CN107782816A - 一种清热解毒凉血通淋药物的检测方法 - Google Patents

一种清热解毒凉血通淋药物的检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种清热解毒凉血通淋药物的质量检测方法，特别是涉及中药制剂中芍药苷的检测方法，属于制药领域。一种癃清片中芍药苷的检测方法，步骤如下：(1)对照品溶液的制备；(2)供试品溶液的制备；(3)采用高效液相色谱仪进行测定，色谱条件为：Diamonsil色谱柱：C18反相色谱柱规格：5μm，250×4.6mm；流动相∶乙腈与磷酸溶液的体积比为10～90∶90～10。本发明的优点是：方便、快速、专属性及重现性好，结果准确可靠，可用于癃清片中芍药苷的定性和定量检测。

Description

一种清热解毒凉血通淋药物的检测方法
技术领域
本发明涉及一种清热解毒凉血通淋药物的检测方法，特别是涉及中药制剂中芍药苷的检测方法，属于制药领域。
背景技术
癃清片是目前市场上销售的一种清热解毒，凉血通淋的中药。用于下焦湿热所致的热淋，症见尿频、尿急、尿痛、腰痛、小腹坠胀。临床药效学实验研究证明，癃清片适宜于治疗老年人泌尿系统感染，有明显的抗炎、镇痛作用，用于治疗泌尿系统感染的有效中成药。
本发明治疗尿路感染及前列腺炎的药物(癃清片)具有明确地抑菌、抗炎、镇痛、利尿、改善微循环、增强机体免疫的作用。其组方中金银花、黄柏、黄连、败酱草、白花蛇舌草清热解毒；赤芍、丹皮、仙鹤草散瘀凉血；泽泻、车前子利水通淋。
《中华人民共和国药典》2015年版一部公开癃清片的处方和制法为：以上十味，泽泻粉碎成细粉，过筛，备用；白花蛇舌草、仙鹤草、金银花、败酱草加水煎煮二次，每次1小时，滤过，合并滤液，滤液浓缩成相对密度为1.25～1.30(50℃)的清膏；其余车前子等五味用60％乙醇加热回流三次，第一次3小时，第二次2小时，第三次1小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，浓缩成相对密度为1.25～1.30(50℃)的清膏。与上述清膏合并，加入泽泻细粉及辅料适量，混匀，制粒，干燥，压制成1000片，或包薄膜衣，即得。每片0.6g。
《中华人民共和国药典》2015年版一部“癃清片”品种项下的检测指标包括：鉴别项下包括泽泻显微鉴别，盐酸小檗碱、丹皮酚、芍药苷薄层色谱鉴别；含量测定项下包括盐酸小檗碱的液相色谱测定。
《中华人民共和国药典》2015年版一部增补版“癃清胶囊”品种项下的检测指标包括：鉴别项下包括泽泻显微鉴别，黄连、黄柏、盐酸小檗碱、丹皮酚、芍药苷、金银花、绿原酸薄层色谱鉴别；含量测定项下包括盐酸小檗碱、盐酸黄柏碱的液相色谱测定。
据文献记载[张晓静,刘德福,丁菲菲,田华,邓雁如,郭利平.HPLC法测定癃清片中表小檗碱、黄连碱、盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱和丹皮酚[J].现代药物与临床,2015,05:527-530.]，采用HPLC法同时测定癃清片中表小檗碱、黄连碱、盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、丹皮酚6种成分。
上述各检测方法中，对于赤芍的检测，仅为芍药苷的薄层鉴别，芍药苷作为赤芍中的主要药效成分，有必要对其含量进行测定。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种检测癃清片制剂中芍药苷的高效液相检测方法。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
一种癃清片中芍药苷的检测方法，步骤为：
(1)对照品溶液的制备：称取芍药苷对照品适量，精密称定，用有机溶剂配置成为浓度为0.1～1.0mg/ml，摇匀，即得；
(2)供试品溶液的制备：取癃清片样品20片，精密称定，研细，取粉末1.0～2.0g精密称定，置50ml具塞锥形瓶中，加10％～100％甲醇25ml～50ml，精密称定，水浴加热回流或超声20～90分钟，放冷至室温，精密称定，用10％～100％有机溶剂补足减失重量，微孔滤膜滤过，作为供试品溶液；
