的浓度为0.4490～0.4505mg/ml、甘草苷的浓度为0.2015～0.2110mg/ml、木犀草苷的浓度为0.0195～0.0210mg/ml、蒙花苷的浓度为0.0920～0.0930mg/ml、槲皮素的浓度为0.2120～0.2135mg/ml、木犀草素的浓度为0.0740～0.0760mg/ml。
进一步地，优选所述混合对照品溶液中绿原酸浓度为0.0210mg/ml、芦丁浓度为0.4500mg/ml、甘草苷浓度为0.2100mg/ml、木犀草苷浓度为0.0200mg/ml、蒙花苷浓度为0.0925mg/ml、槲皮素浓度为0.2125mg/ml、木犀草素浓度为0.0750mg/ml。
本发明所述步骤c中色谱柱的型号为Merck Purospher STARRP-18 endcapped、Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18、Agilent ZORBAXE RX-C18、Agilent ZORBAXE SB-C18中的任意一种。进一步地，优选色谱柱的型号为Agilent ZORBAX EclipseXDB-C18(美国安捷伦科技有限公司)。
本发明所述步骤c的色谱条件中，优选体积流量为1.0ml/min，检测波长为334nm，柱温为25℃，进样量为5μl。
本发明所述d步骤中方法学考察试验包括专属性考察、线性关系考察、精密性试验、重复性试验、稳定性试验、加样回收率试验。
本发明中，所述专属性考察的步骤为：按槐花颗粒制剂的配制工艺分别制成缺少槐花的槐花阴性颗粒、缺野菊花的野菊花阴性颗粒、缺甘草的甘草阴性颗粒，然后按步骤a的提取方法，分别提取出甘草阴性样品、槐花阴性样品、野菊花阴性样品，并按照步骤c所述的色谱条件分别对其进行色谱测定。
本发明，所述专属性考察(即阴性溶液对比试验)，色谱峰的分布情况可以直观的看到槐花阴性颗粒、野菊花阴性颗粒、甘草阴性颗粒中所检测到的槐花颗粒中7个有效成分的来源，考察中，各处方组分间无互相干扰的情况；说明在测定条件下，制剂中其他药材对测定无干扰，专属性强。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
本发明建立了槐花颗粒中7种有效成分绿原酸、芦丁、甘草苷、木犀草苷、蒙花苷、木犀草素、槲皮素一测多评的方法，其重现性、线性关系、稳定性等均达到科研和生产检验的要求；另外此发明方法不仅能有效简化操作步骤，而且大大缩减成本和测定时间，极大程度提高了检测效率，实现全面评价槐花颗粒质量以及为其提供了低成本、新颖、高效的多指标同步质量控制的新方法。
附图说明
图1为槐花颗粒供试品溶液的液相色谱图；
图2为混合对照品溶液的液相色谱图；
图3为专属性考察中阴性溶液的液相色谱图；
其中，图3a-野菊花阴性样品溶液的液相色谱图，图3b-槐花阴性样品溶液的液相色谱图，图3c-甘草阴性样品溶液的液相色谱图；
图4为对比例1色谱条件下槐花颗粒供试品溶液液相色谱图；
图5为对比例2色谱条件下槐花颗粒供试品溶液液相色谱图；
图6为对比例3色谱条件下槐花颗粒供试品溶液液相色谱图。
其中图1-6中：1-绿原酸，2-芦丁，3-甘草苷，4-木犀草苷，5-蒙花苷，6-木犀草素，7-槲皮素。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但并不局限于此。
实施例
本发明供试品槐花颗粒(粤药制备字Z20200038000)为广东省中山市中医院的院内制剂，其具体的处方由5～16份槐花、5～20份野菊花、1～8份甘草制备而成。
1.仪器试剂等
1.1仪器
Agilent1260高效液相色谱仪(美国安捷伦科技有限公司)、Waterse2695高效液相色谱仪(沃特世科技(上海)有限公司)、色谱柱Agilent ZORBAX EclipseXDB-C18(4.6mm×250mm，5μm，美国安捷伦科技有限公司)、色谱柱Agilent ZORBAX RX-C18(4.6mm×250mm，5μm，美国安捷伦科技有限公司)、色谱柱Agilent ZORBAX SB-C18(4.6mm×250mm，5μm，美国安捷伦科技有限公司)、色谱柱Merck Purospher STARRP-18 endcapped(4.6mm×250mm，5μm，德国默克公司)、医用离心机2-16R(湖南恒诺仪器设备有限公司)、Sartorius天平(型号：SQP，赛多利斯科学仪器(北京)有限公司)。
