CN101085224B - 一种脉络宁注射制剂的检测方法 - Google Patents
一种脉络宁注射制剂的检测方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种脉络宁注射制剂,具体而言,是一种脉络宁粉针剂及其质量控制方法。本发明由石斛、牛膝、玄参、金银花四种药材按一定重量份配比提取有效成分后加入药用赋形剂,经超滤、调pH值,除菌过滤,加塞,冷冻干燥得冻干粉针剂。本发明的质量控制方法包括四味药材的鉴别和滨蒿内酯、肉桂酸、绿原酸的含量测定。本发明的药物有效成分含量高,剂型稳定,采用的质量控制方法可操作性强,能很好地控制产品质量。
Description
技术领域
本发明涉及一种脉络宁注射制剂,具体而言,涉及一种脉络宁注射制剂及其质量控制方法。
背景技术
脉络宁注射液是在著名医方“四妙勇安汤”的基础上研制而成的中药复方注射剂,由牛膝、玄参、石斛、金银花四味中药组成,广泛应用于血栓闭塞性脉管炎、动脉硬化性闭塞症、脑血栓形成及后遗症、多发性大动脉炎、四肢急性动脉栓塞症、糖尿病坏疽、静脉血栓形成及血栓性静脉炎等。中国专利CN1557398A公开了其还具有预防和治疗心绞痛的作用。四位原料药的主要成分与药理作用为:
金银花为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.、红腺忍冬Lonicera hypoglauca Miq.、山银花Lonicera confusa DC.或毛花柱忍冬Lonicera dasystyla Rehd.的干燥花蕾或带初开的花。主含有机酸类成分,目前鉴定出的有机酸类主要包括绿原酸(Chlorogcnicacid)和异绿原酸(Isocholrogenicacid)、咖啡酸(Caffeicacid)和3,5-二咖啡酰奎尼酸(3-5-O-dicaffeoylquinicacid)等,前三者为金银花的主要活性成分,具有抗病毒、抗菌、抗炎、退热、免疫调节等作用。
牛膝为苋科植物牛膝(Achuranthes bidentata Bl.)的干燥根。牛膝中含有皂苷类、植物甾酮类、糖类、黄酮类化合物等成分,皂苷类成分为其主要活性成分,其具有抗炎、镇痛和活血等作用。现在化学成分研究证实牛膝皂苷类化合物主要以齐墩果酸型三萜皂苷为主。
玄参为玄参科植物玄参(Scrophularia ningpoenses He msl.)的干燥根。现代研究表明,玄参主要化学成分有环烯醚萜类、苯丙素苷、三萜皂苷、黄酮类、有机芳酸等化学成分,其中哈巴俄苷与肉桂酸为玄参中含量较高的成分,也是其主要活性成分之一,具有抗炎、降压、镇痛、解痉以及免疫促进作用。
为兰科植物环草石斛Dendrobium loddigesii Rolfe.、马鞭石斛Dendrobiumfimbriatum Hook.var.oculatum Hook.、黄草石斛Dendrobium chrysanthumWall.、铁皮石斛Dendrobium candidum Wall.ex Lindl.或金钗石斛Dendrobiumnobile Lindl的新鲜或干燥茎。现代研究表明石斛含有的成分有各种生物碱、菲类和联苄类、芴酮类、倍半萜类、香豆素类、滨蒿内酯等,其中生物碱与滨蒿内酯为其主要活性成分,滨蒿内酯具有抗炎 与清除活性氧的作用,与脉络宁的治法方药有着一定的量效关系。
现有的脉络宁注射液的制备工艺采用水提醇沉法将四种药材同时提取,然后再用乙酸乙酯萃取得有效成分(见“脉络宁注射液的工艺方法”,公开号CN1078148A),而方中含有绿原酸等对光照和空气不稳定性成分,在贮存过程中容易出现注射液色泽变化、有效成分含量降低等现象,同时方中同时存有有机酸与生物碱等成分,在水针状态下这些成分极易发生絮凝沉淀,严重影响到脉络宁注射液临床应用的安全性和有效性。
现有的脉络宁注射液的质量控制方法包括绿原酸的薄层鉴别和滨蒿内酯的含量测定(见部颁标准WS3-B-3462-98),此质量控制方法选择指标单一,含量测定采用薄层扫描方法,精密度、准确性均不高,所以,很难对产品质量进行全面的控制,由此使不良反应的发生率呈逐年增长趋势(陈爱群等.70例脉络宁注射液不良反应文献分析.药物不良反应杂志.2003,2:162-165)。
因此,开发出更加安全、有效、稳定的脉络宁注射制剂,建立操作性强、检测指标合理、全面控制产品质量的质量控制方法是广大医药工作者一直渴望解决的问题。
发明内容
本发明的目的之一是克服现有技术的不足,提供一种更加安全、有效、稳定的脉络宁注射制剂。
本发明的另一目的是提供该脉络宁制剂的质量控制方法。
本发明通过以下技术方案予以实施:
本发明的脉络宁注射用粉针剂由石斛、玄参、牛膝、金银花为原料药制成,其中肉桂酸含量为大于0.44mg/g,优选0.44~0.90mg/g,进一步优选0.60~0.80mg/g,更优选0.60~0.70mg/g。绿原酸含量为大于66.7mg/g,优选66.7~133.3mg/g,进一步优选80.7~105.5mg/g,更优选80.7~95.5mg/g。
进一步的,本发明的脉络宁注射制剂还包括滨蒿内酯,滨蒿内酯含量为大于0.27mg/g,优选0.27~0.55mg/g,进一步优选0.35~0.45mg/g,更优选0.35~0.40mg/g。
以上有效成分中,以滨蒿内酯的含量表征石斛的含量,以肉桂酸的含量表征玄参的含量,以绿原酸的含量表征金银花的含量。
本发明的脉络宁粉针剂以下述方法制备而成:
(1)原料药重量配比为:石斛1~4份 金银花1~4份 牛膝1~4份 玄参1~4份
(2)取处方量的上述药材粉碎成粗粉,用50~90%乙醇以100~300ml/min速度渗漉提取,收集10~14倍生药量的渗漉液,低温减压回收乙醇,减压浓缩至50℃下相对密度为1.0~1.3 的浸膏,离心去除不溶性杂质,加4~8倍量水,充分搅拌,静置过夜,过滤,滤液减压浓缩至50℃下相对密度为1.0~1.3的浸膏,过滤,去除沉淀,调节pH值至1~4,等体积乙酸乙酯萃取4~8次,合并萃取液,回收乙酸乙酯,50~80℃真空干燥得提取物;
(3)在提取物中加注射用水加热煮沸8~15分钟,自然放冷,冷藏,过滤,滤液以截留分子量为3000~8000的超滤膜超滤,收集超滤液,滤液中加入赋形剂,补加注射用水至处方量,调pH值6.5~7.0,除菌过滤,滤液分装于西林瓶中,加塞,冷冻干燥,包装,得冻干粉针剂。
其中,步骤(3)中所述的赋形剂选自甘露醇、PVP、葡聚糖、乳糖、右旋糖苷、蔗糖中的一种或多种。
本发明通过大量的试验研究,确定了本发明的脉络宁注射用粉针剂的质量控制方法。本发明的质量控制方法包括鉴别项和含量测定项,其中鉴别项为牛膝、玄参、石斛、金银花的薄层鉴别中一种或多种的组合,含量测定项为滨蒿内酯、绿原酸、肉桂酸的含量测定种的一种或多种的组合。
其中,鉴别项包括以下全部或部分项目:
牛膝:以牛膝对照药材、齐墩果酸为对照,照薄层色谱法操作,选择硅胶G薄层板,环己烷-氯仿-醋酸乙酯-甲酸为展开剂,硫酸乙醇溶液喷雾显色;样品前处理为加乙醇超声处理,滤过,滤液加盐酸加热回流,滤过,加水,石油醚提取,提取液蒸干,残渣加乙醇使溶解,即得;
玄参:以玄参对照药材为对照,照薄层色谱法操作,选择硅胶G薄层板,正丁醇-冰醋酸-水为展开剂,香草醛硫酸溶液喷雾显色;样品前处理为加水饱和正丁醇超声处理,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇使溶解,即得;
