CN111044624A - 中药制剂的质量检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种中药制剂的质量检测方法。包括以下步骤:分别以没食子酸、芍药内酯苷、芍药苷、阿魏酸、甘草苷、β‑蜕皮甾酮、洋川芎内酯I、甘草素、肉桂酸、桂皮醛、丹皮酚、甘草酸铵和藁本内酯为对照品,采用高效液相色谱法建立所述中药制剂的指纹图谱;采用薄层色谱法鉴别所述中药制剂的当归、川芎、白芍、牡丹皮、人参、肉桂、甘草和牛膝;所述中药制剂由包括当归、川芎、白芍、肉桂、牡丹皮、莪术、人参、甘草和牛膝的原料制备而成。通过上述两种检测手段,能够对温经汤中药制剂进行全面的质量评价,方法简便、准确性高、重现性好,可为温经汤中药制剂的质量检测和评价提供科学依据,有效控制产品的质量。
Description
技术领域
本发明涉及药物分析技术领域,特别是涉及中药制剂的质量检测方法。
背景技术
温经汤为调经之祖方,处方来源于《妇人大全良方》,由当归、川芎、芍药、桂心、牡丹皮、莪术、人参、牛膝、甘草等组成,具有温经补虚、化瘀止痛的功能。方中肉桂温经散寒,通脉调经;人参甘温补气,助肉桂通阳散寒;莪术、丹皮、牛膝活血祛瘀,助当归、川芎、白芍行血养血调经;白芍、甘草配伍起缓急止痛之功。临床上,可用于各种宫寒导致的月经量少、月经不调等,应用广泛,效果良好。
目前已经有关于中药处方中单味药材的检测方法,但是,温经汤处方成分复杂,有效成分往往不是单一成分,而是几种成分共同发挥治疗作用,任何一种单一成分均不能反映其整体疗效,测定其中任何一种单一成分的含量也不能反映出其所体现的整体疗效。因此,目前关于温经汤的质量检测方法并不足以说明温经汤的质量,也不能区分市面上众多质量参差不齐的产品。
发明内容
基于此,建立一种能够全面、系统地检测温经汤的分析方法,尤其是建立温经汤的指纹图谱方法和薄层色谱鉴别方法,对于其全面质量检测和整体质量控制具有重要意义,本发明提供一种中药制剂的质量检测方法。
具体技术方案为:
一种中药制剂的质量检测方法,包括以下步骤。
分别以没食子酸、芍药内酯苷、芍药苷、阿魏酸、甘草苷、β-蜕皮甾酮、洋川芎内酯I、甘草素、肉桂酸、桂皮醛、丹皮酚、甘草酸铵和藁本内酯为对照品,采用高效液相色谱法建立所述中药制剂的指纹图谱;
采用薄层色谱法鉴别所述中药制剂的当归、川芎、白芍、牡丹皮、人参、肉桂、甘草和牛膝;
所述中药制剂由包括当归、川芎、白芍、肉桂、牡丹皮、莪术、人参、甘草和牛膝的原料制备而成。
与现有技术相比,本发明具有以下有益效果:
本发明采用高效液相色谱法和薄层色谱法对温经汤中药制剂的质量进行合理检测。
其中,采用高效液相色谱法建立温经汤药物制剂的指纹图谱,通过优化色谱条件、供试品溶液的制备方法,使中药制剂中的各化学分成实现较好的分离,从而建立了针对该中药制剂的指纹图谱的方法,获得了较为全面的图谱信息,具体为:以乙腈为流动相A,以0.05%磷酸水溶液为流动相B进行梯度洗脱,在120min内共标定了27个共有峰,并指认了其中的13个色谱峰,分别为没食子酸、芍药内酯苷、芍药苷、阿魏酸、甘草苷、β-蜕皮甾酮、洋川芎内酯I、甘草素、肉桂酸、桂皮醛、丹皮酚、甘草酸铵、藁本内酯,能够全面地反映温经汤药物制剂中化学物质的种类和数量,有利于温经汤药物制剂质量的可控性和产品质量的稳定性的提升,对指纹图谱中多个目标成分尤其是有效成分进行准确定量,使中药质量控制更加准确,能从根本上保证中药材质量以及批与批之间产品质量的一致性。
同时,采用薄层色谱法鉴别温经汤中的8味药材,包括当归、川芎、白芍、牡丹皮、人参、甘草、肉桂、牛膝。相应的薄层色谱斑点清晰且阴性对照无干扰。
综上,通过上述两种检测手段,能够对温经汤中药制剂进行全面的质量评价,方法简便、准确性高、重现性好,可为温经汤中药制剂的质量检测和评价提供科学依据,有效控制产品的质量。
附图说明
图1是当归、川芎的薄层色谱鉴别图,其中1是当归、川芎双阴性对照药材,2是阿魏酸,3是温经汤中药制剂供试品溶液,4是当归对照药材,5是川芎对照药材;
图2是白芍、牡丹皮的薄层色谱鉴别图,其中1是白芍对照药材,2是牡丹皮对照药材,3是芍药苷,4是温经汤中药制剂供试品溶液,5是白芍和牡丹皮阴性对照;
图3是牡丹皮的薄层色谱鉴别图,其中1是丹皮酚,2是温经汤中药制剂供试品溶液,3是牡丹皮对照药材,4是牡丹皮阴性对照;
图4是人参的薄层色谱鉴别图,其中1是人参皂苷Rb1,2是人参皂苷Re,3是人参皂苷Rg1,4是人参对照药材,5是人参阴性对照,6、7是温经汤中药制剂供试品溶液;
图5是甘草的薄层色谱鉴别图,其中1是甘草酸铵、甘草苷、异甘草苷混合对照,2、3是甘草阴性对照,4是甘草对照药材,5、6是温经汤中药制剂供试品溶液;
图6是肉桂的薄层色谱鉴别图,其中1是肉桂阴性对照,2是肉桂对照药材,3是温经汤中药制剂供试品溶液,4是桂皮醛;
图7是牛膝的薄层色谱鉴别图,其中1是β-蜕皮甾酮,2是温经汤中药制剂供试品溶液,3是牛膝对照药材,4是牛膝阴性对照;
图8是不同流动相体系考察结果;
图9是不同种类的酸作为流动相B的对比图谱;
图10是不同浓度的磷酸水作为流动相B的对比图谱;
图11是不同色谱柱的考察结果;
图12是不同检测波长的考察结果;
图13是不同柱温的考察结果;
图14是不同流速的考察结果;
图15是不同供试品溶液制备方法的考察结果;
图16是温经汤中药制剂的标准指纹图谱;
图17是白芍、牡丹皮的指纹图谱归属;
图18是川芎的指纹图谱归属;
图19是当归的指纹图谱归属;
图20是人参的指纹图谱归属(203nm);
图21是肉桂的指纹图谱归属;
图22是甘草的指纹图谱归属;
图23是莪术的指纹图谱归属;
图24是牛膝的指纹图谱归属;
图25是没食子酸对照品的指认;
图26是芍药苷对照品的指认;
图27是芍药内酯苷对照品的指认;
图28是阿魏酸对照品的指认;