(3)高效液相色谱法测定：色谱条件为：Diamonsil色谱柱；流动相为乙腈与0.1～0.5％磷酸溶液，二者的体积比为10～90∶90～10；检测波长：232nm；流速：0.5ml/min～1.0ml/min；柱温20℃～40℃，分别精密取对照品溶液与供试品溶液各5-20ul，注入所述高效液相色谱仪，测定。
所述步骤(1)中的有机溶剂为甲醇、乙醇或乙腈。
所述步骤(2)中的有机溶剂为甲醇、乙醇或乙腈。
优选的，所述步骤(1)或(2)中的有机溶剂为甲醇。
所述步骤(2)的微孔滤膜的孔径为0.45μm。
所述步骤(3)中流动相，乙腈与0.1～0.5％磷酸溶液的体积比20∶80。
所述步骤(3)中Diamonsil色谱柱为C18反相色谱柱，规格：5μm，250×4.6mm。
本发明优选的一种癃清片中芍药苷的检测方法，所述步骤为：
(1)对照品溶液的制备:取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成0.1mg/ml，作为对照品溶液；
(2)供试品溶液的制备:取癃清片样品20片，精密称定，研细，取粉末2.0g精密称定，置50ml具塞锥形瓶中，加30％甲醇25ml，精密称定，水浴加热回流30分钟，放冷至室温，精密称定，用30％甲醇补足减失重量，选0.45μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液；
(3)采用高效液相色谱仪进行测定:色谱条件为：Diamonsil色谱柱：C18反相色谱柱规格：5μm，250×4.6mm；流动相∶乙腈与0.1％磷酸溶液的体积比为20∶80；检测波长：232nm；流速：1.0ml/min；柱温35℃，分别精密取对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液各20ul，注入所述高效液相色谱仪，测定。
本发明所述癃清片为现有市售药品，其处方为：泽泻、车前子、败酱草、金银花、牡丹皮、白花蛇舌草、赤芍、仙鹤草、黄连、黄柏。
所述癃清片的制法为：泽泻、车前子、败酱草、金银花、牡丹皮、白花蛇舌草、赤芍、仙鹤草、黄连、黄柏；以上十味，泽泻粉碎成细粉，过筛，备用；白花蛇舌草、仙鹤草、金银花、败酱草加水煎煮二次，每次1小时，滤过，合并滤液，滤液浓缩成相对密度为1.25～1.30(50℃)的清膏；其余车前子等五味用60％乙醇加热回流三次，第一次3小时，第二次2小时，第三次1小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，浓缩成相对密度为1.25～1.30(50℃)的清膏；与上述清膏合并，加入泽泻细粉及辅料适量，混匀，制粒，干燥，压制成1000片，或包薄膜衣，即得。
本发明的优点是：方便、快速、专属性及重现性好，结果准确可靠，可用于癃清片中芍药苷的检测，弥补了现有技术的不足。
下面结合附图和具体实施例方式详细说明，并非对本发明的限制。凡依照本发明公开内容所做的本领域等同替换，均属于本发明的保护范围。
附图说明
图1为芍药苷对照品的高效液相色谱图
图2为癃清片的高效液相色谱图
图3为阴性样品的高效液相色谱图
具体实施方式
实施例1：癃清片中芍药苷的检测
一、材料
芍药苷对照品110736-201337购自中国食品药品检定研究院
癃清片15291中新药业集团股份有限公司隆顺榕制药厂
阴性样品：按《中华人民共和国药典》2015年版一部公开癃清片的处方和制法，去除处方中的赤芍和牡丹皮，制法相同。
二、方法
(1)对照品溶液的制备:取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成0.1mg/ml，作为对照品溶液；
(2)供试品溶液的制备:取癃清片样品20片，精密称定，研细，取粉末2.0g精密称定，置50ml具塞锥形瓶中，加30％甲醇25ml，精密称定，水浴加热回流30分钟，放冷至室温，精密称定，用30％甲醇补足减失重量，选0.45μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液；
