CN109358124A

CN109358124A - 止血调经颗粒的质量检测方法

Info

Publication number: CN109358124A
Application number: CN201811267299.1A
Authority: CN
Inventors: 高尚
Original assignee: ANBANG PHARMACEUTIC Co Ltd HUNAN PROV
Current assignee: ANBANG PHARMACEUTIC Co Ltd HUNAN PROV
Priority date: 2018-10-29
Filing date: 2018-10-29
Publication date: 2019-02-19

Abstract

本发明涉及止血调经颗粒的质量检测方法，其中包括液相色谱供试液制备方法，所述止血调经颗粒由黄芪、阿胶、党参、白芍、当归、仙鹤草、茜草、佛手和续断制备而成，其特征在于：所述方法包括下述步骤：S1：取预订预定量药物，以70％甲醇水溶液提取，提取液回收溶剂至干；S2：以水溶解残渣，过中性氧化铝柱，以70％甲醇洗脱；S3：浓缩洗脱液至干，以水溶解，用水饱和正丁醇萃取；S4：以氨试液洗涤萃取液，浓缩正丁醇液至干；S5：残渣过D101型大孔吸附树脂柱。根据本发明的方法获得的液相色谱供试液可以稳定可靠地监控止血调经颗粒的质量。

Description

止血调经颗粒的质量检测方法

技术领域

本发明涉及中药的质量检测方法，具体涉及供试液制备和液相色谱分析方法。

背景技术

止血调经颗粒，主要由阿胶、当归、佛手、黄芪、党参、白芍等九味药材制剂而成，具有益气补血、止血调经作用，可用于治疗上环、皮埋所致的月经不调证属气血两虚者，证见经期延长，月经色淡质稀、神疲乏力、面色苍白等，临床疗效确切。

申请人是止血调经颗粒在国内唯一的生产厂家，现有技术中尚没有公开专用于本药品的质量检测方法。

摸索止血调经颗粒的质量检测方法，首先需要确定待考察的活性成分，这存在很大困难。因为本药品成分复杂，且各原料药材性质差别迥异，例如其中的黄芪、党参与阿胶、仙鹤草之间在药性、活性成分种类上就差别很大，单就仙鹤草而言，在中成药就包含了种类繁多的药物成分。如何从大量的活性成分中选择具有代表性的、与药物质量正相关一个或者多个成分作为考察对象，是一个难点。其次，同样因为成分复杂的原因，在通过液相色谱进行分析时，如何获得纯度较高的供试液，以排除其他成分的干扰也是技术人员需要克服的困难。在解决上述两个问题之后，如何找到可靠性高的色谱分析条件，也需要付出不小的劳动。

发明内容

本发明涉及止血调经颗粒的质量检测方法，其中包括液相色谱供试液制备方法，所述止血调经颗粒由黄芪、阿胶、党参、白芍、当归、仙鹤草、茜草、佛手和续断制备而成，其特征在于：所述方法包括下述步骤：S1：取预定量药物，以70％甲醇水溶液提取，提取液回收溶剂至干；S2：以水溶解残渣，过中性氧化铝柱，以70％甲醇洗脱；S3：浓缩洗脱液至干，以水溶解，用水饱和正丁醇萃取；S4：以氨试液洗涤萃取液，浓缩正丁醇液至干；S5：残渣过D101型大孔吸附树脂柱。根据本发明的方法获得的液相色谱供试液可以稳定可靠地监控止血调经颗粒的质量。

作为优选，本发明的方法采用如下色谱条件检测药品中黄芪甲苷的含量：

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；

流动相：甲醇-水体积比75:25；

柱温30℃；载气：空气流速3.6bar；进样量10μl。

进一步地，色谱柱采用伊利特C18色谱柱，型号为HYPERSIL BDS 4.6×200mm，5μm。

还优选采用SEDEX 75蒸发光散射检测器。

附图说明

图1是本发明色谱条件和浓度范围下获得的标准曲线图；

图2是采用本发明的方法测得缺黄芪的阴性样品的液相色谱图；

图3是采用本发明的方法测得黄芪甲苷对照品的液相色谱图

图4是根据本发明方法获得的本药品的液相色谱图；

其中1为当归对照药材的薄层分析结果，2为佛手对照药材的薄层分析结果，3为对比专利1产品的薄层分析结果，4为实施例1制得的包合物的薄层分析结果，5为实施例2制得的包合物的薄层分析结果，6为实施例3制得的包合物的薄层分析结果。

具体实施方式

下面对本发明的技术方案进行详细阐述。

供试液的制备

申请人经过多年的生产、监测实践得出，在成药的各活性成分中，来自于黄芪的黄芪甲苷的含量容易受到生产条件、储存条件影响，黄芪在本药品配方中起着君药的作用，因此，黄芪甲苷的含量高低即可以体现药品质量的好坏。本发明选择黄芪甲苷为考察成分来测定止血调经颗粒的药物质量。

为了获得可测试出黄芪甲苷含量的供试液，发明人经过了大量摸索研究，以排除众多其他成分的干扰。一方面，由于阿胶的存在，加大了药品中各成分的分离难度；另一方面，产品中从党参、白芍也提出大量的苷类物质，将他们分开，以获得成分相对单一的供试液非常困难。

本发明中，通过下述步骤制备供试液：

S1：取预定量药物，以70％甲醇水溶液提取，提取液回收溶剂至干；

S2：以水溶解残渣，过中性氧化铝柱，以70％甲醇洗脱；

S3：浓缩洗脱液至干，以水溶解，用水饱和正丁醇萃取；

S4：以氨试液洗涤萃取液，浓缩正丁醇液至干；

S5：残渣过D₁₀₁型大孔吸附树脂柱。

本发明中，先用70％的甲醇水溶液提取药物，再用中性氧化铝柱初分离提取物，除去其中的高极性物质和鞣质物质，然后用水饱和正丁醇尽可能提取出其中的苷类。经过氧化铝柱的处理后，正丁醇水饱和液提取的物质种类会单纯得多。氨试液洗去里面的酸性物质，进一步减少了一些略显酸性的苷类物质，使得后面的大孔吸附树脂层析环节更容易进行。

本发明的优选实施方式中，S1步骤采用70％的甲醇进行提取。在使用索氏提取器的情况下，在40分钟内可以提取出所有的黄芪甲苷。较佳的溶剂用量为每克药物5-8ml。作为优选，S2步骤中，用水微热溶解提取物，中性氧化铝柱适宜的长径比是2比1，例如用长6cm、内径3cm的色谱柱。在提取8克药物的实施例中，用70％的甲醇水溶液40ml洗脱氧化铝柱，较好地避免了色谱柱的拖尾。

优选地，在S3步骤中，水溶液用水饱和的正丁醇振摇提取5次；步骤S4中，合并正丁醇液后，用氨试液洗涤2次。

在更优选的方式中，所用D101大孔吸附树脂柱的内径1.5cm，长12cm。以水50ml洗脱，再用40％乙醇30ml洗脱，最后用70％乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干。

本发明通过上述方法，可以充分地提取出药物中的黄芪甲苷，并且在液相色谱分析时呈现很好的分离效果。

在一个典型实施例中，取供试品约8g，研细，精密称定，置索式提取器中，加70％甲醇40ml，加热回流至无色，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水10ml，微热使溶解，过6cm长3cm内径的中性氧化铝柱，用70％甲醇溶液40ml洗脱。浓缩后用10ml水微热溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取5次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次40ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5ml使溶解，放冷，过D101型大孔吸附树脂柱(内径1.5cm,长12cm)，以水50ml洗脱，弃去水液，再用40％乙醇30ml洗脱，弃去洗脱液，继用70％乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，精密吸取1ml于5ml的量瓶中稀释至刻度，即得。

液相色谱分析

仪器与试药岛津LC-10A型高效液相色谱仪。伊利特C18(HYPERSIL BDS4.6×200mm,5um)色谱柱。迪马公司(Dikma Technologies)SEDEX 75蒸发光散射检测器。CLASS-VP数据工作站。黄芪甲苷(批号：0781-200311中国药品生物制品检定所提供)，甲醇为色谱纯，水为重蒸水，其他试剂均为分析纯。

色谱条件的选择以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；通过考察不同流动相的分离效果，结果以甲醇-水(75:25)为流动相；流速1ml/min；柱温为30℃，载气(空气)流速3.6bar；进样量10μl。理论板数按黄芪甲苷计算不低于2000。黄芪甲苷峰与其它化合物的峰分离良好，测定方法快速、准确、重复性好。

对照品溶液的制备精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成1ml含56μg的对照品溶液。

缺黄芪的阴性样品按处方配比，称取除黄芪外的其余各药味适量，按制备工艺制成缺黄芪的阴性样品，同供试品溶液的制备方法制备缺黄芪的阴性样品溶液，按[含量测定]项下方法试验，结果表明：阴性样品的色谱图(图2)中在与对照品黄芪甲苷色谱图(图3)中相同的保留时间处无吸收峰，说明阴性样品无干扰。

线性关系考察精密吸取黄芪甲苷对照品溶液(56μg/ml)3、6、9、12、15μl注入高效液相色谱仪，测定，以峰面积的对数值为纵坐标，进样量的对数值为横坐标，绘制标准曲线。结果表明：黄芪甲苷对照品在0.168～0.84mg范围内线性关系良好，其回归方程为：Y＝1.5356X+5.8521R＝0.9997，结果见表1。

表1 线性关系考察结果

精密度试验取样品(批号：090718)约8g，精密称定,照供试品溶液的制备方法制成供试品溶液，依法测定，连续测定6次，记录色谱图，以峰面积进行计算，测得结果见表2。图4是6号样的色谱图。

表2 精密度试验结果

结果表明，本测定方法的精密度较好。

稳定性试验取样品(批号：090718)约8g，精密称定,照供试品溶液的制备方法制成供试品溶液，25℃室温放置，分别于0、4、8、12、16、20小时进样，每次10μl，记录色谱图，以峰面积进行计算，结果见表3。

表3 稳定性试验结果

结果表明，供试品溶液在20小时内基本稳定。

重复性试验取同一供试品(批号：090718)6份，照供试品溶液的制备方法制成供试品溶液，依法测定，结果见表4。

表4 重复性试验结果

结果表明：本方法重复性较好。

样品含量测定 10批样品，照上述含量测定方法分别测定并计算黄芪甲苷含量，结果见表5。

表5 10批样品中黄芪甲苷的含量测定结果

批号	含量(mg/g)	批号	含量(mg/g)
				090718	0.12	090901	0.15
090902	0.15	090903	0.14
				111101	0.14	111102	0.15
111103	0.15	990508	0.14
				990515	0.15	990522	0.13

根据以上10批样品中黄芪甲苷含量测定结果的平均值为0.142mg/g，按7折计算，暂定本品中每1g含黄芪以黄芪甲苷(C₄₁H₆₈O₁₄)计,不得少于0.10mg。

以上结合具体的实施例对本发明的构思做了详细说明。本领域普通技术人员在获得上述教导之后，可以不费创造性劳动地对上述具体实施方式做出调整，而获得相同或相近的技术效果。例如，尽管本发明的实施例对中草药原料配方使用的是同一组数值，但是本领域技术人员很容易对该配比作调整，或者在小范围内变化数值，这些皆应该理解为落入本发明权利要求书所限定的范围。

Claims

1.止血调经颗粒的质量检测方法，所述止血调经颗粒由黄芪、阿胶、党参、白芍、当归、仙鹤草、茜草、佛手和续断制备而成，其特征在于：包括供试液制备步骤，具体包括下述步骤：

S2：以水溶解残渣，过中性氧化铝柱，以70％甲醇洗脱；

S3：浓缩洗脱液至干，以水溶解，用水饱和正丁醇萃取；

S4：以氨试液洗涤萃取液，浓缩正丁醇液至干；

S5：残渣过D₁₀₁型大孔吸附树脂柱。

2.如权利要求1所述的质量检测方法，步骤S1中，取药量为8g，用索氏提取器提取，甲醇水溶液用量为40毫升。

3.如权利要求1所述的质量检测方法，步骤S2中，所述中性氧化铝柱的柱长6cm，内径3cm。

4.如权利要求1所述的质量检测方法，步骤S3中，以水微热溶解残渣，水溶液用水饱和的正丁醇振摇提取5次。

5.如权利要求1所述的质量检测方法，步骤S4中，合并正丁醇液后，用氨试液洗涤2次。

6.如权利要求2所述的质量检测方法，步骤S5中，所用D₁₀₁大孔吸附树脂柱的内径1.5cm,长12cm。

7.如权利要求6所述的质量检测方法，以水50ml洗脱，再用40％乙醇30ml洗脱，最后用70％乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干。

8.如权利要求1所述的质量检测方法，在步骤S5之后，用甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，精密吸取1ml于5ml的量瓶中稀释至刻度，即获得所述供试液。

9.如权利要求1-8任一项所述的质量检测方法，采用如下色谱条件检测药品中黄芪甲苷的含量：

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；

流动相：甲醇-水体积比75:25；

柱温30℃；载气：空气流速3.6bar；进样量10μl。

10.如权利要求9所述的质量检测方法，色谱柱采用伊利特C18色谱柱，型号为HYPERSILBDS 4.6×200mm，5μm。

11.如权利要求9所述的质量检测方法，采用SEDEX 75蒸发光散射检测器。