图29是甘草苷对照品的指认;
图30是桂皮醛对照品的指认;
图31是甘草素对照品的指认;
图32是甘草酸铵对照品的指认;
图33是丹皮酚对照品的指认;
图34是肉桂酸对照品的指认;
图35是β-蜕皮甾酮对照品的指认;
图36是洋川芎内酯I对照品的指认;
图37是藁本内酯对照品的指认;
图38是温经汤中药制剂指纹图谱准确度考察;
图39是温经汤中药制剂指纹图谱精密度考察。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明进一步详细的说明。本发明可以以许多不同的形式来实现,并不限于本文所描述的实施方式。相反地,提供这些实施方式的目的是使对本发明公开内容理解更加透彻全面。
除非另有定义,本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的,不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
一种中药制剂的质量检测方法,包括以下步骤:
分别以没食子酸、芍药内酯苷、芍药苷、阿魏酸、甘草苷、β-蜕皮甾酮、洋川芎内酯I、甘草素、肉桂酸、桂皮醛、丹皮酚、甘草酸铵和藁本内酯为对照品,采用高效液相色谱法建立所述中药制剂的指纹图谱;
采用薄层色谱法鉴别所述中药制剂的当归、川芎、白芍、牡丹皮、人参、肉桂、甘草和牛膝;
所述中药制剂由包括当归、川芎、白芍、肉桂、牡丹皮、莪术、人参、甘草和牛膝的原料制备而成。
具体的,采用高效液相色谱法建立所述中药制剂的指纹图谱主要包括以下步骤:
(1)对照品溶液的制备:分别以没食子酸、芍药内酯苷、芍药苷、阿魏酸、甘草苷、β-蜕皮甾酮、洋川芎内酯I、甘草素、肉桂酸、桂皮醛、丹皮酚、甘草酸铵和藁本内酯为对照品,加溶剂溶解,得没食子酸对照品溶液、芍药内酯苷对照品溶液、芍药苷对照品溶液、阿魏酸对照品溶液、甘草苷对照品溶液、β-蜕皮甾酮对照品溶液、洋川芎内酯I对照品溶液、甘草素对照品溶液、肉桂酸对照品溶液、桂皮醛对照品溶液、丹皮酚对照品溶液、甘草酸铵对照品溶液和藁本内酯对照品溶液;
(2)供试品溶液的制备:向所述中药制剂中加入水,然后用水饱和正丁醇萃取2-5次,合并正丁醇层溶液,蒸干,加入溶剂溶解,过滤得供试品溶液;
(3)将所述供试品溶液、没食子酸对照品溶液、芍药内酯苷对照品溶液、芍药苷对照品溶液、阿魏酸对照品溶液、甘草苷对照品溶液、β-蜕皮甾酮对照品溶液、洋川芎内酯I对照品溶液、甘草素对照品溶液、肉桂酸对照品溶液、桂皮醛对照品溶液、丹皮酚对照品溶液、甘草酸铵对照品溶液和藁本内酯对照品溶液置于高效液相色谱仪中,测定。
在其中一个实施例中,所述高效液相色谱的色谱条件包括:
色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以乙腈为流动相A,以0.01-0.15%磷酸水溶液为流动相B,流速0.8-1.2mL/min,柱温25-35℃,检测波长200-400nm,进样量5-20μL,梯度洗脱;
洗脱条件为:
0-10min,保持流动相A的体积分数为5%,流动相B的体积分数为95%;
10min-20min,流动相A的体积分数由5%上升至12%,流动相B的体积分数由95%下降至88%;
20min-30min,流动相A的体积分数由12%上升至14%,流动相B的体积分数由88%下降至86%;
30min-60min,流动相A的体积分数由14%上升至23%,流动相B的体积分数由86%下降至77%;
60min-73min,流动相A的体积分数由23%上升至33%,流动相B的体积分数由77%下降至67%;
73min-95min,流动相A的体积分数由33%上升至50%;流动相B的体积分数由67%下降至50%;
95min-105min,流动相A的体积分数由50%上升至70%,流动相B的体积分数由50%下降至30%;
105-115min,流动相A的体积分数由70%上升至90%,流动相B的体积分数由30%下降至10%;
115-120min,保持流动相A的体积分数为90%,流动相B的体积分数为10%。
优选地,所述高效液相色谱的色谱条件包括:
色谱柱为依利特Supersil ODS2,以乙腈为流动相A,以0.1%磷酸水溶液为流动相B,流速1.0mL/min,柱温30℃,检测波长203nm和254nm。
上述采用高效液相色谱法建立温经汤药物制剂的指纹图谱,通过优化色谱条件、供试品溶液的制备方法,使中药制剂中的各化学成分实现较好的分离,从而建立了针对该中药制剂的指纹图谱的方法,获得了较为全面的图谱信息,具体为:以乙腈为流动相A,以0.05%磷酸水溶液为流动相B进行梯度洗脱,在120min内共标定了27个共有峰,并指认了其中的13个色谱峰,分别为没食子酸、芍药内酯苷、芍药苷、阿魏酸、甘草苷、β-蜕皮甾酮、洋川芎内酯I、甘草素、肉桂酸、桂皮醛、丹皮酚、甘草酸铵和藁本内酯,能够全面地反映温经汤药物制剂中化学物质的种类和数量,有利于温经汤药物制剂质量的可控性和产品质量的稳定性的提升,对指纹图谱中多个目标成分尤其是有效成分进行准确定量,使中药质量控制更加准确,能从根本上保证中药材质量以及批与批之间产品质量的一致性。
具体地,采用薄层色谱法鉴别所述中药制剂的当归、川芎、白芍、牡丹皮、人参、肉桂、甘草和牛膝的具体步骤如下:
用薄层色谱法鉴别所述中药制剂的当归、川芎主要包括以下步骤:
(1)供试品溶液的制备:向所述中药制剂中加水,然后用乙醚萃取2-5次,合并乙醚层溶液,挥干,残渣加乙酸乙酯溶解,得供试品溶液;
(2)对照药材和对照品溶液的制备:取当归对照药材、川芎对照药材,分别加入水,水浴加热,回流20min-40min后过滤,滤液用乙醚萃取2-5次,合并乙醚层溶液,挥干,残渣加乙酸乙酯溶解,得当归对照药材溶液和川芎对照药材溶液;另取阿魏酸对照品,加甲醇溶解,得阿魏酸对照品溶液。
