CN109541117B - 一种用于润肺的药物组合物检测方法 - Google Patents
一种用于润肺的药物组合物检测方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种润肺的药物组合物的检测方法，该组合物由桑叶、石膏、甘草、人参、胡麻仁、阿胶、麦门冬、杏仁、枇杷叶组成；本检测方法包括以甘草对照药材、桑叶对照药材、枇杷叶对照药材为对照的薄层色谱法鉴别，以人参皂苷Re对照品为对照的薄层色谱法鉴别，检查法，以甘草苷对照品、甘草酸铵对照品为对照的高效液相色谱法含量测定。本方法中甘草苷的线性范围76.65～1533μg,线性方程:Y＝2.9768X+5.5425，甘草酸铵的线性范围为200.3～4006μg,线性方程:Y＝1.9671X+13.967。本发明具有操作简便、快速、准确，分离效果好，准确度和精密度高。
Description
技术领域
本发明涉及医药发明领域，具体涉及一种用于润肺的药物组合物的检测方法。
背景技术
用于润肺的药物组合物由桑叶、石膏、甘草、人参、胡麻仁、阿胶、麦门冬、杏仁、枇杷叶组成，其中：桑叶苦寒清泄肺热，甘寒益阴，凉润肺燥，可用于燥热伤肺、干咳少痰，具有清肺润燥，用于肺热燥咳的功效。甘草用于气喘咳嗽，治湿痰咳嗽，治寒痰咳喘，风热咳嗽、风寒咳嗽、热痰咳嗽亦常配伍应用。人参皂苷Re是人参中的有效活性成分，对于很多疾病有改善和预防作用，对于中老年的常见疾病，心脑血管疾病、冠心病、四肢乏力、腿脚不便、记忆力减退都有很好的疗效。枇杷叶有清肺止咳，和胃利尿，止渴的功效。有治疗肺热痰嗽，咳血，衄血，胃热呕哕作用。以上几味药均为润肺的药物组合物的重要有效成分。
目前国家还没有对该药物组合物建立检测方法，但随着社会的发展，对于药品的质量控制的要求越来越高，而且对于寻找快捷方便可控的检测方法的需求也越来越迫切，因此，为了有效地控制药物的质量，确保用药的安全，制定更高效、更严格可靠的质量检测方法来保证药品质量，全面有效控制制剂的质量，保证疗效，本发明人经过研究，提出了一种用于润肺的药物组合物质量检测方法，建立了对本品中君药桑叶和佐药枇杷叶、人参、使药甘草的薄层鉴别，同时还通过超高效液相建立了制剂中甘草中甘草苷和甘草酸铵的含量测定方法；具体为确定了桑叶、枇杷叶、人参皂苷Re的薄层鉴别，其方法专属、可行，重现性好，保证了质量检测标准的准确性和先进性；另外优化了供试品溶液的配制方法以及展开剂的选择，含量测定中供试品的制备采用薄层色谱项下的供试品溶液，节省了样品处理时间；该检测方法精密度、灵敏度、稳定性均好，能够全面、有效地控制本药物的质量。
发明内容
本发明的目的是克服现有质量标准对一种润肺的药物组合物，含量测定供试品处理过程繁杂，提供一种用于润肺的药物组合物检测方法，该方法专属性强、耐用性、灵敏度高，可作为该药物的重要质量检测标准。具体而言，所述质量检测方法为以甘草对照药材、桑叶对照药材、枇杷叶对照药材为对照的薄层色谱法鉴别，以人参皂苷Re对照品为对照的薄层色谱法鉴别，检查法，以甘草苷对照品、甘草酸铵对照品为对照的超高效液相色谱法含量测定
所述以甘草对照药材、桑叶对照药材、枇杷叶对照药材为对照的薄层色谱法鉴别为：
(1)供试品溶液的制备：取本品粉末3-8g，精密称定，加乙醚20-60ml，加热回流30-120分钟，滤过，弃去醚液，药渣挥干后加甲醇10-40ml，超声处理30-40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇定容至1-2ml，作为供试品溶液；
(2)对照药材溶液的制备：另取甘草对照药材0.5-2g，桑叶对照药材0.5-2g，枇杷叶对照药材0.5-2g，同法制成对照药材溶液；
(3)阴性供试品溶液的制备：精密称取缺甘草、桑叶、枇杷叶的阴性供试品，同法分别制成阴性供试品溶液；
(4)照薄层色谱法鉴别：照《中国药典》2015年版四部通则0502薄层色谱法试验，吸取上述四种溶液各1～2μl，分别点于同一用高效硅胶G薄层板上，以体积比为15：1：1：2的乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；阴性供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，无相同颜色的荧光斑点。
优选的，所述以甘草对照药材、桑叶对照药材、枇杷叶对照药材为对照的薄层色谱法鉴别为：
(1)供试品溶液的制备：取本品粉末4-7g，精密称定，加乙醚30-50ml，加热回流40-60分钟，滤过，弃去醚液，药渣挥干后加甲醇10-40ml，超声处理32-37分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇定容至1-2ml，作为供试品溶液；
(2)对照药材溶液的制备：另取甘草对照药材1-1.5g，桑叶对照药材1-1.5g，枇杷叶对照药材1-1.5g，同法制成对照药材溶液；
(3)阴性供试品溶液的制备：精密称取甘草、桑叶、枇杷叶阴性供试品，同法制成阴性供试品溶液；
(4)照薄层色谱法鉴别：照《中国药典》2015年版四部通则0502薄层色谱法试验，吸取上述四种溶液各1～2μl，分别点于同一用高效硅胶G薄层板上，以体积比为15：1：1：2的乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；阴性供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，无相同颜色的荧光斑点；
进一步优选的，所述以甘草对照药材、桑叶对照药材、枇杷叶对照药材为对照的薄层色谱法鉴别为：
(1)供试品溶液的制备：取本品粉末5g，精密称定，加乙醚40ml，加热回流50分钟，滤过，弃去醚液，药渣挥干后加甲醇30ml，超声处理35分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇定容至1-2ml，作为供试品溶液；
(2)对照药材溶液的制备：另取甘草对照药材1g，桑叶对照药材1g，枇杷叶对照药材1g，同法制成对照药材溶液；
(3)阴性供试品溶液的制备：精密称取甘草、桑叶、枇杷叶阴性供试品，同法制成阴性供试品溶液；
(4)照薄层色谱法鉴别：照《中国药典》2015年版四部通则0502薄层色谱法试验，吸取上述四种溶液各2μl，分别点于同一用高效硅胶G薄层板上，以体积比为15：1：1：2的乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；阴性供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，无相同颜色的荧光斑点。
所述以人参皂苷Re对照品为对照的薄层色谱法鉴别为
(1)供试品溶液的制备：取本品粉末4-5g，加水30-40ml，35-45℃超声处理30min，滤过，滤液加乙醚振摇提取，弃去乙醚层，水层用水饱和的正丁醇提取，合并正丁醇液；用饱和碳酸氢钠洗涤，合并正丁醇液；再用正丁醇饱和的水洗涤，合并正丁醇液，蒸干，残渣加1-2ml乙醇使其溶解，作为供试品溶液；
(2)对照药材溶液的制备：取人参皂苷Re对照品，加乙醇制成每1mL中含有0.5mg人参皂苷Re对照品的溶液，作为对照品溶液；
(3)照薄层色谱法鉴别：吸取对照品溶液、供试品溶液，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-乙醇＝25-30:60-65:10-15为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。
优选的，所述以人参皂苷Re对照品为对照的薄层色谱法鉴别为
(1)供试品溶液的制备：取本品粉末5g，加水35ml，40℃超声处理30min，滤过，滤液加乙醚振摇提取，弃去乙醚层，水层用水饱和的正丁醇提取，合并正丁醇液；用饱和碳酸氢钠洗涤，合并正丁醇液；再用正丁醇饱和的水洗涤，合并正丁醇液，蒸干，残渣加1-2ml乙醇使其溶解，作为供试品溶液；