(3)阴性样品溶液制备：取阴性样品20片，按供试品溶液制备方法制备，作为阴性样品溶液。(本步骤用于方法学验证)
(4)采用高效液相色谱仪进行测定:色谱条件为：Diamonsil色谱柱：C18反相色谱柱规格：5μm，250×4.6mm；流动相∶乙腈与0.1％磷酸溶液的体积比为20∶80；检测波长：232nm；流速：1.0ml/min；柱温35℃，分别精密取对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液各20ul，注入所述高效液相色谱仪，测定。
三、结果
由色谱图可见，在该检测条件下，阴性样品(图3)无明显干扰，癃清片样品(图2)分离度良好，该方法能够用于检测癃清片中的芍药苷。
实施例2：癃清片中芍药苷的检测
一、材料
芍药苷对照品110736-201337购自中国食品药品检定研究院
癃清片15291中新药业集团股份有限公司隆顺榕制药厂
二、方法
(1)对照品溶液的制备:取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成0.1mg/ml，作为对照品溶液；
(2)供试品溶液的制备:取癃清片样品20片，精密称定，研细，取粉末2.0g精密称定，置50ml具塞锥形瓶中，加30％甲醇25ml，精密称定，水浴加热回流30分钟，放冷至室温，精密称定，用30％甲醇补足减失重量，选0.45μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液；
(3)采用高效液相色谱仪进行测定:色谱条件为：Diamonsil色谱柱：C18反相色谱柱规格：5μm，250×4.6mm；流动相∶乙腈与0.1％磷酸溶液的体积比为20∶80；检测波长：232nm；流速：1.0ml/min；柱温35℃，分别精密取对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液各20ul，注入所述高效液相色谱仪，测定。
实施例3：癃清片中芍药苷的检测
一、材料
芍药苷对照品110736-201337购自中国食品药品检定研究院
癃清片15291中新药业集团股份有限公司隆顺榕制药厂
二、方法
(1)对照品溶液的制备：称取芍药苷对照品适量，精密称定，用乙醇配置成为浓度为0.5mg/ml，摇匀，即得；
(2)供试品溶液的制备：取癃清片样品20片，精密称定，研细，取粉末1.0g精密称定，置50ml具塞锥形瓶中，加10％乙醇25ml，精密称定，水浴加热回流或超声20分钟，放冷至室温，精密称定，用10％乙醇补足减失重量，微孔滤膜滤过，作为供试品溶液；
(3)高效液相色谱法测定：色谱条件为：Diamonsil色谱柱，C18反相色谱柱规格：5μm，250×4.6mm；流动相为乙腈与0.2％磷酸溶液，二者的体积比为10∶90；检测波长：232nm；流速：0.5ml/min；柱温20℃，分别精密取对照品溶液与供试品溶液各5ul，注入所述高效液相色谱仪，测定。
实施例4：癃清片中芍药苷的检测
一、材料
芍药苷对照品110736-201337购自中国食品药品检定研究院
癃清片15291中新药业集团股份有限公司隆顺榕制药厂
二、方法
(1)对照品溶液的制备：称取芍药苷对照品适量，精密称定，用乙腈配置成为浓度为1.0mg/ml，摇匀，即得；
(2)供试品溶液的制备：取癃清片样品20片，精密称定，研细，取粉末2.0g精密称定，置50ml具塞锥形瓶中，加100％乙腈50ml，精密称定，水浴加热回流或超声90分钟，放冷至室温，精密称定，用100％乙腈补足减失重量，微孔滤膜滤过，作为供试品溶液；
(3)高效液相色谱法测定：色谱条件为：Diamonsil色谱柱，C18反相色谱柱规格：5μm，250×4.6mm；流动相为乙腈与0.5％磷酸溶液，二者的体积比为90∶10；检测波长：232nm；流速：1.0ml/min；柱温40℃，分别精密取对照品溶液与供试品溶液各20ul，注入所述高效液相色谱仪，测定。

Claims (10)

1.一种癃清片中芍药苷的检测方法，其特征在于步骤为：
(1)对照品溶液的制备：称取芍药苷对照品适量，精密称定，用有机溶剂配置成为浓度为0.1～1.0mg/ml，摇匀，即得；
(2)供试品溶液的制备：取癃清片样品20片，精密称定，研细，取粉末1.0～2.0g精密称定，置50ml具塞锥形瓶中，加10％～100％甲醇25ml～50ml，精密称定，水浴加热回流或超声20～90分钟，放冷至室温，精密称定，用10％～100％有机溶剂补足减失重量，微孔滤膜滤过，作为供试品溶液；
(3)高效液相色谱法测定：色谱条件为：Diamonsil色谱柱；流动相为乙腈与0.1～0.5％磷酸溶液，二者的体积比为10～90∶90～10；检测波长：232nm；流速：0.5ml/min～1.0ml/min；柱温20℃～40℃，分别精密取对照品溶液与供试品溶液各5-20ul，注入所述高效液相色谱仪，测定。
2.根据权利要求1所述的一种癃清片中芍药苷的检测方法，其特征在于：所述步骤(1)中的有机溶剂为甲醇、乙醇或乙腈。
3.根据权利要求1所述的一种癃清片中芍药苷的检测方法，其特征在于：步骤(2)中的有机溶剂为甲醇、乙醇或乙腈。
4.根据权利要求2或3所述的一种癃清片中芍药苷的检测方法，其特征在于：所述步骤(1)或(2)中的有机溶剂为甲醇。
5.根据权利要求1所述的一种癃清片中芍药苷的检测方法，其特征在于：所述步骤(2)的微孔滤膜的孔径为0.45μm。
6.根据权利要求1所述的一种癃清片中芍药苷的检测方法，其特征在于：所述步骤(3)中流动相，乙腈与0.1～0.5％磷酸溶液的体积比20∶80。
7.根据权利要求1所述的一种癃清片中芍药苷的检测方法，其特征在于：所述步骤(3)中Diamonsil色谱柱为C18反相色谱柱，规格：5μm，250×4.6mm。
8.根据权利要求1所述的一种癃清片中芍药苷的检测方法，其特征在于，所述步骤为：
(1)对照品溶液的制备:取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成0.1mg/ml，作为对照品溶液；
(2)供试品溶液的制备:取癃清片样品20片，精密称定，研细，取粉末2.0g精密称定，置50ml具塞锥形瓶中，加30％甲醇25ml，精密称定，水浴加热回流30分钟，放冷至室温，精密称定，用30％甲醇补足减失重量，选0.45μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液；
(3)采用高效液相色谱仪进行测定:色谱条件为：Diamonsil色谱柱：C18反相色谱柱规格：5μm，250×4.6mm；流动相∶乙腈与0.1％磷酸溶液的体积比为20∶80；检测波长：232nm；流速：1.0ml/min；柱温35℃，分别精密取对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液各20ul，注入所述高效液相色谱仪，测定。
9.根据权利要求1至8中任何一项所述的一种癃清片中芍药苷的检测方法，其特征在于：所述癃清片的处方为：泽泻、车前子、败酱草、金银花、牡丹皮、白花蛇舌草、赤芍、仙鹤草、黄连、黄柏。
10.根据权利要求9所述的一种癃清片中芍药苷的检测方法，其特征在于：所述癃清片的制法为：泽泻、车前子、败酱草、金银花、牡丹皮、白花蛇舌草、赤芍、仙鹤草、黄连、黄柏；以上十味，泽泻粉碎成细粉，过筛，备用；白花蛇舌草、仙鹤草、金银花、败酱草加水煎煮二次，每次1小时，滤过，合并滤液，滤液浓缩成相对密度为1.25～1.30(50℃)的清膏；其余车前子等五味用60％乙醇加热回流三次，第一次3小时，第二次2小时，第三次1小时，滤过，合并滤液，回收乙醇，浓缩成相对密度为1.25～1.30(50℃)的清膏；与上述清膏合并，加入泽泻细粉及辅料适量，混匀，制粒，干燥，压制成1000片，或包薄膜衣，即得。
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