(3)将所述供试品溶液、当归对照药材溶液和川芎对照药材溶液点样至同一硅胶G薄层板上,以体积比为(1-3):1的正己烷和乙酸乙酯的混合物作为展开剂,展开,显色。
采用薄层色谱法鉴别所述中药制剂的白芍、牡丹皮主要包括以下步骤:
(1)芍药苷的鉴别
供试品溶液A的制备:向所述中药制剂中加水,然后用乙醚萃取2-5次,弃去乙醚层溶液,再加入水饱和正丁醇溶液萃取2-5次,合并正丁醇层溶液,洗涤,蒸干,残渣加甲醇溶解,得供试品溶液A;
对照药材溶液和对照品溶液的制备:取白芍对照药材、牡丹皮对照药材,分别加入水,水浴加热,回流20min-40min后过滤,滤液用乙醚萃取2-5次,弃去乙醚层溶液,再加入水饱和正丁醇溶液萃取2-5次,合并正丁醇层溶液,洗涤,蒸干,残渣加甲醇溶解,得白芍对照药材溶液和牡丹皮对照药材溶液A;另取芍药苷对照品,加甲醇溶解,得芍药苷对照品溶液。
将所述供试品溶液A、白芍对照药材溶液、牡丹皮对照药材溶液A和芍药苷对照品溶液点样至同一硅胶G薄层板上,以体积比为40:(3-8):(8-15):(0.1-1)的三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇和甲酸的混合物作为展开剂,展开,显色;
(2)丹皮酚的鉴别
供试品溶液B的制备:向所述中药制剂中加水,然后用乙醚萃取2-5次,合并乙醚层溶液,挥干,残渣加丙酮溶解,得供试品溶液B;
对照药材溶液和对照品溶液的制备:取牡丹皮对照药材,加入水,水浴加热,回流20min-40min后过滤,滤液用乙醚萃取2-5次,合并乙醚层溶液,挥干,残渣加丙酮溶解,得牡丹皮对照药材溶液B;另取丹皮酚对照品,加丙酮溶解,得丹皮酚对照品溶液。
将所述供试品溶液B、牡丹皮对照药材溶液B和丹皮酚对照品溶液点样至同一硅胶G薄层板上,以体积比为(2-6):(1-3):0.1的环己烷、乙酸乙酯和冰醋酸的混合物作为展开剂,展开,显色。
采用薄层色谱法鉴别所述中药制剂的人参主要包括以下步骤:
(1)供试品溶液的制备:向所述中药制剂中加水,然后用水饱和正丁醇萃取2-5次,合并正丁醇层溶液,加氨试液,分层,取正丁醇层溶液,蒸干,残渣加甲醇溶解,得供试品溶液;
(2)对照药材溶液和对照品溶液的制备:取人参对照药材,加入水,水浴加热,回流20min-40min后过滤,滤液用水饱和正丁醇萃取2-5次,合并正丁醇层溶液,加氨试剂,分层,取正丁醇层溶液,蒸干,残渣加甲醇溶解,得人参对照药材溶液;另取人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rf对照品和人参皂苷Rg1对照品,加甲醇溶解,得人参皂苷Rb1对照品溶液、人参皂苷Re对照品溶液、人参皂苷Rf对照品溶液和人参皂苷Rg1对照品溶液;
(3)将所述供试品溶液、人参对照药材溶液、人参皂苷Rb1对照品溶液、人参皂苷Re对照品溶液、人参皂苷Rf对照品溶液和人参皂苷Rg1对照品溶液点样至同一硅胶G薄层板上,以体积比为(12-18):40:(20-25):(8-12)的三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇和水的混合物作为展开剂,展开,显色。
采用薄层色谱法鉴别所述中药制剂的甘草主要包括以下步骤:
(1)供试品溶液的制备:向所述中药制剂中加水,然后用乙醚萃取2-5次,弃去乙醚层溶液,加水饱和正丁醇萃取2-5次,合并正丁醇层溶液,洗涤,蒸干,残渣加甲醇溶解,得供试品溶液;
(2)对照药材溶液和对照品溶液的制备:取甘草对照药材,加入水,水浴加热,回流20min-40min后过滤,滤液用乙醚萃取2-5次,弃去乙醚层溶液,加水饱和正丁醇萃取2-5次,合并正丁醇层溶液,洗涤,蒸干,残渣加甲醇溶解,得甘草对照药材溶液;另取甘草酸铵、甘草苷和异甘草苷对照品,加甲醇溶解,得混合对照品溶液;
(3)将所述供试品溶液、甘草对照药材溶液、甘草酸铵对照品溶液、甘草苷对照品溶液和异甘草苷对照品溶液点样至同一硅胶G薄层板上,以体积比为(12-18):1:1:(1-3)的乙酸乙酯、甲酸、冰醋酸和水的混合物作为展开剂,展开,显色。
采用薄层色谱法鉴别所述中药制剂的肉桂主要包括以下步骤:
(1)供试品溶液的制备:向所述中药制剂中加乙醇,冷浸10min-30min,滤过,滤液蒸发,得供试品溶液;
(2)对照药材溶液和对照品溶液的制备:取肉桂对照药材,加乙醇,冷浸10min-30min,滤过,滤液蒸发,得肉桂对照药材溶液;另取桂皮醛对照品,加乙醇溶解,得桂皮醛对照品溶液;
(3)将所述供试品溶液、肉桂对照药材溶液、桂皮醛对照品溶液点样至同一硅胶G薄层板上,以体积比为(15-20):3的石油醚和乙酸乙酯的混合物作为展开剂,展开,显色。
采用薄层色谱法鉴别所述中药制剂的牛膝主要包括以下步骤:
(1)供试品溶液的制备:向所述中药制剂中加水,超声10min-30min,加石油醚萃取2-5次,弃去石油醚层溶液,加水饱和正丁醇萃取2-5次,合并正丁醇层溶液,洗涤,蒸干,残渣加乙醇溶解,得供试品溶液;
(2)对照药材溶液和对照品溶液的制备:取牛膝对照药材,加入水,水浴加热,回流20min-40min后过滤,滤液用加石油醚萃取2-5次,弃去石油醚层溶液,加水饱和正丁醇萃取2-5次,合并正丁醇层溶液,洗涤,蒸干,残渣加乙醇溶解,得牛膝对照药材溶液;另取β-蜕皮甾酮对照品,加乙醇溶解,得β-蜕皮甾酮对照品溶液;
(3)将所述供试品溶液、牛膝对照药材溶液和β-蜕皮甾酮对照品溶液点样至同一硅胶G薄层板上,以体积比为(5-10):(1-5):(0.1-1):0.05的三氯甲烷、甲醇、水和甲酸的混合物作为展开剂,展开,显色。
采用上述薄层色谱法鉴别温经汤中的8味药材,包括当归、川芎、白芍、牡丹皮、人参、甘草、肉桂、牛膝。相应的薄层色谱斑点清晰且阴性对照无干扰。
可以理解地,本发明所述的中药制剂由包括以下重量份数的原料制备而成:当归1-2重量份,川芎1-2重量份,白芍1-2重量份,肉桂1-2重量份,牡丹皮1-2重量份,莪术1-2重量份,人参1-3重量份,甘草1-3重量份,牛膝1-3重量份。
所述中药制剂的原料还包括药学上可接受的辅料。
所述中药制剂的制备方法可以为:取当归1重量份,川芎1重量份,白芍1重量份,肉桂1重量份,牡丹皮1重量份,莪术1重量份,人参2重量份,甘草2重量份,牛膝2重量份,投入砂锅中,加入水8-20重量份,浸泡30-120min,大火煮沸,转小火,保持微沸10-60min,过300目筛,收集滤液,浓缩,干燥,加入常规辅料,按照常规工艺,制成临床上可接受的药物制剂。
所述中药制剂的剂型可选自颗粒剂、散剂、片剂、胶囊剂、丸剂、口服液和注射剂中的一种。
综上,通过高效液相色谱法和薄层色谱法两种检测手段,能够对温经汤中药制剂进行全面的质量评价,方法简便、准确性高、重现性好,可为温经汤中药制剂的质量检测和评价提供科学依据,有效控制产品的质量。
以下结合具体实施例进一步说明:
实施例1温经汤颗粒剂的制备方法
称取当归150g,川芎150g,白芍150g,肉桂150g,牡丹皮150g,莪术150g,人参300g,甘草300g,牛膝300g,将上述药材粉碎成最粗粉,加水27000mL,浸泡30min,大火煮沸,转小火,保持微沸30min,趁热过300目筛,浓缩至波美度为20,成清膏,加入清膏量的4%-8%的淀粉,混合均匀,置温度为50-100℃的真空干燥箱中干燥,得到干膏。
将干膏粉碎成粉,加入清膏量的1%-4%硬脂酸镁混合均匀,进行制粒、整粒,得颗粒剂。
实施例2温经汤胶囊剂的制备方法
称取当归150g,川芎150g,白芍150g,肉桂150g,牡丹皮150g,莪术150g,人参300g,甘草300g,牛膝300g,将上述药材粉碎成最粗粉,加水27000mL,浸泡30min,大火煮沸,转小火,保持微沸30min,趁热过300目筛,浓缩至波美度为20,成清膏,加入清膏量的4%-8%的淀粉,混合均匀,置温度为50-100℃的真空干燥箱中干燥,得到干膏。
将干膏粉碎成粉,装入明胶硬胶囊,得胶囊剂。
实施例3温经汤片剂的制备方法
称取当归150g,川芎150g,白芍150g,肉桂150g,牡丹皮150g,莪术150g,人参300g,甘草300g,牛膝300g,将上述药材粉碎成最粗粉,加水27000mL,浸泡30min,大火煮沸,转小火,保持微沸30min,趁热过300目筛,浓缩至波美度为20,成清膏,加入清膏量的4%-8%的淀粉,混合均匀,置温度为50-100℃的真空干燥箱中干燥,得到干膏。
将干膏粉碎成粉,加入清膏量的1%-4%硬脂酸镁混合均匀,进行制粒、整粒,得颗粒;将颗粒加入适量硬脂酸镁及滑石粉混合均匀,压片,包薄膜衣,即得。
实施例4当归、川芎的薄层色谱鉴别
取温经汤药物制剂3g,加水30mL使溶解,乙醚萃取3次,每次30mL,合并乙醚层溶液,挥干,残渣加乙酸乙酯1mL使溶解,作为供试品溶液。
另取当归对照药材1g、川芎对照药材1g,加水20mL,水浴加热,回流30min,趁热过滤,放冷,滤液用乙醚萃取3次,每次20ml,合并乙醚液,挥干,残渣加乙酸乙酯1mL使溶解,作为对照药材溶液。另取阿魏酸对照品,加甲醇制成每1mL含1mg的溶液,作为对照品溶液。
照薄层色谱法试验,分别吸取上述溶液各10μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以正己烷-乙酸乙酯(2:1)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。
当归、川芎的薄层鉴别色谱图如图1所示。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
实施例5白芍、牡丹皮薄层色谱鉴别
①芍药苷鉴别:取温经汤药物制剂4g,加水40ml使溶解,乙醚萃取3次,每次40ml,弃去乙醚层溶液,水饱和正丁醇溶液萃取3次,每次40ml,弃去水层溶液,即下层液体,上层液体用正丁醇饱和水洗涤3次,每次40ml,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液。
再分别取白芍对照药材1g、牡丹皮对照药材1g,加水20mL,水浴加热,回流30min,趁热过滤,放冷,滤液用乙醚萃取3次,每次20ml,弃去乙醚层溶液,水饱和正丁醇溶液萃取3次,每次20ml,弃去水层溶液,即下层溶液,上层液体用正丁醇饱和水洗涤3次,每次10ml,蒸干,残渣加甲醇0.5ml使溶解,作为对照药材溶液。另取芍药苷对照品,加甲醇制成每1mL含1mg的溶液,作为对照品溶液。
照薄层色谱法试验,吸取上述溶液各4μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40:5:11:0.5)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,加热至斑点显色清晰。
白芍、牡丹皮、芍药苷的薄层鉴别色谱图如图2所示。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同的蓝紫色斑点。
②丹皮酚鉴别:取温经汤药物制剂8g,加水80ml使溶解,乙醚萃取3次,每次80ml,合并乙醚层溶液,挥干,残渣加丙酮1ml使溶解,作为供试品溶液。
取牡丹皮对照药材2g,加水20mL,水浴加热,回流30min,趁热过滤,放冷,滤液用乙醚萃取3次,每次20ml,合并乙醚层溶液,挥干,残渣加丙酮0.5ml使溶解,作为对照药材溶液。另取丹皮酚对照品,加丙酮制成每1mL含4mg的溶液,作为对照品溶液。
