CN108872410B - 一种润肺膏指纹图谱的建立方法及其指纹图谱 - Google Patents
一种润肺膏指纹图谱的建立方法及其指纹图谱 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108872410B CN108872410B CN201810237335.3A CN201810237335A CN108872410B CN 108872410 B CN108872410 B CN 108872410B CN 201810237335 A CN201810237335 A CN 201810237335A CN 108872410 B CN108872410 B CN 108872410B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- peak
- lung
- moistening
- fingerprint
- solution
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000002674 ointment Substances 0.000 title claims abstract description 44
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 24
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 title claims abstract description 15
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 23
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 21
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 21
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 20
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims abstract description 19
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 14
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims abstract description 12
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims abstract description 11
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 10
- 239000012088 reference solution Substances 0.000 claims abstract description 8
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims abstract description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims abstract description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000006071 cream Substances 0.000 claims description 16
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 claims description 14
- CWVRJTMFETXNAD-FWCWNIRPSA-N 3-O-Caffeoylquinic acid Natural products O[C@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)C[C@H]1OC(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 CWVRJTMFETXNAD-FWCWNIRPSA-N 0.000 claims description 12
- PZIRUHCJZBGLDY-UHFFFAOYSA-N Caffeoylquinic acid Natural products CC(CCC(=O)C(C)C1C(=O)CC2C3CC(O)C4CC(O)CCC4(C)C3CCC12C)C(=O)O PZIRUHCJZBGLDY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- CWVRJTMFETXNAD-KLZCAUPSSA-N Neochlorogenin-saeure Natural products O[C@H]1C[C@@](O)(C[C@@H](OC(=O)C=Cc2ccc(O)c(O)c2)[C@@H]1O)C(=O)O CWVRJTMFETXNAD-KLZCAUPSSA-N 0.000 claims description 12
- 229940074393 chlorogenic acid Drugs 0.000 claims description 12
- CWVRJTMFETXNAD-JUHZACGLSA-N chlorogenic acid Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)C[C@H]1OC(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 CWVRJTMFETXNAD-JUHZACGLSA-N 0.000 claims description 12
- FFQSDFBBSXGVKF-KHSQJDLVSA-N chlorogenic acid Natural products O[C@@H]1C[C@](O)(C[C@@H](CC(=O)C=Cc2ccc(O)c(O)c2)[C@@H]1O)C(=O)O FFQSDFBBSXGVKF-KHSQJDLVSA-N 0.000 claims description 12
- 235000001368 chlorogenic acid Nutrition 0.000 claims description 12
- BMRSEYFENKXDIS-KLZCAUPSSA-N cis-3-O-p-coumaroylquinic acid Natural products O[C@H]1C[C@@](O)(C[C@@H](OC(=O)C=Cc2ccc(O)cc2)[C@@H]1O)C(=O)O BMRSEYFENKXDIS-KLZCAUPSSA-N 0.000 claims description 12
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 9
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 claims description 8
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 7
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 5
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 5
- 238000010276 construction Methods 0.000 claims description 4
- 239000012085 test solution Substances 0.000 claims description 4
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 2
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 abstract description 9
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract description 3
- YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N octadecylsilane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC[SiH3] YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 abstract 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 abstract 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 3
- DATAGRPVKZEWHA-YFKPBYRVSA-N N(5)-ethyl-L-glutamine Chemical compound CCNC(=O)CC[C@H]([NH3+])C([O-])=O DATAGRPVKZEWHA-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001061264 Astragalus Species 0.000 description 1
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 1
- 206010014561 Emphysema Diseases 0.000 description 1
- 241000490229 Eucephalus Species 0.000 description 1
- 241001547127 Fritillaria cirrhosa Species 0.000 description 1
- 208000019693 Lung disease Diseases 0.000 description 1
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 1
- 235000014443 Pyrus communis Nutrition 0.000 description 1
- 206010057190 Respiratory tract infections Diseases 0.000 description 1
- 206010046306 Upper respiratory tract infection Diseases 0.000 description 1
- PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;hydrate Chemical compound O.CC#N PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 235000006533 astragalus Nutrition 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 206010006451 bronchitis Diseases 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 238000005464 sample preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 1
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004233 talus Anatomy 0.000 description 1
- 229940026510 theanine Drugs 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
Abstract
本发明公开了一种润肺膏指纹图谱的建立方法及其指纹图谱，属于中药制剂检测技术领域。所述指纹图谱的建立方法，包括如下步骤：供试品溶液的制备；参照物溶液的制备；测定；润肺膏指纹图谱的构建。色谱条件为：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充材料；检测波长为254nm；流速为1.0mL/min；柱温为25℃；进样量为20μL；乙腈和0.1％磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱，记录50min的色谱图。该方法具有重复性好、稳定性和精密度高，操作简便等优点。采用本方法建立的润肺膏指纹图谱有10个共有峰，完善了润肺膏的质量控制方法，能从整体上对产品质量进行全面控制，从而保证润肺膏制剂的有效性和安全性。
Description
技术领域
本发明属于中药制剂检测技术领域，具体涉及润肺膏指纹图谱的建立方法及其指纹图谱。
背景技术
中药复方是我国传统医药宝库的重要组成部分，有着悠久的使用历史和明确的疗效。当前，对中药制剂的质量控制内容主要包括外观鉴别、性状检查及单个或几种指标成分的定量分析等。而中药复方含有多味药材，其发挥疗效的药效物质基础比较复杂，作用机制常为多靶点协同作用，单靠单个或几种成分的含量作为质量控制指标难以全面反映中药制剂的质量。
作为一种综合及可量化的质量控制方法，中药指纹图谱能够全面、有效地反应中药材及其制剂的质量，这与中药多靶点与整体性的作用特点是相符合的。近年来，结合计算机软件分析建立的现代中药指纹图谱分析技术广泛应用于中药学研究的各个领域，是目前国际上公认的中药质量控制模式。指纹图谱建立的方法包括各种色谱法、光谱法、波谱法等，色谱法是其中最常用的一种。
润肺膏是以莱阳梨清膏为主药，配以黄芪、党参、百部、紫菀、川贝母精制而成的中药复方制剂。其主要功效为润肺益气，止咳化痰，可用于治疗上呼吸道感染、支气管炎、哮喘肺气肿等多种肺系疾病，临床疗效显著。现有的润肺膏质量控制方法主要通过薄层色谱对原茶儿酸进行定性鉴别，难以全面反应药品的质量。以中药色谱指纹图谱作为润肺膏的质量控制方法，目前尚未见报道。因此，建立润肺膏指纹图谱对其产品质量进行全面控制具有重要意义。
发明内容
为弥补当前润肺膏质量控制方法方面的不足，本发明旨在提供一种润肺膏指纹图谱的建立方法及润肺膏的指纹图谱。该方法简便、稳定性和重复性好、精密度高。建立的指纹图谱可以完善润肺膏的质量控制方法，保证润肺膏的质量可靠稳定，从而可以保证润肺膏制剂的有效性和安全性。
本发明的目的通过以下步骤实现：
1.供试品溶液的制备：精密称取一定质量的不同批次的润肺膏制剂，置于玻璃容器中，加入一定量溶剂稀释并定容，摇匀，过微孔滤膜，得供试品溶液。
2.参照物溶液的制备：精密称取一定量的绿原酸标准品，用溶剂溶解后，过微孔滤膜，得参照物溶液。
3.测定：分别精密吸取供试品和参照物溶液，注入高效液相色谱仪，进行测定，即得各批次润肺膏的色谱图。
4.润肺膏指纹图谱的构建：将不同批次的润肺膏供试品色谱图导入中药色谱指纹图谱相似度评价软件，选择各批次润肺膏色谱图中均存在的色谱峰作为共有的色谱峰，生成润肺膏对照指纹图谱，同时计算各共有峰的相对峰面积和相对保留时间。
5.如上所述润肺膏色谱指纹图谱的构建方法，优选的步骤1中，所述供试品溶液的制备方法为：精密称取润肺膏制剂5.0g，置于烧杯中，加入蒸馏水稀释，之后转移到10mL容量瓶中，加入蒸馏水定容，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，取滤液即得供试品溶液。
6.优选的步骤2中，配制绿原酸标准品溶液所用溶剂为50％甲醇，浓度为50-100μg/mL。
7.优选的步骤3中，建立润肺膏指纹图谱的色谱条件为：采用慧德易SP ODS-A柱(5μm，4.6×250mm)；检测波长为254nm；流速为1.0mL/min；柱温为25℃；进样量为20μL；流动相A为乙腈，流动相B为0.1％磷酸水溶液，采用梯度洗脱的方式。流动相梯度为：0～10min，5％A，95％B；10～20min，5％-8％A，95-92％B；20～30min，8％-12％A，92-88％B；30～50min，12％-18％A，88-82％B。
8.本发明另外提供一种根据所述构建方法建立的润肺膏指纹图谱，含有10个共有特征峰，其中10号峰为对照品绿原酸。以绿原酸峰为参照，10个共有峰相对保留时间依次为：峰1：0.251～0.255；峰2：0.360～0.363；峰3：0.382～0.388；峰4：0.434～0.441；峰5：0.517～0.519；峰6：0.549～0.556；峰7：0.566～0.580；峰8：0.600～0.606；峰9：0.623～0.627；峰10：1.000。
9.使用前述方法测定12个批次的润肺膏样品，得到12个批次的润肺膏指纹图谱，采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》2004版评价各批次润肺膏HPLC图谱的相似度，12批次润肺膏指纹图谱的相似度均大于0.99，说明各批次样品一致性较好。
相比现有技术，本发明的有益效果是：
(1)本发明建立的润肺膏指纹图谱建立方法简便可靠、稳定性和精密度高、重复性较好。
(2)用本发明中建立的方法制定的润肺膏指纹图谱，能从整体上、全面有效地对润肺膏制剂的质量进行控制，从而保证产品的稳定性、可靠性与安全性。
附图说明
图1-1～1-3为本发明一种实施例的选择波长所得色谱图
图2-1～2-4为本发明一种实施例的选择流动相所得色谱图
图3-1～3-3为本发明一种实施例的选择柱温所得色谱图
图4-1～4-2为本发明一种实施例的选择色谱柱所得色谱图
图5为本发明一种实施例的润肺膏对照指纹图谱
图6为本发明一种实施例的12批润肺膏指纹图谱
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步说明，但本发明不仅局限于下述的实施方式。
以下各实施例中所使用的仪器：Thermo Fisher U3000高效液相色谱仪；色谱柱为慧德易SP ODS-A柱(5μm，4.6×250mm)。
以下各实施例中所使用的药品和试剂：润肺膏由烟台渤海制药集团有限公司提供；绿原酸标准品购于上海阿拉丁生化科技股份有限公司；乙腈为色谱纯；磷酸为分析纯。
实施例一：采用HPLC法建立润肺膏的指纹图谱
1.供试品溶液的制备：精密称取润肺膏制剂5.0g于烧杯中，加入蒸馏水稀释，之后转移到10mL容量瓶中，加入蒸馏水定容，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，取滤液即得供试品溶液。
2.参照物溶液的制备：取绿原酸标准品适量，加入50％甲醇配制绿原酸标准品溶液，浓度为50μg/mL，过0.45μm微孔滤膜，滤液即为参照物溶液。
3.润肺膏指纹图谱的测定：精密吸取12个批次的润肺膏供试品溶液注入高效液相色谱仪，进行测定，记录50min色谱图，得到12个批次的润肺膏色谱图。色谱条件为：色谱柱为慧德易SP ODS-A柱(5μm，4.6×250mm)。检测波长为254nm，流速为1.0mL/min；柱温为25℃；进样量为20μL；以乙腈(A)和0.1％磷酸水溶液(B)为流动相，采用梯度洗脱的方式；流动相梯度为：0～10min，5％A，95％B；10～20min，5％-8％A，95-92％B；20～30min，8％-12％A，92-88％B；30～50min，12％-18％A，88-82％B。
4.润肺膏指纹图谱的构建：将12个批次的润肺膏供试品色谱图导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统，选择所有批次样品均有的10个色谱峰作为共有峰，生成润肺膏对照指纹图谱。其中，色谱峰10为绿原酸。以色谱峰10为参照峰，计算各共有峰的相对峰面积和相对保留时间，结果见表1-1，1-2和表2。
表1-1 12批润肺膏指纹图谱共有峰的相对峰面积1
表1-2 12批润肺膏指纹图谱共有峰的相对峰面积2
表2 12批润肺膏指纹图谱共有峰的相对保留时间
5.使用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统研究版(2004A)”对12批润肺膏指纹图谱进行相似度评价，相似度均大于0.99，结果见表3。
表3 12批润肺膏指纹图谱相似度计算结果
实施例二：色谱条件的选择
1.梯度洗脱方式的选择
润肺膏为复方制剂，所含化学成分较为复杂，极性差别大，因此采用梯度洗脱的方式进行检测。
2.检测波长的选择
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈作为流动相A，0.1％磷酸水溶液作为流动相B，采用梯度洗脱，梯度洗脱程序如下：0～10min，5％A，95％B；10～20min，5％-8％A，95-92％B；20～30min，8％-12％A，92-88％B；30～50min，12％-18％A，88-82％B。洗脱流速为1.0mL/min；柱温为25℃；进样量为20μL，分别考察检测波长为210nm，254nm，320nm时供试品溶液色谱图中色谱峰的数量和分离度，结果见图1-1～1-3。
从图1-1～1-3可以看出，检测波长为254nm时，色谱峰的数目最多，各峰分离情况较好，因此选择254nm作为检测波长。
3.流动相组成的选择
采用上述梯度洗脱方法和检测波长，分别考察乙腈-水、乙腈-0.1％甲酸水溶液、乙腈-0.1％醋酸水溶液和乙腈-0.1％磷酸水溶液几种溶剂系统的分离效果，结果见图2-1～2-4。从图2-1～2-4可以看出，以乙腈-0.1％磷酸水溶液作为流动相时，各色谱峰分离效果较好，因此选用乙腈-0.1％磷酸水溶液作为流动相。
4.柱温的选择
采用上述方法，选择柱温25℃、30℃和35℃对供试品溶液进行检测，结果见图3-1～3-3。从图3-1～3-3可以看出，当柱温为25℃时，各色谱峰分离效果较好。因此，选择柱温为25℃。
5.色谱柱的选择
采用上述方法，分别使用Agilent Zorbax Extend C18(5μm，4.6×250mm)和慧德易SP ODS-A(5μm，4.6×250mm)色谱柱对供试品溶液进行检测，结果见图4-1和4-2。结果表明，慧德易SP ODS-A(5μm，4.6×250mm)对润肺膏的分离效果较好。
实施例三：对本发明中润肺膏指纹谱图的测定方法进行方法学考察
方法学考察中使用的色谱条件：色谱柱为慧德易SP ODS-A柱(5μm，4.6×250mm)，洗脱流速为1.0mL/min，柱温为25℃，检测波长为254nm，进样量为20μL，流动相使用乙腈(A)和0.1％磷酸水溶液(B)进行梯度洗脱，梯度洗脱程序为：0～10min，5％A，95％B；10～20min，5％-8％A，95-92％B；20～30min，8％-12％A，92-88％B；30～50min，12％-18％A，88-82％B。
1.精密度试验
分别吸取同一供试品溶液，按上述色谱条件连续进样6次，分别测定峰面积和保留时间。实验结果见表4和表5，各共有峰的相对峰面积RSD均小于3％，相对保留时间的RSD均小于1％，说明精密度良好。
2.稳定性试验
取同一润肺膏供试品溶液，按上述色谱条件，分别在0、3、8、10、12、24h进样测定。实验结果见表6和表7，各共有峰的相对峰面积RSD均小于3％，相对保留时间的RSD均小于1％，说明供试品溶液在24h内稳定性较好。
3.重复性试验
取同一批次的供试品，按上述样品制备方法制备6份供试品溶液。按上述色谱条件注入高效液相色谱仪进行检测。实验结果见表8和表9，各共有峰的相对峰面积RSD均小于3％，相对保留时间的RSD均小于1％，说明建立的润肺膏指纹图谱检测方法重复性良好。
表4精密度试验中各共有峰的相对峰面积
表5精密度试验中各共有峰的相对保留时间
表6稳定性试验中各共有峰的相对峰面积