(2)对照药材溶液的制备：取人参皂苷Re对照品，加乙醇制成每1mL中含有0.5mg人参皂苷Re对照品的溶液，作为对照品溶液；
(3)照薄层色谱法鉴别：吸取对照品溶液、供试品溶液，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-乙醇＝25:60:15为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。
所述检查法为：
照中国药典2015版通则颗粒剂检查，粒度不能通过一号筛和五号筛的总和不能过物料总量的15％；水分不得过不得过8.0％；需氧菌总数≤500cfu/g；霉菌和酵母菌总数≤50cfu/g；大肠埃希菌不得检出。
所述含量测定方法为：
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.1％甲酸水溶液为流动相B，以0.1％甲酸乙腈溶液为流动相A，在超高效液相中，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为237nm，流速为每分钟0.5ml，进样量为1μl。理论板数按甘草苷峰计算应不低于5000。
对照品溶液的制备：取甘草苷对照品、甘草酸铵对照品适量，精密称定，加70％乙醇制成每1ml含甘草苷15μg、甘草酸40μg的混合对照品溶液。
供试品溶液的制备：取以甘草对照药材、桑叶对照药材、枇杷叶对照药材为对照的薄层色谱法鉴别项下供试品溶液1ml，用70％乙醇定容至50ml，摇匀，再取1ml用70％乙醇定容至50ml，摇匀即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液1μl，供试品溶液1μl，注入超高效液相色谱仪，测定，即得；本品按干燥品计算，含甘草苷(C21H22O9)含量的不低于2.5％，含甘草酸(C42H62O16)含量的均值为不低于4.5％。
本发明具有以下优点：
1、本发明对鉴别方法进行优化，对桑叶、枇杷叶、人参进行薄层鉴别，优化了甘草的含量的测定，准确全面地控制增加润肺药物组合物的质量。
2、本发明在薄层色谱鉴别中，做了大量的实验，优化了供试品溶液的制备方法以及展开剂的选择，采用只提取一次供试品溶液，供三种药材鉴别，实现甘草、桑叶、枇杷叶同时鉴别，本供试品溶液还可以由于含量测定，节省供试品处理时间。
3、经方法学验证试验，结果表明本方法在不同薄层板、温度、湿度条件下，色谱图斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，不同条件下均能得到较好的鉴别色谱,验证试验表明重现性好、耐用性好。
4、按本发明检测方法学验证:甘草苷进样量在76.65～1533μg范围内呈良好的线性关系回归方程为：Y＝2.9768X+5.5425,相关系数R2＝1，甘草酸铵的线性范围为200.3～4006μg,线性方为:Y＝1.9671X+13.967,R2＝1。仪器精密度好；重复性良好；甘草苷和甘草酸铵在10h内相对稳定，甘草苷稳定性RSD％为1.52％，甘草酸铵稳定性RSD％为1.12％，表明此甘草苷和甘草酸铵的测定方法具有良好的重复性；所以该方法符合药品质量标准分析方法验证要求。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1
【性状】本品为颗粒剂，内容物为黄色至棕色粉末；气微，味苦。
【鉴别】
甘草、桑叶、枇杷叶的薄层色谱鉴别
供试品溶液的制备：取本品粉末3g，精密称定，加乙醚20ml，加热回流30分钟，滤过，弃去醚液，药渣挥干后加甲醇10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇定容至1ml，作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：另取甘草对照药材0.5g，桑叶对照药材0.5g，枇杷叶对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；
阴性供试品溶液的制备：精密称取分别缺甘草、桑叶、枇杷叶阴性供试品，同法制成阴性供试品溶液；
照薄层色谱法鉴别：照《中国药典》2015年版四部通则0502薄层色谱法试验，吸取上述四种溶液各1μl，分别点于同一用高效硅胶G薄层板上，以体积比为15：1：1：2的乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；阴性供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，无相同颜色的荧光斑点；
人参的薄层色谱鉴别
供试品溶液的制备：取本品粉末4g，加水30-40ml，35-45℃超声处理30min，滤过，滤液加乙醚振摇提取，弃去乙醚层，水层用水饱和的正丁醇提取，合并正丁醇液；用饱和碳酸氢钠洗涤，合并正丁醇液；再用正丁醇饱和的水洗涤，合并正丁醇液，蒸干，残渣加1-2ml乙醇使其溶解，作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：取人参皂苷Re对照品，加乙醇制成每1mL中含有0.5mg人参皂苷Re对照品的溶液，作为对照品溶液；
照薄层色谱法鉴别：吸取对照品溶液、供试品溶液，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-乙醇＝25:60:10为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。
【检查】粒度和粒度分布不能通过一号筛与能通过五号筛的总和不得超过15％；(通则0982第二法双筛分法)
水分不得超过8.0％(通则0832)
装量差异 不得过5.0％(通则0942)
溶化性应 取本药物1袋，加70℃-80℃水200ml，搅拌5分钟，立即观察，可溶颗粒应全部溶化或轻微浑浊，不得有异物，不得有焦屑；(通则0921)
微生物限度 应符规定(通则1105)(通则1106)(通则1107)
【含量测定】照高效液相色谱法(通则0512)测定。
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.1％甲酸水溶液为流动相B，以0.1％甲酸乙腈溶液为流动相A，在超高速液相中，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为237nm，流速为每分钟0.5ml，进样量为1μl。理论板数按甘草苷峰计算应不低于5000。
对照品溶液的制备：取甘草苷对照品、甘草酸铵对照品适量，精密称定，加70％乙醇制成每1ml含甘草苷15μg、甘草酸40μg的混合对照品溶液。
供试品溶液的制备：取以甘草对照药材、桑叶对照药材、枇杷叶对照药材为对照的薄层色谱法鉴别项下供试品溶液1ml，用70％乙醇定容至50ml，摇匀，再取1ml用70％乙醇定容至50ml，摇匀即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液1μl，供试品溶液1μl，注入超高效液相色谱仪，测定，即得；本品按干燥品计算，含甘草苷(C21H22O9)含量的不低于2.5％，含甘草酸(C42H62O16)含量的均值为不低于4.5％。
实施例2
【性状】本品为颗粒剂，内容物为黄色至棕色粉末；气微，味苦。
【鉴别】
甘草、桑叶、枇杷叶的薄层色谱鉴别
供试品溶液的制备：取本品粉末4g，精密称定，加乙醚30ml，加热回流50分钟，滤过，弃去醚液，药渣挥干后加甲醇20ml，超声处理40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇定容至1ml，作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：另取甘草对照药材0.8g，桑叶对照药材0.8g，枇杷叶对照药材0.8g，同法制成对照药材溶液；