照薄层色谱法试验,吸取上述四两种溶液2.5-20μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以环己烷-乙酸乙酯-冰醋酸(4:2:0.1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以2%香草醛硫酸乙醇溶液(1→10),在105℃加热至斑点显色清晰。
牡丹皮、丹皮酚的薄层鉴别色谱图如图3所示。供试品色谱中,在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
实施例6人参薄层色谱鉴别
取温经汤药物制剂4g,加水40ml使溶解,水饱和正丁醇萃取3次,每次40ml,合并正丁醇层溶液,加3倍量氨试液,摇匀,放置分层,取正丁醇层溶液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液。
取人参对照药材1g,加水20mL,水浴加热,回流30min,趁热过滤,放冷,水饱和正丁醇萃取3次,每次20ml,合并正丁醇层溶液,加3倍量氨试液,摇匀,放置分层,取正丁醇层溶液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为对照药材溶液。再取人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rf对照品及人参皂苷Rg1对照品,加甲醇制成每1mL各含2mg的混合溶液,作为对照品溶液。
照薄层色谱法试验,吸取上述三种溶液各2μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15:40:22:10)10℃以下放置的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,分别置日光和紫外光灯(365nm)下检视。
人参的薄层鉴别色谱图如图4所示。供试品色谱中,在与对照药材色谱和对照品色谱相应位置上,分别显相同颜色的斑点或荧光斑点。
实施例7甘草薄层色谱鉴别
取温经汤药物制剂3g,加水30ml使溶解,乙醚萃取3次,每次30ml,弃去乙醚层溶液,水饱和正丁醇萃取3次,每次30ml,合并正丁醇层溶液,水洗涤3次,弃去水液,正丁醇层溶液蒸干,残渣加甲醇5ml使溶解,作为供试品溶液。
另取甘草对照药材1g,加水20mL,水浴加热,回流30min,趁热过滤,放冷,乙醚萃取3次,每次20ml,弃去乙醚层溶液,水饱和正丁醇萃取3次,每次20ml,合并正丁醇层溶液,水洗涤3次,弃去水液,正丁醇层溶液蒸干,残渣加甲醇5ml使溶解,制成对照药材溶液。再取甘草酸铵、甘草苷、异甘草苷对照品,加甲醇制成每1mL含2mg混合对照品的溶液,作为混合对照品溶液。
照薄层色谱法试验,吸取上述溶液各2μL,分别点于同一用1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15:1:1:2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,置紫外光灯(365nm)下检视。
甘草的薄层鉴别色谱图如图5所示。供试品色谱中,在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
实施例8肉桂薄层色谱鉴别
取温经汤样品粉末9g,加乙醇50ml,冷浸20min,时时振摇,滤过,滤液常温下蒸发至约2ml,作为供试品溶液。
再取肉桂对照药材1g,按同法制成对照药材溶液。另取桂皮醛对照品,加乙醇制成每1mL含1μL的溶液,作为对照品溶液。
照薄层色谱法试验,吸取上述溶液各2μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(60~90℃)-乙酸乙酯(17:3)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以二硝基苯肼乙醇试液。
肉桂的薄层鉴别色谱图如图6所示。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,应显相同颜色的斑点。
实施例9牛膝薄层色谱鉴别
取温经汤药物制剂12g加水30ml,超声20min使溶解,石油醚(30-60℃)萃取2次,每次100ml,弃去石油醚层溶液,用水饱和正丁醇萃取3次,每次100ml,合并正丁醇层溶液,加氨试液洗涤3次,每次50ml,弃去碱液,再用正丁醇饱和水洗涤3次,每次50ml,弃去水液,正丁醇层溶液蒸干,残渣加乙醇1ml使溶解,作为供试品溶液。另取牛膝对照药材2g,加水20mL,水浴加热,回流30min,趁热过滤,放冷,石油醚(30-60℃)萃取2次,每次10ml,弃去石油醚层溶液,用水饱和正丁醇萃取3次,每次30ml,合并正丁醇层溶液,加氨试液洗涤2次,每次20ml,弃去碱液,再用正丁醇饱和水洗涤3次,每次20ml,弃去水液,正丁醇层溶液蒸干,残渣加乙醇1ml使溶解,作为对照药材溶液。再取β-蜕皮甾酮对照品,加甲醇制成每1mL含1mg的溶液,作为对照品溶液。
照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液、对照药材溶液和对照品溶液各5μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-甲醇-水-甲酸(7:3:0.5:0.05)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,在105℃加热至斑点显色淸晰。
牛膝的薄层鉴别色谱图如图7所示。供试品色谱中,在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
实施例10中药制剂HPLC指纹图谱构建方法
1仪器与材料
1.1材料
当归,川芎,白芍,肉桂,牡丹皮,莪术,人参,甘草,牛膝
1.2仪器
Agilent 1100型高效液相色谱仪(美国,DAD检测器),冷冻干燥机(北京四环科学仪器厂,LGJ-25C)
2方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱为依利特Supersil ODS2 C18柱(4.6*250mm,5um),以乙腈为流动相A,0.1%磷酸水溶液为流动相B,流速1.0mL/min,柱温30℃,检测波长为203nm和254nm,进样量10μL,梯度洗脱,洗脱条件(体积分数)为:0-10min,5%流动相A,95%流动相B;10min-20min,5%→12%流动相A,95%→88%流动相B;20min-30min,12%→14%流动相A,88%→86%流动相B;30min-60min,14%→23%流动相A,86%→77%流动相B;60min-73min,23%→33%流动相A,77%→67%流动相B;73min-95min,33%→50%流动相A,67%→50%流动相B;95min-105min,50%→70%流动相A,50%→30%流动相B;105min-115min,70%→90%流动相A,30%→10%流动相B;115min-120min,90%流动相A,10%流动相B。采集时间:120min。
2.2供试品制备
精密称取3g温经汤药物制剂,加20ml水溶解,用水饱和正丁醇萃取3次,每次20ml,合并正丁醇层溶液,蒸干,加入体积浓度为70%的甲醇水溶液溶解,定容至5ml,经0.45um微孔滤膜过滤,取续滤液,即得。同法制得处方中各味对照药材的供试品溶液、阴性对照溶液。
2.3对照品制备
精密称取没食子酸、芍药内酯苷、芍药苷、阿魏酸、甘草苷、β-蜕皮甾酮、洋川芎内酯I、甘草素、肉桂酸、桂皮醛、丹皮酚、甘草酸铵和藁本内酯对照品,分别加适量甲醇溶解,配置成浓度约为1.0mg/mL的储备液。分别取0.1mL储备液至分析小瓶,加纯甲醇稀释配制成100μg/mL的对照品溶液。
2.4色谱条件考察
2.4.1不同流动相考察
2.4.1.1不同流动相体系
取温经汤中药制剂供试品溶液,分别采用乙腈-水、甲醇-水、乙腈-0.1%甲酸水和甲醇-0.1%甲酸水为流动相B,然后参照2.2项制备供试品,参照2.1项下的色谱条件进样测定,色谱图如图8所示。
2.4.1.2不同酸作为流动相B
取温经汤中药制剂供试品溶液,分别采用乙腈-0.1%甲酸、乙腈-0.1%磷酸和乙腈-0.1%乙酸为流动相B,然后参照2.2项制备供试品,参照2.1项下的色谱条件进样测定,色谱图如图9所示。
2.4.1.3不同浓度的流动相B
取温经汤中药制剂供试品溶液,分别采用乙腈-0.1%磷酸水、乙腈-0.05%磷酸水、乙腈-0.15%磷酸水和乙腈-0.2%磷酸水为流动相B,然后参照2.2项制备供试品,参照2.1项下的色谱条件进样测定,色谱图如图10所示。
2.4.2不同色谱柱考察
取温经汤中药制剂供试品溶液,分别以依利特Supersil A Q-C18、依利特SinoChrom ODS-BP、Waters XSELECT HSS T3、依利特Supersil ODS2为色谱柱,然后参照2.2项制备供试品,参照2.1项下的色谱条件进样测定,色谱图如图11所示。
2.4.3不同检测波长考察
取温经汤中药制剂供试品溶液,分别以203nm、254nm、280nm和330nm为检测波长,然后参照2.2项制备供试品,参照2.1项下的色谱条件进样测定,色谱图如图12所示。
2.4.4不同柱温考察
取温经汤中药制剂供试品溶液,分别采用25℃、30℃和35℃的柱温,然后参照2.2项制备供试品,参照2.1项下的色谱条件进样测定,色谱图如图13所示。
2.4.5不同流速考察
取温经汤中药制剂供试品溶液,分别以1.0mL/min、0.8mL/min和1.2mL/min为流速,然后参照2.2项制备供试品,参照2.1项下的色谱条件进样测定,色谱图如图14所示。
2.5不同供试品溶液制备方法考察
平行称取同一中药制剂3份,分别以水饱和正丁醇、纯水和乙酸乙酯为萃取溶剂,然后参照2.2项制备供试品,参照2.1项下的色谱条件进样测定,色谱图如图15所示。
2.6主要色谱峰的药材来源
比较温经汤中药制剂供试品溶液与9味药材供试品溶液主要色谱峰的保留行为,对主要色谱峰的药材来源进行归属。温经汤中药制剂的标准指纹图谱如图16所示。结果显示,温经汤供试品溶液中共有27个主要色谱峰,其中有5个色谱峰(峰号1、6、7、11、13)来源于白芍药材,8个色谱峰(峰号1、2、3、6、7、11、13、21)来源于牡丹皮药材,11个色谱峰(峰号9、10、15、16、17、20、22、23、24、25、26)来源于甘草药材,2个色谱峰(峰号18、19)来源于肉桂药材,5个色谱峰(峰号4、5、8、14、27)来源于当归药材,8个色谱峰(峰号3、4、5、6、7、8、14、27)来源于川芎药材,1个色谱峰(峰号12)来源于牛膝药材,结果见图17-24和表1。
表1
2.7主要色谱峰化学指认
通过与对照品保留时间、紫外吸收光谱比对,共鉴定了13个主要特征峰,按保留时间先后顺序,依次为没食子酸(7.626min)、芍药内酯苷(32.660min)、芍药苷(36.439min)、阿魏酸(43.560min)、甘草苷(46.126min)、β-蜕皮甾酮(47.943min)、洋川芎内酯I(58.448min)、甘草素(69.196min)、肉桂酸(71.812min)、桂皮醛(75.681min)、丹皮酚(81.068min)、甘草酸铵(87.418min)、藁本内酯(104.006min)。结果如图25-图37所示上表1所示。
2.8中药制剂指纹图谱准确度考察