表7稳定性试验中各共有峰的相对保留时间
表8重复性试验中各共有峰的相对峰面积
表9重复性试验中各共有峰的相对保留时间
Claims (1)
1.一种润肺膏指纹图谱的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：精密称取一定质量的不同批次的润肺膏制剂，置于玻璃容器中，加入一定量溶剂稀释并定容，摇匀，过微孔滤膜，得供试品溶液；
(2)参照物溶液的制备：精密称取一定量的绿原酸标准品，用溶剂溶解后，过微孔滤膜，得参照物溶液；
(3)测定：分别精密吸取供试品和参照物溶液，注入高效液相色谱仪，进行测定，记录色谱图；
(4)润肺膏指纹图谱的构建：将不同批次的润肺膏供试品色谱图导入中药色谱指纹图谱相似度评价软件，选择各批次润肺膏色谱图中均存在的色谱峰作为共有的色谱峰，生成润肺膏对照指纹图谱，计算各共有峰的相对峰面积和相对保留时间；
其中，所述的步骤(1)中，供试品溶液的制备方法如下：精密称取润肺膏制剂5.0g于烧杯中，加入蒸馏水稀释，之后转移到10mL容量瓶中，加入蒸馏水定容，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，取滤液即得供试品溶液；
所述的步骤(2)中，参照物溶液的制备方法如下：精密称取一定量的绿原酸标准品，加入50％甲醇配制绿原酸参照物溶液，浓度为50-100μg/mL，过0.45μm微孔滤膜，滤液即为参照物溶液；
所述的步骤(3)中，所述测定为分别精密吸取供试品和参照物溶液20μL，注入高效液相色谱仪，测定并记录50min的色谱图，使用的色谱条件为：色谱柱为慧德易SP ODS-A柱，5μm，4.6×250mm；检测波长为254nm；流速为1.0mL/min；柱温为25℃；进样量为20μL；流动相A为乙腈，流动相B为0.1％磷酸水溶液，采用梯度洗脱的方式；流动相梯度为：0～10min，5％A，95％B；10～20min，5％-8％A，95-92％B；20～30min，8％-12％A，92-88％B；30～50min，12％-18％A，88-82％B；
所述的步骤(4)中，所述建立方法得到的指纹图谱中含有10个特征峰，其中10号峰为对照品绿原酸，各峰以10号峰为参照峰的相对保留时间和相对峰面积如下：相对保留时间：峰1：0.251～0.255；峰2：0.360～0.363；峰3：0.382～0.388；峰4：0.434～0.441；峰5：0.517～0.519；峰6：0.549～0.556；峰7：0.566～0.580；峰8：0.600～0.606；峰9：0.623～0.627；峰10：1.000；相对峰面积：峰1：4.3576～5.1133；峰2：1.3582～1.7955；峰3：26.5149～35.4553；峰4：2.1450～2.5839；峰5：2.5258～3.1187；峰6：0.4975～0.5665；峰7：1.2079～1.3804；峰8：2.0684～2.3946；峰9：2.3285～2.4911；峰10：1.0000。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810237335.3A CN108872410B (zh) | 2018-03-22 | 2018-03-22 | 一种润肺膏指纹图谱的建立方法及其指纹图谱 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810237335.3A CN108872410B (zh) | 2018-03-22 | 2018-03-22 | 一种润肺膏指纹图谱的建立方法及其指纹图谱 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN108872410A CN108872410A (zh) | 2018-11-23 |
| CN108872410B true CN108872410B (zh) | 2023-11-17 |
Family
ID=64326104
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201810237335.3A Active CN108872410B (zh) | 2018-03-22 | 2018-03-22 | 一种润肺膏指纹图谱的建立方法及其指纹图谱 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN108872410B (zh) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109613154A (zh) * | 2018-12-18 | 2019-04-12 | 贵阳中医学院 | 一种威宁党参药材hplc特征图谱的建立方法 |
| CN109655543B (zh) * | 2018-12-21 | 2022-05-17 | 广东一方制药有限公司 | 一种利用uplc特征图谱鉴别百部药材基源的方法 |
| CN112578066B (zh) * | 2019-09-27 | 2022-11-04 | 江阴天江药业有限公司 | 一种紫菀样品的质量评价方法 |
| CN114216995B (zh) * | 2021-12-30 | 2023-08-18 | 江苏弘典中药产业研究院有限公司 | 一种中药膏方的指纹图谱检测方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101129911A (zh) * | 2007-09-12 | 2008-02-27 | 烟台渤海制药集团有限公司 | 一种治疗肺虚气弱证咳嗽和慢性气管炎症的药及制备方法 |
| CN104749123A (zh) * | 2015-04-07 | 2015-07-01 | 湖北端正药业股份有限公司 | 测定雪梨膏中含苯丙烯酸类母核的多酚化合物含量的方法 |
| CN107183634A (zh) * | 2017-05-17 | 2017-09-22 | 山东农业大学 | 梨优异加工品质新品种的创制与应用 |
-
2018
- 2018-03-22 CN CN201810237335.3A patent/CN108872410B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101129911A (zh) * | 2007-09-12 | 2008-02-27 | 烟台渤海制药集团有限公司 | 一种治疗肺虚气弱证咳嗽和慢性气管炎症的药及制备方法 |
| CN104749123A (zh) * | 2015-04-07 | 2015-07-01 | 湖北端正药业股份有限公司 | 测定雪梨膏中含苯丙烯酸类母核的多酚化合物含量的方法 |
| CN107183634A (zh) * | 2017-05-17 | 2017-09-22 | 山东农业大学 | 梨优异加工品质新品种的创制与应用 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| HPLC法同时测定莱阳梨清膏中3个咖啡酰奎宁酸类成分的含量;桂怡;徐丽华;林永强;;药物分析杂志(第09期);第1648-1650页 * |
| 润肺膏对哮喘大鼠支气管肺泡灌洗液中TNF-α、IFN-γ含量的影响;邹爱玲;柳新;于文潇;;临床医药文献电子杂志(第16期);第2975-2976页 * |
| 液质联用技术(LC-MS)分析雪花梨中化学成分;陈四平;张盼盼;;食品研究与开发(第24期);第146-148页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN108872410A (zh) | 2018-11-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN108872410B (zh) | 一种润肺膏指纹图谱的建立方法及其指纹图谱 | |
| CN106353430B (zh) | 一种基于多指标活性成分测定的前列欣胶囊质量评价方法 | |
| CN111487344B (zh) | 益母草颗粒指纹图谱的检测方法 | |
| CN108362790B (zh) | 一种中成药“清胰利胆颗粒”hplc特征图谱的构建方法 | |
| CN114527221A (zh) | 一种黄芩药材的质量评价方法 | |
| CN109856270A (zh) | 一种用高效液相色谱法同时测定华盖散配方颗粒中7个指标成分的方法 | |
| CN114252532B (zh) | 一种防风通圣颗粒指纹图谱的建立方法及其指纹图谱 | |
| CN108459129B (zh) | 一种防己茯苓汤组合物的质量控制方法 | |
| CN111007190B (zh) | 一种土贝母药材uplc特征图谱的构建方法及其成分含量测定方法 | |
| CN102133333A (zh) | 一种参麦注射液质谱指纹图谱质量控制方法 | |
| CN112684036A (zh) | 黄蛭益肾胶囊指纹图谱测定方法及其应用 | |
| CN114965802B (zh) | 一种更年安片的质量控制方法 | |
| CN110441443B (zh) | 一种有柄石韦、石韦、庐山石韦与华北石韦的uplc特征图谱构建方法及其鉴别方法 | |
| CN109061024B (zh) | 小儿扶脾颗粒的标准指纹图谱的构建方法及其应用 | |
| CN102854283B (zh) | 一种小金牛草的检测方法 | |
| CN111487351A (zh) | 活血止痛胶囊指纹图谱的检测方法 | |
| CN110118841A (zh) | 一种肝胆双清口服液的hplc特征图谱的构建方法 | |
| CN113533598B (zh) | 一种小儿肺热咳喘颗粒中黄芩含量的高效液相色谱分析方法 | |
| CN115097040B (zh) | 一种木鳖子的uplc特征图谱构建方法及应用 | |
| CN115343388B (zh) | 一种利用一测多评法评价槐花颗粒质量的方法 | |
| CN115372510B (zh) | 一种竹红菌指纹图谱及其建立方法与应用 | |
| CN110068640B (zh) | 基于hplc指纹图谱的蒙药紫檀香心药材质量检测方法 | |
| CN114487135B (zh) | 一种小蓟与小蓟炭饮片、标准汤剂、配方颗粒的高效液相检测方法及其鉴别方法 | |
| CN117288870B (zh) | 蚁灵口服液指纹图谱的建立方法 | |
| CN114113437B (zh) | 一种清热解毒口服液hplc指纹图谱和在清热解毒口服液质量控制中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| TA01 | Transfer of patent application right | ||
| TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20231023 Address after: 346 Guanhai Road, Laishan District, Yantai City, Shandong Province Applicant after: BINZHOU MEDICAL University Applicant after: Shandong Xianglong Pharmaceutical Research Institute Co.,Ltd. Address before: 346 Guanhai Road, Laishan District, Yantai City, Shandong Province Applicant before: BINZHOU MEDICAL University Applicant before: YANTAI BOHAI PHARMACEUTICALS GROUP CO.,LTD. |
|
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |