CN104101657B - 中药组合物制剂中多种成分含量的测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种中药组合物制剂中多种成分含量的测定方法，属于中药领域，具体制备步骤为：供试品溶液的制备、对照品溶液的制备、UPLC检测、标准曲线的制定及结果计算。本发明的测定周期短、灵敏度高。
Description
技术领域
本发明属于中药分析领域，具体涉及中药成分的含量测定方法。
背景技术
该中药组合物具有清瘟解毒，宣肺泄热的功效，适用于流行性感冒治疗，症见：发热或高热，恶寒，肌肉酸痛，鼻塞流涕，咳嗽，头痛，咽干咽痛，舌偏红，苔黄或黄腻等，已列入国家医保乙类目录。主要成分包括连翘、金银花、炙麻黄、炒苦杏仁、石膏、板蓝根、绵马贯众、鱼腥草、广藿香、大黄、红景天、薄荷脑、甘草。
为了能够有效的控制产品质量，保证公众的用药安全，必须对生产工艺的中间环节进行质量控制，但是药物中成分比较多，而采用HPLC检验周期长，重复性、灵敏度等无法满足连续生产的需要。
发明内容
本发明需要解决的技术问题是提供一种周期短、灵敏度高的检测一种中药组合物中间体中多种成分含量的方法。
为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：
一种中药组合物制剂中多种成分含量的测定方法，该中药组合物制剂包括下列重量份的原料药:金银花200-300 板蓝根200-300 广藿香60-100 绵马贯众200-300 红景天60-100 苦杏仁60-100 甘草60-100 石膏200-300，该中药组合物水提液的制备过程为：广藿香碎断，加8-10倍量水提取挥发油，提油时间4小时，收集挥发油，备用，提取液过滤后，残渣弃去，滤液备用；金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加7-11倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁，煎煮2次，每次0.5-2.5小时，提取液合并过滤，所得滤液与广藿香提油后的滤液合并，浓缩成在60℃时测定相对密度为1.10-1.15的水提液，其特征在于该水提液中多种成分含量测定方法由以下步骤组成：
A、供试品溶液的制备：量取该中药组合物制剂水提液5-8ml，加水4ml摇匀，超声提取10-20min，过滤，即得；
B、对照样品溶液的制备：分别称取绿原酸、甘草苷、甘草酸铵、新绿原酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸对照品，加70%甲醇，摇匀，即得各对照品溶液；
C、UPLC检测：色谱柱为C18，柱温20-50℃，流动相为甲醇-乙腈-0.1%磷酸溶液，梯度洗脱：0-3min，5%甲醇，5%乙腈，90%的0.1%磷酸；3-8min，5%甲醇，5-40%乙腈，90-55%的0.1%磷酸；8-11min，5%甲醇，40-85%乙腈，55-10%的0.1%磷酸；11-11.5min，5%甲醇，85-5%乙腈，10-90%的0.1%磷酸；11.5-13min，5%甲醇，5%乙腈，90%的0.1%磷酸；检测波长237nm，流速为0.2-0.4ml/min；
D、标准曲线的制定及计算结果:分别将绿原酸、甘草苷、甘草酸铵、新绿原酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸对照品溶液0.4-2.0μL注入步骤c中超高效色谱仪中分析，以色谱峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，得到各对照样品溶液的标准曲线；然后将供试样品溶液注入超高效色谱仪中分析，将各成分峰面积带入标准曲线中，得到绿原酸、甘草苷、甘草酸铵、新绿原酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸的含量。
所述步骤A中用0.2μm滤膜过滤；所述步骤C中色谱柱为ACQUITY BEH C18 ，规格为1.7μm，2.1×100mm，流速为0.4 ml/min。
作为优选方式，该中药组合物制剂中多种成分含量的测定方法，具体步骤如下：
A、供试品溶液的制备：量取该中药组合物制剂水提液5-8ml，加水4ml摇匀，超声提取10-20min，用0.2μm滤膜过滤，即得；
B、对照样品溶液的制备：分别称取绿原酸、甘草苷、甘草酸铵、新绿原酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸对照品，加70%甲醇，摇匀，即得各对照品溶液，各对照品溶液的浓度为：绿原酸17μg/ml、甘草苷6μg/ml、甘草酸铵10μg/ml、新绿原酸11μg/ml、3,4-二咖啡酰奎宁酸41μg/ml、4,5-二咖啡酰奎宁酸36μg/ml；
C、UPLC检测：色谱柱为ACQUITY BEH C18，规格为1.7μm，2.1×100mm，柱温20-50℃，流动相为甲醇-乙腈-0.1%磷酸溶液，梯度洗脱：0-3min，5%甲醇，5%乙腈，90%的0.1%磷酸；3-8min，5%甲醇，5-40%乙腈，90-55%的0.1%磷酸；8-11min，5%甲醇，40-85%乙腈，55-10%的0.1%磷酸；11-11.5min，5%甲醇，85-5%乙腈，10-90%的0.1%磷酸；11.5-13min，5%甲醇，5%乙腈，90%的0.1%磷酸；检测波长237nm，流速为0.2-0.4ml/min；
D、标准曲线的制定及计算结果:分别将绿原酸、甘草苷、甘草酸铵、新绿原酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸对照品溶液0.4-2.0μL注入步骤c中超高效色谱仪中分析，以色谱峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，得到各对照样品溶液的标准曲线；然后将供试样品溶液注入超高效色谱仪中分析，将各成分峰面积带入标准曲线中，得到绿原酸、甘草苷、甘草酸铵、新绿原酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸的含量。
该中药组合物包括下列重量份的原料药:
金银花 300 板蓝根 200 广藿香 60 绵马贯众 300 红景天 60 苦杏仁 100 甘草100 石膏200。
该中药组合物包括下列重量份的原料药:
金银花 200 板蓝根 300 广藿香 100
绵马贯众 200 红景天 60 苦杏仁 60
甘草 60 石膏300。
该中药组合物包括下列重量份的原料药:
金银花 255 板蓝根 255广藿香 85
绵马贯众 255 红景天 85 苦杏仁 85
甘草 85 石膏 255。
为了验证本发明的方法的可行性和精确度，作了如下的试验：
仪器精密度试验
分别吸取新绿原酸、绿原酸、甘草苷、3,4-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸、甘草酸铵对照品溶液，分别连续进样5次，测定峰面积，结果新绿原酸、绿原酸、甘草苷、3,4-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸、甘草酸铵对照品峰面积的RSD分别为0.50%、0.55%、0.94%、0.90%、1.06%、0.95%，说明仪器精密度良好。
稳定性试验
吸取实施例1中的供试品溶液，于0，2，6，12，24 h进样，测定峰面积，结果供试品中新绿原酸、绿原酸、甘草苷、3,4-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸、甘草酸铵对照品峰面积的RSD分别为0.28%、0.43%、0.80%、0.55%、0.79%、0.92%，说明24h内供试品溶液稳定。
重复性试验
取同一批样品，按照实施例1中供试品溶液的制备方法制备6份，测定，结果样品中新绿原酸、绿原酸、甘草苷、3,4-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸、甘草酸铵的含量平均值分别为0.3014mg/mL、0.1434 mg/mL、0.1888mg/mL、0.3237mg/mL、0.1811mg/mL、0.2190mg/mL，RSD分别为1.39%、1.49%、1.06%、0.82%、1.08%、0.65%，说明方法重复性良好。
回收率试验
采用加样回收试验，量取该水提液6份，每份2.5ml，每份都加入新绿原酸、绿原酸、甘草苷、3,4-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸、甘草酸铵对照品溶液各2.5ml，测定，计算回收率。结果见表1。
表1回收率试验结果（n=6）
由于采用了上述技术方案，本发明取得的技术进步是：
本发明采用UPLC同时测定该中药组合物中多种成分的含量，重复性好、精密度高、分析速度快，可以在比较短的周期内检测出各成分的含量，可以更方便的控制药物的质量。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明做进一步详细说明：
仪器与试药
ACQUITY UPLC H-class-PDA高效液相色谱仪(waters)；AT201 1/10万分析天平(瑞士METTLER TOLEDO)。Empower 3 Build 3471 工作站；色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C181.7μm，2.1*100mm；Milli-Q Advantage A10超纯水系统（millipore）
绿原酸、甘草苷、甘草酸铵对照品（批号分别为：110753-200413、111610-201005、110731-200614），购于中国药品生物制品检定所；新绿原酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸对照品（批号分别为：MUST-11112202、MUST-11083102、MUST-11081803），纯度≥98%，购于成都曼斯特生物科技有限公司。乙腈、甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。
实施例1：
原料药包括：
金银花 255 g 板蓝根 255 g 广藿香 85 g
绵马贯众 255 g 红景天 85 g
苦杏仁 85 g甘草 85 g 石膏 255 g
中药组合物水提液的制备方法为：
(1) 按照上述处方称取中药材，净选，酌情碎断；
(2) 广藿香碎断，加8倍量水提取挥发油，提油时间4小时，收集挥发油，备用；提取液过滤后，残渣弃去，滤液备用；
(3) 金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加7倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁煎煮2次，第一次1.5小时，第二次1小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤（2）广藿香提油后的滤液合并，浓缩成在60℃时测定相对密度为1.10的水提液，即得。
中药组合物制剂中多种成分含量的测定方法，由以下步骤组成：
供试品溶液的制备：量取上述水提液5ml，加水4ml摇匀，超声提取10min，用0.2um滤膜过滤，即得；
对照样品溶液的制备：分别称取绿原酸、甘草苷、甘草酸铵、新绿原酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸对照品适量，加70%甲醇，摇匀，制得17μg/ml的绿原酸对照品溶液、6μg/ml的甘草苷对照品溶液、10μg/ml的甘草酸铵对照品溶液、11μg/ml新绿原酸对照品溶液、41μg/ml的3,4-二咖啡酰奎宁酸对照品溶液、36μg/ml的4,5-二咖啡酰奎宁酸的对照品溶液；
UPLC检测：色谱柱为ACQUITY BEH C18 ，规格为1.7μm，2.1×100mm，柱温20℃，流动相为甲醇-乙腈-0.1%磷酸溶液，梯度洗脱：0-3min，5%的甲醇-5%的乙腈-90%的0.1%磷酸；3-8min，5%的甲醇，5-40%的乙腈，90-55%的0.1%磷酸；8-11min，5%的甲醇，40-85%的乙腈，55-10%的0.1%磷酸；11-11.5min，5%的甲醇，85-5%的乙腈，10-90%的0.1%磷酸；11.5-13min，5%的甲醇，5%的乙腈，90%的0.1%磷酸；检测波长237nm，流速0.2ml/min；
标准曲线的制定及计算结果: 分别精密吸取0.4μL的绿原酸、甘草苷、甘草酸铵、新绿原酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸对照品溶液注入步骤c中uplc色谱仪中，然后吸取0.8μL的各对照品溶液，1μL的各对照品溶液、1.5μL的各对照品溶液、2μL的各对照品溶液，注入超高效液相色谱仪中进行色谱分析，以色谱峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，得到各对照样品溶液的标准曲线，见表2；然后将供试样品溶液注入超高效色谱仪中分析，将各成分峰面积带入标准曲线中，得到绿原酸、甘草苷、甘草酸铵、新绿原酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸的含量。
表2
仪器精密度试验：新绿原酸、绿原酸、甘草苷、3,4-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸、甘草酸铵对照品溶液峰面积的RSD分别为0.53%、0.57%、0.84%、0.71%、1.16%、0.75%。
稳定性试验：新绿原酸、绿原酸、甘草苷、3,4-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸、甘草酸铵对照品峰面积的RSD分别为0.53%、0.57%、084%、0.71%、1.16%、0.75%。
重复性试验：新绿原酸、绿原酸、甘草苷、3,4-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸、甘草酸铵的RSD分别为1.29%、1.19%、1.16%、0.92%、1.18%、0.75%。
回收率试验：表3
实施例2：
原料药包括：
金银花 200 g 板蓝根 300 g 广藿香 100 g
绵马贯众 200 g 红景天 60 g
苦杏仁 60 g 甘草 60 g 石膏 300 g
中药组合物水提液的制备方法为：
(1) 按照上述处方称取中药材，净选，酌情碎断；
(2) 广藿香碎断，加10倍量水提取挥发油，提油时间4小时，收集挥发油，备用；提取液过滤后，残渣弃去，滤液备用；
(3) 金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加11倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁煎煮2次，第一次0.5小时，第二次1小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤（2）广藿香提油后的滤液合并，浓缩成在60℃时测定相对密度为1.15的水提液，即得。
中药组合物制剂中多种成分含量的测定方法，由以下步骤组成：
供试品溶液的制备：量取上述水提液6ml，加水4ml摇匀，超声提取15min，用0.2um滤膜过滤，即得；
对照样品溶液的制备：分别称取绿原酸、甘草苷、甘草酸铵、新绿原酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸对照品适量，加70%甲醇，摇匀，制17μg/ml绿原酸对照品溶液、6μg/ml甘草苷对照品溶液、10μg/ml甘草酸铵对照品溶液、11μg/ml新绿原酸对照品溶液、41μg/ml3,4-二咖啡酰奎宁酸对照品溶液、36μg/ml4,5-二咖啡酰奎宁酸的对照品溶液；
UPLC检测：色谱柱为ACQUITY BEH C18 ，规格为1.7μm，2.1×100mm，柱温30℃，流动相为甲醇-乙腈-0.1%磷酸溶液，梯度洗脱：0-3min，5%甲醇-5%乙腈-90%0.1%磷酸；3-8min，5%甲醇，5-40%乙腈，90-55%0.1%磷酸；8-11min，5%甲醇，40-85%乙腈，55-10%0.1%磷酸；11-11.5min，5%甲醇，85-5%乙腈，10-90%0.1%磷酸；11.5-13min，5%甲醇，5%乙腈，90%0.1%磷酸；检测波长237nm，流速0.3ml/min；
标准曲线的制定及计算结果: 分别精密吸取0.4μL的绿原酸、甘草苷、甘草酸铵、新绿原酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸对照品溶液注入步骤c中uplc色谱仪中，然后分别吸取0.8μL的各对照品溶液，1μL的各对照品溶液、1.5μL的各对照品溶液、2μL的各对照品溶液，注入超高效色谱仪中进行色谱分析，以色谱峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，得到各对照样品溶液的标准曲线，见表2；然后将供试样品溶液注入超高效色谱仪中分析，将各成分峰面积带入标准曲线中，得到绿原酸、甘草苷、甘草酸铵、新绿原酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸的含量。
仪器精密度试验：新绿原酸、绿原酸、甘草苷、3,4-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸、甘草酸铵对照品溶液峰面积的RSD分别为0.56%、0.58%、0.94%、0.91%、1.26%、0.85%。
稳定性试验：新绿原酸、绿原酸、甘草苷、3,4-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸、甘草酸铵对照品峰面积的RSD分别为0.56%、0.58%、0.94%、0.91%、1.26%、0.85%。
重复性试验：新绿原酸、绿原酸、甘草苷、3,4-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸、甘草酸铵的RSD分别为1.19%、1.09%、1.06%、0.95%、1.08%、0.85%。
回收率试验：表4
| 平均回收率/% | RSD/% | |
| 新绿原酸 | 98.20 | 1.02 |
| 绿原酸 | 98.66 | 1.10 |
| 甘草苷 | 97.34 | 1.11 |
| 3,4-二咖啡酰奎宁酸 | 97.98 | 1.07 |
| 4,5-二咖啡酰奎宁酸 | 94.97 | 1.43 |
| 甘草酸铵 | 98.80 | 1.53 |
实施例3：
原料药包括为：
金银花 300g 板蓝根 200g 广藿香 60g
绵马贯众 300g 红景天 60g 苦杏仁 100g
甘草 100g 石膏 200g。
中药组合物水提液的制备方法为：
(1) 按照上述处方称取中药材，净选，酌情碎断；
(2) 广藿香碎断，加9倍量水提取挥发油，提油时间4小时，收集挥发油，备用；提取液过滤后，残渣弃去，滤液备用；
(3) 金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加8倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁煎煮2次，第一次1.5小时，第二次2.5小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤（2）广藿香提油后的滤液合并，浓缩成在60℃时测定相对密度为1.10的水提液，即得。
中药组合物制剂中多种成分含量的测定方法，由以下步骤组成：
供试品溶液的制备：量取上述水提液8ml，加水4ml摇匀，超声提取20min，用0.2um滤膜过滤，即得；
对照样品溶液的制备：分别称取绿原酸、甘草苷、甘草酸铵、新绿原酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸对照品适量，加70%甲醇，摇匀，制17μg/ml绿原酸对照品溶液、6μg/ml甘草苷对照品溶液、10μg/ml甘草酸铵对照品溶液、11μg/ml新绿原酸对照品溶液、41μg/ml3,4-二咖啡酰奎宁酸对照品溶液、36μg/ml4,5-二咖啡酰奎宁酸的对照品溶液；
UPLC检测：色谱柱为ACQUITY BEH C18 ，规格为1.7μm，2.1×100mm，柱温50℃，流动相为甲醇-乙腈-0.1%磷酸溶液，梯度洗脱：0-3min，5%甲醇-5%乙腈-90%0.1%磷酸；3-8min，5%甲醇，5-40%乙腈，90-55%0.1%磷酸；8-11min，5%甲醇，40-85%乙腈，55-10%0.1%磷酸；11-11.5min，5%甲醇，85-5%乙腈，10-90%0.1%磷酸；11.5-13min，5%甲醇，5%乙腈，90%0.1%磷酸；检测波长237nm，流速0.4ml/min；
标准曲线的制定及计算结果: 分别精密吸取0.4μL的绿原酸、甘草苷、甘草酸铵、新绿原酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸对照品溶液注入步骤c中uplc色谱仪中，然后分别吸取0.8μL的各对照品溶液，1μL的各对照品溶液、1.5μL的各对照品溶液、2μL的各对照品溶液，注入超高效色谱仪中进行色谱分析，以色谱峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，得到各对照样品溶液的标准曲线，见表2；然后将供试样品溶液注入超高效色谱仪中分析，将各成分峰面积带入标准曲线中，得到绿原酸、甘草苷、甘草酸铵、新绿原酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸的含量。
仪器精密度试验：新绿原酸、绿原酸、甘草苷、3,4-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸、甘草酸铵对照品溶液峰面积的RSD分别为0.63%、0.67%、0.74%、0.72%、1.06%、0.85%。
稳定性试验：新绿原酸、绿原酸、甘草苷、3,4-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸、甘草酸铵对照品峰面积的RSD分别为0.63%、0.67%、0.74%、0.72%、1.06%、0.85%。
重复性试验：新绿原酸、绿原酸、甘草苷、3,4-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸、甘草酸铵的RSD分别为1.09%、1.29%、1.26%、1.02%、1.08%、0.95%。
回收率试验：表5
| 平均回收率/% | RSD/% | |
| 新绿原酸 | 97.50 | 0.97 |
| 绿原酸 | 97.86 | 1.24 |
| 甘草苷 | 95.74 | 1.29 |
| 3,4-二咖啡酰奎宁酸 | 97.88 | 1.35 |
| 4,5-二咖啡酰奎宁酸 | 96.98 | 1.49 |
| 甘草酸铵 | 96.80 | 1.54 |
Claims (6)
1.一种中药组合物中多种成分含量的测定方法，该中药组合物包括下列重量份的原料药:金银花200-300 板蓝根200-300 广藿香60-100 绵马贯众200-300 红景天60-100 苦杏仁60-100 甘草60-100 石膏200-300，该中药组合物的制备过程为：广藿香碎断，加8-10倍量水提取挥发油，提油时间4小时，收集挥发油，备用，提取液过滤后，残渣弃去，滤液备用；金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加7-11倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁，煎煮2次，每次0.5-2.5小时，提取液合并过滤，所得滤液与广藿香提油后的滤液合并，浓缩成在60℃时测定相对密度为1.10-1.15的水提液，其特征在于该中药组合物中多种成分含量测定方法由以下步骤组成：