称取6份不同的温经汤中药制剂,参照2.2项制备供试品,参照2.1项下的色谱条件进样测定,色谱图如图38所示。
2.9中药制剂指纹图谱精密度考察
取温经汤中药制剂,参照2.2项制备供试品,参照2.1项下的色谱条件进样测定,连续测定6次,色谱图如图39所示。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合,为使描述简洁,未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述,然而,只要这些技术特征的组合不存在矛盾,都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式,其描述较为具体和详细,但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是,对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干变形和改进,这些都属于本发明的保护范围。因此,本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (11)
1.一种中药制剂的质量检测方法,其特征在于,包括以下步骤:
分别以没食子酸、芍药内酯苷、芍药苷、阿魏酸、甘草苷、β-蜕皮甾酮、洋川芎内酯I、甘草素、肉桂酸、桂皮醛、丹皮酚、甘草酸铵和藁本内酯为对照品,采用高效液相色谱法建立所述中药制剂的指纹图谱;
采用薄层色谱法鉴别所述中药制剂的当归、川芎、白芍、牡丹皮、人参、肉桂、甘草和牛膝;
所述中药制剂由包括当归、川芎、白芍、肉桂、牡丹皮、莪术、人参、甘草和牛膝的原料制备而成。
2.根据权利要求1所述的中药制剂的质量检测方法,其特征在于,采用高效液相色谱法建立所述中药制剂的指纹图谱主要包括以下步骤:
(1)对照品溶液的制备:分别以没食子酸、芍药内酯苷、芍药苷、阿魏酸、甘草苷、β-蜕皮甾酮、洋川芎内酯I、甘草素、肉桂酸、桂皮醛、丹皮酚、甘草酸铵和藁本内酯为对照品,加溶剂溶解,得没食子酸对照品溶液、芍药内酯苷对照品溶液、芍药苷对照品溶液、阿魏酸对照品溶液、甘草苷对照品溶液、β-蜕皮甾酮对照品溶液、洋川芎内酯I对照品溶液、甘草素对照品溶液、肉桂酸对照品溶液、桂皮醛对照品溶液、丹皮酚对照品溶液、甘草酸铵对照品溶液和藁本内酯对照品溶液;
(2)供试品溶液的制备:向所述中药制剂中加入水,然后用水饱和正丁醇萃取2-5次,合并正丁醇层溶液,蒸干,加入溶剂溶解,过滤得供试品溶液;
(3)将所述供试品溶液、没食子酸对照品溶液、芍药内酯苷对照品溶液、芍药苷对照品溶液、阿魏酸对照品溶液、甘草苷对照品溶液、β-蜕皮甾酮对照品溶液、洋川芎内酯I对照品溶液、甘草素对照品溶液、肉桂酸对照品溶液、桂皮醛对照品溶液、丹皮酚对照品溶液、甘草酸铵对照品溶液和藁本内酯对照品溶液置于高效液相色谱仪中,测定。
3.根据权利要求2所述的中药制剂的质量检测方法,其特征在于,所述高效液相色谱的色谱条件包括:
色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以乙腈为流动相A,以0.01-0.15%磷酸水溶液为流动相B,流速0.8-1.2mL/min,柱温25-35℃,检测波长200-400nm,进样量5-20μL,梯度洗脱;
洗脱条件为:
0-10min,保持流动相A的体积分数为5%,流动相B的体积分数为95%;
10min-20min,流动相A的体积分数由5%上升至12%,流动相B的体积分数由95%下降至88%;
20min-30min,流动相A的体积分数由12%上升至14%,流动相B的体积分数由88%下降至86%;
30min-60min,流动相A的体积分数由14%上升至23%,流动相B的体积分数由86%下降至77%;
60min-73min,流动相A的体积分数由23%上升至33%,流动相B的体积分数由77%下降至67%;
73min-95min,流动相A的体积分数由33%上升至50%,流动相B的体积分数由67%下降至50%;
95min-105min,流动相A的体积分数由50%上升至70%,流动相B的体积分数由50%下降至30%;
105-115min,流动相A的体积分数由70%上升至90%,流动相B的体积分数由30%下降至10%;
115-120min,保持流动相A的体积分数为90%,流动相B的体积分数为10%。
4.根据权利要求3所述的中药制剂的质量检测方法,其特征在于,所述高效液相色谱的色谱条件包括:
色谱柱为依利特Supersil ODS2,以乙腈为流动相A,以0.1%磷酸水溶液为流动相B,流速1.0mL/min,柱温30℃,检测波长203nm和254nm。
5.根据权利要求1所述的中药制剂的质量检测方法,其特征在于,采用薄层色谱法鉴别所述中药制剂的当归、川芎主要包括以下步骤:
(1)供试品溶液的制备:向所述中药制剂中加水,然后用乙醚萃取2-5次,合并乙醚层溶液,挥干,残渣加乙酸乙酯溶解,得供试品溶液;
(2)对照药材溶液和对照品溶液的制备:取当归对照药材、川芎对照药材,分别加入水,水浴加热,回流20min-40min后过滤,滤液用乙醚萃取2-5次,合并乙醚层溶液,挥干,残渣加乙酸乙酯溶解,得当归对照药材溶液和川芎对照药材溶液;另取阿魏酸对照品,加甲醇溶解,得阿魏酸对照品溶液;
(3)将所述供试品溶液、当归对照药材溶液和川芎对照药材溶液点样至同一硅胶G薄层板上,以体积比为(1-3):1的正己烷和乙酸乙酯的混合物作为展开剂,展开,显色。
6.根据权利要求1所述的中药制剂的质量检测方法,其特征在于,采用薄层色谱法鉴别所述中药制剂的白芍、牡丹皮主要包括以下步骤:
(1)芍药苷的鉴别
供试品溶液A的制备:向所述中药制剂中加水,然后用乙醚萃取2-5次,弃去乙醚层溶液,再加入水饱和正丁醇溶液萃取2-5次,合并正丁醇层溶液,洗涤后挥干,残渣加甲醇溶解,得供试品溶液A;
对照药材溶液和对照品溶液的制备:取白芍对照药材、牡丹皮对照药材,分别加入水,水浴加热,回流20min-40min后过滤,滤液用乙醚萃取2-5次,弃去乙醚层溶液,再加入水饱和正丁醇溶液萃取2-5次,合并正丁醇层溶液,洗涤后挥干,残渣加甲醇溶解,得白芍对照药材溶液和牡丹皮对照药材溶液A;另取芍药苷对照品,加甲醇溶解,得芍药苷对照品溶液;
将所述供试品溶液A、白芍对照药材溶液、牡丹皮对照药材溶液A和芍药苷对照品溶液点样至同一硅胶G薄层板上,以体积比为40:(3-8):(8-15):(0.1-1)的三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇和甲酸的混合物作为展开剂,展开,显色;
(2)丹皮酚的鉴别
供试品溶液B的制备:向所述中药制剂中加水,然后用乙醚萃取2-5次,合并乙醚层溶液,挥干,残渣加丙酮溶解,得供试品溶液B;
对照药材溶液和对照品溶液的制备:取牡丹皮对照药材,加入水,水浴加热,回流20min-40min后过滤,滤液用乙醚萃取2-5次,合并乙醚层溶液,挥干,残渣加丙酮溶解,得牡丹皮对照药材溶液B;另取丹皮酚对照品,加丙酮溶解,得丹皮酚对照品溶液;
将所述供试品溶液B、牡丹皮对照药材溶液B和丹皮酚对照品溶液点样至同一硅胶G薄层板上,以体积比为(2-6):(1-3):0.1的环己烷、乙酸乙酯和冰醋酸的混合物作为展开剂,展开,显色。
7.根据权利要求1所述的中药制剂的质量检测方法,其特征在于,采用薄层色谱法鉴别所述中药制剂的人参主要包括以下步骤:
(1)供试品溶液的制备:向所述中药制剂中加水,然后用水饱和正丁醇萃取2-5次,合并正丁醇层溶液,加氨试液,分层,取正丁醇层溶液,蒸干,残渣加甲醇溶解,得供试品溶液;
(2)对照药材溶液和对照品溶液的制备:取人参对照药材,加入水,水浴加热,回流20min-40min后过滤,滤液用水饱和正丁醇萃取2-5次,合并正丁醇层溶液,加氨试液,分层,取正丁醇层溶液,蒸干,残渣加甲醇溶解,得人参对照药材溶液;另取人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rf对照品和人参皂苷Rg1对照品,加甲醇溶解,得人参皂苷Rb1对照品溶液、人参皂苷Re对照品溶液、人参皂苷Rf对照品溶液和人参皂苷Rg1对照品溶液;
(3)将所述供试品溶液、人参对照药材溶液、人参皂苷Rb1对照品溶液、人参皂苷Re对照品溶液、人参皂苷Rf对照品溶液和人参皂苷Rg1对照品溶液点样至同一硅胶G薄层板上,以体积比为(12-18):40:(20-25):(8-12)的三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇和水的混合物作为展开剂,展开,显色。
8.根据权利要求1所述的中药制剂的质量检测方法,其特征在于,采用薄层色谱法鉴别所述中药制剂的甘草主要包括以下步骤:
(1)供试品溶液的制备:向所述中药制剂中加水,然后用乙醚萃取2-5次,弃去乙醚层溶液,加水饱和正丁醇萃取2-5次,合并正丁醇层溶液,洗涤,蒸干,残渣加甲醇溶解,得供试品溶液;
(2)对照药材溶液和对照品溶液的制备:取甘草对照药材,加入水,水浴加热,回流20min-40min后过滤,滤液用乙醚萃取2-5次,弃去乙醚层溶液,加水饱和正丁醇萃取2-5次,合并正丁醇层溶液,洗涤,蒸干,残渣加甲醇溶解,得甘草对照药材溶液;另取甘草酸铵、甘草苷和异甘草苷对照品,加甲醇溶解,得混合对照品溶液;
(3)将所述供试品溶液、甘草对照药材溶液、甘草酸铵对照品溶液、甘草苷对照品溶液和异甘草苷对照品溶液点样至同一硅胶G薄层板上,以体积比为(12-18):1:1:(1-3)的乙酸乙酯、甲酸、冰醋酸和水的混合物作为展开剂,展开,显色。
9.根据权利要求1所述的中药制剂的质量检测方法,其特征在于,采用薄层色谱法鉴别所述中药制剂的肉桂主要包括以下步骤:
(1)供试品溶液的制备:向所述中药制剂中加乙醇,冷浸10min-30min,滤过,滤液蒸发,得供试品溶液;
(2)对照药材溶液和对照品溶液的制备:取肉桂对照药材,加乙醇,冷浸10min-30min,滤过,滤液蒸发,得肉桂对照药材溶液;另取桂皮醛对照品,加乙醇溶解,得桂皮醛对照品溶液;
(3)将所述供试品溶液、肉桂对照药材溶液、桂皮醛对照品溶液点样至同一硅胶G薄层板上,以体积比为(15-20):3的石油醚和乙酸乙酯的混合物作为展开剂,展开,显色。
10.根据权利要求1所述的中药制剂的质量检测方法,其特征在于,采用薄层色谱法鉴别所述中药制剂的牛膝主要包括以下步骤:
(1)供试品溶液的制备:向所述中药制剂中加水,超声10min-30min,加石油醚萃取2-5次,弃去石油醚层溶液,加水饱和正丁醇萃取2-5次,合并正丁醇层溶液,洗涤,蒸干,残渣加乙醇溶解,得供试品溶液;
(2)对照药材溶液和对照品溶液的制备:取牛膝对照药材,加入水,水浴加热,回流20-40min后过滤,滤液用加石油醚萃取2-5次,弃去石油醚层溶液,加水饱和正丁醇萃取2-5次,合并正丁醇层溶液,洗涤,蒸干,残渣加乙醇溶解,得牛膝对照药材溶液;另取β-蜕皮甾酮对照品,加乙醇溶解,得β-蜕皮甾酮对照品溶液;
(3)将所述供试品溶液、牛膝对照药材溶液和β-蜕皮甾酮对照品溶液点样至同一硅胶G薄层板上,以体积比为(5-10):(1-5):(0.1-1):0.05的三氯甲烷、甲醇、水和甲酸的混合物作为展开剂,展开,显色。
11.根据权利要求1-10任一项所述的中药制剂的质量检测方法,其特征在于,所述中药制剂的剂型选自颗粒剂、散剂、片剂、胶囊剂、丸剂、口服液和注射剂中的一种。
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