CN111879884A - 一种中药制剂的质量控制方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种中药制剂的质量控制方法，采用HPLC特征图谱对温经汤中的化学成分种类及数量进行有效表征，并同时测定温经汤制剂中芍药苷、甘草苷、β‑蜕皮甾酮、阿魏酸的含量；色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶柱；流动相A为乙腈，流动相B为0.05wt％磷酸水溶液，洗脱梯度为0‑16min：流动相A的体积分数由16.5％渐变至17.6％，16‑20min：流动相A的体积分数由17.6％渐变至32％，20‑45min：流动相A的体积分数由32％渐变至38％，45‑50min：流动相A的体积分数由38％渐变至100％。本发明可使温经汤制剂的含量测定在25min内检测完毕，特征图谱在60min内检测完毕，其特征图谱可快速、精准地反映出温经汤的质量信息。

Description

一种中药制剂的质量控制方法

技术领域

本发明涉及中药质量控制技术领域，具体涉及一种中药制剂的质量控制方法。

背景技术

温经汤最早见于张仲景的《金匮要略》，后世对该方评价极高，清代医家陈修园曾这么评价温经汤：“《金匮》温经汤一方，无论阴阳虚实、闭塞崩漏、老少，善用之无不应手取效。”宋代陈自明所著的《妇人大全良方》(1237年)收录的温经汤为其加减方，并被国家中医药管理局收录入《古代经典名方目录》中，其组方由当归、川芎、白芍、肉桂、牡丹皮、莪术、人参、甘草、牛膝组成。温经汤能温经散寒、活血调经，传统用于主治经脉不通，血凝不行，绕脐寒疝痛彻。现代临床广泛用于痛经、月经不调、子宫内膜异位症、盆腔炎等妇科疾病的治疗，此外对于痤疮、湿疹等皮肤病有一定的疗效。

目前，中药汤剂是临床用药的主流，但因煎煮方法、煎煮器具等原因使得煎煮制备的汤剂质量差异较大，临床疗效也随之各异。经典名方临床应用广泛、疗效确切、具有明显特色及优势。因此，运用现代科学技术将经典名方开发传承为携带方便、便于服用、质量可控的中药制剂，不仅能够弥补传统中药汤剂的不足，更能促进经典名方的临床应用。由于中药复方制剂均为多组分复杂体系，因此质量控制难度系数较大。而特征图谱是一种综合的、多指标的质量控制手段，可以比较全面地反映复方制剂中所含的化学成分种类及数量，进而对药品质量进行整体描述和评价，对于阐明药效物质基础，促进中药现代化具有重要意义。因HPLC法具有选择性高、分析速度快、灵敏度高等优点，且中药大多数化学成分可在HPLC上进行分析检测，因此， HPLC法成为中药特征图谱研究中的首选方法。

温经汤由九味中药组成，因为处方中药材种类较多，因此化学成分复杂。其中莪术、当归、川芎、牡丹皮、肉桂均含有挥发性物质，在制备物质基准时，需充分考虑其能否充分体现原汤剂的化学成分特性，从而为后续制剂的研究提供可靠、真实的质量属性参数。此外该处方还含有皂苷类、单帖糖苷类、苯丙酸类、黄酮类等主要化学成份，因此分析检测难度较大，相关技术存在检测时间长的问题。

发明内容

本发明提供一种中药制剂的质量控制方法，解决了相关技术中温经汤制剂检测方法检测时间长的问题。

本发明提供的中药制剂的质量控制方法，采用高效液相色谱法检测温经汤制剂化学成分及其含量，温经汤制剂由当归、川芎、白芍、牡丹皮、肉桂、莪术、人参、甘草、牛膝制成，其色谱条件为：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶柱；流动相由流动相A和流动相B组成，其中，流动相A为乙腈，流动相B为0.05wt％磷酸水溶液，洗脱梯度为0-16min：流动相A的体积分数由16.5％渐变至17.6％，16-20min：流动相A的体积分数由17.6％渐变至32％，20-45min：流动相A的体积分数由32％渐变至38％，45-50min：流动相A的体积分数由38％渐变至100％。

优选地，流速为0.3mL/min～0.8mL/min，柱温为20～50℃，进样量为5μL～50μL；更优选地，流速为0.5mL/min；柱温为35℃，进样量为20μL。