1.2试剂和药品
对照品：绿原酸(批号110753-202018)、芦丁(批号100080-201811)、甘草苷(批号111610-201908)、木犀草苷(批号111720-201810)、蒙花苷(批号111528-201911)、木犀草素(111520-202006)、槲皮素(批号100081-201610)，均购于中国药品生物制品检定所。
色谱纯：乙腈，甲醇；
分析纯：70％乙醇，95％乙醇，甲醇；超纯水自制；
槐花颗粒(批号20001、批号20002、批号20003、批号20004、批号21001、批号21002，广东省中山市中医院制剂室提供)。
2.实验步骤
2.1索氏提取法制备供试品溶液
取同一批号的槐花颗粒5g，再以70％乙醇为提取溶剂，固液比1:20，再以80℃水浴加热索氏提取4h，提取完成后待提取液冷却后，将提取液过滤，除去提取液中可能含有的药材粉末，分批将滤液置于同一蒸发皿中水浴蒸干，残渣加甲醇溶解，转移到棕色容量瓶中并定容至50ml，取定容后的试液少许，以13500r/min离心15分钟，取上清液1ml置10ml棕色容量瓶中，加甲醇定容即得供试品溶液，用封口膜封口并避光保存。
2.2制备混合对照品溶液
分别精密称取绿原酸、芦丁、甘草苷、木犀草苷、蒙花苷、槲皮素、木犀草素对照品适量，加甲醇溶解并定容至50ml，分别制成含绿原酸的浓度为0.0210mg/ml、芦丁的浓度为0.4500mg/ml、甘草苷的浓度为0.2100mg/ml、木犀草苷的浓度为0.0200mg/ml、蒙花苷的浓度为0.0925mg/ml、槲皮素的浓度为0.2125mg/ml、木犀草素的浓度为0.0750mg/ml的混合对照品储备液，用封口膜封口并避光保存。
2.3色谱峰测定
将上述“2.1”项所制得的供试品溶液注入高效液相色谱仪，按照以下色谱条件，测定供试液溶液，得到槐花颗粒中各自特征峰的保留时间；
所述色谱条件如下：
色谱柱为Agilent ZORBAX EclipseXDB-C18(4.6mm×250mm，5μm，美国安捷伦科技有限公司)；
流动相A为乙腈,流动相B为0.5％的磷酸溶液；
梯度洗脱：见表1：
表1梯度洗脱程序
时间/min 乙腈(A％) 0.5％磷酸溶液(B％)
0 10 90
20 19 81
30 20 80
50 21 79
85 60 40
95 10 90
体积流量：1.0ml/min；
检测波长：334nm；
柱温：20～35℃；
进样量：5μl。
如图1和图2所示，在上述色谱条件下，供试品溶液和混合对照品溶液中绿原酸、芦丁、甘草苷、木犀草苷、蒙花苷、槲皮素、木犀草素分离良好，且芦丁峰的理论塔板数不低于3000。
2.4方法学考察试验
2.4.1专属性考察
制备阴性溶液：取槐花、野菊花、甘草按槐花颗粒制剂的配制工艺分别制成缺少槐花的槐花阴性颗粒、缺野菊花的野菊花阴性颗粒、缺甘草的甘草阴性颗粒。然后按上述“2.1”项的提取方法，分别提取出甘草阴性样品、槐花阴性样品、野菊花阴性样品。并按照上述“2.3”项所述的色谱条件分别对其进行色谱测定。
如图3所示，在上述“2.3”项所述的色谱条件下，甘草阴性样品、槐花阴性样品、野菊花阴性样品，各处方组分间无互相干扰的情况。说明，在测定条件下，制剂中其他药材对测定无干扰，专属性强。
2.4.2线性关系考察
分别精密吸取“2.2”项下混合对照品储备液各1.0、2.0、4.0、6.0、8.0ml于10ml量瓶中，用甲醇稀释并定容，制得系列混合对照品溶液。将各混合对照品溶液及混合对照品储备液，在“2.3”项下测定其峰面积，各混合对照与峰面积呈良好线性关系。另以混合对照品浓度为横坐标(Xμg/ml)，测得的峰面积为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，得回归方程及相关系数r2，结果r2均大于0.999，与峰面积呈良好线性关系，结果见表2。
表2槐花颗粒中7种成分回归方程、线性范围(μg/ml)
2.4.3精密性试验
取“2.2”项下混合对照品溶液，按“2.3”项下条件连续进样6次，记录其峰面积，结果显示绿原酸、芦丁、甘草苷、木犀草苷、蒙花苷、木犀草素、槲皮素峰面积RSD依次为1.03％、0.99％、1.03％、1.03％、1.03％、1.02％、1.03％，表明进样精密度良好。
2.4.4重复性试验
取同一批(批号20004)供试品6份，按“2.1”项下方法平行制备供试品溶液6份，按“2.3”项下色谱条件依次进行测定，计算出绿原酸、芦丁、甘草苷、木犀草苷、蒙花苷、木犀草素、槲皮素的浓度分别为7.8μg/mL、329.5μg/mL、71.2μg/mL、6.9μg/mL、41.1μg/mL、6.4μg/mL、47.1μg/mL。RSD(％)分别为1.00％、1.03％、1.02％、1.03％、1.00％、1.02％、1.00％，表明方法重复性良好。
2.4.5稳定性试验
取同一供试品(批号20004)，按“2.1”项下方法制备供试品溶液，室温下放置，分别在0、4、8、12、16、20、24h测定，记录峰面积，结果绿原酸、芦丁、甘草苷、木犀草苷、蒙花苷、木犀草素、槲皮素的峰面积的RSD(％)依次为1.03％、1.03％、1.04％、1.04％、1.00％、1.01％、1.04％，表明供试品溶液在24h内稳定性良好。
2.4.6加样回收率试验
分别精密称取绿原酸、芦丁、甘草苷、木犀草苷、蒙花苷、槲皮素、木犀草素对照品适量，加甲醇溶解并定容至10ml，制成质量浓度分别为1.9500mg/ml、65.0160mg/ml、15.0800mg/ml、1.7400mg/ml、9.5000mg/ml、1.5060mg/ml、10.5000mg/ml的混合对照品溶液，精密称定9份已测定的槐花颗粒样品(批号20004)2.4g，分为三组，每组平行制备3份，一组加0.8ml混合对照品、二组加1.0ml混合对照品、三组加1.2ml混合对照品，按“2.1”项下方法制备供试品溶液，按“2.3”项下色谱条件进行测定，分别计算绿原酸、芦丁、甘草苷、木犀草苷、蒙花苷、木犀草素、槲皮素的平均回收率，各成分平均回收率分别为98.89％、98.69％、98.49％、98.11％、98.21％、98.33％、98.30％，RSD(％)依次为1.53％、0.98％、0.69％、0.88％、1.37％、0.62％、0.81％，表明该方法的准确性良好。
2.5QAMS法
2.5.1相对校正因子的测定
取“2.4.2”项数据，以芦丁为内参物(S)，按公式fS/I＝fS/fI＝(AS×CI)/(AI×CS)，AI、CI分别为待测成分对照品的峰面积和质量浓度，AS、CS分别代表内参物的峰面积和质量浓度。计算绿原酸、甘草苷、木犀草苷、蒙花苷、木犀草素、槲皮素的相对校正因子fS/A、fS/B、fS/C、fS/D、fS/E、fS/F的RSD(％)分别是依次为1.73％、2.71％、2.45％、2.26％、2.53％、1.64％，结果见表3。
表3以芦丁为内参物的fS/测定结果
2.5.2相对校正因子重现性考察
(1)不同仪器对f的影响
以芦丁为内参物(S)，试验考察了2种高效液相色谱系统agilent1260高效液相色谱和Waterse2695高效液相色谱仪对槐花颗粒中6种有效成分绿原酸、甘草苷、木犀草苷、蒙花苷、木犀草素、槲皮素的相对校正因子fS/A、fS/B、fS/C、fS/D、fS/E、fS/F的影响，结果见表4。
表4不同仪器对fS/I的影响
结果显示RSD(％)依次1.47％、1.19％、1.26％、0.65％、1.38％、0.73％，表明不同仪器对各成分的的f并无显著性差异。
(2)不同色谱柱对f的影响