A、供试品溶液的制备：量取该中药组合物5-8ml，加水4ml摇匀，超声提取10-20min，过滤，即得；
B、对照样品溶液的制备：分别称取绿原酸、甘草苷、甘草酸铵、新绿原酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸对照品，加70%甲醇，摇匀，即得各对照品溶液；
C、UPLC检测：色谱柱为C18，柱温20-50℃，流动相为甲醇-乙腈-0.1%磷酸溶液，梯度洗脱：0-3min，5%甲醇，5%乙腈，90%的0.1%磷酸；3-8min，5%甲醇，5-40%乙腈，90-55%的0.1%磷酸；8-11min，5%甲醇，40-85%乙腈，55-10%的0.1%磷酸；11-11.5min，5%甲醇，85-5%乙腈，10-90%的0.1%磷酸；11.5-13min，5%甲醇，5%乙腈，90%的0.1%磷酸；检测波长237nm，流速为0.2-0.4ml/min；
D、标准曲线的制定及计算结果:分别将绿原酸、甘草苷、甘草酸铵、新绿原酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸对照品溶液0.4-2.0μL注入步骤c中超高效色谱仪中分析，以色谱峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，得到各对照样品溶液的标准曲线；然后将供试样品溶液注入超高效色谱仪中分析，将各成分峰面积带入标准曲线中，得到绿原酸、甘草苷、甘草酸铵、新绿原酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸的含量。
2.根据权利要求1所述的中药组合物中多种成分含量的测定方法，其特征在于：所述步骤A中用0.2μm滤膜过滤；所述步骤C中色谱柱为ACQUITY BEH C18 ，规格为1.7μm，2.1×100mm，流速为0.4 ml/min。
3.根据权利要求1所述的中药组合物中多种成分含量的测定方法，其特征在于：
A、供试品溶液的制备：量取该中药组合物5-8ml，加水4ml摇匀，超声提取10-20min，用0.2μm滤膜过滤，即得；
B、对照样品溶液的制备：分别称取绿原酸、甘草苷、甘草酸铵、新绿原酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸对照品，加70%甲醇，摇匀，即得各对照品溶液，各对照品溶液的浓度为：绿原酸17μg/ml、甘草苷6μg/ml、甘草酸铵10μg/ml、新绿原酸11μg/ml、3,4-二咖啡酰奎宁酸41μg/ml、4,5-二咖啡酰奎宁酸36μg/ml；
C、UPLC检测：色谱柱为ACQUITY BEH C18，规格为1.7μm，2.1×100mm，柱温20-50℃，流动相为甲醇-乙腈-0.1%磷酸溶液，梯度洗脱：0-3min，5%甲醇，5%乙腈，90%的0.1%磷酸；3-8min，5%甲醇，5-40%乙腈，90-55%的0.1%磷酸；8-11min，5%甲醇，40-85%乙腈，55-10%的0.1%磷酸；11-11.5min，5%甲醇，85-5%乙腈，10-90%的0.1%磷酸；11.5-13min，5%甲醇，5%乙腈，90%的0.1%磷酸；检测波长237nm，流速为0.2-0.4ml/min；
D、标准曲线的制定及计算结果:分别将绿原酸、甘草苷、甘草酸铵、新绿原酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸对照品溶液0.4-2.0μL注入步骤c中超高效色谱仪中分析，以色谱峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，得到各对照样品溶液的标准曲线；然后将供试样品溶液注入超高效色谱仪中分析，将各成分峰面积带入标准曲线中，得到绿原酸、甘草苷、甘草酸铵、新绿原酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸的含量。
4.根据权利要求1-3任一项所述的中药组合物中多种成分含量的测定方法，其特征在于该中药组合物包括下列重量份的原料药:
金银花 300 板蓝根 200 广藿香 60 绵马贯众 300 红景天 60 苦杏仁 100 甘草100 石膏200。
5.根据权利要求1-3任一项所述的中药组合物中多种成分含量的测定方法，其特征在于该中药组合物包括下列重量份的原料药:
金银花 200 板蓝根 300 广藿香 100
绵马贯众 200 红景天 60 苦杏仁 60
甘草 60 石膏300。
6.根据权利要求1-3任一项所述的中药组合物中多种成分含量的测定方法，其特征在于该中药组合物包括下列重量份的原料药:
金银花 255 板蓝根 255广藿香 85
绵马贯众 255 红景天 85 苦杏仁 85
甘草 85 石膏 255。
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