优选地，色谱柱径长规格为4.6mm×150mm，填料粒径为3μm。

优选地，检测仪器采用二极管阵列检测器，指纹图谱检测波长为 230～270nm，更优选地，检测波长为254nm。

优选地，对照品溶液为含有芍药苷、甘草苷、β-蜕皮甾酮、阿魏酸、桂皮醛、丹皮酚、甘草酸铵的甲醇溶液，其中，芍药苷浓度为25～ 110μg/mL，甘草苷浓度为6～26μg/mL，β-蜕皮甾酮浓度为1.5～16μg/mL，阿魏酸浓度为2.5～10.0μg/mL，桂皮醛浓度为25～75μg/mL，丹皮酚浓度为25～75μg/mL，甘草酸铵浓度为20～60μg/mL。更优选地，对照品溶液中芍药苷浓度为52μg/mL、甘草苷浓度为13μg/mL、β-蜕皮甾酮浓度为3μg/mL、阿魏酸浓度为5μg/mL、桂皮醛浓度为48μg/mL、丹皮酚浓度为47μg/mL、甘草酸铵浓度为37μg/mL。

优选地，供试品特征图谱中应呈现14个特征峰，其中7个峰应分别与相应的参照物峰保留时间相一致，与甘草苷参照物峰相应的峰为S 峰(峰6)，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±5％之内，芍药苷、甘草苷、β-蜕皮甾酮、阿魏酸的特征峰对应的浓度均不小于规定值时，判定供试品合格。

优选地，温经汤制剂供试品溶液按如下方法制备：将温经汤制剂置于容量瓶中，加甲醇，超声提取，放冷，定容至刻度，摇匀，即成。

优选地，温经汤制剂为液体制剂或固体制剂，液体制剂为口服液、合剂、糖浆剂中的一种，固体制剂为粉剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂中的一种。

本发明提供的技术方案带来的有益效果如下：

本发明提供的中药制剂的质量控制方法，可使温经汤的有效成分 (芍药苷、甘草苷、β-蜕皮甾酮、阿魏酸)含量在25min内检测完毕，特征图谱在60min内检测完毕，其特征图谱可快速、精准地反映出温经汤的质量信息，从而能够达到更加全面、有效地控制温经汤制剂产品质量的目的。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明实施例提供的用于检测的温经汤汤剂的制备方法流程图。

图2是本发明实施例提供的温经汤汤剂的质量检测方法流程图。

图3是本发明实施例提供的芍药苷、甘草苷、β-蜕皮甾酮、阿魏酸对照品溶液图谱。

图4是本发明实施例提供的芍药苷、甘草苷、β-蜕皮甾酮、阿魏酸的供试品溶液图谱。

图5是本发明实施例提供的特征图谱参照物图谱。

图6是本发明实施例提供的温经汤汤剂在检测波长为254nm条件下的特征图谱。

图7是本发明实施例提供的连续15批样品特征图谱对比色谱图。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种中药制剂的质量控制方法，下面结合附图和数据对本发明的技术方案作详细的描述。

以下实施例中，术语“60％甲醇”指的甲醇和二次水按体积比3:2混合形成的甲醇水溶液，“0.05％磷酸水”指的是每100mL二次水中添加 0.05mL市售色谱纯浓磷酸制备的磷酸水溶液。

本发明用于检测的温经汤制剂，含当归、川芎、白芍、牡丹皮、肉桂、莪术各2.505～7.515重量份，人参、甘草、牛膝各4.995～14.985 重量份。

本发明实施例用于检测的温经汤制剂为温经汤汤剂，每一煎重量份含如下饮片：当归、川芎、白芍、牡丹皮、肉桂、莪术各2.505g～7.515g，人参、甘草、牛膝各4.995g～14.985g。

如图1所示，本发明实施例用于检测的温经汤汤剂的制备方法包括以下步骤：

S101，按每一煎重量份计称取如下饮片：

咀的当归、川芎、白芍、牡丹皮、肉桂、莪术、人参、甘草、牛膝；

S102，将饮片混合，置于3L砂锅中，加1575mL(药材的26.25 倍量)水；

S103，开盖，武火加热煮沸，文火保持微沸至煎液840mL，即得温经汤汤剂。

如图2所示，本发明实施例提供的温经汤汤剂的检测方法包括以下步骤：

S201：采用高效液相色谱建立温经汤汤剂指纹图谱。

S202：用高效液相色谱法测定温经汤汤剂中芍药苷、甘草苷、β- 蜕皮甾酮、阿魏酸的含量，供试品特征图谱中应呈现14个特征峰，其中7个峰应分别与相应的参照物峰保留时间相一致，与甘草苷参照物峰相应的峰为S峰(峰6)，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±5％之内。且芍药苷、甘草苷、β-蜕皮甾酮、阿魏酸的特征峰对应的浓度均不小于规定值时，则判定供试品合格。

下面结合实施例对本发明的技术方案作进一步描述。

本发明试药及仪器：

试药：

芍药苷对照品(批号：110736-201943，中国食品药品检定研究院)；

甘草苷对照品(批号：111610-201908，中国食品药品检定研究院)；

β-蜕皮甾酮对照品(批号：111638-201907，中国食品药品检定研究院)；

阿魏酸对照品(批号：110773-201915，中国食品药品检定研究院)；

桂皮醛对照品(批号：110701-201821，中国食品药品检定研究院)；

丹皮酚对照品(批号：110708-201407，中国食品药品检定研究院)；

甘草酸铵对照品(批号：110731-201720，中国食品药品检定研究院)；

乙腈(Fisher Scientific，色谱纯)；

温经汤汤剂(试验室自制，具体方法见实施例1)。

试剂为分析纯，水为超纯水。

仪器：

岛津LC-20A型高效液相色谱仪(SPD-M20A二极管阵列检测器)，

METTLER TOLEDO XSR105/A型十万分之一电子天平；

Sartorious TE212-L百分之一型电子天平(赛多利斯科学仪器(北京) 有限公司)；

KQ-500E型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

实施例1：温经汤标准汤剂的制备

称取如下饮片：

咀的当归、川芎、白芍、牡丹皮、肉桂、莪术各5.00g，

咀的人参、甘草、牛膝各10.00g；混合后置于3L砂锅中，加1575mL水，开盖，武火加热煮沸，文火保持微沸至煎液840mL，趁热滤过，滤液冷却至室温，加水定容至1000mL，即得温经汤标准汤剂。

实施例2：HPLC法测定温经汤汤剂中芍药苷、甘草苷、β-蜕皮甾酮、阿魏酸的含量

(1)色谱条件及系统适用性

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.05％磷酸水为流动相A，以乙腈为流动相B；检测波长：254nm；理论塔板数按芍药苷计算应不小于3000；流速：0.5mL/min；柱温：35℃。梯度洗脱程序如表1所示。

表1梯度洗脱程序

(2)对照品溶液的制备

精密称取芍药苷、甘草苷、β-蜕皮甾酮、阿魏酸对照品适量，加60％甲醇制成芍药苷浓度为52μg/mL、甘草苷浓度为13μg/mL、β-蜕皮甾酮浓度为3μg/mL、阿魏酸浓度为5μg/mL的对照品溶液1。

(3)供试品溶液的制备

精密量取温经汤标准汤剂10mL，置于25mL容量瓶中，加10mL 60％甲醇，超声处理，放冷，定容至刻度，摇匀后用有机系0.45μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液1。

(4)检测波长的选择

《中国药典》2015年版白芍中芍药苷的检测波长为230nm，甘草中甘草苷的检测波长为237nm，当归中阿魏酸检测波长为316nm，川芎中阿魏酸检测波长为321nm，牛膝中β-蜕皮甾酮的检测波长为250nm，因β-蜕皮甾酮的含量略低，峰面积较小，故选择在其最大吸收波长附近 250nm检测。秉着运用最少波长组的简便方法原则，最终选择254nm为检测波长。

(5)测定法

精密吸取对照品溶液1与供试品溶液1各20μL，分别注入液相色谱仪，测定，得对照品溶液1的图谱与供试品溶液1的图谱。图3是对照品溶液1的图谱。图4是供试品溶液1的图谱。

(6)标准曲线的制备

按照对照品溶液1的制备方法，取芍药苷、甘草苷、β-蜕皮甾酮、阿魏酸对照品适量，配制成芍药苷浓度为101.48μg/mL、甘草苷浓度为 25.82μg/mL、β-蜕皮甾酮浓度为15.28μg/mL、阿魏酸浓度为9.97μg/mL 的对照品溶液2；分别进样2μL、4μL、6μL、8μL、10μL、12μL、15μL、 20μL，测定并记录色谱图。以进样量(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，以进样量对峰面积进行回归分析，绘制标准曲线。芍药苷的线性回归方程为：Y＝257.8751x-3194.0414，r²＝0.9999，线性关系良好；甘草苷的线性回归方程为Y＝1329.5769x+3088.9370，r²＝0.9999，线性关系良好；β-蜕皮甾酮的线性回归方程为Y＝2231.8322x+2186.528， r²＝0.9998，线性关系良好；阿魏酸的线性回归方程为 Y＝3110.8786x+1048.4443，r²＝0.9999，线性关系良好。芍药苷的线性范围为202.98～2029.81ng，甘草苷的线性范围为51.65～516.50ng，β-蜕皮甾酮的线性范围为12.02～120.16ng，阿魏酸的线性范围为19.94～ 199.44ng。本发明所用供试品溶液与对照品溶液的进样量均在此范围内。