石斛:以石斛对照药材为对照,照薄层色谱法操作,选择硅胶GF254薄层板,环己烷-醋酸乙酯-浓氨试液为展开剂,紫外光灯(254nm)下检视;样品前处理为加氯仿-甲醇-浓氨试液混合液超声处理,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇使溶解,即得;
金银花:以绿原酸、金银花对照药材为对照,照薄层色谱法操作,选择聚酰胺薄膜,醋酸丁酯-甲酸-水的上层溶液为展开剂,置紫外光灯(365nm)下检视;样品前处理为加乙醇超声处理,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇使溶解,即得。
优选步骤为:
牛膝:以牛膝对照药材、齐墩果酸为对照,照薄层色谱法分别将样品、牛膝对照药材、齐墩果酸点于同一硅胶G薄层板上,以体积比为20∶5∶8∶0.1的环己烷-氯仿-醋酸乙酯-甲酸为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,105℃加热至色斑显色清晰;其中样 品前处理为加乙醇超声处理15~45分钟,滤过,滤液加盐酸,加热回流0.5~2小时,滤过,滤液浓缩,加水,用石油醚提取1~3次,提取液蒸干,残渣加乙醇使溶解,即得;
玄参:以玄参对照药材为对照,照薄层色谱法分别将样品、玄参对照药材点于同一硅胶G薄层板上,以体积比为7∶1∶2的正丁醇-冰醋酸-水为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%香草醛硫酸溶液,105℃加热至色斑显色清晰,放置15~45分钟;样品前处理为加水饱和正丁醇1,超声处理0.5~1.5小时,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇使溶解,即得;
石斛:以石斛对照药材为对照,照薄层色谱法分别将样品与石斛对照药材点于同一硅胶GF254薄层板上,以体积比为7.5∶7.5∶0.2的环己烷-醋酸乙酯-浓氨试液为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(254nm)下检视;样品前处理为加体积比为5∶1∶0.1的氯仿-甲醇-浓氨试液混合液,超声处理15~45分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇使溶解,即得;
金银花:以绿原酸、金银花对照药材为对照,照薄层色谱法分别将样品、绿原酸与金银花对照药材点于同一聚酰胺薄膜上,以体积比为7∶2.5∶2.5的醋酸丁酯-甲酸-水的上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视;样品前处理为加乙醇,超声处理15~45分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇使溶解,即得。
含量测定项包括以下全部或部分项目:
绿原酸:
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以乙腈-0.1%磷酸为流动相,检测波长为327nm,理论板数按绿原酸峰计算应不低于3000;
对照品溶液的制备 精密称取绿原酸对照品,加50%甲醇制成每1ml含40μg的溶液,摇匀,即得;
供试品溶液的制备 精密称取注射用粉针剂适量,置量瓶中,加50%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取1ml,置25ml量瓶中,加50%甲醇稀释至刻度,摇匀,即得;
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,计算,即得;
肉桂酸:
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以乙腈-0.1%磷酸为流动相,检测波长为277nm,理论板数按肉桂酸峰计算应不低于3000;
对照品溶液的制备 精密称取肉桂酸对照品,加甲醇制成每1ml含0.01mg的溶液,摇匀,即得;
供试品溶液的制备 精密称取注射用粉针剂适量,置量瓶中,加50%甲醇溶解并稀释至 刻度,摇匀,即得;
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,计算,即得;
滨蒿内酯:
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以乙腈-0.1%磷酸为流动相,检测波长为343nm,理论板数按滨蒿内酯峰计算应不低于3000;
对照品溶液的制备 精密称取滨蒿内酯对照品,加甲醇制成每1ml含0.02mg的溶液,摇匀,即得;
供试品溶液的制备 精密称取注射用粉针剂适量,置10ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,即得;
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,计算,即得。
其中,绿原酸含量测定项下流动相中乙腈-0.1%磷酸的比为10∶90,肉桂酸含量测定项下流动相中乙腈-0.1%磷酸的比为32∶68,滨蒿内酯含量测定项下流动相中乙腈-0.1%磷酸的比为23∶77。
最佳的,本发明的脉络宁注射用粉针包括以下全部的质量控制项目:
鉴别项:
牛膝:以牛膝对照药材、齐墩果酸为对照,照薄层色谱法分别将样品、牛膝对照药材、齐墩果酸点于同一硅胶G薄层板上,以体积比为20∶5∶8∶0.1的环己烷-氯仿-醋酸乙酯-甲酸为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,105℃加热至色斑显色清晰;其中样品前处理为加乙醇超声处理15~45分钟,滤过,滤液加盐酸,加热回流0.5~2小时,滤过,滤液浓缩,加水,用石油醚提取1~3次,提取液蒸干,残渣加乙醇使溶解,即得;
玄参:以玄参对照药材为对照,照薄层色谱法分别将样品、玄参对照药材点于同一硅胶G薄层板上,以体积比为7∶1∶2的正丁醇-冰醋酸-水为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%香草醛硫酸溶液,105℃加热至色斑显色清晰,放置15~45分钟;样品前处理为加水饱和正丁醇1,超声处理0.5~1.5小时,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇使溶解,即得;
石斛:以石斛对照药材为对照,照薄层色谱法分别将样品与石斛对照药材点于同一硅胶GF254薄层板上,以体积比为7.5∶7.5∶0.2的环己烷-醋酸乙酯-浓氨试液为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(254nm)下检视;样品前处理为加体积比为5∶1∶0.1的氯仿-甲醇-浓氨试液混合液,超声处理15~45分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇使溶解,即得;
金银花:以绿原酸、金银花对照药材为对照,照薄层色谱法分别将样品、绿原酸与金银花对照药材点于同一聚酰胺薄膜上,以体积比为7∶2.5∶2.5的醋酸丁酯-甲酸-水的上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视;样品前处理为加乙醇,超声处理15~45分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇使溶解,即得。
含量测定项:
绿原酸:
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以体积比为10∶90的乙腈-0.1%磷酸为流动相,检测波长为327nm,理论板数按绿原酸峰计算应不低于3000;
对照品溶液的制备 精密称取绿原酸对照品,加50%甲醇制成每1ml含40μg的溶液,摇匀,即得;
供试品溶液的制备 精密称取注射用粉针剂适量,置量瓶中,加50%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取1ml,置25ml量瓶中,加50%甲醇稀释至刻度,摇匀,即得;
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,计算,即得;
依照本法,本发明的脉络宁粉针剂每瓶含绿原酸(C16H18O9)不得少于30.0mg。
肉桂酸:
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以体积比为32∶68的乙腈-0.1%磷酸为流动相,检测波长为277nm,理论板数按肉桂酸峰计算应不低于3000;
对照品溶液的制备 精密称取肉桂酸对照品,加甲醇制成每1ml含0.01mg的溶液,摇匀,即得;
供试品溶液的制备 精密称取注射用粉针剂适量,置量瓶中,加50%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得;
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,计算,即得;
依照本法,本发明的脉络宁粉针剂每瓶含肉桂酸(C9H8O2)不得少于0.2mg。
滨蒿内酯:
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以体积比为23∶77的乙腈-0.1%磷酸为流动相,检测波长为343nm,理论板数按滨蒿内酯峰计算应不低于3000;
对照品溶液的制备 精密称取滨蒿内酯对照品,加甲醇制成每1ml含0.02mg的溶液,摇匀,即得;
供试品溶液的制备 精密称取注射用粉针剂适量,置10ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,即得;
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,计算,即得。
依照本法,本发明的脉络宁粉针剂每瓶含滨蒿内酯(C11H10O4)不得少于0.12mg。
本发明的脉络宁粉针剂0.45g/瓶,加入0.9%生理盐水或5%GS250ml中静滴。可清热养阴,活血化瘀;主治阴虚内热、脉络瘀阻型动脉粥样硬化性脑梗塞,症见半身不遂,口舌歪斜,言语謇涩或不语,感觉减退或消失,眩晕耳鸣,手足心热,咽干口燥。
本发明的脉络宁注射用粉针剂采用简洁、适合工业化生产的制备工艺提高了有效成分的提取率,节省了药材用量,最大程度去除杂质,且粉针制剂更加稳定,克服了液体制剂中不稳定的有效成分降解、絮凝等问题的出现;本发明的质量控制方法选择最能表征药材有效成分的指标全面控制成品质量,且方法可操作性强,保证了制剂更加安全、有效。
附图说明
图1绿原酸对照品液相色谱图
图2注射用脉络宁冻干粉液相色谱图(绿原酸)
图3缺金银花阴性对照品液相色谱图
图4肉桂酸对照品液相色谱图
图5注射用脉络宁冻干粉液相色谱图(肉桂酸)
图6缺玄参的阴性对照(有干扰)
图7缺玄参金银花的阴性对照(无干扰)
图8滨蒿内酯对照品色谱图
图9注射用脉络宁冻干粉色谱图(滨蒿内酯)
图10缺石斛阴性对照色谱图
下面通过试验例来说明本发明的依据。
试验例一提取工艺研究
1.1提取工艺的比较研究
四味药主要活性成分水溶性与醇溶性均较好,既可用水提取也可用醇提取。然而各种成分在不同溶媒中不同提取方式下其提取效果并不一致,须对其进行对比研究。工艺研究中应以金银花中的绿原酸、玄参中的肉桂酸、石斛中的滨蒿内酯三个主要活性成分作为评价指标,然而,本方遣方复杂,评价指标较多,单指标评价存在片面性,因此其提取效果优劣应 以众指标综合评价判定。纵观本方理法方药,方中玄参清热凉血兼滋阴,加用金银花宣散清热,使邪热自气分而解,共为臣药,较之石斛其权重系数分别设为0.4;石斛养阴清热,为治疗虚热不退、津伤口渴之要药,既可固护胃气,又可养阴生脉、利血行,方中以为佐使之用,较之玄参银花二味权重系数可定为0.2,因此综合指标评分可用下式计算:
综合指标评分=绿原酸转移率×0.4+肉桂酸转移率×0.4+滨蒿内酯转移率×0.2
1.1.1药材的前处理
取金银花(批号:021202)、牛膝(批号:021205)、玄参(批号:021203)、石斛(批号:021204)各约25kg,分别净制,低温干燥,粉碎机中打成粗粉(过二号筛),备用。
1.1.2操作方法
分别准确称取上述四味药材粗粉各100g,混合均匀,作为供试药材,同样操作准备供试药材共三份,作下述试验。
第一份以70%乙醇渗漉提取,流速4ml/min,接收渗漉液4800ml,HPLC法测定样品中绿原酸、肉桂酸、滨蒿内酯的含量。
第二份以70%乙醇回流提取二次。第一次用7倍量70%乙醇在搅拌下回流提取3小时,第二次加入5倍量70%乙醇在搅拌下回流提取2小时。合并二次乙醇提取液,同浓度乙醇定容,同上测定样品中绿原酸、肉桂酸、滨蒿内酯的含量。
第三份以水煎煮提取二次。第一次以7倍量水在搅拌下煎煮提取3小时,第二次加入5倍量水在搅拌下煎煮提取2小时。合并二次水提取液,以蒸馏水定容后同上测定样品中绿原酸、肉桂酸、滨蒿内酯的含量。
1.1.3结果
三组实验提取液测定体积和绿原酸、肉桂酸、滨蒿内酯的含量,计算提取率及各活性成分的综合提取率。结果如表1所示。
表1三种提取方法的对比
注:综合提取率=绿原酸提取率×0.4+肉桂酸提取率×0.4+滨蒿内酯提取率×0.2
由表1可见,以70%乙醇渗漉提取,各指标成分转移率及各成分综合提取率均高于其它两种提取方式,而固形物的收率较低,因此乙醇渗漉法同现有技术常用的乙醇回流或者水煎 煮法相比具有明显的优势,采取乙醇渗漉法为宜。
试验例二鉴别方法的建立
【鉴别】
试药 注射用脉络宁冻干粉样品(批号:031017、031023、031028);绿原酸对照品(由中国药品生物制品检定所提供,批号:0753-9909);齐墩果酸对照品(由中国药品生物制品检定所提供,批号:0709-9803);牛膝对照药材、玄参对照药材、石斛对照药材、金银花对照药材购于中国药品生物制品检定所;所有化学试剂均为分析纯。
(1)牛膝鉴别 取本品8瓶内容物,加乙醇30ml,超声处理30分钟,滤过,滤液加盐酸1ml,加热回流1小时,滤过,滤液蒸至约5ml,加水10ml,用石油醚(60-90℃)提取2次,每次20ml,提取液蒸干,残渣加乙醇2ml使溶解,作为供试品溶液。另取缺牛膝阴性对照,同法制备阴性对照溶液。再另取牛膝对照药材2g,加乙醇20ml,加热回流1小时,滤过,滤液加盐酸1ml,同法制成对照药材溶液。再取齐墩果酸对照品,加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2000年版一部附录VIB)试验,吸取上述四种溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以环己烷-氯仿-醋酸乙酯-甲酸(20∶5∶8∶0.1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,105℃加热至色斑显色清晰。供试品色谱中,分别在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。阴性对照未见干扰。
(2)玄参鉴别 取本品6瓶内容物,加水饱和正丁醇30ml,密塞,超声处理1小时,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液。另取缺玄参阴性对照,同法制备阴性对照溶液。另取玄参对照药材2g,同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2000年版一部附录VIB)试验,吸取上述三种溶液各2μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以正丁醇-冰醋酸-水(7∶1∶2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%香草醛硫酸溶液,105℃加热至色斑显色清晰,放置30分钟。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的红色主斑点。阴性对照未见干扰。
(3)石斛鉴别 取本品8瓶内容物,加氯仿-甲醇-浓氨试液(5∶1∶0.1)混合液40ml,超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液。另取缺石斛阴性对照,同法制备阴性对照溶液。再另取石斛对照药材4g,同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2000年版一部附录VIB)试验,吸取上述三种溶液各5μl,分别点于同一硅胶GF254薄层板上,以环己烷-醋酸乙酯-浓氨试液(7.5∶7.5∶0.2)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的暗斑点。阴性对照未见干扰。
(4)金银花鉴别 取本品2瓶内容物,加乙醇20ml,超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液。另取缺金银花阴性对照,同法制备阴性对照溶液。再另取金银花对照药材1g,加乙醇20ml,加热回流1小时,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为对照药材溶液。再取绿原酸对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2000年版一部附录VIB)试验,吸取上述四种溶液各2μl,分别点于同一聚酰胺薄膜上,以醋酸丁酯-甲酸-水(7∶2.5∶2.5)的上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,分别在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。阴性对照未见干扰。
试验例三含量测定
一、绿原酸
注射用脉络宁冻干粉为复方中药制剂,为了有效地控制本品的质量,质量标准中以其主要成分绿原酸为含测指标,采用高效液相色谱法测定本品中绿原酸的含量。
1、仪器与试药
仪器 高效液相色谱仪:Waters 600E泵,Waters 717自动进样器,Waters PDA2996二极管阵列检测器;Waters Empower色谱工作站;Mettler AE240(十万分之一)天平(梅特勒-托利多上海仪器有限公司);SYZ-A石英亚沸高纯水蒸馏器(江苏信达仪器厂)。
试药 绿原酸对照品(由中国药品生物制品检定所提供,批号:0753-200111);乙腈为色谱纯,其它试剂均为分析纯;成品及阴性对照品(由本公司提供)。
2、色谱条件的选择
色谱柱:Diamonsil C18,5μm,250×4.6mm(迪马公司产);流动相:乙腈-0.1%磷酸(10∶90);柱温:30℃;流速1.2ml/min;检测波长:327nm。在此色谱条件下,绿原酸与样品中其它组分分离良好,理论板数按绿原酸对照品峰计大于3000。(见图1)。
3、供试品溶液的制备
精密称取装量差异项下本品0.3g,置25ml量瓶中,加50%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取1ml,置25ml量瓶中,加50%甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。(见图2)
4、空白试验 取缺金银花的阴性对照品,按供试品溶液制备方法操作,依法进样测定,记录色谱图。结果,在对照品相同保留时间处无吸收峰。表明样品中无干扰绿原酸的成分存在。(见图3)
5、线性关系的考察
精密称取绿原酸对照品11.03mg,置250ml量瓶中,加50%甲醇溶解并稀释至刻度,得绿原酸对照品溶液;分别精密吸取上述对照品溶液3μl、5μl、10μl、15μl、25μl,分别注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定绿原酸峰面积,以对照品进样量X(μg)为横座标、峰面积值Y(mv.s) 为纵座标,绘制标准曲线,结果见表2。
表2绿原酸对照品线性范围测定结果
测定结果表明,绿原酸对照品在进样量0.13236μg~1.10300μg范围内呈良好的线性关系(见图4)。
6、精密度试验
精密吸取上述绿原酸对照品溶液10μl,重复进样5次,测定,记录绿原酸对照品峰面积值,求相对标准偏差RSD。结果见表3。实验结果表明:本法精密度良好。
表3精密度试验
7、稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液(批号:031017),在室温下,分别于配制后0、4、7、12、24小时测定绿原酸峰面积,每次进样10μl,测定。结果见表4。实验结果表明:供试品溶液在24小时内基本稳定。
表4稳定性试验
8、重现性试验
精密称取样品5份(批号:031017),每份约0.3g,按供试品溶液制备方法操作,依法进样测定,计算绿原酸含量,求相对标准偏差RSD,结果见表5。实验结果表明:本法重现性良好。
表5重现性试验
9、回收率测定
采用加样回收法,精密称取已知含量的同一批号样品(批号:031017)(绿原酸含量为 36.847mg/瓶,每瓶平均装量为0.45g)约150mg,置25ml量瓶中,精密加入绿原酸对照品溶液(浓度为2.653mg/ml)5ml,照供试品溶液的制备方法操作,即得。按正文方法,进样,测定,计算。结果表明,本法具有较好的回收率。结果见表6。
表6绿原酸回收率测定结果
二、肉桂酸
注射用脉络宁冻干粉为复方中药制剂,为了有效地控制本品的质量,质量标准中以其主要成分肉桂酸(经试验证明来自于玄参和金银花药材)为含测指标,采用高效液相色谱法测定本品中肉桂酸的含量。
1、仪器与试药
仪器 高效液相色谱仪:Waters 600E泵,Waters 717自动进样器,Waters PDA2996二极管阵列检测器;Waters Empower色谱工作站;Mettler AE240(十万分之一)天平(梅特勒-托利多上海仪器有限公司);SYZ-A石英亚沸高纯水蒸馏器(江苏信达仪器厂)。
试药 肉桂酸对照品(由中国药品生物制品检定所提供,批号:0786-9802);乙腈为色谱纯,其它试剂均为分析纯;成品及阴性对照品(由本公司提供)。
2、色谱条件的选择
色谱柱:Diamonsil C18,5μm,250×4.6mm(迪马公司产);流动相:乙腈-0.1%磷酸(32∶68);柱温:30℃;流速1ml/min;检测波长:277nm。在此色谱条件下,肉桂酸与样品中其它组分分离良好,理论板数按肉桂酸对照品峰计大于3000。(见图4)。
3、供试品溶液的制备 精密称取装量差异项下本品0.3g,置25ml量瓶中,加50%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。(见图5)
4、空白试验 精密吸取缺玄参的阴性样品,按供试品溶液制备方法操作,依法进样测定,记录色谱图。结果,在对照品相同保留时间处有吸收峰,为了证明此干扰来自何药味,又对药材进行了肉桂酸测定,发现在金银花药材中含有肉桂酸,且缺金银花和玄参的阴性对照无干扰。(见图6、图7)
5、线性关系的考察
精密称取肉桂酸对照品11.30mg,置25ml量瓶中,加50%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀, 精密量取肉桂酸对照品储备液2ml,置100ml量瓶中,加50%甲醇稀释至刻度,摇匀,得肉桂酸对照品溶液;分别精密吸取上述对照品溶液3μl、5μl、10μl、15μl、20μl,分别注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定肉桂酸峰面积,以对照品进样量X(μg)为横座标、峰面积值Y(mv.s)为纵座标,绘制标准曲线,结果见表7。
表7肉桂酸线性范围测定结果
测定结果表明,肉桂酸对照品在进样量0.02712μg~0.18080μg范围内呈良好的线性关系。
6、精密度试验
精密吸取上述对照品溶液10μl,重复进样5次,测定,记录肉桂酸对照品峰面积值,求相对标准偏差RSD,结果见表8。实验结果表明:本法精密度良好。
表8精密度试验
7、稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液(批号:031017),在室温下,分别于配制后0、2、9、13、24小时测定肉桂酸峰面积,每次进样10μl,测定,结果见表9。实验结果表明:供试品溶液在24小时内基本稳定。
表9稳定性试验
8、重现性试验
精密称取样品5份(批号:031017),每份约0.3g,按供试品溶液制备方法操作,依法进样测定,计算肉桂酸含量,求相对标准偏差RSD,结果见表10。实验结果表明:本法重现性良好。
表10重现性试验
9、回收率测定
采用加样回收法,精密称取已知含量的同一批号样品(批号:031017)(肉桂酸含量为0.270mg/瓶,每瓶平均装量为0.45g)约150mg,置25ml量瓶中,精密加入肉桂酸对照品溶液10ml,加50%甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。按正文方法,进样,测定,计算。结果表明,本法具有较好的回收率。结果见表11。
表11肉桂酸回收率测定结果
三、滨蒿内酯
注射用脉络宁冻干粉为复方中药制剂,为了有效地控制本品的质量,质量标准中以滨蒿内酯为含测指标,采用高效液相色谱法测定本品中滨蒿内酯的含量。
1、仪器与试药
仪器 高效液相色谱仪:Waters 600E泵,Waters 717自动进样器,Waters PAD2996二极管阵列检测器;Waters Empower色谱工作站;Mettler AE240(十万分之一)天平(梅特勒-托利多上海仪器有限公司);SYZ-A石英亚沸高纯水蒸馏器(江苏信达仪器厂)。
试药 滨蒿内酯对照品(由中国药品生物制品检定所提供,批号:1511-200001);乙腈为色谱纯,其它试剂均为分析纯;成品及阴性对照品(由本公司提供)。
2、色谱条件的选择
色谱柱:Diamonsil C18,5μm,250×4.6mm(迪马公司产);流动相:乙腈-0.1%磷酸(23∶77);柱温:30℃;流速1.0ml/min;检测波长:343nm。在此色谱条件下,滨蒿内酯与样品中其它组分分离良好,理论板数按滨蒿内酯对照品峰计大于3000。(见图8)。
3、供试品溶液的制备
精密称取装量差异项下本品0.45g,置10ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。(见图9)。
4、空白试验 取缺石斛的阴性对照品,按供试品溶液制备方法操作,依法进样测定,记 录色谱图。结果,在对照品相同保留时间处无吸收峰。表明样品中无干扰滨蒿内酯的成分存在。(见图10)。
5、线性关系的考察
精密称取滨蒿内酯对照品13.52mg,置50ml量瓶中,加50%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取1ml,置10ml量瓶中,加50%甲醇稀释至刻度,摇匀,得滨蒿内酯对照品溶液;分别精密吸取上述对照品溶液3μl、5μl、10μl、15μl、20μl,分别注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定滨蒿内酯峰面积,以对照品进样量X(μg)为横座标、峰面积值Y(mv.s)为纵座标,绘制标准曲线,结果见表12。
表12滨蒿内酯对照品线性范围测定结果
测定结果表明,滨蒿内酯对照品在进样量0.08112μg~0.5408μg范围内呈良好的线性关系。
6、精密度试验
精密吸取上述滨蒿内酯对照品溶液10μl,重复进样5次,测定,记录滨蒿内酯对照品峰面积值,求相对标准偏差RSD。结果见表13。实验结果表明:本法精密度良好。
表13精密度试验
7、稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液(批号:031017),在室温下,分别于配制后0、4、8、12、24小时测定滨蒿内酯峰面积,每次进样10μl,测定。结果见表14。实验结果表明:供试品溶液在24小时内基本稳定。
表14稳定性试验
8、重现性试验
精密称取样品5份(批号:031017),每份约0.45g,按供试品溶液制备方法操作,依法进样测定,计算滨蒿内酯含量,求相对标准偏差RSD,结果见表15。实验结果表明:本法重现性良好。
表15重现性试验
9、回收率测定
采用加样回收法,精密称取已知含量的同一批号样品(批号:031017)(滨蒿内酯含量为0.177mg/瓶,每瓶平均装量为0.45g)约250mg,置10ml量瓶中,精密加入上述滨蒿内酯对照品溶液3ml,照供试品溶液的制备方法操作,即得。按正文方法,进样,测定,计算。结果表明,本法具有较好的回收率。结果见表16。
表16滨蒿内酯回收率测定结果
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明,旨在列举本发明的具体实施方式,不以任何形式构成对本发明的限制。
实施例一脉络宁粉针剂的制备
取3000g石斛、6000g玄参、6000g牛膝、5000g金银花粉碎成粗粉,用70%乙醇以300ml/min速度渗漉提取,收集12倍生药量的渗漉液,低温减压回收乙醇,减压浓缩至50℃下相对密度为1.20的浸膏,离心去除不溶性杂质,加8倍量水,充分搅拌,静置过夜,过滤,滤液减压浓缩至50℃下相对密度为1.15的浸膏,过滤,去除沉淀,调节pH值至1~2,等体积乙酸乙酯萃取8次,合并萃取液,回收乙酸乙酯,50℃真空干燥得提取物338g。提取物中加注射用水2000ml加热煮沸8分钟,自然放冷,冷藏,过滤,滤液以截留分子量为5000的超滤膜超滤,收集超滤液,滤液中加入甘露醇200g,PVP 2g,补加注射用水至3000ml,调pH值6.5~7.0,除菌过滤,滤液分装于西林瓶中,加塞,冷冻干燥,包装,得冻干粉针剂1000支。
实施例二
一脉络宁粉针剂的制备
取5000g石斛、5000g玄参、5000g牛膝、5000g金银花粉碎成粗粉,用70%乙醇以100ml/min速度渗漉提取,收集12倍生药量的渗漉液,低温减压回收乙醇,减压浓缩至50℃下相对密度为1.20的浸膏,离心去除不溶性杂质,加6倍量水,充分搅拌,静置过夜,过滤,滤液减压浓缩至50℃下相对密度为1.20的浸膏,过滤,去除沉淀,调节pH值至1~2,等体积乙酸乙酯萃取6次,合并萃取液,回收乙酸乙酯,60℃真空干燥得提取物345g。提取物中加注射用水2000ml加热煮沸10分钟,自然放冷,冷藏,过滤,滤液以截留分子量为5000的超滤膜超滤,收集超滤液,滤液中加入甘露醇330g,PVP 6g,补加注射用水至3000ml,调pH值6.5~7.0,除菌过滤,滤液分装于西林瓶中,加塞,冷冻干燥,包装,得冻干粉针剂1000支。
二鉴别
(1)牛膝鉴别 取粉针剂8瓶内容物,加乙醇30ml,超声处理30分钟,滤过,滤液加盐酸1ml,加热回流1小时,滤过,滤液蒸至约5ml,加水10ml,用石油醚(60-90℃)提取2次,每次20ml,提取液蒸干,残渣加乙醇2ml使溶解,作为供试品溶液。另取缺牛膝阴性对照,同法制备阴性对照溶液。再另取牛膝对照药材2g,加乙醇20ml,加热回流1小时,滤过,滤液加盐酸1ml,同法制成对照药材溶液。再取齐墩果酸对照品,加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2000年版一部附录VIB)试验,吸取上述四种溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以环己烷-氯仿-醋酸乙酯-甲酸(20∶5∶8∶0.1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,105℃加热至色斑显色清晰。供试品色谱中,分别在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。阴性对照未见干扰。
(2)玄参鉴别 取粉针剂6瓶内容物,加水饱和正丁醇30ml,密塞,超声处理1小时,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液。另取缺玄参阴性对照,同法制备阴性对照溶液。另取玄参对照药材2g,同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2000年版一部附录VIB)试验,吸取上述三种溶液各2μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以正丁醇-冰醋酸-水(7∶1∶2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%香草醛硫酸溶液,105℃加热至色斑显色清晰,放置30分钟。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的红色主斑点。阴性对照未见干扰。
(3)石斛鉴别 取粉针剂8瓶内容物,加氯仿-甲醇-浓氨试液(5∶1∶0.1)混合液40ml,超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液。另取缺石斛阴性对照,同法制备阴性对照溶液。再另取石斛对照药材4g,同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中 国药典》2000年版一部附录VIB)试验,吸取上述三种溶液各5μl,分别点于同一硅胶GF254薄层板上,以环己烷-醋酸乙酯-浓氨试液(7.5∶7.5∶0.2)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的暗斑点。阴性对照未见干扰。
(4)金银花鉴别 取粉针剂2瓶内容物,加乙醇20ml,超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液。另取缺金银花阴性对照,同法制备阴性对照溶液。再另取金银花对照药材1g,加乙醇20ml,加热回流1小时,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为对照药材溶液。再取绿原酸对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2000年版一部附录VIB)试验,吸取上述四种溶液各2μl,分别点于同一聚酰胺薄膜上,以醋酸丁酯-甲酸-水(7∶2.5∶2.5)的上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,分别在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。阴性对照未见干扰。
三含量测定
绿原酸
1、仪器与试药
仪器 高效液相色谱仪:Waters 600E泵,Waters 717自动进样器,Waters PDA2996二极管阵列检测器;Waters Empower色谱工作站;Mettler AE240(十万分之一)天平(梅特勒-托利多上海仪器有限公司);SYZ-A石英亚沸高纯水蒸馏器(江苏信达仪器厂)。
试药 绿原酸对照品(由中国药品生物制品检定所提供,批号:0753-200111);乙腈为色谱纯,其它试剂均为分析纯;成品及阴性对照品(由本公司提供)。
2、色谱条件的选择
色谱柱:Diamonsil C18,5μm,250×4.6mm(迪马公司产);流动相:乙腈-0.1%磷酸(10∶90);柱温:30℃;流速1.2ml/min;检测波长:327nm。在此色谱条件下,绿原酸与样品中其它组分分离良好,理论板数按绿原酸对照品峰计大于3000。
3、供试品溶液的制备
精密称取装量差异项下本品0.3g,置25ml量瓶中,加50%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取1ml,置25ml量瓶中,加50%甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。
4、样品测定
取样品三支,照供试品溶液制备方法制备,分别精密吸取供试品溶液10μl,按上述色谱条件测定,计算样品中绿原酸的平均含量为36.847mg/瓶。
肉桂酸
1、仪器与试药
仪器 同绿原酸含量测定.
试药 肉桂酸对照品(由中国药品生物制品检定所提供,批号:0786-9802);乙腈为色谱纯,其它试剂均为分析纯;成品及阴性对照品(由本公司提供)。
2、色谱条件的选择
色谱柱:Diamonsil C18,5μm,250×4.6mm(迪马公司产);流动相:乙腈-0.1%磷酸(32∶68);柱温:30℃;流速1ml/min;检测波长:277nm。在此色谱条件下,肉桂酸与样品中其它组分分离良好,理论板数按肉桂酸对照品峰计大于3000。(见图6~8)。
3、供试品溶液的制备 精密称取装量差异项下本品0.3g,置25ml量瓶中,加50%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。
4、样品测定
取样品三支,照供试品溶液制备方法制备,分别精密吸取供试品溶液10μl,按上述色谱条件测定,计算样品中绿原酸的平均含量为0.277mg/瓶。
滨蒿内酯
1、仪器与试药
仪器 同绿原酸含量测定
试药 滨蒿内酯对照品(由中国药品生物制品检定所提供,批号:1511-200001);乙腈为色谱纯,其它试剂均为分析纯;成品及阴性对照品(由本公司提供)。
2、色谱条件的选择
色谱柱:Diamonsil C18,5μm,250×4.6mm(迪马公司产);流动相:乙腈-0.1%磷酸(23∶77);柱温:30℃;流速1.0ml/min;检测波长:343nm。在此色谱条件下,滨蒿内酯与样品中其它组分分离良好,理论板数按滨蒿内酯对照品峰计大于3000。
3、供试品溶液的制备
精密称取装量差异项下本品0.45g,置10ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。
4、样品测定
取样品三支,照供试品溶液制备方法制备,分别精密吸取供试品溶液10μl,按上述色谱条件测定,计算样品中绿原酸的平均含量为0.187mg/瓶。
Claims (7)
1.一种脉络宁注射用粉针剂的检测方法,其中所述脉络宁注射用粉针剂,由石斛、玄参、牛膝、金银花为原料药制成,其中肉桂酸含量为0.44~0.90mg/g,绿原酸含量为66.7~133.3mg/g;其特征在于,该方法包括鉴别项和含量测定项,
其中鉴别项为牛膝、玄参、石斛和金银花的薄层鉴别:
牛膝:以牛膝对照药材、齐墩果酸为对照,照薄层色谱法操作,选择硅胶G薄层板,环己烷-氯仿-醋酸乙酯-甲酸为展开剂,硫酸乙醇溶液喷雾显色;样品前处理为加乙醇超声处理,滤过,滤液加盐酸加热回流,滤过,加水,石油醚提取,提取液蒸干,残渣加乙醇使溶解,即得;
玄参:以玄参对照药材为对照,照薄层色谱法操作,选择硅胶G薄层板,正丁醇-冰醋酸-水为展开剂,香草醛硫酸溶液喷雾显色;样品前处理为加水饱和正丁醇超声处理,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇使溶解,即得;
石斛:以石斛对照药材为对照,照薄层色谱法操作,选择硅胶GF254薄层板,环己烷-醋酸乙酯-浓氨试液为展开剂,紫外光灯254nm下检视;样品前处理为加氯仿-甲醇-浓氨试液混合液超声处理,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇使溶解,即得;
金银花:以绿原酸、金银花对照药材为对照,照薄层色谱法操作,选择聚酰胺薄膜,醋酸丁酯-甲酸-水的上层溶液为展开剂,置紫外光灯365nm下检视;样品前处理为加乙醇超声处理,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇使溶解,即得;
该方法的含量测定项包括以下全部或部分项目:
并且含量测定项为滨蒿内酯、绿原酸和肉桂酸的含量测定:
绿原酸:
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以乙腈-0.1%磷酸为流动相,检测波长为327nm,理论板数按绿原酸峰计算应不低于3000;
对照品溶液的制备 精密称取绿原酸对照品,加50%甲醇制成每1ml含40μg的溶液,摇匀,即得;
供试品溶液的制备 精密称取注射用粉针剂适量,置量瓶中,加50%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取1ml,置25ml量瓶中,加50%甲醇稀释至刻度,摇匀,即得;
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,计 算,即得;
肉桂酸:
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以乙腈-0.1%磷酸为流动相,检测波长为277nm,理论板数按肉桂酸峰计算应不低于3000;
对照品溶液的制备 精密称取肉桂酸对照品,加甲醇制成每1ml含0.01mg的溶液,摇匀,即得;
供试品溶液的制备 精密称取注射用粉针剂适量,置量瓶中,加50%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得;
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,计算,即得;
滨蒿内酯:
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以乙腈-0.1%磷酸为流动相,检测波长为343nm,理论板数按滨蒿内酯峰计算应不低于3000;
对照品溶液的制备 精密称取滨蒿内酯对照品,加甲醇制成每1ml含0.02mg的溶液,摇匀,即得;
供试品溶液的制备 精密称取注射用粉针剂适量,置10ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,即得;
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,计算,即得。
2.如权利要求1所述的脉络宁注射用粉针剂的检测方法,其特征在于,其中所述脉络宁注射用粉针剂中滨蒿内酯含量为0.27~0.55mg/g。
3.如权利要求2所述的脉络宁注射用粉针剂的检测方法,其特征在于,其中所述脉络宁注射用粉针剂中肉桂酸含量为0.60~0.80mg/g,绿原酸含量为80.7~105.5mg/g,滨蒿内酯含量为0.35~0.45mg/g。
4.如权利要求2所述的脉络宁注射用粉针剂的检测方法,其特征在于,其中所述脉络宁注射用粉针剂中肉桂酸含量为0.60~0.70mg/g,绿原酸含量为80.7~95.5mg/g,滨蒿内酯含量为0.35~0.40mg/g。
5.如权利要求4所述的脉络宁注射用粉针剂的检测方法,其特征在于,该方法鉴别项为:
牛膝:以牛膝对照药材、齐墩果酸为对照,照薄层色谱法分别将样品、牛膝对照药材、齐墩果酸点于同一硅胶G薄层板上,以体积比为20∶5∶8∶0.1的环己烷-氯仿-醋酸乙酯-甲酸 为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,105℃加热至色斑显色清晰;其中样品前处理为加乙醇超声处理15~45分钟,滤过,滤液加盐酸,加热回流0.5~2小时,滤过,滤液浓缩,加水,用石油醚提取1~3次,提取液蒸干,残渣加乙醇使溶解,即得;
玄参:以玄参对照药材为对照,照薄层色谱法分别将样品、玄参对照药材点于同一硅胶G薄层板上,以体积比为7∶1∶2的正丁醇-冰醋酸-水为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%香草醛硫酸溶液,105℃加热至色斑显色清晰,放置15~45分钟;样品前处理为加水饱和正丁醇,超声处理0.5~1.5小时,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇使溶解,即得;
石斛:以石斛对照药材为对照,照薄层色谱法分别将样品与石斛对照药材点于同一硅胶GF254薄层板上,以体积比为7.5∶7.5∶0.2的环己烷-醋酸乙酯-浓氨试液为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯254nm下检视;样品前处理为加体积比为5∶1∶0.1的氯仿-甲醇-浓氨试液混合液,超声处理15~45分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇使溶解,即得;
金银花:以绿原酸、金银花对照药材为对照,照薄层色谱法分别将样品、绿原酸与金银花对照药材点于同一聚酰胺薄膜上,以体积比为7∶2.5∶2.5的醋酸丁酯-甲酸-水的上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯365nm下检视;样品前处理为加乙醇,超声处理15~45分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇使溶解,即得。
6.如权利要求5所述的脉络宁注射用粉针剂的检测方法,其特征在于,绿原酸含量测定项下流动相中乙腈-0.1%磷酸的比为10∶90,肉桂酸含量测定项下流动相中乙腈-0.1%磷酸的比为32∶68,滨蒿内酯含量测定项下流动相中乙腈-0.1%磷酸的比为23∶77。
7.权利要求4所述的脉络宁注射用粉针剂的检测方法,其特征在于,该方法为:
鉴别项:
牛膝:以牛膝对照药材、齐墩果酸为对照,照薄层色谱法分别将样品、牛膝对照药材、齐墩果酸点于同一硅胶G薄层板上,以体积比为20∶5∶8∶0.1的环己烷-氯仿-醋酸乙酯-甲酸为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,105℃加热至色斑显色清晰;其中样品前处理为加乙醇超声处理15~45分钟,滤过,滤液加盐酸,加热回流0.5~2小时,滤过,滤液浓缩,加水,用石油醚提取1~3次,提取液蒸干,残渣加乙醇使溶解,即得;
玄参:以玄参对照药材为对照,照薄层色谱法分别将样品、玄参对照药材点于同一硅胶G薄层板上,以体积比为7∶1∶2的正丁醇-冰醋酸-水为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%香草醛硫酸溶液,105℃加热至色斑显色清晰,放置15~45分钟;样品前处理为加水饱和正丁醇,超声处理0.5~1.5小时,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇使溶解,即得;
石斛:以石斛对照药材为对照,照薄层色谱法分别将样品与石斛对照药材点于同一硅胶 GF254薄层板上,以体积比为7.5∶7.5∶0.2的环己烷-醋酸乙酯-浓氨试液为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯254nm下检视;样品前处理为加体积比为5∶1∶0.1的氯仿-甲醇-浓氨试液混合液,超声处理15~45分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇使溶解,即得;
金银花:以绿原酸、金银花对照药材为对照,照薄层色谱法分别将样品、绿原酸与金银花对照药材点于同一聚酰胺薄膜上,以体积比为7∶2.5∶2.5的醋酸丁酯-甲酸-水的上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯365nm下检视;样品前处理为加乙醇,超声处理15~45分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇使溶解,即得;
含量测定项:
绿原酸:
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以体积比为10∶90的乙腈-0.1%磷酸为流动相,检测波长为327nm,理论板数按绿原酸峰计算应不低于3000;
对照品溶液的制备 精密称取绿原酸对照品,加50%甲醇制成每1ml含40μg的溶液,摇匀,即得;
供试品溶液的制备 精密称取注射用粉针剂适量,置量瓶中,加50%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取1ml,置25ml量瓶中,加50%甲醇稀释至刻度,摇匀,即得;
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,计算,即得;
肉桂酸:
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以体积比为32∶68的乙腈-0.1%磷酸为流动相,检测波长为277nm,理论板数按肉桂酸峰计算应不低于3000;
对照品溶液的制备 精密称取肉桂酸对照品,加甲醇制成每1ml含0.01mg的溶液,摇匀,即得;
供试品溶液的制备 精密称取注射用粉针剂适量,置量瓶中,加50%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得;
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,计算,即得;
滨蒿内酯:
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以体积比为23∶77的乙腈-0.1%磷酸为流动相,检测波长为343nm,理论板数按滨蒿内酯峰计算应不低于3000;
对照品溶液的制备 精密称取滨蒿内酯对照品,加甲醇制成每1ml含0.02mg的溶液,摇匀, 即得;
供试品溶液的制备 精密称取注射用粉针剂适量,置10ml量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,即得;
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