CN102914612B - 一种菲牛蛭药材指纹图谱的测定方法 - Google Patents
一种菲牛蛭药材指纹图谱的测定方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102914612B CN102914612B CN201110224102.8A CN201110224102A CN102914612B CN 102914612 B CN102914612 B CN 102914612B CN 201110224102 A CN201110224102 A CN 201110224102A CN 102914612 B CN102914612 B CN 102914612B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- hiruto
- finger
- medicinal material
- liquid chromatography
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明提供了一种菲牛蛭药材指纹图谱的测定方法。菲牛蛭(Poecilobdella manillensis)，俗称金边蚂蝗，隶属于无吻蛭目、医蛭科、牛蛭属，具有显著的抗凝血、抗血栓、溶栓、抗血小板聚集活性，具有显著的药用价值，迄今为止药典和地方标准均无收载，也无任何关于指纹图谱的报道，本发明采用高效液相色谱法对菲牛蛭药材进行测定，建立了菲牛蛭药材的指纹图谱，为该药材的整体质量评价提供了方法，用于菲牛蛭药材原料质量控制。
Description
技术领域
本发明涉及一种菲牛蛭药材指纹图谱的测定方法，属于药物分析技术领域。
背景技术
菲牛蛭(Poecilobdella manillensis)，俗称金边蚂蝗，隶属于无吻蛭目、医蛭科、牛蛭属，主要分布于广西、广东、海南和福建等省区,并且可以进行人工养殖，其具有显著的抗凝血、抗血栓、溶栓、抗血小板聚集活性，主要化学成分为脂肪酸、氨基酸和蛋白质，其中以报道的活性成分为水蛭素P6、水蛭素P18、菲牛蛭素A和菲牛蛭素B，急性毒性试验表明菲牛蛭没有明显的毒副作用，因此其具有显著的药用价值，迄今为止药典和地方标准均无收载，也无任何关于指纹图谱的报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种菲牛蛭指纹图谱的测定方法。
本发明所述指纹图谱的测定方法是采用高效液相色谱法测定菲牛蛭的指纹图谱。
本发明所述指纹图谱的测定方法供试液配制方法及色谱条件优选为：
供试液配制方法：菲牛蛭药材干品粉碎，过40目筛，取0.40g，加5ml去离子水超声15min，4500r·min-1离心15min，用0.45μm滤膜滤过，滤液作为高效液相色谱供试品溶液备用；
色谱条件：色谱柱为C18柱,规格为250mm×4.6mm,5μm；流动相：A相为乙腈，B相为水,梯度洗脱；洗脱程序为0→5min，A为0%，5→23min，A为0%→4%，23→24min，A为4%→5%，24-66min，A为5%→21.4%；流速：1ml·min-1；柱温：20℃；检测波长为254nm。
为证实该方法准确可靠，重复性好，能够用于控制菲牛蛭药材的内在质量进行如下方法学验证：
1仪器与试药
Waters高效液相色谱仪(2695-2996，美国Waters公司)；电子天平(AG135，MettlerToledo)；KQ5200B型超声波清洗器(昆山市超声仪有限公司)；高速万能粉碎机（天津市太斯特仪器有限公司）；相似度计算软件：中药色谱指纹图谱相似度评价系统A版。
乙腈为色谱纯（Fisherscientific)；实验用水为超纯水。
菲牛蛭由广西科康生物科技有限公司提供，批号为：200901、200902、200903、201001、201002、201003、201104、201101、201102，201103。
2方法与结果
2.1供试品溶液制备
供试液配制方法：菲牛蛭药材干品粉碎，过40目筛，取0.40g，加5ml去离子水超声15min，4500r·min-1离心15min，用0.45μm滤膜滤过，滤液作为高效液相色谱供试品溶液备用；
2.2液相色谱条件
色谱柱为C18柱,规格为250mm×4.6mm,5μm；流动相：A相为乙腈，B相为水,梯度洗脱；洗脱程序为0→5min，A为0%，5→23min，A为0%→4%，23→24min，A为4%→5%，24-66min，A为5%→21.4%；流速：1ml·min-1；柱温：20℃；检测波长为254nm。
2.3方法学考察
2.3.1精密度试验
取同一批号供试品溶液，连续进样5次，测得各共有峰相对保留时间和峰面积RSD均小于3%，表明进样的精密度良好。
2.3.2稳定性试验
取同一批号供试品溶液，分别于0、2、4、8、12、24h进样，测得各共有峰相对保留时间和峰面积RSD均小于3%，表明供试品溶液在24h内稳定。
2.3.3重复性试验
取同一批号供试品，按2.2项方法，分别制备5份供试品溶液，分别进样，测得各共有峰相对保留时间和峰面积RSD均小于3%，表明方法重复性较好。
2.3.4菲牛蛭药材特征指纹图谱及溶剂的测定图谱，见图1和图2，由图可见，溶剂对样品测定无干扰。按上述方法检测10批样品指纹图谱,同时生成对照分峰，标示了指纹图谱中23个共有峰，其中6、7、8、13、14、16，17和21号的峰为强吸收峰。
指纹图谱的建立及相似度分析
2.4.1指纹图谱的建立
取10批菲牛蛭药材样品，菲牛蛭药材指纹图谱共有模式确立利用中国药典“中药色谱指纹图谱相似度评价系统A版”，将1-10批次菲牛蛭药材图谱数据导入，经数据自动匹配，以中位数法生成对照指纹图谱，指纹图谱见图3。
指纹图谱相似度分析
按照建立起来的指纹图谱对不同批次的菲牛蛭药材进行相似度分析，相似度数据见表1，结果表明其共有峰RSD＞0.9，具有很好的相似度。
表1十批菲牛蛭药材指纹图谱与对照指纹图谱相似度
| Sl | S2 | S3 | S4 | S5 | S6 | S7 | S8 | S9 | Sl0 | 对照指纹图 | |
| Sl | 1.000 | 0.931 | 0.972 | 0.967 | 0.964 | 0.994 | 0.933 | 0.924 | 0.969 | 0.978 | 0.983 |
| S2 | 0.931 | 1.000 | 0.935 | 0.932 | 0.928 | 0.939 | 0.994 | 0.994 | 0.946 | 0.952 | 0.973 |
| S3 | 0.972 | 0.935 | 1.000 | 0.998 | 0.998 | 0.974 | 0.940 | 0.921 | 0.968 | 0.976 | 0.987 |
| S4 | 0.967 | 0.932 | 0.998 | 1.000 | 0.998 | 0.972 | 0.937 | 0.918 | 0.963 | 0.973 | 0.984 |
| S5 | 0.964 | 0.928 | 0.998 | 0.998 | 1.000 | 0.967 | 0.932 | 0.915 | 0.960 | 0.969 | 0.982 |
| S6 | 0.994 | 0.939 | 0.974 | 0.972 | 0.967 | 1.000 | 0.943 | 0.927 | 0.969 | 0.978 | 0.986 |
| S7 | 0.933 | 0.994 | 0.940 | 0.937 | 0.932 | 0.943 | 1.000 | 0.985 | 0.955 | 0.950 | 0.974 |
| S8 | 0.924 | 0.994 | 0.921 | 0.918 | 0.915 | 0.927 | 0.985 | 1.000 | 0.940 | 0.945 | 0.964 |
| S9 | 0.969 | 0.946 | 0.968 | 0.963 | 0.960 | 0.969 | 0.955 | 0.940 | 1.000 | 0.991 | 0.985 |
| S10 | 0.978 | 0.952 | 0.976 | 0.973 | 0.969 | 0.978 | 0.950 | 0.945 | 0.991 | 1.000 | 0.990 |
| 对照指纹图 | 0.983 | 0.973 | 0.987 | 0.984 | 0.982 | 0.986 | 0.974 | 0.964 | 0.985 | 0.990 | 1.000 |
3色谱条件优选
3.1检测波长的选择
为了在指纹图谱中获得最丰富的菲牛蛭化学成分信息，参照文献对菲牛蛭指纹图谱的检测波长进行了选择，范围为191～600nm,对此范围内全部波长进行扫描，结果显示在254nm下指纹图谱的色谱峰数目最多，代表的化学成分信息量最大，峰的分离也较好，所以确定254nm为检测波长。
3.2样品预处理方法的选择取
同一样品2份，分别以水和生理盐水超声萃取。结果显示，相比于文献中用生理盐水得到的样品能够得到更有效的提取，提取得到的色谱图反应的化学信息量最大且分离度高，所以确定用水对菲牛蛭进行提取。之后又对提取时间15min、20min、25min和35min进行考查，结果显示15min已充分提取且效果佳，故本实验采用水超声15min提取。
3.3 流动相的选择
分别以乙腈-水、甲醇-水，乙腈-磷酸水和乙腈-生理盐水等体系为流动相进行洗脱色谱分析，结果显示用甲醇-水溶剂系统进行洗脱时，峰形堆积，分离度不好，并且色谱峰数目很少；尝试了乙腈-磷酸溶液质量分数为0.1%体系，样品很快被冲出；乙腈-生理盐水较差；而采用乙腈-水分离效果最好。
3.4柱温选择
分别考察了15℃、20℃、25℃、30℃，35℃结果显示20℃分离效果最好。
3.5 色谱柱的选择