阴性供试品溶液的制备：精密称取甘草、桑叶、枇杷叶阴性供试品，同法制成阴性供试品溶液；
照薄层色谱法鉴别：照《中国药典》2015年版四部通则0502薄层色谱法试验，吸取上述四种溶液各2μl，分别点于同一用高效硅胶G薄层板上，以体积比为15：1：1：2的乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；阴性供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，无相同颜色的荧光斑点；
人参的薄层色谱鉴别
供试品溶液的制备：取本品粉末5g，加水35ml，30℃超声处理30min，滤过，滤液加乙醚振摇提取，弃去乙醚层，水层用水饱和的正丁醇提取，合并正丁醇液；用饱和碳酸氢钠洗涤，合并正丁醇液；再用正丁醇饱和的水洗涤，合并正丁醇液，蒸干，残渣加2ml乙醇使其溶解，作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：取人参皂苷Re对照品，加乙醇制成每1mL中含有0.5mg人参皂苷Re对照品的溶液，作为对照品溶液；
照薄层色谱法鉴别：吸取对照品溶液、供试品溶液，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-乙醇＝25-30:60-65:10-15为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。
【检查】粒度和粒度分布不能通过一号筛与能通过五号筛的总和不得超过15％；(通则0982第二法双筛分法)
水分 不得超过8.0％(通则0832)
装量差异 不得过5.0％(通则0942)
溶化性应 取本药物1袋，加70℃-80℃水200ml，搅拌5分钟，立即观察，可溶颗粒应全部溶化或轻微浑浊，不得有异物，不得有焦屑；(通则0921)
微生物限度 应符规定(通则1105)(通则1106)(通则1107)
【含量测定】照高效液相色谱法(通则0512)测定。
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.1％甲酸水溶液为流动相B，以0.1％甲酸乙腈溶液为流动相A，在超高速液相中，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为237nm，流速为每分钟0.5ml，进样量为1UL。理论板数按甘草苷峰计算应不低于5000。
对照品溶液的制备：取甘草苷对照品、甘草酸铵对照品适量，精密称定，加70％乙醇制成每1ml含甘草苷15μg、甘草酸40μg的混合对照品溶液。
供试品溶液的制备：取以甘草对照药材、桑叶对照药材、枇杷叶对照药材为对照的薄层色谱法鉴别项下供试品溶液1ml，用70％乙醇定容至50ml，摇匀，再取1ml用70％乙醇定容至50ml，摇匀即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液1μl，供试品溶液1μl，注入超高效液相色谱仪，测定，即得；本品按干燥品计算，含甘草苷(C21H22O9)含量的不低于2.5％，含甘草酸(C42H62O16)含量的均值为不低于4.5％。
实施例3
【性状】本品为颗粒剂，内容物为黄色至棕色粉末；气微，味苦。
【鉴别】
甘草、桑叶、枇杷叶的薄层色谱鉴别
供试品溶液的制备：取本品粉末5g，精密称定，加乙醚40ml，加热回流60分钟，滤过，弃去醚液，药渣挥干后加甲醇30ml，超声处理35分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇定容至2ml，作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：另取甘草对照药材1.5g，桑叶对照药材1.5g，枇杷叶对照药材1.5g，同法制成对照药材溶液；阴性供试品溶液的制备：分别精密称取甘草、桑叶、枇杷叶阴性供试品，同法制成阴性供试品溶液；
照薄层色谱法鉴别：照《中国药典》2015年版四部通则0502薄层色谱法试验，吸取上述四种溶液各2μl，分别点于同一用高效硅胶G薄层板上，以体积比为15：1：1：2的乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；阴性供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，无相同颜色的荧光斑点；
人参的薄层色谱鉴别
供试品溶液的制备：取本品粉末4.5g，加水35ml，40℃超声处理30min，滤过，滤液加乙醚振摇提取，弃去乙醚层，水层用水饱和的正丁醇提取，合并正丁醇液；用饱和碳酸氢钠洗涤，合并正丁醇液；再用正丁醇饱和的水洗涤，合并正丁醇液，蒸干，残渣加1ml乙醇使其溶解，作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：取人参皂苷Re对照品，加乙醇制成每1mL中含有0.5mg人参皂苷Re对照品的溶液，作为对照品溶液；
照薄层色谱法鉴别：吸取对照品溶液、供试品溶液，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-乙醇＝28:62:12为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。
【检查】粒度和粒度分布不能通过一号筛与能通过五号筛的总和不得超过15％；(通则0982第二法双筛分法)
水分 不得超过8.0％(通则0832)
装量差异 不得过5.0％(通则0942)
溶化性应 取本药物1袋，加70℃-80℃水200ml，搅拌5分钟，立即观察，可溶颗粒应全部溶化或轻微浑浊，不得有异物，不得有焦屑；(通则0921)
微生物限度 应符规定(通则1105)(通则1106)(通则1107)
【含量测定】照高效液相色谱法(通则0512)测定。
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.1％甲酸水溶液为流动相B，以0.1％甲酸乙腈溶液为流动相A，在超高速液相中，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为237nm，流速为每分钟0.5ml，进样量为1UL。理论板数按甘草苷峰计算应不低于5000。
对照品溶液的制备：取甘草苷对照品、甘草酸铵对照品适量，精密称定，加70％乙醇制成每1ml含甘草苷15μg、甘草酸40μg的混合对照品溶液。
供试品溶液的制备：取以甘草对照药材、桑叶对照药材、枇杷叶对照药材为对照的薄层色谱法鉴别项下供试品溶液1ml，用70％乙醇定容至50ml，摇匀，再取1ml用70％乙醇定容至50ml，摇匀即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液1μl，供试品溶液1μl，注入超高效液相色谱仪，测定，即得；本品按干燥品计算，含甘草苷(C21H22O9)含量的不低于2.5％，含甘草酸(C42H62O16)含量的均值为不低于4.5％。
实施例4
【性状】本品为颗粒剂，内容物为黄色至棕色粉末；气微，味苦。
【鉴别】
甘草、桑叶、枇杷叶的薄层色谱鉴别
供试品溶液的制备：取本品粉末5g，精密称定，加乙醚50ml，加热回流80分钟，滤过，弃去醚液，药渣挥干后加甲醇30ml，超声处理35分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇定容至1ml，作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：另取甘草对照药材1g，桑叶对照药材1g，枇杷叶对照药材1g，同法制成对照药材溶液；阴性供试品溶液的制备：精密称取甘草、桑叶、枇杷叶阴性供试品，同法制成阴性供试品溶液；
照薄层色谱法鉴别：照《中国药典》2015年版四部通则0502薄层色谱法试验，吸取上述四种溶液各2μl，分别点于同一用高效硅胶G薄层板上，以体积比为15：1：1：2的乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；阴性供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，无相同颜色的荧光斑点；
人参的薄层色谱鉴别
供试品溶液的制备：取本品粉末5g，加水35ml，40℃超声处理30min，滤过，滤液加乙醚振摇提取，弃去乙醚层，水层用水饱和的正丁醇提取，合并正丁醇液；用饱和碳酸氢钠洗涤，合并正丁醇液；再用正丁醇饱和的水洗涤，合并正丁醇液，蒸干，残渣加1ml乙醇使其溶解，作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：取人参皂苷Re对照品，加乙醇制成每1mL中含有0.5mg人参皂苷Re对照品的溶液，作为对照品溶液；
照薄层色谱法鉴别：吸取对照品溶液、供试品溶液，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-乙醇＝30:65:15为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。
【检查】粒度和粒度分布不能通过一号筛与能通过五号筛的总和不得超过15％；(通则0982第二法双筛分法)
水分不得超过8.0％(通则0832)
装量差异 不得过5.0％(通则0942)
溶化性应 取本药物1袋，加70℃-80℃水200ml，搅拌5分钟，立即观察，可溶颗粒应全部溶化或轻微浑浊，不得有异物，不得有焦屑；(通则0921)
微生物限度 应符规定(通则1105)(通则1106)(通则1107)
【含量测定】照高效液相色谱法(通则0512)测定。
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.1％甲酸水溶液为流动相B，以0.1％甲酸乙腈溶液为流动相A，在超高速液相中，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为237nm，流速为每分钟0.5ml，进样量为1UL。理论板数按甘草苷峰计算应不低于5000。
对照品溶液的制备：取甘草苷对照品、甘草酸铵对照品适量，精密称定，加70％乙醇制成每1ml含甘草苷15μg、甘草酸40μg的混合对照品溶液。
供试品溶液的制备：取以甘草对照药材、桑叶对照药材、枇杷叶对照药材为对照的薄层色谱法鉴别项下供试品溶液1ml，用70％乙醇定容至50ml，摇匀，再取1ml用70％乙醇定容至50ml，摇匀即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液1μl，供试品溶液1μl，注入超高效液相色谱仪，测定，即得；本品按干燥品计算，含甘草苷(C21H22O9)含量的不低于2.5％，含甘草酸(C42H62O16)含量的均值为不低于4.5％。
实施例5
【性状】本品为颗粒剂，内容物为黄色至棕色粉末；气微，味苦。
【鉴别】
甘草、桑叶、枇杷叶的薄层色谱鉴别
供试品溶液的制备：取本品粉末8g，精密称定，加乙醚60ml，加热回流120分钟，滤过，弃去醚液，药渣挥干后加甲醇40ml，超声处理40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇定容至2ml，作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：另取甘草对照药材2g，桑叶对照药材2g，枇杷叶对照药材2g，同法制成对照药材溶液；阴性供试品溶液的制备：精密称取甘草、桑叶、枇杷叶阴性供试品，同法制成阴性供试品溶液；
照薄层色谱法鉴别：照《中国药典》2015年版四部通则0502薄层色谱法试验，吸取上述四种溶液各2μl，分别点于同一用高效硅胶G薄层板上，以体积比为15：1：1：2的乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；阴性供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，无相同颜色的荧光斑点；
人参的薄层色谱鉴别
供试品溶液的制备：取本品粉末5g，加水40ml，45℃超声处理30min，滤过，滤液加乙醚振摇提取，弃去乙醚层，水层用水饱和的正丁醇提取，合并正丁醇液；用饱和碳酸氢钠洗涤，合并正丁醇液；再用正丁醇饱和的水洗涤，合并正丁醇液，蒸干，残渣加2ml乙醇使其溶解，作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：取人参皂苷Re对照品，加乙醇制成每1mL中含有0.5mg人参皂苷Re对照品的溶液，作为对照品溶液；
照薄层色谱法鉴别：吸取对照品溶液、供试品溶液，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-乙醇＝30:65:15为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。
【检查】粒度和粒度分布不能通过一号筛与能通过五号筛的总和不得超过15％；(通则0982第二法双筛分法)
水分不得超过8.0％(通则0832)
装量差异不得过5.0％(通则0942)
溶化性应取本药物1袋，加70℃-80℃水200ml，搅拌5分钟，立即观察，可溶颗粒应全部溶化或轻微浑浊，不得有异物，不得有焦屑；(通则0921)
微生物限度应符规定(通则1105)(通则1106)(通则1107)
【含量测定】照高效液相色谱法(通则0512)测定。
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.1％甲酸水溶液为流动相B，以0.1％甲酸乙腈溶液为流动相A，在超高效液相中，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为237nm，流速为每分钟0.5ml，进样量为1UL。理论板数按甘草苷峰计算应不低于5000。
对照品溶液的制备：取甘草苷对照品、甘草酸铵对照品适量，精密称定，加70％乙醇制成每1ml含甘草苷15μg、甘草酸40μg的混合对照品溶液。
供试品溶液的制备：取以甘草对照药材、桑叶对照药材、枇杷叶对照药材为对照的薄层色谱法鉴别项下供试品溶液1ml，用70％乙醇定容至50ml，摇匀，再取1ml用70％乙醇定容至50ml，摇匀即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液1μl，供试品溶液1μl，注入超高效液相色谱仪，测定，即得；本品按干燥品计算，含甘草苷(C21H22O9)含量的不低于2.5％，含甘草酸(C42H62O16)含量的均值为不低于4.5％。
实验例：为证明本发明的科学性与合现性，进行了以下方法学实验研究：
实验例1：
1材料、设备及试剂
1.1材料
样品:本发明药物组合物(组方：桑叶35kg，煅石膏30kg，甘草14kg，人参14kg，胡麻仁15kg，阿胶6kg，麦冬15kg，杏仁5kg，枇杷叶70kg。
制备方法(1)将煅石膏粉碎，加3倍量水煎煮3次，每次1小时，滤液过滤，合并滤液，混合均匀，浓缩，干燥，粉碎成细粉备用；
2)按配方称取重量份的桑叶、麦冬、枇杷叶，用5倍量65％的乙醇加热提取2次，每次3小时，过滤，合并滤液，滤液浓缩、干燥、粉碎成细粉备用；
3)按配方称取重量份的甘草，加入5倍量的50％的乙醇，浸泡2小时，加热提取3次，每次时间为1.5小时，提取温度100℃，过滤，合并提取液，减压浓缩后70℃-80℃下干燥，粉碎成细粉备用；
4)按配方称取重量份的胡麻仁、杏仁，采用CO2超临界萃取，萃取压力为18MPa，萃取温度40℃，萃取时间100分钟，萃取物用环糊精包合后干燥，粉碎成细粉备用；
5)按配方称取重量份的人参，分别粉碎，过80目筛，混匀，得细粉备用；
6)将步骤1)至5)备用的细粉混合均匀，加入1/20的淀粉，再加入热熔后的阿胶，加入粘合剂和润湿剂，制软材，制粒，干燥，整粒，总混得颗粒剂。
批号：170601、170602、170603、170604、170605、170701、170702、170703、170704、170705共10批
对照品：人参皂苷Re对照品
对照品来源：中国食品药品检定研究院
对照药材：甘草对照药材、桑叶对照药材、枇杷叶对照药材；
对照药材来源：中国药品生物制品检定所
1.2设备
薄层板：青岛海洋化工厂分厂硅胶G商品板(规格：200×100mm青岛海洋化工厂分厂高效薄层板(规格：200×100mm)
数显恒温水浴锅：常州普天仪器制造有限公司
1.3试剂
乙酸乙酯：成都市科隆化学品有限公司
乙醚：重庆川东化工(集团)有限公司
碳酸氢钠：天津市科密欧化学试剂有限公司
正丁醇：重庆川东化工(集团)有限公司
甲醇：重庆川东化工(集团)有限公司
甲酸：重庆川东化工(集团)有限公司
冰醋酸：重庆川东化工(集团)有限公司
三氯甲烷：重庆川东化工(集团)有限公司
乙醇：重庆川东化工(集团)有限公司
2检测
2.1.甘草、桑叶、枇杷叶的薄层色谱鉴别
2.1.1供试品溶液的制备：
方法一：取本品粉末3g，加乙醚20ml，加热回流30分钟，滤过，弃去醚液，药渣挥干后加甲醇10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；
方法二：取本品粉末8g，加乙醚60ml，加热回流120分钟，滤过，弃去醚液，药渣挥干后加甲醇40ml，超声处理40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；
方法三(优选方法)：取本品粉末5g，加乙醚30ml，加热回流40分钟，滤过，弃去醚液，药渣挥干后加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；
方法四(对比例)：取本品粉末5g，加乙醚40ml，加热回流1小时，滤过，弃去醚液，药渣加甲醇30ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水40ml使溶解，用正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用水洗涤3次，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液。
2.1.2对照药材溶液的制备：
方法一(优选方法)：另取甘草对照药材1g，桑叶对照药材1g，加乙醚30ml，加热回流40分钟，滤过，弃去醚液，药渣挥干后加甲醇20ml，超声处理35分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为对照药材溶液。
方法二(对比例)：另取甘草对照药材1g，桑叶对照药材1g，加乙醚40ml，加热回流1小时，滤过，弃去醚液，药渣加甲醇30ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水40ml使溶解，用正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用水洗涤3次，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为照药材溶液。
2.1.3测定结果:
取上述由2.1.1方法一，方法二，方法三(优选方法)，方法四处理供试品溶液及对照药材溶液2.1.2(方法一)2μl，分别点于同一高效薄层板上，以体积比为15：1：1：2的乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视。供试品色谱中，2.1.1方法一，方法二，方法三斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中，且在与对2.1.2照药材溶液(方法一)色谱相应的位置上，显一个以上相同颜色的荧光斑点。2.1.1方法四(对比例)斑点暗淡，颜色浅，不清晰，Rf值适中，在与2.1.2对照药材溶液(方法一)色谱相应的位置上，显一个以上相同颜色的荧光斑点。
取上述由2.1.1方法一，方法二，方法三(对比例)，方法四处理供试品溶液及对照药材溶液2.1.2(方法二)2μl，分别点于同一高效薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水15：1：1：2为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视。供试品色谱中，2.1.1方法一，方法二斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中，且在与2.1.2对照药材溶液(方法一)色谱相应的位置上，显一个以上相同颜色的荧光斑点。2.1.1方法三(对比例)斑点暗淡，颜色浅，不清晰，Rf值适中，在与对照药材溶液(方法一)色谱相应的位置上，显一个以上相同颜色的荧光斑点。
取上述由对照药材溶液2.1.1方法一和方法二的两种溶液各10μl，分别点于不同高效薄层板上，2.1.1方法一以比例以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水15：1：1：2为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视。2.1.2方法二中两种对照药材相应的荧光斑点在方法一的图谱中都能对应找到，且显相同颜色。
结论：在处理供试品时，2.1.1方法一、方法二方法三采用超声处理，缩短了蒸干时间，实验结果显示2.1.1方法一，方法二斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中，且在与对照药材溶液2.1.2(方法一)色谱相应的位置上，显一个以上相同颜色的荧光斑点。2.1.1方法三(对比例)斑点暗淡，颜色浅，不清晰，Rf值适中，说明蒸干时间长对影响实验结果，本发明能有效缩短蒸干时间，在对照品处理时两种对照药材同时置于一容器处理，操作方便简化，节约时间，能达到检测效果。
2.2人参的薄层鉴别
2.2.1供试品溶液的制备：
方法一：取本品粉末5g，加水35ml，40℃超声处理30min，滤过，滤液加乙醚振摇提取，弃去乙醚层，水层用水饱和的正丁醇提取，合并正丁醇液；用饱和碳酸氢钠洗涤，合并正丁醇液；再用正丁醇饱和的水洗涤，合并正丁醇液，蒸干，残渣加1-2ml乙醇使其溶解，作为供试品溶液；
方法二(对比例)：采用CN200510200881.2治疗肿瘤的注射制剂的质量控制方法制备的供试品溶液；
取取本品粉末5g，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取3次，合并提取液，置水浴上蒸干，残渣用蒸馏水5ml溶解，加入预先制备好的内径1～1.5cm、长15cm、填充12cm的DA-201树脂后，再填充2g中性氧化铝的DA-201树脂柱上，用水100ml洗涤，再用60％甲醇液50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；
2.2.2测定结果:
取人参皂苷Re对照品，加乙醇制成每1mL中含有0.5mg人参皂苷Re对照品的溶液，作为对照品溶液，取上述由2.2.1方法一，方法二处理供试品溶液和对照品溶液各2μl，分别点于同一高效薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-乙醇＝25:60:15为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，方法一处理的供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点；
方法二处理的供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，斑点暗淡，颜色浅，不清晰，斑点分离度差。
结论：本发明的方法，更适用于本药物制剂中人参皂苷Re的鉴别，CN200510200881.2治疗肿瘤的注射制剂的质量控制方法的方法不记入正文。
2.2.3为了验证本发明试验方法、条件及重现性，做如下实验：
用上述方法一处理10批不同批次的样品，同时与对比例的方法进行实验比较，按规定的方法展开，结果见表1。
表1试验方法、条件及重现性试验结果
| 序号 | 批号 | 结果 |
| 1 | 170601 | 斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好 |
| 2 | 170602 | 斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好 |
| 3 | 170603 | 斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好 |
| 4 | 170604 | 斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好 |
| 5 | 170605 | 斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好 |
| 6 | 170701 | 斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好 |
| 7 | 170702 | 斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好 |
| 8 | 170703 | 斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好 |
| 9 | 170704 | 斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好 |
| 10 | 170705 | 斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中，重现性好 |
| 11 | 对比例 | 斑点不明显，分离度不符合要求，重现性差 |
2.2.4耐用性
2.2.4.1不同薄层板的比较
取2.2.1方法一项下的供试品溶液，比较了青岛海洋化工厂分厂硅胶G商品板和高效硅胶G商品板(各10批次的样品)，结果见表2。
表2：不同薄层板耐用性结果表
结果高效硅胶板商品板斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中；硅胶G商品板斑点清晰，分离达到要求,Rf值适中，故本方法耐用性好。
2.2.4.2不同湿度的比较
比较了低湿度(30％)和高湿度(75％)环境下高效薄层板展开效果，结果见表3。
表3：低湿度(30％)和高湿度(75％)环境下高效薄层板展开效果表
| 批号 | 低湿度(30％) | 高湿度(75％) |
| 170601 | 斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 170602 | 斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 170603 | 斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 170604 | 斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 170605 | 斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 170701 | 斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 170702 | 斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 170703 | 斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 170704 | 斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中 |
| 170705 | 斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中 | 斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中 |
结果：斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，两个条件下均能得到较好的鉴别色谱。
经上述方法学验证试验，结果表明本发明在供试品处理方法中使用超声处理，明显减少蒸干时间，同时斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中；不同湿度条件下，用高效薄层板和硅胶G商品板进行试验，色谱图斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，验证试验表明重现性好、耐用性好。
3.【检查】
依据《中国药典》相关内容，结合本品特性，研究制定了相应的检查项目。
3.1水份不得超过8.0％
表4水分结果表
3.2粒度和粒度分布测定法即通则0982第二法双筛分法测定，不能通过一号筛与能通过五号筛的总和不得超过15％。实测十个不同批次样品各1批，结果见表5
表5粒度和粒度分布结果表
3.3装量差异取本药物10袋，除去包装，分别精密称定每袋内容物的重量，求出每袋内容物的装量与平均装量。每袋装量与标示装量比较，超出装量差异限度的颗粒剂不得多于2袋，并不得有1袋超出装量差异限度1倍，平均装量或标示装量装量差异限度士5％；结果见表6
表6装量差异测定结果表
3.4微生物检验
需氧菌总数≤20cfu/g；霉菌和酵母菌总数≤10cfu/g；大肠埃希菌未检出。
4【含量测定】
仪器与试药
超高效液相色谱仪：Waters ACQUITY UPLC-H-Class超高效液相色谱仪系统；Waters Quaternary Solvent Manager四元泵；Sample Manager-FTN自动进样器；WatersUPLC PDA检测器；Empower 3色谱工作站；
色谱柱：Acclaim RSLC 120C18(柱长为100mm，内径为2.1mm，粒径为2.2μm)色谱柱；Waters T3柱
电子天平：梅特勒托利多ME203TE，
乙腈：乙腈(色谱纯，Thermo Fisher公司)；
乙醇：重庆川东化工(集团)有限公司
甲酸：重庆川东化工(集团)有限公司
KQ-250B超声清洗机(昆山超声仪器有限公司)(功率250W，频率30KHZ)；
控温水浴锅(南通华泰实验仪器有限公司)；
甘草苷对照品、甘草酸铵(中国食品药品检定研究所)。
水为超纯水；其它试剂为分析纯。
4.1方法一
方法来源：参照高效液相色谱法《中国药典》2015年版四部通则0512)测定的方法结合本公司的仪器设备而拟定的.