(7)方法学考察

该测定方法经过方法学验证，空白样品对测定结果无干扰，样品在72h的稳定性良好，芍药苷、甘草苷、β-蜕皮甾酮、阿魏酸的RSD值依次分别为：0.59％，0.18％，0.43％，0.19％；重复性测定结果RSD值依次分别为0.62％，0.76％，0.53％，0.31％。加样回收率为：芍药苷92.18％ (n＝6)，RSD为1.05％；甘草苷101.93％(n＝6)，RSD为0.37％；β- 蜕皮甾酮98.53％(n＝6)，RSD为0.95％；阿魏酸99.52％(n＝6)，RSD 为0.85％；回收率均在90％～108％范围内，RSD值均小于3。表明方法准确度高，重复性良好。

实施例3：HPLC法建立温经汤汤剂的特征图谱的检测方法

(1)色谱条件及系统适应性

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；色谱柱：Venusil XBP C18， 4.6×150mm，粒径为3μm。以0.05％磷酸水为流动相A，以乙腈为流动相B；检测波长：254nm；理论塔板数按芍药苷计算应不小于3000；流速：0.5mL/min；柱温：35℃。梯度洗脱程序见表2。

表2梯度洗脱程序

(2)对照品溶液的制备

精密称定芍药苷、甘草苷、β-蜕皮甾酮、阿魏酸、桂皮醛、丹皮酚、甘草酸铵对照品适量，加60％甲醇制成芍药苷浓度为52μg/mL、甘草苷浓度为13μg/mL、β-蜕皮甾酮浓度为3μg/mL、阿魏酸浓度为5μg/mL、桂皮醛浓度为48μg/mL、丹皮酚浓度为47μg/mL、甘草酸铵浓度为 37μg/mL的对照品溶液3。

(3)供试品溶液的制备

精密量取温经汤标准汤剂10mL，置于25mL容量瓶中，加10mL 60％甲醇，超声处理，放冷，定容至刻度，摇匀后用有机系0.45μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液2。

(4)测定法

精密吸取对照品溶液3与供试品溶液2各20μL，注入液相色谱仪，测定，即得液相色谱图。

(5)精密度

取同一份温经汤汤剂，按供试品溶液2的制备方法制备供试品溶液 3，连续进样6次，以甘草苷为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积，并计算RSD(％)值。实验数据见表3、表4。

表3温经汤特征图谱精密度试验结果-相对保留时间

表4温经汤特征图谱精密度试验结果-相对峰面积

结果表明，以甘草苷为参照峰，各共有峰的相对保留时间RSD均小于0.1％，相对峰面积RSD均小于2％，说明仪器精密度良好。

(6)稳定性

取同一份温经汤汤剂，按供试品溶液2的制备方法制备供试品溶液4，分别于0～48h进样9次，以甘草苷为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积，并计算RSD(％)值。实验数据见表5、表 6。

表5温经汤特征图谱稳定性试验结果-相对保留时间

表6温经汤特征图谱稳定性试验结果-相对峰面积

结果表明，各共有峰的相对保留时间RSD均小于0.2％，相对峰面积RSD均小于5.0％，供试品溶液4在48h内稳定。

(7)重复性

取同一批号温经汤样品，按供试品溶液2的制备方法平行制备6 份供试品溶液5，按上述色谱条件分别进样分析，以甘草苷为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积，并计算RSD(％)值。实验数据见表7、表8。

表7温经汤特征图谱重复性试验结果-相对保留时间

表8温经汤特征图谱重复性试验结果-相对峰面积

结果表明，以甘草苷为参照峰，各共有峰的相对保留时间RSD均小于0.1％，相对峰面积RSD均小于3％，说明该方法重复性良好。

温经汤汤剂特征图谱的确定及相似度分析：

制备温经汤汤剂15份，分别制备温经汤汤剂供试品溶液6，按特征图谱测定法测定，记录图谱。供试品特征图谱中应呈现14个特征峰，其中7个峰应分别与相应的参照物峰保留时间相一致，与甘草苷参照物峰相应的峰标记为S峰(即峰6)，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±5％之内。规定值为：0.43(峰1)、 0.49(峰2)、0.57(峰3)、0.68(峰4，芍药苷专属峰)、0.92(峰5)、1.00(峰 6，甘草苷专属峰)、1.06(峰7，β-蜕皮甾酮专属峰)、1.12(峰8，阿魏酸专属峰)、1.85(峰9)、2.55(峰10，桂皮醛专属峰)、2.65(峰11)、2.86(峰 12，丹皮酚专属峰)、3.02(峰13，甘草酸铵专属峰)、3.55(峰14)。

运用中药色谱指纹图谱相似度评价软件(2012年版)处理图谱，以样品1(表9和图7中简称S1)作为参照图谱，得到温经汤汤剂对照指纹图谱。计算样品相似度，结果表明，使用同批次药材煎煮的15批温经汤汤剂的相似度在0.996-1.000之间(表9)，使用不同产地不同批次药材煎煮的15份温经汤汤剂相似度在0.898-1.000之间(表10)，相似度均较高。15批温经汤汤剂相似度评价结果见表9、表10。

表9同批次药材煎煮的15批温经汤汤剂特征图谱相似度评价结果

表10不同产地不同批次药材煎煮的15批温经汤汤剂特征图谱相似度评价结果

以上所述仅是本发明的具体实施方式，使本领域技术人员能够理解或实现本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所申请的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

Claims (10)

1.一种中药制剂的质量控制方法，其特征在于：采用高效液相色谱法检测温经汤制剂化学成分及其含量，所述温经汤制剂由当归、川芎、白芍、牡丹皮、肉桂、莪术、人参、甘草、牛膝制成，其色谱条件为：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶柱；流动相由流动相A和流动相B组成，其中，流动相A为乙腈，流动相B为0.05wt％磷酸水溶液，洗脱梯度为0-16min：流动相A的体积分数由16.5％渐变至17.6％，16-20min：流动相A的体积分数由17.6％渐变至32％，20-45min：流动相A的体积分数由32％渐变至38％，45-50min：流动相A的体积分数由38％渐变至100％。

2.根据权利要求1所述的中药制剂的质量控制方法，其特征在于:流速为0.3mL/min～0.8mL/min，柱温为20～50℃，进样量为5μL～50μL。

3.根据权利要求2所述的中药制剂的质量控制方法，其特征在于:流速为0.5mL/min；柱温为35℃，进样量为20μL。

4.根据权利要求1所述的中药制剂的质量控制方法，其特征在于:所述色谱柱径长规格为4.6mm×150mm，填料粒径为3μm。

5.根据权利要求1所述的中药制剂的质量控制方法，其特征在于:检测仪器采用二极管阵列检测器，指纹图谱检测波长为230～270nm。

6.根据权利要求5所述的中药制剂的质量控制方法，其特征在于:检测波长为254nm。

7.根据权利要求1所述的中药制剂的质量控制方法，其特征在于:对照品溶液为含有芍药苷、甘草苷、β-蜕皮甾酮、阿魏酸、桂皮醛、丹皮酚、甘草酸铵的甲醇溶液，其中，芍药苷浓度为25～110μg/mL，甘草苷浓度为6～26μg/mL，β-蜕皮甾酮浓度为1.5～16μg/mL，阿魏酸浓度为2.5～10.0μg/mL，桂皮醛浓度为25～75μg/mL，丹皮酚浓度为25～75μg/mL，甘草酸铵浓度为20～60μg/mL。

8.根据权利要求7所述的中药制剂的质量控制方法，其特征在于:对照品溶液中芍药苷浓度为52μg/mL、甘草苷浓度为13μg/mL、β-蜕皮甾酮浓度为3μg/mL、阿魏酸浓度为5μg/mL、桂皮醛浓度为48μg/mL、丹皮酚浓度为47μg/mL、甘草酸铵浓度为37μg/mL。

9.根据权利要求1所述的中药制剂的质量控制方法，其特征在于:当供试品特征图谱中呈现14个特征峰，其中的7个峰分别与相应的参照物峰保留时间相一致，以与甘草苷参照物峰相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间在规定值的±5％之内，且芍药苷、甘草苷、β-蜕皮甾酮、阿魏酸的的浓度均不小于规定值时，判定供试品合格。

10.根据权利要求1所述的中药制剂的质量控制方法，其特征在于:所述温经汤制剂为液体制剂或固体制剂，所述液体制剂为口服液、合剂、糖浆剂中的一种，所述固体制剂为粉剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂中的一种。

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