分别考察了Waterssymmetry(symmetryshieldTM,250mm×4.6mm,5μm)，WatersBiosuite125(250mm×4.6mm,5μm)和TSK-GELG4000SW(300mm×7.5mm,10μm)柱，结果显示Waterssymmetry(symmetryshieldTM,250mm×4.6mm,5μm)适合分离。
结果显示用上述方法确立的菲牛蛭药材指纹图谱方法有较好的相关性，不同批次色谱图谱的相似度均大于0.92，表明该方法准确、重复性好，可作为控制菲牛蛭药材的质量依据。
附图说明
图1菲牛蛭药材高效液相指纹图谱。
图2溶剂指纹图谱。
图3 10批菲牛蛭药材高效液相指纹图谱与对照指纹图谱。
具体实施方式
实施例1
供试液配制方法：菲牛蛭药材干品粉碎，过40目筛，取0.40g，加5ml去离子水超声15min，4500r·min-1离心15min，用0.45μm滤膜滤过，滤液作为高效液相色谱供试品溶液备用；
色谱条件：色谱柱为C18柱,规格为250mm×4.6mm,5μm；流动相：A相为乙腈，B相为水,梯度洗脱；洗脱程序为0→5min，A为0%，5→23min，A为0%→4%，23→24min，A为4%→5%，24-66min，A为5%→21.4%；流速：1ml·min-1；柱温：20℃；检测波长为254nm。
取供试品溶液，按上述色谱条件，进样，记录色谱图，经与标准图谱比对，完全拟合。
Claims (1)
1.一种菲牛蛭药材的指纹图谱测定方法，该方法采用高效液相色谱法测定指纹图谱，其特征在于所述高效液相色谱法的供试液配制方法及色谱条件为：
供试液配制方法：菲牛蛭药材干品粉碎，过40目筛，取0.40g，加5ml去离子水超声15min，4500r·min-1离心15min，用0.45μm滤膜滤过，滤液作为高效液相色谱供试品溶液备用；
色谱条件：色谱柱为C18柱,规格为250mm×4.6mm,5μm；流动相：A相为乙腈，B相为水,梯度洗脱；洗脱程序为0→5min，A为0%，5→23min，A为0%→4%，23→24min，A为4%→5%，24-66min， A为5%→21.4%；流速：1ml·min-1；柱温：20℃；检测波长为254nm。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201110224102.8A CN102914612B (zh) | 2011-08-06 | 2011-08-06 | 一种菲牛蛭药材指纹图谱的测定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201110224102.8A CN102914612B (zh) | 2011-08-06 | 2011-08-06 | 一种菲牛蛭药材指纹图谱的测定方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102914612A CN102914612A (zh) | 2013-02-06 |
| CN102914612B true CN102914612B (zh) | 2015-10-21 |
Family
ID=47613069
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201110224102.8A Active CN102914612B (zh) | 2011-08-06 | 2011-08-06 | 一种菲牛蛭药材指纹图谱的测定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102914612B (zh) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113984936A (zh) * | 2021-12-09 | 2022-01-28 | 车延柠 | 一种水蛭酶解多肽的lc-ms特征图谱、检测方法及其应用 |
| CN115902077B (zh) * | 2022-10-17 | 2024-06-11 | 广东一方制药有限公司 | 蚂蟥的特征图谱及其构建方法与应用 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5114922A (en) * | 1988-06-11 | 1992-05-19 | Ciba-Geigy Corporation | Polypeptides with an anticoagulant activity |
| CN1452986A (zh) * | 2002-04-28 | 2003-11-05 | 康强 | 一种水蛭提取物及其生产方法和用途 |
| CN1844911A (zh) * | 2006-01-24 | 2006-10-11 | 李振国 | 一种水蛭指纹图谱的建立方法和水蛭药材的鉴别方法 |
| CN101703524A (zh) * | 2009-12-09 | 2010-05-12 | 鲁南制药集团股份有限公司 | 一种水蛭及含有水蛭的制剂的质量控制方法 |
-
2011
- 2011-08-06 CN CN201110224102.8A patent/CN102914612B/zh active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5114922A (en) * | 1988-06-11 | 1992-05-19 | Ciba-Geigy Corporation | Polypeptides with an anticoagulant activity |
| CN1452986A (zh) * | 2002-04-28 | 2003-11-05 | 康强 | 一种水蛭提取物及其生产方法和用途 |
| CN1844911A (zh) * | 2006-01-24 | 2006-10-11 | 李振国 | 一种水蛭指纹图谱的建立方法和水蛭药材的鉴别方法 |
| CN101703524A (zh) * | 2009-12-09 | 2010-05-12 | 鲁南制药集团股份有限公司 | 一种水蛭及含有水蛭的制剂的质量控制方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| 中药菲牛蛭化学成分的分析;苗艳丽 等;《中成药》;20070831;第29卷(第8期);1248，附1-2 * |
| 菲牛蛭的研究进展;周维官 等;《广西科学院学报》;20100228;第26卷(第1期);74-77 * |
| 菲牛蛭的酸水解及其棕色化反应产物的分析;苗艳丽 等;《食品科技》;20090930;第34卷(第9期);108-111 * |
| 蚂蝗及其混淆品菲牛蛭的高效毛细管电泳法鉴别;刘兴国 等;《时珍国医国药》;20090831;第20卷(第8期);1871-1872 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN102914612A (zh) | 2013-02-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN105628834B (zh) | 蒙药漏芦花指纹图谱建立方法以及质量评价方法 | |
| CN102095822A (zh) | 一种测定烟用山楂酊中有机酸的方法 | |
| CN106353430A (zh) | 一种基于多指标活性成分测定的前列欣胶囊质量评价方法 | |
| CN106370739A (zh) | 康复新液制剂指纹图谱的质量测定方法及标准指纹图谱 | |
| CN105987966A (zh) | 基于谱效关系的广东紫珠质量控制方法及其模型建立方法 | |
| CN111487344B (zh) | 益母草颗粒指纹图谱的检测方法 | |
| CN101256176A (zh) | 一种色谱峰匹配的分析方法 | |
| CN104374844A (zh) | 丹参药材中水溶性成分的含量测定方法及其应用 | |
| CN105699506B (zh) | 一种中成药“二丁颗粒”hplc指纹图谱的构建方法 | |
| CN102914612B (zh) | 一种菲牛蛭药材指纹图谱的测定方法 | |
| CN102998375B (zh) | 一种同时检测养血清脑颗粒中阿魏酸与芍药苷含量的方法 | |
| CN110243986B (zh) | 一种活血消瘿片hplc指纹图谱及其制备方法 | |
| CN112684036A (zh) | 黄蛭益肾胶囊指纹图谱测定方法及其应用 | |
| CN102309531A (zh) | 一种西洋参药材指纹图谱的测定方法 | |
| CN104849384B (zh) | 建立健肝乐制剂指纹图谱的方法及其应用 | |
| CN109142563B (zh) | 一种龟龄集uplc指纹图谱的构建方法及其应用 | |
| CN110988238A (zh) | 一种芫花标准汤剂hplc特征图谱的构建方法及其成分含量测定方法 | |
| CN106153805A (zh) | 一种元胡止痛胶囊指纹图谱的构建方法及其应用 | |
| CN108548885A (zh) | 二维液相色谱检测复方南星止痛膏的方法 | |
| CN105588888A (zh) | 一种中药的指纹图谱质量控制测定方法 | |
| CN110632198B (zh) | 一种消炎止咳片的hplc指纹图谱及其构建方法和应用 | |
| CN115032310A (zh) | 一种何首乌中6种二蒽酮类化合物的检测方法 | |
| CN101008632A (zh) | 五味子水煎液的hplc标准指纹图谱及其建立方法 | |
| CN110308213B (zh) | 滋肾育胎丸指纹图谱构建方法及其在质量检测中的应用 | |
| CN113917009A (zh) | 北柴胡非皂苷类成分hplc指纹图谱的构建方法及应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant |