CN105588888A

CN105588888A - 一种中药的指纹图谱质量控制测定方法

Info

Publication number: CN105588888A
Application number: CN201510301508.XA
Authority: CN
Inventors: 不公告发明人
Original assignee: GUIZHOU BAILING GROUP PHARMACY CO Ltd
Current assignee: GUIZHOU BAILING GROUP PHARMACY CO Ltd
Priority date: 2016-01-13
Filing date: 2016-01-13
Publication date: 2016-05-18

Abstract

本发明公开了一种中药的指纹图谱质量控制测定方法，该测定方法是基于HPLC指纹图谱的检测方法，用于银丹心脑通组方中的药材质量控制,主要用于鉴别真伪和评价原药材、半成品及制剂质量的均一性、和稳定性。中药指纹图谱是一种全面的反映中药材或中药复方所包含的化学信息的分析方法。本发明能有效的检测银丹心脑通软胶囊的指纹图谱，并能有效确定相关峰对应的物质结构，能有效监控本品质量。本发明获得的指纹图谱具有全面，重复性好，稳定性好的特点。

Description

一种中药的指纹图谱质量控制测定方法

技术领域

本发明涉及中药领域，银丹心脑通组方的指纹图谱质量控制，具体涉及银丹心脑通软胶囊的HPLC指纹图谱的测定方法。

背景技术

中药色谱指纹图谱是一种综合的、可量化的鉴定中药材及中药制剂的手段，主要用于鉴别真伪和评价原药材、半成品及制剂质量的均一性、和稳定性。随着仪器自动化程度的提高和计算机的快速发展，大量的中药色谱指纹图谱相继涌现。

银丹心脑通软胶囊(YDXNT)是根据苗族医学“两病两纲”理论研制的复方制剂，由银杏叶、丹参、绞股蓝、灯盏细辛、大蒜、三七、山楂、天然冰片8味中药组成，具有活血化瘀、行气止痛、消食化滞等功效。目前的质量控制手段只能针对单一成分定性或定量，而中药指纹图谱技术能全面表述中药的化学成分，对中药的质量控制特别是在样品真伪品的鉴别及稳定性评价方面是一种行之有效的方法。

发明内容

针对目前银丹心脑质量控制仅有单一成分的定性或定量，不能全面控制中药复方的质量及质量控制与疗效的相关性不好等问题，本发明的目的在于建立银丹心脑通HPLC指纹图谱检测标准，并采用国家药典委员会的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”(2004A版)对银丹心脑通软胶囊进行相似度评价，对其质量进行有效的控制。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

银丹心脑通软胶囊的HPLC指纹图谱的检测方法，银丹心脑通软胶囊由银杏叶500g、丹参500g、灯盏细辛300g、绞股蓝300g、山楂400g、大蒜400g、三七200g、冰片10g制成1000粒软胶囊；

仪器与试药：Waters2695高效液相色谱仪(WatersCorporation，Milford，MA，USA)：四元泵，在线真空脱气系统，自动进样器，柱温箱，2996二极管阵列检测器，Empower2工作站，国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)，KQ3200DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；METTLERTOLEVO十万分之一电子天秤。

14个批次银丹心脑通软胶囊(贵州百灵企业集团制药股份有限公司)样品批次(表1)；芦丁、丹参酮ⅡA、丹酚酸B购于成都克洛玛生物科技有限公司(批号：130915)，乙腈均为色谱级，甲酸为分析级，水为娃哈哈纯净水。

该检测方法包括以下步骤：

(1)供试品溶液制备：称取银丹心脑通软胶囊内囊液0.3g，置于25mL具塞锥形瓶，加75％甲醇25mL在90W，40KHz，40℃条件下超声提取45min，8190r/min离心10min，取上清液，定容至25mL容量瓶中，用0.45μm微孔滤膜过滤，取滤液作为样品溶液；

(2)对照品溶液制备：精密称取对照品芦丁1.0mg，置于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度；

(3)色谱条件：5μm，4.6×250mm型号的DiamonsilC₁₈色谱柱，流动相0.3％甲酸乙腈(A)-0.3％甲酸水(B)，梯度洗脱程序：0～10min90％～82％(B)；10～25min82％(B)；25～38min82％～75％(B)；38～43min75％(B)；43～45min75％～67％(B)；45～50min67％～45％(B)；50～60min45％～40％(B)；60～75min40％(B)；75～80min40％～22％(B)；80～90min22％～0(B)；检测波长267nm，柱温30℃，流速1.0mL，进样量15μL；

(4)方法学考察：按照指纹图谱的要求进行精密度试验，稳定性试验，重复性试验；

(5)样品测定：取数批次银丹心脑通软胶囊内囊液，按照步骤(1)方法分别制备14份供试品溶液，各精密吸取15μL，采用步骤(3)的色谱条件进行测定，记录0～90min色谱图，色谱图中以芦丁为参照峰计算相对保留时间和相对峰面积；

(6)指纹图谱的建立：分别取数批次银丹心脑通软胶囊样品，按步骤(1)项下制备供试品溶液，按步骤(3)的方法测定并记录120min色谱图，结果所有色谱峰集中在90min内，比较批次样品的色谱图，确定了33个共有峰，经过与对照品图谱对比，确认11号为芦丁、30号为丹酚酸B、32号为丹参酮ⅡA，因黄酮类成分为复方的主要活性成分，选择芦丁为内参比峰，银丹心脑通通软胶囊和三个标准品HPLC色谱图。

(7)样品相似度计算：将所得14批次银丹心脑通软胶囊色谱图导入国家药典委员颁布的2004版“中药色谱指纹图相似度评价系统”，选取“时间窗”宽度为0.1min，采用样品S14生成对照谱，经过多点矫正和数据匹配生成色谱指纹图谱共有模式，对14批样品的指纹图谱进行相似度分析。

中药是在中医的理论指导下应用的，任何单一活性成分均不能反映中医用药的所体现的整体疗效，尤其是复方制剂，是通过多成分之间的相互协同作用发挥疗效，单一的测定一个或几个指标性成分不能全面反映中药材或中药复方的内在质量，而中药指纹图谱时一种全面的反映中药材或中药复方所包含的化学信息的分析方法。在本实验中，建立了银丹心脑通软胶囊的HPLC指纹图谱，同时测定了14批银丹心脑通软胶囊，标出了33个共有峰和一个共有峰群，所得到的色谱图相似度达到0.94以上；以其相对保留时间和相对峰面积来计算稳定性、重复性和精密度，相对保留时间的RSD值均小于0.5％，相对峰面积的RSD值均小于5.0％；在33个成分中，鉴定了3个成分，分别是芦丁、丹参酮ⅡA和丹酚酸B。

本发明与现有技术相比，具有以下优点：

1.本发明能有效的检测银丹心脑通软胶囊的指纹图谱，并能有效确定相关峰对应的物质结构，能有效监控本品质量。

2.本发明获得的指纹图谱比较全面，重复性好，稳定性好。

附图说明

图1是银丹心脑通软胶囊内囊液0～90min色谱图，色谱图中以芦丁为参照峰计算相对保留时间和相对峰面积。

具体实施方式

1.供试品溶液制备：称取S1～S14银丹心脑通软胶囊内囊液各0.3g，分别置于25mL具塞锥形瓶，加75％甲醇25mL超声提取(90W，40KHz，40℃)45min，8190r/min离心10min，取上清液，定容至25mL容量瓶中。用0.45μm微孔滤膜过滤，取滤液作为样品溶液。

2.对照品溶液制备：精密称取对照品芦丁1.0mg，置于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。

3.色谱条件：DiamonsilC₁₈色谱柱(5μm，4.6×250mm)，流动相0.3％甲酸乙腈(A)-0.3％甲酸水(B)，梯度洗脱程序：0～10min90％～82％(B)；10～25min82％(B)；25～38min82％～75％(B)；38～43min75％(B)；43～45min75％～67％(B)；45～50min67％～45％(B)；50～60min45％～40％(B)；60～75min40％(B)；75～80min40％～22％(B)；80～90min22％～0(B)。检测波长267nm，柱温30℃，流速1.0mL，进样量15μL。

4.方法学考察

4.1精密度试验：取S1供试品溶液按照2.3项下条件，连续进样5次，考察各共有峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD。结果表明，各色谱峰的相对保留时间均小于0.19％，各色谱峰的相对峰面积均小于4.29％，符合指纹图谱技术要求。

4.2稳定性试验：取S1供试品溶液按照2.3项下条件，在0、2、4、8、12h、24h测定，考察各共有峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD。结果表明，各色谱峰的相对保留时间均小于0.35％，各色谱峰的相对峰面积均小于3.85％，符合指纹图谱技术要求。

4.3重复性试验：取S1样品5份，按照2.1项下供试品溶液制备方法制备5份供试品溶液，在2.3项下条件进行测定，考察各共有峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD。结果表明，各色谱峰的相对保留时间均小于0.18％，各色谱峰的相对峰面积均小于4.65％，符合指纹图谱技术要求。

5.样品测定：取14批银丹心脑通软胶囊内囊液，按照2.1项下方法分别制备14份供试品溶液，各精密吸取15μL，采用2.3项下色谱条件进行测定，记录0～90min色谱图，银丹心脑通软胶囊的HPLC色谱图见图1，色谱图中以芦丁为参照峰计算相对保留时间和相对峰面积。

6.指纹图谱的建立：分别取14批银丹心脑通软胶囊样品，按2.1项下制备供试品溶液，按2.3项下方法测定并记录120min色谱图，结果所有色谱峰集中在90min内，比较了14批样品的色谱图，确定了33个共有峰，经过与对照品图谱对比，确认11号为芦丁、30号为丹酚酸B、32号为丹参酮ⅡA，因黄酮类成分为复方的主要活性成分，因此选择芦丁为内参比峰。

7.样品相似度计算：将14批银丹心脑通软胶囊色谱图导入国家药典委员颁布的“中药色谱指纹图相似度评价系统(2004版)”，选取“时间窗”宽度为0.1min，采用样品S14生成对照谱，经过多点矫正和数据匹配生成色谱指纹图谱共有模式，14批样品(表1)指纹图谱相似度计算结果见表2。

表1银丹心脑通样品批次

批号	生产日期
		S1	20140409
S2	20140411
		S3	20140413
S4	20140415
		S5	20140417
S6	20140419
		S7	20140421
S8	20140424
		S9	20140426
S10	20140428
		S11	20140418
S12	20140420
		S13	20140423
S14	20140425

表214批银丹心脑通软胶囊指纹图谱相似度计算数据

Claims

1.丹心脑通组方口服制剂的HPLC指纹图谱的检测方法，其特征在于银丹心脑通组方由银杏叶500g、丹参500g、灯盏细辛300g、绞股蓝300g、山楂400g、大蒜400g，三七200g、冰片10g组成，按照口服常规制剂工艺制成药品。

2.银丹心脑通软胶囊的HPLC指纹图谱的检测方法，银丹心脑通软胶囊由银杏叶500g、丹参500g、灯盏细辛300g、绞股蓝300g、山楂400g、大蒜400g、三七200g、冰片10g制成1000粒软胶囊；其特征在于该检测方法包括以下步骤：

（1）供试品溶液制备：称取银丹心脑通软胶囊内囊液0.3g，置于25mL具塞锥形瓶，加75%甲醇25mL在90W，40KHz，40℃条件下超声提取45min，8190r/min离心10min，取上清液，定容至25mL容量瓶中，用0.45μm微孔滤膜过滤，取滤液作为样品溶液；

（2）对照品溶液制备：精密称取对照品芦丁1.0mg，置于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度；

（3）色谱条件：5μm，4.6×250mm型号的DiamonsilC₁₈色谱柱，流动相0.3%甲酸乙腈（A）-0.3%甲酸水（B），梯度洗脱程序：0~10min90%~82%（B）；10~25min82%（B）；25~38min82%~75%（B）；38~43min75%（B）；43~45min75%~67%（B）；45~50min67%~45%（B）；50~60min45%~40%（B）；60~75min40%（B）；75~80min40%~22%（B）；80~90min22%~0（B）；检测波长267nm，柱温30℃，流速1.0mL，进样量15μL；

（4）方法学考察：按照指纹图谱的要求进行精密度试验，稳定性试验，重复性试验；

（5）样品测定：取14批次银丹心脑通软胶囊内囊液，按照步骤（1）方法分别制备14份供试品溶液，各精密吸取15μL，采用步骤（3）的色谱条件进行测定，记录0~90min色谱图，色谱图中以芦丁为参照峰计算相对保留时间和相对峰面积；

（6）指纹图谱的建立：分别取14批次银丹心脑通软胶囊样品，按步骤（1）项下制备供试品溶液，按步骤（3）的方法测定并记录120min色谱图，结果所有色谱峰集中在90min内，比较批次样品的色谱图，确定了33个共有峰，经过与对照品图谱对比，确认11号为芦丁、30号为丹酚酸B、32号为丹参酮ⅡA，因黄酮类成分为复方的主要活性成分，选择芦丁为内参比峰，银丹心脑通通软胶囊和三个标准品HPLC色谱图；

（7）样品相似度计算：将所得14批次银丹心脑通软胶囊色谱图导入国家药典委员颁布的2004版“中药色谱指纹图相似度评价系统”，选取“时间窗”宽度为0.1min，采用样品S14生成对照谱，经过多点矫正和数据匹配生成色谱指纹图谱共有模式，对14批样品的指纹图谱进行相似度分析。