CN106483213A - 桃核承气汤组合物指纹图谱的建立方法及指纹图谱 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了桃核承气汤组合物指纹图谱的建立方法及指纹图谱，属于中药分析领域。本发明方法采用高效液相色谱法建立桃核承气汤组合物指纹图谱，色谱条件为：色谱柱采用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；检测仪器采用紫外检测器，指纹图谱的检测波长210nm～250nm；流速0.9ml/ml～1.1ml/ml，柱温：25℃～35℃，检测波长210nm～250nm，理论板数按儿茶素峰计算应不低于3000，流动相为甲醇‑0.1％磷酸溶液为系统按照如下洗脱顺序进行梯度洗脱：
Description
技术领域
本发明属于中药分析领域，具体涉及桃核承气汤组合物指纹图谱。
背景技术
桃核承气汤组合物由桃仁、大黄、甘草、桂枝、芒硝五味中药组成，主治破血下淤，逐淤泻热，现代临床常方常随症加减治疗急性盆腔炎、附件炎、急性脑出血、卵巢囊肿、子宫内异位症等症状；目前在临床上常加减治疗“瘀热互结”的上、中、下焦的病症；在日本，该方作为汉方药在药店销售排名第六位，因此，该方具有较强的开发价值。为了更全面、有效的控制本中药组合物的质量控制水平，和国际接轨，让临床用药安全及疗效更加有所保证，需要对本中药组合物采用更为先进的质量控制手段。
由于中药及其副剂均为多组分复杂体系，因此评价其质量应采用与之相适应的，能提供丰富鉴别信息的检测方法，但现行的显微鉴别、理化鉴别和含量测定等方法都不足以解决这一问题。中药指纹图谱是指某些中药材或中药剖剂经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标示其化学特征的色谱图或光谱图。中药指纹图谱是一种综合的，可量化的鉴定手段，能较为全面地反映中药及其制剂中所含化学，成分的种类与数量进而对药品质量进行整体描述和评价。所以，中药指纹图谱已经成为目前国际上较为先进的中药质量控制手段。本中药组合物还没有作为质量控制标准的指纹图谱公开报道。
美国食品药品管理局(FDA)植物药产品工业指南、WHO草药评价指南中均指出，如果草药制剂的活性成分不能鉴别，可以通过指纹图谱(fingerprint spectrum)证明产品质量的一致。欧共体在草药质量指南注释中也指出，草药及其制剂是以整体作为有效物质，因此，草药的质量稳定性仅靠测定己知的有效成分是不够的，应该通过指纹图谱显示其所含的各种成分。印度草药典、英国草药典、德国药用植物协会、加拿大药用及芳香植物协会等，也接受用指纹图谱来保证有效成分未明的草药产品质量的一致性。目前国家药品监督管理局对中药注射剂己要求具有相关的指纹图谱，对提高中药注射剂的质量起到了关键作用，但对其他剂型的中药尚没有强制性要求。
中药指纹图谱包括中药化学指纹图谱、蛋白指纹图谱、DNA指纹图谱及生物效应指纹图谱等。通常说的指纹图谱是指化学指纹图谱，是中药材、中药提取物或中成药经适当处理后，采用一定分析手段，得到的能够标示该中药主要化学成分特性的色谱或光谱。
中药化学指纹图谱可以分为中药光谱指纹图谱，如红外光谱(IR)、紫外光谱(UV)、X射线衍射图谱等；色谱指纹图谱，如薄层色谱(TLC)、气相色谱(GC)、高效液相色谱(HPLC)、毛细管电泳图谱(CE)等；波谱指纹图谱，如质谱(MS)、核磁共振波谱(NMR)等；DNA指纹图图谱；以及采用多种现代分析仪器联用得到的多维多息特征谱(characteristicfingerprint of muhrdimension andmuhrdata)，如HPLC/MS、HPLC/Ms/MS、GC/MS、CE/MS等。
中药指纹图谱研究方法虽然较多，但色谱学方法应是主流方法，尤其是TLC，HPLC和GC色谱技术，已经成为大家所公认的三种常规的分析手段，是目前研究中药指纹图谱应优先考虑的方法。
中药指纹图谱有两个作用：一是通过指纹图谱的特征性，能有效鉴别中药材的真伪或产地：二是通过指纹图谱主要特征峰的面积或比例的制定，能有效控制产品的质量，确保产品质量的相对一致。
中药指纹图谱的制作和应用常包括：(1)采集具有代表性的中药样品，采取适当的方法制备供试品溶液，并选用适当的标准标准品(参照物)，进行分析方法的优选；(2)根据确定的分析方法，对一定批次的中药样品进干了分离分析，将所得的多批次数据进行处理，得到标准指纹图谱；(3)将样品按照与标准指纹图谱制作相同的方法进行样品处理、分离分析后，将所得的指纹图谱与标准指纹图谱进行相似度比较，一般相以度达到80％以上即可视为该样品为合格。相似度的计算和评价方法通常采用相关系数与相合系数或夹角余弦法。我国中南大学、浙江大学等单位提据以上方法，编制了相应的计算机软件用于完成相假度评价，其中以国家药典委员会推荐的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”应用较多。因此采用指纹图谱技术全面反映教材的整体特征，并进一步与其活性相关联，对于完善目前的质量控制方法，保证临床用药的安全有效是十分必要的。目前，关于桃核承气汤组合物的指纹图谱的研究尚未有文献报道更没有建立桃核承气汤的指纹图谱，从质量控制方面，有关桃核承气汤组合物的指纹图谱亦没有报道。
发明内容
因此，本发明要解决的技术问题在于克服现有技术中的没有关于桃核承气汤组合物的指纹图谱以及建立桃核承气汤组合物的指纹图谱的文献报道的缺陷，从而提供一种桃核承气汤组合物指纹图谱的建立方法及指纹图谱。
为此，本发明提供如下技术方案：
桃核承气汤组合物的指纹图谱的建立方法包括采用高效液相色谱法建立桃核承气汤组合物指纹图谱，色谱条件为：
色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；
流速0.9ml/ml～1.1ml/ml，柱温：25℃～35℃，
检测仪器采用紫外检测器，指纹图谱的检测波长210nm～250nm；
理论板数按儿茶素峰计算应不低于3000；
参照物溶液为儿茶素的甲醇溶液；
流动相为甲醇-0.1％磷酸溶液为系统按照如下洗脱顺序进行梯度洗脱：
所述指纹图谱包括15个共有峰：各峰的相对保留时间分别为：1号峰相对保留时间RRT为9.839,2号峰相对保留时间RRT为17.973，3号(S)峰相对保留时间RRT为22.210，4号峰相对保留时间RRT为24.563，5号峰相对保留时间RRT为31.572，6号峰相对保留时间RRT为39.139，7号峰相对保留时间RRT为43.253，8号峰相对保留时间RRT为48.801，9号峰相对保留时间RRT为55.976，10号峰相对保留时间RRT为60.140，11号峰相对保留时间RRT为61.066，S峰相对保留时间RRT为64.647，13号峰相对保留时间RRT为67.075，14号峰相对保留时间RRT为70.368，15号峰相对保留时间RRT为71.504，其中，3号S峰是参照物的色谱峰。
桃核承气汤组合物按如下两种方法制备：
(1)按重量份计称取如下饮片：燀桃仁12g，大黄12g，炙甘草6g，桂枝6g，芒硝6g；将除芒硝外的四味饮片置于4L砂锅中，加1400ml水，浸泡30分钟，加盖，加煮沸，保持微沸至煎液490-510ml，滤除药渣，加入芒硝，煮沸，即得第一桃核承气汤组合物；或
(2)按重量份计称取如下饮片：燀桃仁1000g，大黄1000g，桂枝500g，芒硝500g，炙甘草500g；将除芒硝外的四味饮片加8倍量的水，煎煮1.5h，得滤液；芒硝加入滤液中，减压浓缩至相对密度为1.0-1.20的清膏，加入麦芽糊精，干燥，混匀，加硬脂酸镁，干压制粒，制成1000g，即得第二桃核承气汤组合物。
用于高效液相色谱测定的供试品溶液采用水作溶剂，参照物溶液采用甲醇作溶剂。
所述桃核承气汤组合物参照物溶液按如下方法制备：参照物溶液的制备：取儿茶素对照品适量，加50％甲醇配制成100μg/ml的参照物溶液；
所述桃核承气汤组合物供试品溶液按如下方法制备：取第一桃核承气汤组合物5ml，离心，取上清液，即得；或取第二桃核承气汤组合物1.3g，置50ml容量瓶中，加水稀释，超声溶解，放冷，再加水定容，摇匀，取溶液，离心，取上清液，即得。
进样量为10μl。
采用高效液相色谱法建立，色谱条件为：
色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；
流速1.0ml/ml，柱温：30℃，
检测仪器采用紫外检测器，指纹图谱的检测波长210～250nm；
理论板数按儿茶素峰计算应不低于3000；
参照物溶液为儿茶素的甲醇溶液；
流动相为甲醇-0.1％磷酸溶液为系统按照如下洗脱顺序进行梯度洗脱：
所述进样量为10μl，检测波长为210～250nm。
所述指纹图谱包括15个共有峰：各峰的相对保留时间分别为：1号峰相对保留时间RRT为9.839,2号峰相对保留时间RRT为17.973，3号(S)峰相对保留时间RRT为22.210，4号峰相对保留时间RRT为24.563，5号峰相对保留时间RRT为31.572，6号峰相对保留时间RRT为39.139，7号峰相对保留时间RRT为43.253，8号峰相对保留时间RRT为48.801，9号峰相对保留时间RRT为55.976，10号峰相对保留时间RRT为60.140，11号峰相对保留时间RRT为61.066，S峰相对保留时间RRT为64.647，13号峰相对保留时间RRT为67.075，14号峰相对保留时间RRT为70.368，15号峰相对保留时间RRT为71.504，其中，3号S峰是参照物的色谱峰。
本发明技术方案，具有如下优点：
1、本发明提供的桃核承气汤组合物指纹图谱可全面反映出桃核承气汤的质量信息，从而能够达到更加全面、有效地控制桃核承气汤制剂产品质量的目的。
2、本发明提供的桃核承气汤组合物指纹图谱采用国家药典委员会提供的中药色谱指纹图谱相似度评价系统对所测指纹图谱进行辨认，操作方便、快捷；而且，以此得出的相以度结果对制剂指纹图谱进行评价，结论较为客观、准确。
3、本发明提供的桃核承气汤组合物指纹图谱参照中药注射剂指纹图谱的要求，对本发明涉及的中药组合物指纹图谱进行了研究，经过对供试品制备方法的考察及测定指纹图谱的仪器，色谱柱、流动相、检测波长等条件进行系统的优选，建立了指纹图谱测定条件并进行了方法学考察，在对多批本中药组合物指纹图谱检测结果的基础上，逐渐积累数据，提出了标准指纹图谱，作为本品指纹图谱标准，从而达到能够更全面、有效地控制制剂质量的目的。
4、本发明提供的桃核承气汤组合物指纹图谱采用国家药典委员会提供中药色谱指纹图谱相似度评价系统做为本中药组合物指纹图谱相似度计算软件，经多次试验研究，旦通过与计算相对保留时间及相对峰面积的方法相比较，所得出的评价结论基本一致，使用中药色谱指纹图谱相似度评价系统评价指纹图谱的相似度，操作方便、快捷，以其得出的相似度结果，对制剂指纹图谱进行评价，结论较为客观、准确。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1指纹图谱测定中200～400nm扫描光谱3D图；
图2是检测波长230nm色谱图；
图3是检测波长210nm色谱图；
图4是检测波长220nm色谱图；
图5是检测波长254nm色谱图；
图6是检测波长278nm色谱图；
图7是检测波长300nm色谱图；
图8是检测波长316nm色谱图；
图9流动相洗脱系统考察
图10是儿茶素对照品溶液色谱图
图11是肉桂酸对照品溶液色谱图
图12是甘草酸对照品溶液色谱图
图13是芦荟大黄素对照品溶液色谱图
图14是大黄酸对照品溶液色谱图
图15供试品溶液指纹图谱对照品峰指认图谱
图16指纹图谱测定中的对照指纹图谱
图17连续四批样品指纹图谱对比色谱图
具体实施方式
提供下述实施例是为了更好地进一步理解本发明，并不局限于所述最佳实施方式，不对本发明的内容和保护范围构成限制，任何人在本发明的启示下或是将本发明与其他现有技术的特征进行组合而得出的任何与本发明相同或相近似的产品，均落在本发明的保护范围之内。
实施例中未注明具体实验步骤或条件者，按照本领域内的文献所描述的常规实验步骤的操作或条件即可进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品。
本发明试药及仪器：
试药：
芦荟大黄素对照品(批号：110795-201007，中国药品生物制品检定研究院)；
大黄酸对照品(批号：110757-200206，中国药品生物制品检定研究院)；
大黄素对照品(批号：110756-200110，中国药品生物制品检定研究院)；
大黄酚对照品(批号：201118，中国药品生物制品检定研究院)；
大黄素甲醚对照品(批号：110758-201013，中国药品生物制品检定研究院)；
苦杏仁苷对照品(批号：110820-201004，中国药品生物制品检定研究院)；
肉桂酸对照品(批号：200503，中国药品生物制品检定研究院)；
甘草酸对照品(批号：110731-201116，中国药品生物制品检定研究院)；
儿茶素对照品(批号：110877-201203，中国药品生物制品检定研究院)；
桂皮醛对照品(批号：110710-201217，中国药品生物制品检定研究院)；
桃核承气汤组合物(自制)，甲醇(Fisher Scientific，色谱纯)、乙睛(FisherScientific，色谱纯)试剂为分析纯，水为超纯水。
仪器：Agilent 1260高效液相色谱仪(DAD检测器)
Waters E2695高效液相色谱仪(2998DAD检测器)
实施例1.配制对照品溶液
芦荟大黄素对照品溶液取芦荟大黄素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含80μg的溶液，即得。
大黄酸对照品溶液取大黄酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含80μg的溶液，即得。
大黄素对照品溶液取大黄素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含80μg的溶液，即得。
大黄酚对照品溶液取大黄酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含80μg的溶液，即得。
大黄素甲醚对照品溶液取大黄素甲醚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含40μg的溶液，即得。
大黄混合对照品溶液分别取上述对照品溶液5ml，混匀，即得。
苦杏仁苷对照品溶液取在黄芩苷对照品适量，精密称定，加70％甲醇制成每1ml含80μg的溶液，即得。
肉桂酸对照品溶液取在肉桂酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含10μg的溶液，即得。
桂皮醛对照品溶液取在桂皮醛对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含10μg的溶液，即得。
取甘草苷对照品、甘草酸铵对照品适量，精密称定，加70％乙醇分别制成每1ml含甘草苷20μg、甘草酸铵0.2mg的溶液，即得(甘草酸重量＝甘草酸铵重量/1.0207)。
儿茶素对照品溶液取儿茶素对照品适量，加50％的甲醇制成每1ml含100μg的对照品溶液。
混合对照品溶液分别取上述对照品溶液1ml，混匀，即得。
实施例2.桃核承气汤组合物的制备
第一桃核承气汤组合物：按重量份计称取如下饮片燀桃仁12g，大黄12g，炙甘草6g，桂枝6g，芒硝6g；四味饮片(除芒硝外)置于4L砂锅中，加1400ml水，浸泡30分钟，加盖，以sogo加热板为加热装置，煮沸(约25min)，保持微沸(约85分钟，蒸发量约10g/min)至煎液约500ml，采用两层医用纱布滤除药渣，加入芒硝，煮沸，即得。
第二桃核承气汤组合物：按重量份计称取如下饮片燀桃仁1000g，大黄1000g，桂枝500g，芒硝500g，炙甘草500g；四味饮片(除芒硝外)，加8倍量的水，煎煮1.5h，得滤液；芒硝加入滤液中，减压浓缩至相对密度为1.05-1.15(优选为1.10)清膏(60℃～70℃)，加入适量麦芽糊精，干燥，混匀，加适量硬脂酸镁，干压制粒，制成1000g，即得。第二桃核承气汤组合物采用聚酯镀铝/聚乙烯复合膜，包装规格为4.0g/袋。
实施例3.指纹图谱色谱条件的考察
(1)检测波长的选择
以以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A，以0.1％磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速1.0ml/ml，柱温：30℃。
指纹图谱流动相梯度程序
采用二极管阵列检测器对供试品溶液进行全波长检测，根据收集的三维图谱(见图1)，并同时收集330nm、316nm、278nm、254nm、230nm、220nm、210nm波长处的图谱(见图2-8)，综合考察，桃核承气汤颗粒在230nm波长处的信息量最大，因此最后确定230nm为桃核承气汤颗粒指纹图谱的检测波长。
(2)色谱系统的考察
分别考察了乙腈-磷酸水、甲醇-磷酸水系统，指纹图谱检测见图9，结果表明：桃核承气汤颗粒在乙腈-磷酸水系统下色谱峰堆积严重，因此确定流动相系统为甲醇-磷酸水。
实施例4.参照物溶液的选择
参照物在指纹图谱中主要用于辨认和评价指纹图谱特征的指引，不等同于含量测定的对照品。按照《中药质量标准研究制定技术要求》指纹图谱的参照物一般选取容易获取的一个或一个以上制剂中的主要活性成分或指标成分，用于考察指纹图谱的稳定程度和重现性。中药复方制剂的参照物首选君药的活性成分或指标成分，而参照物应为保留时间适中、峰面积大小合适、分离稳定的色谱峰。
取含量测定项下的对照品溶液，照指纹图谱检测方法检测，对照品峰指认图谱见图10-15。由图可知，在对比色图谱中，桃核承气汤颗粒的特征成分苦杏仁苷检出峰响应值较低，不适合做为参照峰，经过文献研究及验证，知图谱中响应值较高峰为儿茶素成分，且该成分与相邻色谱峰分离度尚可，保留时间适中，因此确定选择此成分为参照物。
实施例5.共有峰的确定及对照指纹图谱的建立
采用同一批次饮片，分别制备10份第一桃核承气汤组合物，依法制备供试品溶液，进样，测定，根据10批次供试品溶液色谱图各色谱峰的情况，确定共有峰应15个，各共有峰依次标号为1,2，……，N，其中参照峰标记为3(S)，通过分析，确定其共有特征峰为15个，所述的15个共有特征峰的相对保留时间偏差RSD均小于2％，即：
1号峰相对保留时间RRT为9.839，RSD％为1.39％；
2号峰相对保留时间RRT为17.973，RSD％为0.07％；
3号(S)峰相对保留时间RRT为22.210，RSD％为0.04％；
4号峰相对保留时间RRT为24.563，RSD％为0.05％；
5号峰相对保留时间RRT为31.572，RSD％为0.04％；
6号峰相对保留时间RRT为39.139，RSD％为0.03％；
7号峰相对保留时间RRT为43.253，RSD％为0.02％；
8号峰相对保留时间RRT为48.801，RSD％为0.02％；
9号峰相对保留时间RRT为55.976，RSD％为0.02％；
10号峰相对保留时间RRT为60.140，RSD％为0.01％；
11号峰相对保留时间RRT为61.066，RSD％为0.01％；
12(S)峰相对保留时间RRT为64.647，RSD％为0.01％；
13号峰相对保留时间RRT为67.075，RSD％为0.01％；
14号峰相对保留时间RRT为70.368，RSD％为0.01％；
15号峰相对保留时间RRT为71.504。其中，3号S峰是参照物的色谱峰。
运用中药色谱指纹图谱相似度评价软件(2012年版)处理图谱，以160512-1作为参照图谱，得到第一桃核承气汤组合物对照指纹图谱(见图16)。采用夹角余弦法计算样品相似度，结果表明，煎煮的10份第一桃核承气汤组合物相似度在0.934～1.000之间，相似度较高。
表1 10份第一桃核承气汤组合物相似度评价结果
根据10批供试品溶液色谱图所给出的相关参数，选择具有特征性的15共有峰，以3号参照峰峰面积作为1，计算其他各共有特征指纹峰峰面积的比值，结果见表2。
表2 10份第一桃核承气汤组合物共有峰面积比值结果
取第一桃核承气汤组合物所对应的饮片，制备连续三批次第二桃核承气汤组合物样品，按指纹图谱测定方法测定，记录色谱图(见附图17)，以第一桃核承气汤组合物生成的对照指纹图谱作为随行对照图谱，计算4批次第二桃核承气汤组合物的相似度。结果见下表。
第二桃核承气汤组合物相似度计算结果
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。
Claims (10)
1.桃核承气汤组合物的指纹图谱的建立方法，其特征在于，包括采用高效液相色谱法建立桃核承气汤组合物指纹图谱，色谱条件为：
色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；
流速0.9ml/ml～1.1ml/ml，柱温：25℃～35℃，
检测仪器采用紫外检测器，指纹图谱的检测波长210nm～250nm；
理论板数按儿茶素峰计算应不低于3000；
参照物溶液为儿茶素的甲醇溶液；
流动相为甲醇-0.1％磷酸溶液为系统按照如下洗脱顺序进行梯度洗脱：
2.根据权利要求1所述的指纹图谱方法，其特征在于，所述指纹图谱包括15个共有峰：各峰的相对保留时间分别为：1号峰相对保留时间RRT为9.839,2号峰相对保留时间RRT为17.973，3号(S)峰相对保留时间RRT为22.210，4号峰相对保留时间RRT为24.563，5号峰相对保留时间RRT为31.572，6号峰相对保留时间RRT为39.139，7号峰相对保留时间RRT为43.253，8号峰相对保留时间RRT为48.801，9号峰相对保留时间RRT为55.976，10号峰相对保留时间RRT为60.140，11号峰相对保留时间RRT为61.066，S峰相对保留时间RRT为64.647，13号峰相对保留时间RRT为67.075，14号峰相对保留时间RRT为70.368，15号峰相对保留时间RRT为71.504，其中，3号S峰是参照物的色谱峰。
3.根据权利要求2所述的指纹图谱的建立方法，其特征在于，桃核承气汤组合物按如下两种方法制备：
(1)按重量份计称取如下饮片：燀桃仁12g，大黄12g，炙甘草6g，桂枝6g，芒硝6g；将除芒硝外的四味饮片置于4L砂锅中，加1400ml水，浸泡30分钟，加盖，加煮沸，保持微沸至煎液490-510ml，滤除药渣，加入芒硝，煮沸，即得第一桃核承气汤组合物；或
(2)按重量份计称取如下饮片：燀桃仁1000g，大黄1000g，桂枝500g，芒硝500g，炙甘草500g；将除芒硝外的四味饮片加8倍量的水，煎煮1.5h，得滤液；芒硝加入滤液中，减压浓缩至相对密度为1.05-1.15的清膏，加入麦芽糊精，干燥，混匀，加硬脂酸镁，干压制粒，制成1000g，即得第二桃核承气汤组合物。
4.根据权利要求3所述的指纹图谱的建立方法，其特征在于，用于高效液相色谱测定的供试品溶液采用水作溶剂，参照物溶液采用甲醇作溶剂。
5.根据权利要求4所述的指纹图谱方法，其特征在于，所述桃核承气汤组合物参照物溶液按如下方法制备：参照物溶液的制备：取儿茶素对照品适量，加50％甲醇配制成100μg/ml的参照物溶液。
6.根据权利要求5所述的指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述桃核承气汤组合物供试品溶液按如下方法制备：取第一桃核承气汤组合物5ml，离心，取上清液，即得；或取第二桃核承气汤组合物1.3g，置50ml容量瓶中，加水稀释，超声溶解，放冷，再加水定容，摇匀，取溶液，离心，取上清液，即得。
7.根据权利要求6所述的指纹图谱方法，其特征在于，进样量为10μl。
8.桃核承气汤组合物的指纹图谱，其特征在于，采用高效液相色谱法建立，色谱条件为：
色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；
流速1.0ml/ml，柱温：30℃，
检测仪器采用紫外检测器，指纹图谱的检测波长210～250nm；
理论板数按儿茶素峰计算应不低于3000；
参照物溶液为儿茶素的甲醇溶液；
流动相为甲醇-0.1％磷酸溶液为系统按照如下洗脱顺序进行梯度洗脱：
9.根据权利要求8所述的桃核承气汤组合物指纹图谱，其特征在于，所述进样量为10μl，检测波长为210～250nm。
10.根据权利要求9所述的桃核承气汤组合物指纹图谱，其特征在于，所述指纹图谱包括15个共有峰：各峰的相对保留时间分别为：1号峰相对保留时间RRT为9.839,2号峰相对保留时间RRT为17.973，3号(S)峰相对保留时间RRT为22.210，4号峰相对保留时间RRT为24.563，5号峰相对保留时间RRT为31.572，6号峰相对保留时间RRT为39.139，7号峰相对保留时间RRT为43.253，8号峰相对保留时间RRT为48.801，9号峰相对保留时间RRT为55.976，10号峰相对保留时间RRT为60.140，11号峰相对保留时间RRT为61.066，S峰相对保留时间RRT为64.647，13号峰相对保留时间RRT为67.075，14号峰相对保留时间RRT为70.368，15号峰相对保留时间RRT为71.504，其中，3号S峰是参照物的色谱峰。
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