以芦丁为内参物(S)，试验考察了4种色谱柱Merck Purospher STARRP-18endcapped、Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18、Agilent ZORBAX RX-C18、AgilentZORBAX SB-C18对槐花颗粒中其它6种有效成分绿原酸、甘草苷、木犀草苷、蒙花苷、木犀草素、槲皮素的相对校正因子fS/A、fS/B、fS/C、fS/D、fS/E、fS/F的影响，结果见表5。
表5不同色谱柱对fS/I的影响
结果显示RSD(％)依次为1.00％、1.61％、1.99％、0.79％、1.94％、0.42％，表明色谱柱对各成分的的f并无显著性差异。
(3)不同柱温对f的影响
以芦丁为内参物(S)，试验考察了4种不同柱温(20℃、25℃、30℃、35℃)对槐花颗粒中6种有效成分绿原酸、甘草苷、木犀草苷、蒙花苷、木犀草素、槲皮素的相对校正因子fS/A、fS/B、fS/C、fS/D、fS/E、fS/F的影响,结果见表6。
表6不同柱温对fS/I的影响
结果显示RSD(％)依次为0.88％、0.77％、1.20％、0.39％、1.16％、0.66％，结果见表6，表明柱温对各成分的的f并无显著性差异。
(4)不同操作人员对f的影响
以芦丁为内参物(S)，试验考察了3名试验人员对槐花颗粒中6种有效成分绿原酸、甘草苷、木犀草苷、蒙花苷、木犀草素、槲皮素的相对校正因子fS/A、fS/B、fS/C、fS/D、fS/E、fS/F的影响，结果见表7。
表7不同试验人员对fS/I的影响
结果显示RSD(％)依次为0.50％、0.63％、0.98％、0.39％、1.18％、0.23％，表明不同试验人员对各成分的的f并无显著性差异。
(5)不同流速对f的影响
以芦丁为内参物(S)，试验考察了3种流速(0.8ml/min、1ml/min、1.2ml/min)对槐花颗粒中6种有效成分绿原酸、甘草苷、木犀草苷、蒙花苷、木犀草素、槲皮素的相对校正因子fS/A、fS/B、fS/C、fS/D、fS/E、fS/F的影响，结果见表8。
表8不同流速对fS/I的影响
结果显示RSD(％)依次为0.80％、1.39％、0.92％、0.39％、1.21％、0.33％，表明不同流速对各成分的的f并无显著性差异。
2.6色谱峰定位参数考察
利用相对保留时间(rI/S)进行峰定位，r(I/S)＝tR(I)/tR(S)(I为待测成分，S为内参物)，测得绿原酸、芦丁、甘草苷、木犀草苷、蒙花苷、木犀草素、槲皮素的相对保留时间r(I/S)的结果，见表9。
表9不同仪器和色谱柱测得的rI/S
不同色谱条件所的到相对保留值变动较小，rA/S、rB/S、rC/S、rD/S、rE/S、rF/S的RSD(％)＜5％，表明采用r(I/S)对绿原酸、芦丁、甘草苷、木犀草苷、蒙花苷、木犀草素、槲皮素进行峰的定位良好。
2.7QAMS法外标法测定结果的比较
取6批次的样品，按“2.1”项的方法制备供试品溶液，并按“2.3”项的色谱条件下进样，记录峰面积，分别采用外标法(ESM)和一测多评法(QAMS)计算各批次样品中绿原酸、芦丁、甘草苷、木犀草苷、蒙花苷、木犀草素、槲皮素含量，并采用T检验对结果进行比较分析，结果见表10。
表10QAMS法与外标法测定结果
结果显示，两组数据的方差无显著性差异(P＞0.05)，表明该两种方法计算的含量无显著性差异，说明一测多评法(QAMS)用于槐花颗粒的多成分质量评价研究是可行的。
对比例
下面以不同的色谱条件对本实施例中“2.1”项制得的槐花颗粒的供试品进行则是分析，具体如下。
对比例1
色谱柱：Agilent ZORBAX EclipseXDB-C18(4.6mm×250mm，5μm，美国安捷伦科技有限公司)；
流动相：乙腈-1％冰醋酸溶液；
梯度洗脱：见表11；
表11梯度洗脱程序
时间/min 乙腈(A％) 1％冰醋酸(B％)
0 10 90
20 16 84
45 25 75
75 65 35
85 10 90
体积流量：1.0ml/min；
检测波长：334nm；
柱温：25℃；
进样量：5μl。
结果木犀草素和槲皮素均未被洗脱出峰，且前面已出峰成分，各色谱峰之间并没达到有效分离，且成分峰中也受其他杂志峰干扰，峰形欠佳。见图4。
对比例2
色谱柱：Agilent ZORBAX EclipseXDB-C18(4.6mm×250mm，5μm，美国安捷伦科技有限公司)；
流动相：乙腈-0.5％磷酸溶液；
梯度洗脱：见表12；
表12梯度洗脱程序
时间/min 乙腈(A％) 0.5％磷酸溶液(B％)
0 10 90
20 19 81
30 20 80
50 21 79
85 40 60
100 10 90
体积流量：1.0ml/min；
检测波长：334nm；
柱温：25℃；
进样量：5μl。
结果前面5个成分色谱峰均被有效分离，相互之间并无干扰，且不受杂志峰影响，但木犀草素和槲皮素的色谱峰并未分离，峰形欠佳。见图5。
对比例3
色谱柱：Agilent ZORBAX EclipseXDB-C18(4.6mm×250mm，5μm，美国安捷伦科技有限公司)；
流动相：乙腈-0.5％磷酸溶液；
梯度洗脱：见表13；
表13梯度洗脱程序
时间/min 乙腈(A％) 0.5％磷酸溶液(B％)
0 10 90
20 19 81
30 20 80
50 21 79
76 36 64
85.1 80 20
100 10 90
体积流量：1.0ml/min；
检测波长：334nm；
柱温：25℃；
进样量：5μl。
结果前面5个成分色谱峰均被有效分离，相互之间并无干扰，且不受杂志峰影响，但木犀草素和槲皮素的色谱峰得到分离，但分离度小于1.5，峰形尚可，需进一步稍作优化。见图6。

Claims (7)

1.一种利用一测多评法评价槐花颗粒质量的方法，其特征在于包括以下的步骤：
a. 制备供试品溶液：称取槐花颗粒，以乙醇为提取溶剂，固液比为1: 15～25，进行水浴加热提取3～6h，待提取液冷却至室温，过滤，将滤液水浴蒸干，残渣加甲醇溶解，定容，离心，取上清液加甲醇定容即可；
b. 制备混合对照品溶液：精密称取绿原酸、芦丁、甘草苷、木犀草苷、蒙花苷、槲皮素、木犀草素对照品适量，加甲醇溶解并定容，配置混合对照品溶液；
c. 色谱峰测定：将上述步骤a所制得的供试品溶液注入高效液相色谱仪，按照预设的色谱条件，测定供试液溶液，得到槐花颗粒中各自特征峰的保留时间；
所述色谱条件为：色谱柱以十八烷基键合硅胶柱为填充剂，规格为4.6mm×250mm，5μm；流动相A为乙腈, 流动相B为0.5%的磷酸溶液；梯度洗脱程序为：0～20min，10%～19%乙腈；20～30min，19%～20%乙腈；30～50min，20%～21%乙腈；50～85min，21%～60%乙腈，85～95min，10%乙腈；体积流量为0.8～1.2ml/min，检测波长为325～345nm，柱温为20～35℃，进样量为5～15μl；
d．进行方法学考察试验；
所述步骤b的混合对照品溶液中，绿原酸的浓度为0.0205～0.0215mg/ml、芦丁的浓度为0.4490～0.4505mg/ml、甘草苷的浓度为0.2015～0.2110mg/ml、木犀草苷的浓度为0.0195～0.0210mg/ml、蒙花苷的浓度为0.0920～0.0930mg/ml、槲皮素的浓度为0.2120～0.2135mg/ml、木犀草素的浓度为0.0740～0.0760mg/ml；
所述d步骤中方法学考察试验包括专属性考察、线性关系考察、精密性试验、重复性试验、稳定性试验、加样回收率试验；
所述专属性考察的步骤为：按槐花颗粒制剂的配制工艺分别制成缺少槐花的槐花阴性颗粒、缺野菊花的野菊花阴性颗粒、缺甘草的甘草阴性颗粒，然后按步骤a的提取方法，分别提取出甘草阴性样品、槐花阴性样品、野菊花阴性样品，并按照步骤c所述的色谱条件分别对其进行色谱测定。
2.根据权利要求1所述的利用一测多评法评价槐花颗粒质量的方法，其特征在于：所述步骤a制备供试品溶液中，乙醇的浓度为70%，槐花颗粒与乙醇的固液比为1:20。
3.根据权利要求1所述的利用一测多评法评价槐花颗粒质量的方法，其特征在于：所述步骤a制备供试品溶液中，所述水浴加热提取为索氏提取，水浴的温度为80℃，水浴提取时间为4h。
4.根据权利要求1所述的利用一测多评法评价槐花颗粒质量的方法，其特征在于：所述混合对照品溶液中，绿原酸的浓度为0.0210mg/ml、芦丁的浓度为0.4500mg/ml、甘草苷的浓度为0.2100mg/ml、木犀草苷的浓度为0.0200mg/ml、蒙花苷的浓度为0.0925mg/ml、槲皮素的浓度为0.2125mg/ml、木犀草素的浓度为0.0750mg/ml。
5.根据权利要求1所述的利用一测多评法评价槐花颗粒质量的方法，其特征在于：所述步骤c中色谱柱的型号为Merck Purospher STARRP-18 endcapped、Agilent ZORBAXEclipse XDB-C18、Agilent ZORBAXE RX-C18、Agilent ZORBAXE SB-C18中的任意一种。
6.根据权利要求5所述的利用一测多评法评价槐花颗粒质量的方法，其特征在于：所述色谱柱的型号为Agilent ZORBAX EclipseXDB-C18。
7.根据权利要求1所述的利用一测多评法评价槐花颗粒质量的方法，其特征在于：所述步骤c的色谱条件中，体积流量为1.0ml/min，检测波长为334nm，柱温为25℃，进样量为5μl。
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Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106841478A (zh) * 2017-04-20 2017-06-13 广西壮族自治区梧州食品药品检验所 一种同时测定野菊花中七种成分的含量的方法
WO2017148426A1 (zh) * 2016-03-03 2017-09-08 石家庄以岭药业股份有限公司 一种中药组合物的指纹图谱的测定方法
WO2017148418A1 (zh) * 2016-03-03 2017-09-08 石家庄以岭药业股份有限公司 一种中药组合物的含量测定方法
CN108896673A (zh) * 2018-06-25 2018-11-27 贵阳中医学院 一种蜘蛛果中绿原酸、木犀草素和芹菜素的含量测定方法
CN109580846A (zh) * 2019-01-22 2019-04-05 北京九龙制药有限公司 一种治疗高尿酸血症的中药复方制剂的质量检测方法
CN110426479A (zh) * 2019-08-24 2019-11-08 合肥九鼎医药科技有限公司 一种泻白散物质基准的hplc特征图谱测定方法
CN110772484A (zh) * 2019-11-12 2020-02-11 安徽协和成制药有限公司 一种炒槐花配方颗粒及其制备方法和质量标准检测方法

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2017148426A1 (zh) * 2016-03-03 2017-09-08 石家庄以岭药业股份有限公司 一种中药组合物的指纹图谱的测定方法
WO2017148418A1 (zh) * 2016-03-03 2017-09-08 石家庄以岭药业股份有限公司 一种中药组合物的含量测定方法
CN106841478A (zh) * 2017-04-20 2017-06-13 广西壮族自治区梧州食品药品检验所 一种同时测定野菊花中七种成分的含量的方法
CN108896673A (zh) * 2018-06-25 2018-11-27 贵阳中医学院 一种蜘蛛果中绿原酸、木犀草素和芹菜素的含量测定方法
CN109580846A (zh) * 2019-01-22 2019-04-05 北京九龙制药有限公司 一种治疗高尿酸血症的中药复方制剂的质量检测方法
CN110426479A (zh) * 2019-08-24 2019-11-08 合肥九鼎医药科技有限公司 一种泻白散物质基准的hplc特征图谱测定方法
CN110772484A (zh) * 2019-11-12 2020-02-11 安徽协和成制药有限公司 一种炒槐花配方颗粒及其制备方法和质量标准检测方法

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