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.1％甲酸水溶液为流动相B，以0.1％甲酸乙腈溶液为流动相A，在超高速液相中，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为237nm，流速为每分钟0.5ml，进样量为1UL。理论板数按甘草苷峰计算应不低于5000。
对照品溶液的制备：取甘草苷对照品、甘草酸铵对照品适量，精密称定，加70％乙醇制成每1ml含甘草苷15μg、甘草酸40μg的混合对照品溶液。
供试品溶液的制备：取以甘草对照药材、桑叶对照药材、枇杷叶对照药材为对照的薄层色谱法鉴别项下供试品溶液1ml，用70％乙醇定容至50ml，摇匀，再取1ml用70％乙醇定容至50ml，摇匀即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液1μl，供试品溶液1μl，注入超高效液相色谱仪，测定，即得；
4.2方法二:方法二为对比文件
方法来源：色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.05％磷酸溶液为流动相B，在超高效液相中，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为237nm，流速为每分钟0.4ml。理论板数按甘草苷峰计算应不低于5000。
对照品溶液的制备取甘草苷对照品、甘草酸铵对照品适量，精密称定，加70％乙醇制成每1ml含甘草苷15μg、甘草酸40μg的溶液，即得(甘草酸重量＝甘草酸铵重量/1.0207)。
供试品溶液的制备取本品约0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％乙醇100ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，取出，放冷，再称定重量，用70％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液1μl，供试品溶液0.5～1μl，注入超高效液相色谱仪，测定，即得。
结论：用此方法测本品中甘草苷、甘草酸铵的含量，供试品处理过程繁杂，供试品图谱杂质峰多，目标峰响应值低，分离差，不再进行此方法的研究。故不载入正文。
针对4.1方法一，进行如下实验
4.2.1线性试验
精密吸取对照品溶液(按甘草苷计浓度为15.33μg/ml)5μl、10μl以及甘草苷对照品溶液(153.3μg/ml)2μl、5μl、10μl注入超高效液相色谱仪,按上述色谱条件测定峰面积,以峰面积(Y)对进样量(X)进行线性回归,线性方程为:Y＝2.9768X+5.5425,R2＝1；表明甘草苷进样量在76.65～1533μg范围内呈良好的线性关系。结果见表7。
表7甘草苷线性试验结果
精密吸取对照品溶液(按甘草酸铵计浓度为40.06μg/ml)5μl、10μl以及甘草酸铵对照品溶液(400.6μg/ml)2μl、5μl、10μl注入超高效液相色谱仪,按上述色谱条件测定峰面积,以峰面积(Y)对进样量(X)进行线性回归,线性方程为:Y＝1.9671X+13.967,R2＝1；表明甘草苷进样量在200.3～4006μg范围内呈良好的线性关系。结果见表8。
表8甘草酸铵线性试验结果
4.2.2仪器精密度试验
取4.1项下制备的对照品溶液，在上述色谱条件下，重复进样6次，测定甘草苷峰面积，计算RSD％(甘草苷)值为1.1842％，表明仪器精密度好，测定结果见表9。
表9仪器精密度试验结果
4.2.4重复性试验
精密称取同一批样品(批号170601)6份，同时按4.1项方法一所述方法测定样品中甘草苷的含量，4.1项方法一平均含量为3.26％，RSD值
1.52％，表明此甘草苷的测定方法具有良好的重复性；结果见表10。
表10重复性试验结果
4..2.5稳定性试验
按4.1项和4.2项下方法各制备供试品溶液一份，室温放置，按拟定色谱条件下于0，2，4，6，8，10h分别进样，测定峰面积。计算RSD％为1.375％，表明4.1方法一项甘草苷在10h内相对稳定。4.4方法二项甘草苷在10h内稳定性RSD％为3.6772％，稳定性试验结果见表11。
表11稳定性试验结果
4.2.6样品含量测定
按4.1方法一的方法的方法对十批样品进行含量测定，同时对比4.2
方法二进行含量检测，结果见表12。
表12十批样品甘草苷含量结果表
表13十批样品甘草酸铵含量结果表
结论：采用本发明的检测方法，甘草苷的线性范围为76.65～1533μg,线性方程为:Y＝2.9768X+5.5425,R2＝1，甘草酸铵的线性范围为200.3～4006μg,线性方程为:Y＝1.9671X+13.967,R2＝1。仪器精密度RSD％为1.1842％，重复性RSD％为1.52％。采用本发明方法处理的供试品溶液的稳定性甘草苷RSD％为1.375％，甘草酸铵RSD％为1.122％，方法二(对比例)RSD％为3.6772％，采用本发明方法供试品的响应值高，结果准确可靠，该方法简便、重复性好,可有效地控制本药物组合物的各种固体制剂的质量。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作出一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (6)
1.一种润肺的药物组合物的检测方法，其特征在于：该组合物由桑叶20-50份，煅石膏15-45份，甘草10-18份，人参13-18份，胡麻仁13-18份，阿胶3-9份，麦冬13-18份，杏仁3-8份，枇杷叶50-90份组成，所述检测方法包括以甘草对照药材、桑叶对照药材、枇杷叶对照药材为对照的薄层色谱法鉴别，以人参皂苷Re对照品为对照的薄层色谱法鉴别，检查法，以甘草苷对照品、甘草酸铵对照品为对照的超高效液相色谱法含量测定；
以甘草对照药材、桑叶对照药材、枇杷叶对照药材为对照的薄层色谱法鉴别为取本品粉末3-8g，精密称定，加乙醚20-60ml，加热回流30-120分钟，滤过，弃去醚液，药渣挥干后加甲醇10-40ml，超声处理30-40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇定容至1-2ml，作为供试品溶液；另取甘草对照药材0.5-2g，桑叶对照药材0.5-2g，枇杷叶对照药材0.5-2g，同法制成对照药材溶液；精密称取分别缺少甘草、桑叶、枇杷叶的阴性供试品，同法制成阴性供试品溶液；照《中国药典》2015年版四部通则0502薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、甘草对照药材溶液、桑叶对照药材溶液、枇杷叶对照药材溶液以及缺少甘草的阴性供试品溶液、缺少桑叶的阴性供试品溶液和缺少枇杷叶的阴性供试品溶液各1～2μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以体积比为15：1：1：2的乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视；
以人参皂苷Re对照品为对照的薄层色谱法鉴别为：取本品粉末4-5g，加水30-40ml，35-45℃超声处理30min，滤过，滤液加乙醚振摇提取，弃去乙醚层，水层用水饱和的正丁醇提取，合并正丁醇液；用饱和碳酸氢钠洗涤，合并正丁醇液；再用正丁醇饱和的水洗涤，合并正丁醇液，蒸干，残渣加1-2ml乙醇使其溶解，作为供试品溶液；取人参皂苷Re对照品，加乙醇制成每1mL中含有0.5mg人参皂苷Re对照品的溶液，作为对照品溶液；吸取对照品溶液、供试品溶液，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-乙醇＝25-30:60-65:10-15为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点；
检查法为：照《中国药典》2015年版四部通则颗粒剂检查，粒度不能通过一号筛和五号筛的总和不能过物料总量的15％；水分不得过8.0％；需氧菌总数≤500cfu/g；霉菌和酵母菌总数≤50cfu/g；大肠埃希菌不得检出；
以甘草苷对照品、甘草酸铵对照品为对照的超高效液相色谱法含量测定方法为：色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；使用超高效液相色谱法，以0.1％甲酸水溶液为流动相B，以0.1％甲酸乙腈溶液为流动相A，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为237nm，流速为每分钟0.5ml，进样量为1μl；理论板数按甘草苷峰计算应不低于5000；
时间（min） 流动相A 流动相B
0-3 0 100
3-12 0-10 100-90
12-20 10-30 90-70
20-24 30-90 70-10
24-28 90-0 10-100
对照品溶液的制备：取甘草苷对照品、甘草酸铵对照品适量，精密称定，加70％乙醇制成每1ml含甘草苷15μg、甘草酸40μg的混合对照品溶液；
供试品溶液的制备：取以甘草对照药材、桑叶对照药材、枇杷叶对照药材为对照的薄层色谱法鉴别项下供试品溶液1ml，用70％乙醇定容至50ml，摇匀，再取1ml用70％乙醇定容至50ml，摇匀即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液1μl，供试品溶液1μl，注入超高效液相色谱仪，测定，即得；本品按干燥品计算，含甘草苷含量的不低于2.5％，含甘草酸含量的均值为不低于4.5％。
2.根据权利要求1所述的药物组合物的检测方法，其特征在于:以甘草对照药材、桑叶对照药材、枇杷叶对照药材为对照的薄层色谱法鉴别为：取本品粉末4-7g，精密称定，加乙醚30-50ml，加热回流40-60分钟，滤过，弃去醚液，药渣挥干后加甲醇10-40ml，超声处理32-37分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇定容至1-2ml，作为供试品溶液；另取甘草对照药材1-1.5g，桑叶对照药材1-1.5g，枇杷叶对照药材1-1.5g，同法制成对照药材溶液；精密称取分别缺少甘草、桑叶、枇杷叶的阴性供试品，同法制成阴性供试品溶液；照《中国药典》2015年版四部通则0502薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、甘草对照药材溶液、桑叶对照药材溶液、枇杷叶对照药材溶液以及缺少甘草的阴性供试品溶液、缺少桑叶的阴性供试品溶液和缺少枇杷叶的阴性供试品溶液各1～2μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以体积比为15：1：1：2的乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视。
3.根据权利要求2所述的药物组合物的检测方法，其特征在于:以甘草对照药材、桑叶对照药材、枇杷叶对照药材为对照的薄层色谱法鉴别为：取本品粉末5g，精密称定，加乙醚40ml，加热回流50分钟，滤过，弃去醚液，药渣挥干后加甲醇30ml，超声处理35分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇定容至1-2ml，作为供试品溶液；另取甘草对照药材1g，桑叶对照药材1g，枇杷叶对照药材1g同法制成对照药材溶液；精密称取分别缺少甘草、桑叶、枇杷叶的阴性供试品，同法制成阴性供试品溶液；照《中国药典》2015年版四部通则0502薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、甘草对照药材溶液、桑叶对照药材溶液、枇杷叶对照药材溶液以及缺少甘草的阴性供试品溶液、缺少桑叶的阴性供试品溶液和缺少枇杷叶的阴性供试品溶液各1～2μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以体积比为15：1：1：2的乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视。
4.根据权利要求1所述的药物组合物的检测方法，其特征在于，以人参皂苷Re对照品为对照的薄层色谱法鉴别为：取本品粉末5g，加水35ml，40℃超声处理30min，滤过，滤液加乙醚振摇提取，弃去乙醚层，水层用水饱和的正丁醇提取，合并正丁醇液；用饱和碳酸氢钠洗涤，合并正丁醇液；再用正丁醇饱和的水洗涤，合并正丁醇液，蒸干，残渣加1-2ml乙醇使其溶解，作为供试品溶液；取人参皂苷Re对照品，加乙醇制成每1mL中含有0.5mg人参皂苷Re对照品的溶液，作为对照品溶液；吸取对照品溶液、供试品溶液，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-乙醇＝25:60:15为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。
5.根据权利要求1-4中任意一项所述的药物组合物的检测方法，其特征在于，所述检测方法为：
以甘草对照药材、桑叶对照药材、枇杷叶对照药材为对照的薄层色谱法鉴别为：取本品粉末5g，精密称定，加乙醚40ml，加热回流50分钟，滤过，弃去醚液，药渣挥干后加甲醇30ml，超声处理35分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇定容至2ml，作为供试品溶液；另取甘草对照药材1g，桑叶对照药材1g，枇杷叶对照药材1g同法制成对照药材溶液；精密称取分别缺少甘草、桑叶、枇杷叶的阴性供试品，同法制成阴性供试品溶液；照《中国药典》2015年版四部通则0502薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、甘草对照药材溶液、桑叶对照药材溶液、枇杷叶对照药材溶液以及缺少甘草的阴性供试品溶液、缺少桑叶的阴性供试品溶液和缺少枇杷叶的阴性供试品溶液各1～2μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以体积比为15：1：1：2的乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视；
以人参皂苷Re对照品为对照的薄层色谱法鉴别为：取本品粉末5g，加水35ml，40℃超声处理30min，滤过，滤液加乙醚振摇提取，弃去乙醚层，水层用水饱和的正丁醇提取，合并正丁醇液；用饱和碳酸氢钠洗涤，合并正丁醇液；再用正丁醇饱和的水洗涤，合并正丁醇液，蒸干，残渣加1-2ml乙醇使其溶解，作为供试品溶液；取人参皂苷Re对照品，加乙醇制成每1mL中含有0.5mg人参皂苷Re对照品的溶液，作为对照品溶液；吸取对照品溶液、供试品溶液，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-乙醇＝25:60:15为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点；
检查法为：照《中国药典》2015年版四部通则颗粒剂检查，粒度不能通过一号筛和五号筛的总和不能过物料总量的15％；水分不得过8.0％；需氧菌总数≤500cfu/g；霉菌和酵母菌总数≤50cfu/g；大肠埃希菌不得检出；
以甘草苷对照品、甘草酸铵对照品为对照的超高效液相色谱法含量测定方法为：色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.1％甲酸水溶液为流动相B，以0.1％甲酸乙腈溶液为流动相A，使用超高效液相色谱法，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为237nm，流速为每分钟0.5ml，进样量为1μl，理论板数按甘草苷峰计算应不低于5000；
时间（min） 流动相A 流动相B
0-3 0 100
3-12 0-10 100-90
12-20 10-30 90-70
20-24 30-90 70-10
24-28 90-0 10-100
对照品溶液的制备：取甘草苷对照品、甘草酸铵对照品适量，精密称定，加70％乙醇制成每1ml含甘草苷15μg、甘草酸40μg的混合对照品溶液；
供试品溶液的制备：取以甘草对照药材、桑叶对照药材、枇杷叶对照药材为对照的薄层色谱法鉴别项下供试品溶液1ml，用70％乙醇定容至50ml，摇匀，再取1ml用70％乙醇定容至50ml，摇匀即得；测定法分别精密吸取对照品溶液1μl，供试品溶液1μl，注入超高效液相色谱仪，测定，即得；
本品按干燥品计算，含甘草苷含量的不低于2.5％，含甘草酸含量的均值为不低于4.5％。
6.根据权利要求5所述的药物组合物的检测方法，其特征在于，所述药物组合物含甘草苷含量为3.3％，含甘草酸含量为4.8％。
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