CN108143825B - 一种治疗银屑病的药物及其制备方法与检测方法 - Google Patents
一种治疗银屑病的药物及其制备方法与检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108143825B CN108143825B CN201810019853.8A CN201810019853A CN108143825B CN 108143825 B CN108143825 B CN 108143825B CN 201810019853 A CN201810019853 A CN 201810019853A CN 108143825 B CN108143825 B CN 108143825B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- solution
- extract
- parts
- taking
- extracting
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/80—Scrophulariaceae (Figwort family)
- A61K36/804—Rehmannia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/35—Caprifoliaceae (Honeysuckle family)
- A61K36/355—Lonicera (honeysuckle)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/53—Lamiaceae or Labiatae (Mint family), e.g. thyme, rosemary or lavender
- A61K36/539—Scutellaria (skullcap)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/63—Oleaceae (Olive family), e.g. jasmine, lilac or ash tree
- A61K36/634—Forsythia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/65—Paeoniaceae (Peony family), e.g. Chinese peony
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/71—Ranunculaceae (Buttercup family), e.g. larkspur, hepatica, hydrastis, columbine or goldenseal
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/06—Ointments; Bases therefor; Other semi-solid forms, e.g. creams, sticks, gels
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/30—Extraction of the material
- A61K2236/33—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones
- A61K2236/333—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones using mixed solvents, e.g. 70% EtOH
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/30—Extraction of the material
- A61K2236/35—Extraction with lipophilic solvents, e.g. Hexane or petrol ether
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/30—Extraction of the material
- A61K2236/39—Complex extraction schemes, e.g. fractionation or repeated extraction steps
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
- A61K2236/51—Concentration or drying of the extract, e.g. Lyophilisation, freeze-drying or spray-drying
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
- A61K2236/53—Liquid-solid separation, e.g. centrifugation, sedimentation or crystallization
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
- A61K2236/55—Liquid-liquid separation; Phase separation
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Botany (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明属于中药领域,涉及一种治疗银屑病的药物,特别涉及一种治疗寻常性银屑病的药物及其制备方法。发明名称为一种治疗银屑病的药物及其制备方法与检测方法,该药物由以下重量份的药味原料药制成:生地黄3~5重量份,牡丹皮2~4重量份,金银花2~4重量份、连翘2~4重量份、黄芩2~4重量份。实验研究表明,该药物对豚鼠耳背银屑病模型具有非常好的治疗效果,对于寻常性银屑病具有较好的治疗效果,且安全无不良反应。
Description
技术领域
本发明属于中药领域,涉及一种治疗银屑病的药物,特别涉及一种治疗寻常性银屑病的药物及其制备方法。
背景技术
银屑病是一种慢性易复发的红斑鳞屑性皮肤病。主要症状是患者的皮损部位出现红色的丘疹和斑片,其表面覆盖多层的银白色鳞屑,反复发作,较难治愈。现代医学认为皮损有病理改变及炎症细胞浸润现象。
黑龙江中医药大学附属二院马天明于2005年在其黑龙江中医药大学硕士研究所毕业论文《祛风消疕汤治疗银屑病寻常型静止期的临床研究》(马天明.祛风消疕汤治疗银屑病寻常型静止期的临床研究[D].黑龙江中医药大学,2005.)的论文中提出,将88例寻常型静止期银屑病患者分成2组。A组58例,口服祛风除风除疕汤,外用凡士林。B组30例,口服消银片,外用凡士林。观察两组治疗前后皮损红斑、硬结、鳞屑的变化。结果显示:(1)A组总有效率82.76%,B组总有效率43.33%,两组总有效率比较差异有显著性(P<0.05)(2)两组内治疗后各症状积分较治疗前均有下降,差异具有显著性(P<0.01)(3)祛风消疕汤在消除鳞屑方面与消银片比较,差异具有显著性(P<0.05)。祛风消疕汤与消银片对寻常型静止期银屑病(血虚风燥型)均具有较好疗效,而前者疗效显著优于后者。
黑龙江中医药大学附属二院马天明,刘立萍,王玉玺于2005年在《中医药信息》杂志上发表论文《银屑病的中医病因病机研究进展》(马天明,刘立萍,王玉玺.银屑病的中医病因病机研究进展[J].中医药信息,2005(04):23-24),论文中提出,银屑病的发生与“血”关系密切。概括其病因有内因和外因两方面,内因为饮食不节或情志内伤,或禀赋不足,肝肾亏虚;外因风寒、湿热、寒温燥毒之邪、侵袭肌腠;内外合邪,搏于气血所致,与肝、脾、胃、肺、肾等脏腑有关。其病因病机虽较复杂,但“血热”、“血虚”、“血燥”则可看作本病的基本病因。血热血燥皆可形成瘀血,而瘀血的长期存在,又是银屑病迁延难愈的主要病理因素。
黑龙江中医药大学刘拥军于2005年在其博士毕业论文《银消丸治疗银屑病的实验研究》(刘拥军.银消丸治疗银屑病的实验研究[D].黑龙江中医药大学,2005)提出,银屑病是一种常见并易复发的慢性炎症性疾病,本病病程较长,病因及发病机制未明,可能与遗传、感染、代谢、内分泌、神经精神、免疫功能障碍有关。中医药治疗银屑病疗效可靠,副作用小,成为现在研究的趋势。银屑病是多基因遗传背景下T细胞失常的免疫性疾病。在临床上银消丸用于热毒血瘀型银屑病的治疗。观察中药银消丸对银屑病小鼠模型的治疗作用及免疫功能的影响。用鼠尾鳞片表皮模型、雌激素期阴道上皮模型及增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组化方法观察,检测ConA诱导的T淋巴细胞增殖,分泌细胞因子IFN-γ,IL-2,IL-6的水平以及增殖细胞核抗原表达情况。结果显示,银消丸可促进鼠尾鳞片颗粒层的形成,在电镜下可见多层颗粒细胞,细胞较大;对小鼠阴道上皮细胞有丝分裂有抑制作用,在电镜下可见细胞核与细胞器无异常改变。银消丸还可抑制ConA诱导的T淋巴细胞增殖及分泌细胞因子IFN-γ,L-2,IL-6的水平,抑制增殖细胞核抗原表达。由此推断,银消丸可能通过抑制表皮细胞增殖与促进其分化,抑制增殖细胞核抗原表达,参与抗炎与免疫调节过程来发挥治疗作用的。银消丸对银屑病小鼠模型有显著的治疗作用,是多靶位治疗银屑病的有效药物。
黑龙江中医药大学附属第二医院刘拥军于2008年在《中医药信息》杂志上发表论文《银消丸对小鼠尾鳞片表皮颗粒层形成的影响》(刘拥军.银消丸对小鼠尾鳞片表皮颗粒层形成的影响[J].中医药信息,2008(02):70-71),论文中提出,使用鼠尾鳞片表皮模型,观察中药银消丸对银屑病小鼠模型的治疗作用。结果显示,银消丸可促进鼠尾鳞片颗粒层的形成,在电镜下可见多层颗粒细胞,细胞较大。所以,银消丸可能是通过促进颗粒细胞形成及其分化来发挥治疗作用的。
黑龙江中医药大学附属第二医院刘拥军于2009年在《中国麻风皮肤病杂志》上发表论文《银消丸对小鼠模型T细胞增殖及细胞因子的影响》(刘拥军.银消丸对小鼠模型T细胞增殖及细胞因子的影响[J].中国麻风皮肤病杂志,2009,25(06):439-440),论文中提出,通过检测ConA诱导的T细胞增殖,分泌细胞因子IFN-γ、IL-2和IL-6的水平,观察中药银消丸对银屑病小鼠模型的T细胞增殖及细胞因子的影响。结果显示,银消丸可抑制ConA诱导的T细胞增殖及细胞因子IFN-γ、IL-2和IL-6的分泌。所以,银消丸是通过免疫调节机制来发挥治疗银屑病的作用。
黑龙江中医药大学附属二院王思琦,刘拥军于2012年在《吉林中医药》杂志上发表论文《消疕汤治疗血热风燥型银屑病临床观察》(王思琦,刘拥军.消疕汤治疗血热风燥型银屑病临床观察[J].吉林中医药,2012,32(05):482-483),论文中提出,观察消疕汤治疗静止期血热风燥型银屑病的临床疗效。将寻常型静止期银屑病血热风燥型患者60例随机分为2组,治疗组30例口服消疕汤(生地黄、牡丹皮、白芍、白鲜皮、玄参、白花蛇舌草、丹参、蚤休等),对照组30例口服消银胶囊。结果显示,治疗组及对照组临床疗效总的有效率分别为93%和80%,治疗组与对照组相比有统计学意义。所以,消疕汤可明显改善静止期血热风燥型银屑病患者的临床症状。
黑龙江中医药大学附属第二医院刘拥军,颜建伟于2013年在《黑龙江中医药》杂志上发表论文《完疕汤治疗寻常型银屑病血热内蕴型的临床观察》(刘拥军,颜建伟.完疕汤治疗寻常型银屑病血热内蕴型的临床观察[J].黑龙江中医药,2013,42(06):22-23),论文中提出,观察完疕汤治疗寻常型银屑病血热内蕴型的疗效,随机分为治疗组31例和对照组31例,治疗组口服完疕汤,对照组口服阿维A胶囊,治疗2月后观察两组疗效。通过对比治疗前后的PASI评分,经SPSS17.0软件统计分析,治疗组有效率为93.54%,对照组为74.19%,二者差异有统计学意义。说明完疕汤治疗寻常型银屑病有着较好的疗效。
黑龙江中医药大学附属二院刘贵军,李全,马天明于2016年在《中医药学报》杂志上发表论文《加减沙参麦冬汤治疗胃阴伤型银屑病验案二则》(刘贵军,李全,马天明.加减沙参麦冬汤治疗胃阴伤型银屑病验案二则[J].中医药学报,2016,44(04):74-75),论文中提出,银屑病属于临床疑难杂病范畴,传统经典的银屑病中医治法一般从“血分论治”辨证论治入手,但临床中针对辨证分型属于胃阴伤,下焦血分有热的阴伤型患者,可基于"甘寒养胃阴"理论,以沙参麦冬汤为基本方加以清下焦血分热药物,临床中可取得明显的治疗效果,为银屑病的临床治疗提供了一个很好的治疗思路选择。
通过查阅大量医学文献,检索到生地黄、牡丹皮、金银花等药味原料对治疗银屑病有一定的作用,但大多以口服为主,口服药物治疗银屑病虽然有一定的疗效,但是其作用效果缓慢,在皮肤病治疗方面,外用制剂有其特别的治疗优势,但目前未见有将生地黄、牡丹皮、金银花等药味原料制成外用制剂来治疗银屑病的报道。
基于上述技术问题,本发明在长期的临床实践基础上,临床医生联合药物制剂专业技术人员,将生地黄、牡丹皮、金银花等药味原料制成外用制剂,在治疗银屑病方面取得了令人预料不到的非常好的治疗效果。
本发明提供的技术获得了黑龙江中医药中青年科技攻关项目的支持,项目编号:ZQG-033,并获得了黑龙江省中医药科学技术二等奖。同时,本专利的创新技术已经与黑龙江省、海南省和江苏省的几个制药企业达成意向性合作协议,已经为本专利的创新技术开发出新药做好了前期的准备工作。据不完全统计,我国治疗寻常性银屑病药物的市场容量,每年约二十亿元,本发明的创新技术开发新药成功后,初步预测每年的市场销售额在两亿元以上,对促进我国中药产业实体经济的发展,将起到非常大的推动作用。
发明内容
为了解决背景技术中存在的技术问题,本发明的目的之一是提供一种治疗寻常性银屑病效果好的药物。
本发明的另一目的是提供该治疗寻常性银屑病药物的制备方法。
本发明还提供该治疗寻常性银屑病药物的检测方法。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的:
一种治疗寻常性银屑病的药物,该药物是由以下重量份的药味原料制成:生地黄3~5重量份,牡丹皮2~4重量份,金银花2~4重量份、连翘2~4重量份、黄芩2~4重量份。
所述的药物,作为优选,是由以下重量份的药味原料制成:生地黄4重量份,牡丹皮3重量份,金银花3重量份、连翘3重量份、黄芩3重量份。
所述的药物是由以下重量份的药味原料制成:生地黄3~5重量份,牡丹皮2~4重量份,金银花2~4重量份、连翘2~4重量份、黄芩2~4重量份,该药物采用如下方法制备:
制备方法:(1)取处方量的生地黄、牡丹皮、金银花、连翘、黄芩,加8~12倍量的仿生提取溶媒,35~39℃恒温下,搅拌提取2~4h,收集提取液T1和药渣Z1;提取液T1在3000~3500r·min-1的离心速度下,离心30~50min,分别收集上清液Q1和沉淀D1;取上清液Q1,减压浓缩,得到浸膏G1,备用;药渣Z1和沉淀D1,均保留备用;上述仿生提取溶媒是由0.1%氯化钠、0.1%胃蛋白酶、0.3%胰蛋白酶及0.02mol·L-1盐酸配制成的溶液;
(2)取步骤(1)得到的药渣Z1,加入8~12倍量的70~80%的乙醇溶液,加入盐酸调整pH值为1~3,在微波功率700~900W,提取温度70~80℃的条件下,进行微波提取,提取时间25~35min,得到提取液T2;取提取液T2,滤过,收集滤液,减压浓缩,得到浸膏G2;上述微波提取后的药渣弃去;
(3)取步骤(1)得到的沉淀D1,加6~10倍量乙酸乙酯,在80~90℃下进行水浴回流提取1~3次,每次提取35~45min,合并提取液,得到提取液T3;取提取液T3,减压回收乙酸乙酯,得到浸膏G3;上述乙酸乙酯提取后的药渣弃去;
(4)取步骤(1)得到的浸膏G1、步骤(2)得到的浸膏G2、步骤(3)得到的浸膏G3,将3种浸膏混合,充分搅拌均匀,得混合浸膏G4,将混合浸膏G4上柱层析进行分离,选用XDA-1B型大孔吸附树脂,柱径高比为1:4~6,上样体积5~7BV,用pH 10~12的氨水溶液7~9BV进行洗脱,弃去洗脱液,再用95%的乙醇溶液9~11BV进行洗脱,弃去洗脱液,再用体积比为8:1~3的乙酸乙酯-5%冰醋酸溶液9~11BV进行洗脱,流速为1.5~2.5BV·h-1,收集洗脱液,然后在85℃下蒸馏,除去乙酸乙酯和冰醋酸,再减压浓缩,得到浸膏G5;
(5)取步骤(4)得到的浸膏G5,干燥,粉碎成细粉,加入25~35倍量重量的白凡士林、5~15倍量重量的羊毛脂,55~65℃水浴下,搅拌混匀,冷却,即得软膏。
所述的药物,作为优选,是由以下重量份的药味原料制成:生地黄4重量份,牡丹皮3重量份,金银花3重量份、连翘3重量份、黄芩3重量份,作为优选,该药物采用如下方法制备:
(1)取处方量的生地黄、牡丹皮、金银花、连翘、黄芩,加10倍量的仿生提取溶媒,37℃恒温下,搅拌提取3h,收集提取液T1和药渣Z1;提取液T1在3300r·min-1的离心速度下,离心40min,分别收集上清液Q1和沉淀D1;取上清液Q1,减压浓缩,得到浸膏G1,备用;药渣Z1和沉淀D1,均保留备用;上述仿生提取溶媒是由0.1%氯化钠、0.1%胃蛋白酶、0.3%胰蛋白酶及0.02mol·L-1盐酸配制成的溶液;
(2)取步骤(1)得到的药渣Z1,加入10倍量的75%的乙醇溶液,加入盐酸调整pH值为2,在微波功率800W,提取温度75℃的条件下,进行微波提取,得到提取液T2;取提取液T2,滤过,收集滤液,减压浓缩,得到浸膏G2;上述微波提取后的药渣弃去;
(3)取步骤(1)得到的沉淀D1,加8倍量乙酸乙酯,在85℃下进行水浴回流提取2次,每次提取40min,合并提取液,得到提取液T3;取提取液T3,减压回收乙酸乙酯,得到浸膏G3;上述乙酸乙酯提取后的药渣弃去;
(4)取步骤(1)得到的浸膏G1、步骤(2)得到的浸膏G2、步骤(3)得到的浸膏G3,将3种浸膏混合,充分搅拌均匀,得混合浸膏G4,将混合浸膏G4上柱层析进行分离,选用XDA-1B型大孔吸附树脂,柱径高比为1:5,上样体积6BV,用pH 11的氨水溶液8BV进行洗脱,弃去洗脱液,再用95%的乙醇溶液10BV进行洗脱,弃去洗脱液,再用体积比为8:2的乙酸乙酯-5%冰醋酸溶液10BV进行洗脱,流速为2BV·h-1,收集洗脱液,然后在85℃下蒸馏,除去乙酸乙酯和冰醋酸,再减压浓缩,得到浸膏G5;
(5)取步骤(4)得到的浸膏G5,干燥,粉碎成细粉,加入30倍量重量的白凡士林、10倍量重量的羊毛脂,60℃水浴下,搅拌混匀,冷却,即得软膏。
一种治疗寻常性银屑病的药物的检测方法,该药物是由以下重量份的药味原料制成:生地黄4重量份,牡丹皮3重量份,金银花3重量份、连翘3重量份、黄芩3重量份,该药物采用如下方法制备:
(1)取处方量的生地黄、牡丹皮、金银花、连翘、黄芩,加10倍量的仿生提取溶媒,37℃恒温下,搅拌提取3h,收集提取液T1和药渣Z1;提取液T1在3300r·min-1的离心速度下,离心40min,分别收集上清液Q1和沉淀D1;取上清液Q1,减压浓缩,得到浸膏G1,备用;药渣Z1和沉淀D1,均保留备用;上述仿生提取溶媒是由0.1%氯化钠、0.1%胃蛋白酶、0.3%胰蛋白酶及0.02mol·L-1盐酸配制成的溶液;
(2)取步骤(1)得到的药渣Z1,加入10倍量的75%的乙醇溶液,加入盐酸调整pH值为2,在微波功率800W,提取温度75℃的条件下,进行微波提取,得到提取液T2;取提取液T2,滤过,收集滤液,减压浓缩,得到浸膏G2;上述微波提取后的药渣弃去;
(3)取步骤(1)得到的沉淀D1,加8倍量乙酸乙酯,在85℃下进行水浴回流提取2次,每次提取40min,合并提取液,得到提取液T3;取提取液T3,减压回收乙酸乙酯,得到浸膏G3;上述乙酸乙酯提取后的药渣弃去;
(4)取步骤(1)得到的浸膏G1、步骤(2)得到的浸膏G2、步骤(3)得到的浸膏G3,将3种浸膏混合,充分搅拌均匀,得混合浸膏G4,将混合浸膏G4上柱层析进行分离,选用XDA-1B型大孔吸附树脂,柱径高比为1:5,上样体积6BV,用pH 11的氨水溶液8BV进行洗脱,弃去洗脱液,再用95%的乙醇溶液10BV进行洗脱,弃去洗脱液,再用体积比为8:2的乙酸乙酯-5%冰醋酸溶液10BV进行洗脱,流速为2BV·h-1,收集洗脱液,然后在85℃下蒸馏,除去乙酸乙酯和冰醋酸,再减压浓缩,得到浸膏G5;
(5)取步骤(4)得到的浸膏G5,干燥,粉碎成细粉,加入30倍量重量的白凡士林、10倍量重量的羊毛脂,60℃水浴下,搅拌混匀,冷却,即得软膏;
采用高效液相色谱法同时测定3-甲氧基-4-羟基桂皮醛、齐墩果酸、苯甲酰芍药苷含量,测定方法如下:
(1)色谱条件:色谱柱为ODS-3柱,流动相:乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液,梯度洗脱:梯度洗脱:从0min至5min,乙腈的比例从0%线性上升至10%,0.1%三氟乙酸水溶液的比例从100%线性下降至90%;从6min至15min,乙腈的比例从10%线性上升至40%,0.1%三氟乙酸水溶液的比例从90%线性下降至60%;从16min至35min,乙腈的比例从40%线性上升至50%,0.1%三氟乙酸水溶液的比例从60%线性下降至50%;体积流量:1.0~2.0mL·min-1,检测波长:260~270nm,柱温:35~45℃,进样量:5~20μL;3-甲氧基-4-羟基桂皮醛、齐墩果酸和苯甲酰芍药苷的理论板数均不低于5000;
(2)混合对照品溶液制备:精密称取3-甲氧基-4-羟基桂皮醛对照品、齐墩果酸对照品、苯甲酰芍药苷对照品,混合,加体积比为80:20的乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液制成每1mL含3-甲氧基-4-羟基桂皮醛1.00~3.00mg、齐墩果酸2.00~4.00mg、苯甲酰芍药苷0.50~2.00mg的混合对照品溶液;
(3)供试品溶液制备:取本品0.3~0.8g,精密称定,置于具塞锥形瓶中,加0.15moL·L-1磷酸二氢钠水溶液3~8mL,精密加入1%冰醋酸溶液10~20mL,密塞,称定质量,超声处理25~35min,超声功率200~240W,超声频率50~70kHz,放冷,在2500~3500r·min-1的离心速度下,离心20~30min,取离心后的上清液,减压回收至干,残渣加体积比为80:20的乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液溶解并转移至10mL量瓶中,摇匀,即得供试品溶液;
(4)测定:吸取混合对照品溶液、供试品溶液各5~20μL,注入高效液相色谱仪,进行测定。
所述的药物的检测方法,该药物是由以下重量份的药味原料制成:生地黄4重量份,牡丹皮3重量份,金银花3重量份、连翘3重量份、黄芩3重量份,该药物采用如下方法制备:
(1)取处方量的生地黄、牡丹皮、金银花、连翘、黄芩,加10倍量的仿生提取溶媒,37℃恒温下,搅拌提取3h,收集提取液T1和药渣Z1;提取液T1在3300r·min-1的离心速度下,离心40min,分别收集上清液Q1和沉淀D1;取上清液Q1,减压浓缩,得到浸膏G1,备用;药渣Z1和沉淀D1,均保留备用;上述仿生提取溶媒是由0.1%氯化钠、0.1%胃蛋白酶、0.3%胰蛋白酶及0.02mol·L-1盐酸配制成的溶液;
(2)取步骤(1)得到的药渣Z1,加入10倍量的75%的乙醇溶液,加入盐酸调整pH值为2,在微波功率800W,提取温度75℃的条件下,进行微波提取,得到提取液T2;取提取液T2,滤过,收集滤液,减压浓缩,得到浸膏G2;上述微波提取后的药渣弃去;
(3)取步骤(1)得到的沉淀D1,加8倍量乙酸乙酯,在85℃下进行水浴回流提取2次,每次提取40min,合并提取液,得到提取液T3;取提取液T3,减压回收乙酸乙酯,得到浸膏G3;上述乙酸乙酯提取后的药渣弃去;
(4)取步骤(1)得到的浸膏G1、步骤(2)得到的浸膏G2、步骤(3)得到的浸膏G3,将3种浸膏混合,充分搅拌均匀,得混合浸膏G4,将混合浸膏G4上柱层析进行分离,选用XDA-1B型大孔吸附树脂,柱径高比为1:5,上样体积6BV,用pH 11的氨水溶液8BV进行洗脱,弃去洗脱液,再用95%的乙醇溶液10BV进行洗脱,弃去洗脱液,再用体积比为8:2的乙酸乙酯-5%冰醋酸溶液10BV进行洗脱,流速为2BV·h-1,收集洗脱液,然后在85℃下蒸馏,除去乙酸乙酯和冰醋酸,再减压浓缩,得到浸膏G5;
(5)取步骤(4)得到的浸膏G5,干燥,粉碎成细粉,加入30倍量重量的白凡士林、10倍量重量的羊毛脂,60℃水浴下,搅拌混匀,冷却,即得软膏;
采用高效液相色谱法同时测定3-甲氧基-4-羟基桂皮醛、齐墩果酸、苯甲酰芍药苷含量,作为优选,测定方法如下:
(1)色谱条件:色谱柱为ODS-3柱,规格:5μm,0.46cm×15cm,流动相:乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液,梯度洗脱:梯度洗脱:从0min至5min,乙腈的比例从0%线性上升至10%,0.1%三氟乙酸水溶液的比例从100%线性下降至90%;从6min至15min,乙腈的比例从10%线性上升至40%,0.1%三氟乙酸水溶液的比例从90%线性下降至60%;从16min至35min,乙腈的比例从40%线性上升至50%,0.1%三氟乙酸水溶液的比例从60%线性下降至50%;体积流量:1.5mL·min-1,检测波长:266nm,柱温:40℃,进样量:10μL;3-甲氧基-4-羟基桂皮醛、齐墩果酸和苯甲酰芍药苷的理论板数均不低于5000;
(2)混合对照品溶液制备:精密称取3-甲氧基-4-羟基桂皮醛对照品、齐墩果酸对照品、苯甲酰芍药苷对照品,混合,加体积比为80:20的乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液制成每1mL含3-甲氧基-4-羟基桂皮醛2.00mg、齐墩果酸3.00mg、苯甲酰芍药苷1.00mg的混合对照品溶液;
(3)供试品溶液制备:取本品0.5g,精密称定,置于具塞锥形瓶中,加0.15moL·L-1磷酸二氢钠水溶液5mL,精密加入1%冰醋酸溶液15mL,密塞,称定质量,超声处理30min,超声功率220W,超声频率60kHz,放冷,在3000r·min-1的离心速度下,离心25min,取离心后的上清液,减压回收至干,残渣加体积比为80:20的乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液溶解并转移至10mL量瓶中,摇匀,即得供试品溶液;
(4)测定:吸取混合对照品溶液、供试品溶液各10μL,注入高效液相色谱仪,进行测定。
一种药物软膏在制备治疗寻常性银屑病药物中的制药用途,该药物是由以下重量份的药味原料制成:生地黄4重量份,牡丹皮3重量份,金银花3重量份、连翘3重量份、黄芩3重量份,该药物采用如下方法制备:
(1)取处方量的生地黄、牡丹皮、金银花、连翘、黄芩,加10倍量的仿生提取溶媒,37℃恒温下,搅拌提取3h,收集提取液T1和药渣Z1;提取液T1在3300r·min-1的离心速度下,离心40min,分别收集上清液Q1和沉淀D1;取上清液Q1,减压浓缩,得到浸膏G1,备用;药渣Z1和沉淀D1,均保留备用;上述仿生提取溶媒是由0.1%氯化钠、0.1%胃蛋白酶、0.3%胰蛋白酶及0.02mol·L-1盐酸配制成的溶液;
(2)取步骤(1)得到的药渣Z1,加入10倍量的75%的乙醇溶液,加入盐酸调整pH值为2,在微波功率800W,提取温度75℃的条件下,进行微波提取,得到提取液T2;取提取液T2,滤过,收集滤液,减压浓缩,得到浸膏G2;上述微波提取后的药渣弃去;
(3)取步骤(1)得到的沉淀D1,加8倍量乙酸乙酯,在85℃下进行水浴回流提取2次,每次提取40min,合并提取液,得到提取液T3;取提取液T3,减压回收乙酸乙酯,得到浸膏G3;上述乙酸乙酯提取后的药渣弃去;
(4)取步骤(1)得到的浸膏G1、步骤(2)得到的浸膏G2、步骤(3)得到的浸膏G3,将3种浸膏混合,充分搅拌均匀,得混合浸膏G4,将混合浸膏G4上柱层析进行分离,选用XDA-1B型大孔吸附树脂,柱径高比为1:5,上样体积6BV,用pH 11的氨水溶液8BV进行洗脱,弃去洗脱液,再用95%的乙醇溶液10BV进行洗脱,弃去洗脱液,再用体积比为8:2的乙酸乙酯-5%冰醋酸溶液10BV进行洗脱,流速为2BV·h-1,收集洗脱液,然后在85℃下蒸馏,除去乙酸乙酯和冰醋酸,再减压浓缩,得到浸膏G5;
(5)取步骤(4)得到的浸膏G5,干燥,粉碎成细粉,加入30倍量重量的白凡士林、10倍量重量的羊毛脂,60℃水浴下,搅拌混匀,冷却,即得软膏;
采用高效液相色谱法同时测定3-甲氧基-4-羟基桂皮醛、齐墩果酸、苯甲酰芍药苷含量,测定方法如下:
(1)色谱条件:色谱柱为ODS-3柱,规格:5μm,0.46cm×15cm,流动相:乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液,梯度洗脱:梯度洗脱:从0min至5min,乙腈的比例从0%线性上升至10%,0.1%三氟乙酸水溶液的比例从100%线性下降至90%;从6min至15min,乙腈的比例从10%线性上升至40%,0.1%三氟乙酸水溶液的比例从90%线性下降至60%;从16min至35min,乙腈的比例从40%线性上升至50%,0.1%三氟乙酸水溶液的比例从60%线性下降至50%;体积流量:1.5mL·min-1,检测波长:266nm,柱温:40℃,进样量:10μL;3-甲氧基-4-羟基桂皮醛、齐墩果酸和苯甲酰芍药苷的理论板数均不低于5000;
(2)混合对照品溶液制备:精密称取3-甲氧基-4-羟基桂皮醛对照品、齐墩果酸对照品、苯甲酰芍药苷对照品,混合,加体积比为80:20的乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液制成每1mL含3-甲氧基-4-羟基桂皮醛2.00mg、齐墩果酸3.00mg、苯甲酰芍药苷1.00mg的混合对照品溶液;
(3)供试品溶液制备:取本品0.5g,精密称定,置于具塞锥形瓶中,加0.15moL·L-1磷酸二氢钠水溶液5mL,精密加入1%冰醋酸溶液15mL,密塞,称定质量,超声处理30min,超声功率220W,超声频率60kHz,放冷,在3000r·min-1的离心速度下,离心25min,取离心后的上清液,减压回收至干,残渣加体积比为80:20的乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液溶解并转移至10mL量瓶中,摇匀,即得供试品溶液;
(4)测定:吸取混合对照品溶液、供试品溶液各10μL,注入高效液相色谱仪,进行测定。
一种药物软膏在制备治疗神经性皮炎药物中的制药用途,该药物是由以下重量份的药味原料制成:生地黄4重量份,牡丹皮3重量份,金银花3重量份、连翘3重量份、黄芩3重量份,该药物采用如下方法制备:
(1)取处方量的生地黄、牡丹皮、金银花、连翘、黄芩,加10倍量的仿生提取溶媒,37℃恒温下,搅拌提取3h,收集提取液T1和药渣Z1;提取液T1在3300r·min-1的离心速度下,离心40min,分别收集上清液Q1和沉淀D1;取上清液Q1,减压浓缩,得到浸膏G1,备用;药渣Z1和沉淀D1,均保留备用;上述仿生提取溶媒是由0.1%氯化钠、0.1%胃蛋白酶、0.3%胰蛋白酶及0.02mol·L-1盐酸配制成的溶液;
(2)取步骤(1)得到的药渣Z1,加入10倍量的75%的乙醇溶液,加入盐酸调整pH值为2,在微波功率800W,提取温度75℃的条件下,进行微波提取,得到提取液T2;取提取液T2,滤过,收集滤液,减压浓缩,得到浸膏G2;上述微波提取后的药渣弃去;
(3)取步骤(1)得到的沉淀D1,加8倍量乙酸乙酯,在85℃下进行水浴回流提取2次,每次提取40min,合并提取液,得到提取液T3;取提取液T3,减压回收乙酸乙酯,得到浸膏G3;上述乙酸乙酯提取后的药渣弃去;
(4)取步骤(1)得到的浸膏G1、步骤(2)得到的浸膏G2、步骤(3)得到的浸膏G3,将3种浸膏混合,充分搅拌均匀,得混合浸膏G4,将混合浸膏G4上柱层析进行分离,选用XDA-1B型大孔吸附树脂,柱径高比为1:5,上样体积6BV,用pH 11的氨水溶液8BV进行洗脱,弃去洗脱液,再用95%的乙醇溶液10BV进行洗脱,弃去洗脱液,再用体积比为8:2的乙酸乙酯-5%冰醋酸溶液10BV进行洗脱,流速为2BV·h-1,收集洗脱液,然后在85℃下蒸馏,除去乙酸乙酯和冰醋酸,再减压浓缩,得到浸膏G5;
(5)取步骤(4)得到的浸膏G5,干燥,粉碎成细粉,加入30倍量重量的白凡士林、10倍量重量的羊毛脂,60℃水浴下,搅拌混匀,冷却,即得软膏;
采用高效液相色谱法同时测定3-甲氧基-4-羟基桂皮醛、齐墩果酸、苯甲酰芍药苷含量,测定方法如下:
(1)色谱条件:色谱柱为ODS-3柱,规格:5μm,0.46cm×15cm,流动相:乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液,梯度洗脱:梯度洗脱:从0min至5min,乙腈的比例从0%线性上升至10%,0.1%三氟乙酸水溶液的比例从100%线性下降至90%;从6min至15min,乙腈的比例从10%线性上升至40%,0.1%三氟乙酸水溶液的比例从90%线性下降至60%;从16min至35min,乙腈的比例从40%线性上升至50%,0.1%三氟乙酸水溶液的比例从60%线性下降至50%;体积流量:1.5mL·min-1,检测波长:266nm,柱温:40℃,进样量:10μL;3-甲氧基-4-羟基桂皮醛、齐墩果酸和苯甲酰芍药苷的理论板数均不低于5000;
(2)混合对照品溶液制备:精密称取3-甲氧基-4-羟基桂皮醛对照品、齐墩果酸对照品、苯甲酰芍药苷对照品,混合,加体积比为80:20的乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液制成每1mL含3-甲氧基-4-羟基桂皮醛2.00mg、齐墩果酸3.00mg、苯甲酰芍药苷1.00mg的混合对照品溶液;
(3)供试品溶液制备:取本品0.5g,精密称定,置于具塞锥形瓶中,加0.15moL·L-1磷酸二氢钠水溶液5mL,精密加入1%冰醋酸溶液15mL,密塞,称定质量,超声处理30min,超声功率220W,超声频率60kHz,放冷,在3000r·min-1的离心速度下,离心25min,取离心后的上清液,减压回收至干,残渣加体积比为80:20的乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液溶解并转移至10mL量瓶中,摇匀,即得供试品溶液;
(4)测定:吸取混合对照品溶液、供试品溶液各10μL,注入高效液相色谱仪,进行测定。
本发明通过以下实验研究验证本发明的有益效果,但是并不限制本发明权利要求的保护范围。采用本发明技术制成的药物,在本发明中称为“本品”或者“地黄银丹软膏”。
实验一:治疗银屑病的药物筛选实验研究
1材料与方法
1.1实验材料
1.1.1实验动物
秘鲁种健康白色豚鼠,体重310~340g,性别随机,雌雄分养,由黑龙江中医药大学药物安全性评价中心提供,合格证号为P00102013。实验前适应性喂养5d,温度为(20±2)℃,12h光照,湿度35%,自由进食,均以基础饲料喂养,排除饮食及环境等所有可能对实验动物产生的影响。
1.1.2药品、试剂与受试药物
盐酸普萘洛尔注射液,英文名称:Propranolol Hydrochloride Injection,由华润紫竹药业有限公司提供,批准文号:国药准字H11021734,规格:5ml:5mg。
复方曲安奈德乳膏,由中美上海施贵宝制药有限公司提供,批准文号:国药准字H31022515。
乳剂基质,由广州市欧妍化妆品有限公司提供。
无钙镁PBS缓冲液,由广州安邦生物科技有限公司提供。
ELISA试剂盒,购于上海恒远生物科技有限公司。
受试药物GA:处方:生地黄200g、牡丹皮150g、金银花150g,连翘150g,黄芩150g。
制备方法:(1)取处方量的生地黄、牡丹皮、金银花、连翘、黄芩,加10倍量的仿生提取溶媒,37℃恒温下,搅拌提取3h,收集提取液;提取液在3300r·min-1的离心速度下,离心40min,收集上清液;取上清液,减压浓缩,得到浸膏,干燥,粉碎成细粉,加入30倍量重量的白凡士林、10倍量重量的羊毛脂,60℃水浴下,搅拌混匀,冷却,即得受试药物GA软膏。上述仿生提取溶媒是由0.1%氯化钠、0.1%胃蛋白酶、0.3%胰蛋白酶及0.02mol·L-1盐酸配制成的溶液。
受试药物GB:处方:生地黄200g、牡丹皮150g、金银花150g,连翘150g,黄芩150g。
制备方法:(1)取处方量的生地黄、牡丹皮、金银花、连翘、黄芩,加入10倍量的75%的乙醇溶液,加入盐酸调整pH值为2,在微波功率800W,提取温度75℃的条件下,进行微波提取,得到提取液;取提取液,滤过,收集滤液,减压浓缩,得到浸膏,干燥,粉碎成细粉,加入30倍量重量的白凡士林、10倍量重量的羊毛脂,60℃水浴下,搅拌混匀,冷却,即得受试药物GB软膏。
受试药物GC:处方:生地黄200g、牡丹皮150g、金银花150g,连翘150g,黄芩150g。
制备方法:(1)取处方量的生地黄、牡丹皮、金银花、连翘、黄芩,加10倍量的仿生提取溶媒,37℃恒温下,搅拌提取3h,收集提取液T1和药渣Z1;提取液T1在3300r·min-1的离心速度下,离心40min,分别收集上清液Q1和沉淀D1;取上清液Q1,减压浓缩,得到浸膏G1,备用;药渣Z1和沉淀D1,均保留备用;上述仿生提取溶媒是由0.1%氯化钠、0.1%胃蛋白酶、0.3%胰蛋白酶及0.02mol·L-1盐酸配制成的溶液;
(2)取步骤(1)得到的药渣Z1,加入10倍量的75%的乙醇溶液,加入盐酸调整pH值为2,在微波功率800W,提取温度75℃的条件下,进行微波提取,得到提取液T2;取提取液T2,滤过,收集滤液,减压浓缩,得到浸膏G2;上述微波提取后的药渣弃去;
(3)取步骤(1)得到的沉淀D1,加8倍量乙酸乙酯,在85℃下进行水浴回流提取2次,每次提取40min,合并提取液,得到提取液T3;取提取液T3,减压回收乙酸乙酯,得到浸膏G3;上述乙酸乙酯提取后的药渣弃去;
(4)取步骤(1)得到的浸膏G1、步骤(2)得到的浸膏G2、步骤(3)得到的浸膏G3,将3种浸膏混合,充分搅拌均匀,得混合浸膏G4,将混合浸膏G4上柱层析进行分离,选用XDA-1B型大孔吸附树脂,柱径高比为1:5,上样体积6BV,用pH 11的氨水溶液8BV进行洗脱,弃去洗脱液,再用95%的乙醇溶液10BV进行洗脱,弃去洗脱液,再用体积比为8:2的乙酸乙酯-5%冰醋酸溶液10BV进行洗脱,流速为2BV·h-1,收集洗脱液,然后在85℃下蒸馏,除去乙酸乙酯和冰醋酸,再减压浓缩,得到浸膏G5;
(5)取步骤(4)得到的浸膏G5,干燥,粉碎成细粉,加入30倍量重量的白凡士林、10倍量重量的羊毛脂,60℃水浴下,搅拌混匀,冷却,即得受试药物GC软膏。
受试药物GD:处方:生地黄200g、牡丹皮150g、金银花150g,连翘150g,黄芩150g。
制备方法:(1)取处方量的生地黄、牡丹皮、金银花、连翘、黄芩,加8倍量乙酸乙酯,在85℃下进行水浴回流提取2次,每次提取40min,合并提取液,得到提取液;取提取液T3,减压回收乙酸乙酯,得到浸膏,干燥,粉碎成细粉,加入30倍量重量的白凡士林、10倍量重量的羊毛脂,60℃水浴下,搅拌混匀,冷却,即得受试药物GD软膏。
1.1.3造模、分组、给药
将豚鼠随机分成7组,分别为:空白对照组、模型组,阳性药物组、受试药物GA组、受试药物GB组、受试药物GC组、受试药物GD组,每组10只。
空白对照组仅在豚鼠耳背皮肤上外涂乳剂基质,其余各组,用棉签沾取盐酸普萘洛尔注射液,外涂于豚鼠耳背的皮肤上,每日4次,每隔6小时涂抹一次,连续涂抹21天,制成豚鼠耳背皮肤的银屑病动物模型,以豚鼠耳背皮肤角质细胞过度增生,从而出现角化过度,或者角化不全等表现,确定为豚鼠银屑病的动物模型造模成功。
另外阳性药物组、受试药物GA组、受试药物GB组、受试药物GC组、受试药物GD组均在造模的第14天始给药,阳性药物组外搽复方曲安奈德乳膏,受试药物GA组外搽受试药物GA乳膏、受试药物GB组外搽受试药物GB乳膏、受试药物GC组外搽受试药物GC乳膏、受试药物GD组外搽受试药物GD乳膏,每天3次,分别于早中晚各外搽一次,均匀涂搽,连续外搽10d。
实验结束后,麻醉豚鼠,处死,取豚鼠一侧耳背皮肤,取0.5g,加3mL无钙镁PBS缓冲液,匀浆,以3000r·min-1的转速,离心12min。取离心后的上清液,ELISA试剂盒进行检测,检测豚鼠耳背皮肤中TNF-α和ICAM-1的含量。
再取豚鼠另一侧耳背皮肤,用12%的甲醛溶液进行固定,石蜡包埋,HE染色,光镜下观测豚鼠耳背皮肤颗粒层、角质层、棘细胞层、基底细胞层;
在光镜下对豚鼠同一部位耳廓表皮的厚度进行精确的测量,换算成实际厚度(mm),进行组间比较。
1.2.4统计学分析
2实验结果
表1以说明书附图1至附图7显示,实验结果如下:
模型组豚鼠耳背皮肤组织中TNF-α和ICAM-1含量均明显高于空白对照组。阳性对照组和受试药物GC组豚鼠耳背皮肤组织中的TNF-α和ICAM-1的含量均明显低于模型组(P<0.05);阳性对照组中TNF-α和ICAM-1的含量也明显低于模型组(P<0.05)。受试药物GA组、受试药物GB组和受试药物GD组豚鼠耳背皮肤组织中TNF-α和ICAM-1含量略低于模型组,但是没有显著性差异(P>0.05)。
在光镜下观测,正常组豚鼠耳背皮肤可见完整角质层,条状的颗粒层,可见少量黑色颗粒,可见多角形的棘细胞层,可见单层柱状的基底层细胞,未见有丝分裂。模型组的可见棘层明显增厚,角化不全,未见条状的颗粒层,未见单层柱状的基底层细胞,可见较多黑褐色颗粒细胞。阳性对照组和受试药物GC组的豚鼠耳背皮肤组织病理状态明显改善,与空白对照组非常接近。受试药物GA组、受试药物GB组和受试药物GD组豚鼠耳背皮肤组织病理状态没有明显改善,与模型组非常接近。
模型组豚鼠的耳背皮肤厚度明显厚于空白对照组。阳性对照组和受试药物GC组豚鼠的耳背皮肤厚度明显薄于模型组(P<0.05),厚度接近空白对照组;受试药物GA组、受试药物GB组和受试药物GD组豚鼠的耳背皮肤厚度略低于模型组,但是没有显著性差异(P>0.05)。
注:与模型组比较,*P<0.05;与阳性药物组比较,#P<0.05
3实验结论
受试药物GC对豚鼠耳背银屑病模型具有非常好的治疗效果。
实验二:治疗寻常性银屑病的临床观察
1资料和方法
1.1病例
因技术法规的限制,本发明黄银丹软膏还不可以做大规模的临床试验研究,仅以16例自愿者的小样本做了初步的临床试验研究。16例患者均签署了《知情同意书》,自愿接受临床试验。
寻常性银屑病患者16例。患者年龄22~42岁,性别不限;患者需同时符合以下条件:(1)具有寻常性银屑病的基本临床表现;(2)皮损面积在30%以内;(3)病程在4个月以内;(4)皮损炎症不明显,并且没有其他病原体感染的临床表现;(5)近15d内未使用过其他药物治疗。
排除标准:对药物所含成分有过敏史的患者;皮肤出现渗出或者糜烂的患者;患有关节型银屑病、脓疱型银屑病、红皮型银屑病的患者;处于妊娠期及哺乳期的患者;使用了其他药物可能影响到银屑病治疗的患者。
1.2方法
将入选的银屑病患者随机分为治疗组和对照组,每组各8例,两组病例的性别、年龄、病程、临床表现方面均无显著性差异(P>0.05)。
治疗组8例,患处外涂地黄银丹软膏外用;处方及制法为:
处方:生地黄200g、牡丹皮150g、金银花150g,连翘150g,黄芩150g。
制备方法:(1)取处方量的生地黄、牡丹皮、金银花、连翘、黄芩,加10倍量的仿生提取溶媒,37℃恒温下,搅拌提取3h,收集提取液T1和药渣Z1;提取液T1在3300r·min-1的离心速度下,离心40min,分别收集上清液Q1和沉淀D1;取上清液Q1,减压浓缩,得到浸膏G1,备用;药渣Z1和沉淀D1,均保留备用;上述仿生提取溶媒是由0.1%氯化钠、0.1%胃蛋白酶、0.3%胰蛋白酶及0.02mol·L-1盐酸配制成的溶液;
(2)取步骤(1)得到的药渣Z1,加入10倍量的75%的乙醇溶液,加入盐酸调整pH值为2,在微波功率800W,提取温度75℃的条件下,进行微波提取,得到提取液T2;取提取液T2,滤过,收集滤液,减压浓缩,得到浸膏G2;上述微波提取后的药渣弃去;
(3)取步骤(1)得到的沉淀D1,加8倍量乙酸乙酯,在85℃下进行水浴回流提取2次,每次提取40min,合并提取液,得到提取液T3;取提取液T3,减压回收乙酸乙酯,得到浸膏G3;上述乙酸乙酯提取后的药渣弃去;
(4)取步骤(1)得到的浸膏G1、步骤(2)得到的浸膏G2、步骤(3)得到的浸膏G3,将3种浸膏混合,充分搅拌均匀,得混合浸膏G4,将混合浸膏G4上柱层析进行分离,选用XDA-1B型大孔吸附树脂,柱径高比为1:5,上样体积6BV,用pH 11的氨水溶液8BV进行洗脱,弃去洗脱液,再用95%的乙醇溶液10BV进行洗脱,弃去洗脱液,再用体积比为8:2的乙酸乙酯-5%冰醋酸溶液10BV进行洗脱,流速为2BV·h-1,收集洗脱液,然后在85℃下蒸馏,除去乙酸乙酯和冰醋酸,再减压浓缩,得到浸膏G5;
(5)取步骤(4)得到的浸膏G5,干燥,粉碎成细粉,加入30倍量重量的白凡士林、10倍量重量的羊毛脂,60℃水浴下,搅拌混匀,冷却,即得地黄银丹软膏。
对照组8例,患处外涂糠酸莫米松乳膏(华润三九(南昌)药业有限公司生产,批准文号:国药准字H20074090,规格:0.1%)。
治疗组和对照组均为每天早中晚各1次,连续使用30d。
观察并记录治疗前1d、治疗后第10d、第20d、第30d的临床疗效和不良反应。
观察用药后患者的临床表现,包括皮损范围、浸润程度、瘙痒、鳞屑、红斑,评分方法为五级评分法,每类参数按照临床表现的轻重,计分为:0分、1分、2分、3分、4分。
1.3疗效判定的标准
疗效指数≥90%为痊愈;疗效指数≥60%为显效;疗效指数≥20%为好转;疗效指数<20%为无效;治疗有效率为痊愈率加显效率的和。
1.4不良反应
观察治疗过程中是否的不良反应,并做记录,不良反应主要包括刺激、过敏。
1.5统计学处理
实验结果的计数资料,采用χ2检验进行统计学分析。
2结果
临床试验疗效结果见表2。治疗组的有效率为87.5%,对照组的有效率为62.5%,两组有效率比较,具有显著性差异(P<0.05);治疗30d后治疗组的痊愈率为62.5%,对照组的痊愈率为25.0%,两组痊愈率比较,具有显著性差异(P<0.05)。治疗组和对照组均未见刺激、过敏等明显的不良反应。
表2患者在治疗30d后的临床疗效比较单位:例(%)
3结论
本发明黄银丹软膏对于寻常性银屑病具有较好的治疗效果,且安全无不良反应。
实验三:HPLC法测定地黄银丹软膏中3-甲氧基-4-羟基桂皮醛、齐墩果酸和苯甲酰芍药苷
经前期研究及现有技术研究表明,在本发明地黄银丹软膏的药味原料中生地黄含有的3-甲氧基-4-羟基桂皮醛,金银花和连翘含有的齐墩果酸,以及牡丹皮中含有的苯甲酰芍药苷是治疗银屑病的重要活性成分,发明人经过反复实验,建立了通过高效液相色谱法一次性同时测定3-甲氧基-4-羟基桂皮醛、齐墩果酸和苯甲酰芍药苷含量的检测方法,研究如下。
1仪器与材料
Agilent 1100高效液相色谱仪,检测器为:紫外-可见光检测器。3-甲氧基-4-羟基桂皮醛,由广州隽沐生物科技有限公司提供,批号:1105-201601;齐墩果酸,由南京卡塞斯医药科技有限公司提供,批号:1203-201602;苯甲酰芍药苷对照品,由武汉斯坦德化工科技有限公司
提供,批号:1025-201512。
样品:地黄银丹软膏样品,在本发明中成为“本品”,其处方和制备方法如下:
处方:生地黄200g、牡丹皮150g、金银花150g,连翘150g,黄芩150g。
制备方法:(1)取处方量的生地黄、牡丹皮、金银花、连翘、黄芩,加10倍量的仿生提取溶媒,37℃恒温下,搅拌提取3h,收集提取液T1和药渣Z1;提取液T1在3300r·min-1的离心速度下,离心40min,分别收集上清液Q1和沉淀D1;取上清液Q1,减压浓缩,得到浸膏G1,备用;药渣Z1和沉淀D1,均保留备用;上述仿生提取溶媒是由0.1%氯化钠、0.1%胃蛋白酶、0.3%胰蛋白酶及0.02mol·L-1盐酸配制成的溶液;
(2)取步骤(1)得到的药渣Z1,加入10倍量的75%的乙醇溶液,加入盐酸调整pH值为2,在微波功率800W,提取温度75℃的条件下,进行微波提取,得到提取液T2;取提取液T2,滤过,收集滤液,减压浓缩,得到浸膏G2;上述微波提取后的药渣弃去;
(3)取步骤(1)得到的沉淀D1,加8倍量乙酸乙酯,在85℃下进行水浴回流提取2次,每次提取40min,合并提取液,得到提取液T3;取提取液T3,减压回收乙酸乙酯,得到浸膏G3;上述乙酸乙酯提取后的药渣弃去;
(4)取步骤(1)得到的浸膏G1、步骤(2)得到的浸膏G2、步骤(3)得到的浸膏G3,将3种浸膏混合,充分搅拌均匀,得混合浸膏G4,将混合浸膏G4上柱层析进行分离,选用XDA-1B型大孔吸附树脂,柱径高比为1:5,上样体积6BV,用pH 11的氨水溶液8BV进行洗脱,弃去洗脱液,再用95%的乙醇溶液10BV进行洗脱,弃去洗脱液,再用体积比为8:2的乙酸乙酯-5%冰醋酸溶液10BV进行洗脱,流速为2BV·h-1,收集洗脱液,然后在85℃下蒸馏,除去乙酸乙酯和冰醋酸,再减压浓缩,得到浸膏G5;
(5)取步骤(4)得到的浸膏G5,干燥,粉碎成细粉,加入30倍量重量的白凡士林、10倍量重量的羊毛脂,60℃水浴下,搅拌混匀,冷却,即得地黄银丹软膏。
阴性样品:按照地黄银丹软膏样品的取样量,取等量的白凡士林和羊毛脂,60℃水浴下,搅拌混匀,即得阴性样品。
所用试剂均为色谱纯,均由上海纯晟精细化工科技有限公司公司提供。
2方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱为ODS-3柱,规格:5μm,0.46cm×15cm,流动相:乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液,梯度洗脱:梯度洗脱:从0min至5min,乙腈的比例从0%线性上升至10%,0.1%三氟乙酸水溶液的比例从100%线性下降至90%;从6min至15min,乙腈的比例从10%线性上升至40%,0.1%三氟乙酸水溶液的比例从90%线性下降至60%;从16min至35min,乙腈的比例从40%线性上升至50%,0.1%三氟乙酸水溶液的比例从60%线性下降至50%;体积流量:1.5mL·min-1,检测波长:266nm,柱温:40℃,进样量:10μL;3-甲氧基-4-羟基桂皮醛、齐墩果酸和苯甲酰芍药苷的理论板数均不低于5000;阴性对照溶液对样品测定无干扰。实验结果色谱图见说明书附图8、附图9、附图10。
2.2溶液配制
2.2.1混合对照品溶液制备
精密称取3-甲氧基-4-羟基桂皮醛对照品、齐墩果酸对照品、苯甲酰芍药苷对照品,混合,加体积比为80:20的乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液制成每1mL含3-甲氧基-4-羟基桂皮醛2.00mg、齐墩果酸3.00mg、苯甲酰芍药苷1.00mg的混合对照品溶液。
2.2.2供试品溶液制备
取本品0.5g,精密称定,置于具塞锥形瓶中,加0.15moL·L-1磷酸二氢钠水溶液5mL,精密加入1%冰醋酸溶液15mL,密塞,称定质量,超声处理30min,超声功率220W,超声频率60kHz,放冷,在3000r·min-1的离心速度下,离心25min,取离心后的上清液,减压回收至干,残渣加体积比为80:20的乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液溶解并转移至10mL量瓶中,摇匀,即得供试品溶液。
2.2.3阴性对照溶液制备
取阴性样品0.5g,按照供试品溶液制备相同的方法制备成阴性对照溶液。
2.3线性关系考察
精密吸取上述混合对照品溶液1μL、2μL、4μL、8μL,注入高效液相液相色谱仪,记录峰面积。以进样量(μg)为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线并进行回归计算,回归方程分别为:
3-甲氧基-4-羟基桂皮醛回归方程为:Y=1256.15X+5.135,r=0.9998(n=3);
齐墩果酸回归方程为:Y=742.36X-2.658,r=0.9998(n=3);
苯甲酰芍药苷回归方程为:Y=7469.25X+0.633,r=0.9989(n=3);
结果表明,3-甲氧基-4-羟基桂皮醛在进样量为0.0826~8.268μg、齐墩果酸在进样量为0.0846~8.2676μg、苯甲酰芍药苷在进样量为0.0746~3.268μg范围内峰面积与进样量线性关系良好。
2.4精密度试验
精密吸取上述混合对照品溶液,连续进样6次测定,计算3-甲氧基-4-羟基桂皮醛、齐墩果酸和苯甲酰芍药苷色谱峰面积的RSD分别为1.6%、1.3%和1.8%,结果表明仪器精密度良好。
2.5重复性试验
取同一批样品6份,进行测定,3-甲氧基-4-羟基桂皮醛、齐墩果酸和苯甲酰芍药苷质量分数的RSD分别为1.8%、1.6%和2.1%,结果表明样品重复性良好。
2.6稳定性试验
吸取同一供试品溶液,在上述色谱条件下,分别于0、2、4、6、12、24h进样测定,测得3-甲氧基-4-羟基桂皮醛、齐墩果酸和苯甲酰芍药苷色谱峰面积的RSD分别为1.6%、1.9%和1.8%,结果表明供试品溶液在24h内基本稳定。
2.7加样回收率试验
实验结果见表3。
表3地黄银丹软膏中3-甲氧基-4-羟基桂皮醛、齐墩果酸和苯甲酰芍药苷加样回收率试验结果(n=6)
2.8样品测定
对3批样品中3-甲氧基-4-羟基桂皮醛、齐墩果酸和苯甲酰芍药苷进行测定,用外标法计算,结果见表4。
表4地黄银丹软膏中3-甲氧基-4-羟基桂皮醛、齐墩果酸和苯甲酰芍药苷测定结果(n=3)
3结论
本发明的检测方法精密度高,重复性好,稳定性,可以用于本品的质量检测。
实验四:采用高效液相色谱法测定不同制备方法下制备的受试药物中活性成分含量的比较实验
1不同制备方法下制备的受试药物
1.1受试药物GA,其处方与制备方法如下:
处方:生地黄200g、牡丹皮150g、金银花150g,连翘150g,黄芩150g。
制备方法:(1)取处方量的生地黄、牡丹皮、金银花、连翘、黄芩,加10倍量的仿生提取溶媒,37℃恒温下,搅拌提取3h,收集提取液;提取液在3300r·min-1的离心速度下,离心40min,收集上清液;取上清液,减压浓缩,得到浸膏,干燥,粉碎成细粉,加入30倍量重量的白凡士林、10倍量重量的羊毛脂,60℃水浴下,搅拌混匀,冷却,即得受试药物GA软膏。上述仿生提取溶媒是由0.1%氯化钠、0.1%胃蛋白酶、0.3%胰蛋白酶及0.02mol·L-1盐酸配制成的溶液。
1.2受试药物GB,其处方与制备方法如下:
处方:生地黄200g、牡丹皮150g、金银花150g,连翘150g,黄芩150g。
制备方法:(1)取处方量的生地黄、牡丹皮、金银花、连翘、黄芩,加入10倍量的75%的乙醇溶液,加入盐酸调整pH值为2,在微波功率800W,提取温度75℃的条件下,进行微波提取,得到提取液;取提取液,滤过,收集滤液,减压浓缩,得到浸膏,干燥,粉碎成细粉,加入30倍量重量的白凡士林、10倍量重量的羊毛脂,60℃水浴下,搅拌混匀,冷却,即得受试药物GB软膏。
1.3受试药物GC,其处方与制备方法如下:
处方:生地黄200g、牡丹皮150g、金银花150g,连翘150g,黄芩150g。
制备方法:(1)取处方量的生地黄、牡丹皮、金银花、连翘、黄芩,加10倍量的仿生提取溶媒,37℃恒温下,搅拌提取3h,收集提取液T1和药渣Z1;提取液T1在3300r·min-1的离心速度下,离心40min,分别收集上清液Q1和沉淀D1;取上清液Q1,减压浓缩,得到浸膏G1,备用;药渣Z1和沉淀D1,均保留备用;上述仿生提取溶媒是由0.1%氯化钠、0.1%胃蛋白酶、0.3%胰蛋白酶及0.02mol·L-1盐酸配制成的溶液;
(2)取步骤(1)得到的药渣Z1,加入10倍量的75%的乙醇溶液,加入盐酸调整pH值为2,在微波功率800W,提取温度75℃的条件下,进行微波提取,得到提取液T2;取提取液T2,滤过,收集滤液,减压浓缩,得到浸膏G2;上述微波提取后的药渣弃去;
(3)取步骤(1)得到的沉淀D1,加8倍量乙酸乙酯,在85℃下进行水浴回流提取2次,每次提取40min,合并提取液,得到提取液T3;取提取液T3,减压回收乙酸乙酯,得到浸膏G3;上述乙酸乙酯提取后的药渣弃去;
(4)取步骤(1)得到的浸膏G1、步骤(2)得到的浸膏G2、步骤(3)得到的浸膏G3,将3种浸膏混合,充分搅拌均匀,得混合浸膏G4,将混合浸膏G4上柱层析进行分离,选用XDA-1B型大孔吸附树脂,柱径高比为1:5,上样体积6BV,用pH 11的氨水溶液8BV进行洗脱,弃去洗脱液,再用95%的乙醇溶液10BV进行洗脱,弃去洗脱液,再用体积比为8:2的乙酸乙酯-5%冰醋酸溶液10BV进行洗脱,流速为2BV·h-1,收集洗脱液,然后在85℃下蒸馏,除去乙酸乙酯和冰醋酸,再减压浓缩,得到浸膏G5;
(5)取步骤(4)得到的浸膏G5,干燥,粉碎成细粉,加入30倍量重量的白凡士林、10倍量重量的羊毛脂,60℃水浴下,搅拌混匀,冷却,即得受试药物GC软膏。
1.4受试药物GD,其处方与制备方法如下:
处方:生地黄200g、牡丹皮150g、金银花150g,连翘150g,黄芩150g。
制备方法:(1)取处方量的生地黄、牡丹皮、金银花、连翘、黄芩,加8倍量乙酸乙酯,在85℃下进行水浴回流提取2次,每次提取40min,合并提取液,得到提取液;取提取液T3,减压回收乙酸乙酯,得到浸膏,干燥,粉碎成细粉,加入30倍量重量的白凡士林、10倍量重量的羊毛脂,60℃水浴下,搅拌混匀,冷却,即得受试药物GD软膏。
2测定
采用本发明实验三提供的HPLC法同时测定药物中3-甲氧基-4-羟基桂皮醛、齐墩果酸、苯甲酰芍药苷含量的方法进行测定。
3测定结果
测定结果见表5。
表5不同制备方法下制备的受试药物中活性成分含量(mg·g-1,n=2)
4.结论
由上表实验结果可见,采用本发明提供的制备方法制备得到的受试药物GC,其含有的3-甲氧基-4-羟基桂皮醛、齐墩果酸、苯甲酰芍药苷的含量明显高于其他制备方法下制备所得的药物,这也可能是受试药物GC(本发明药物)在治疗银屑病方面的疗效优于其他药物的原因。
附图说明:
图1为光镜下空白对照组豚鼠耳背皮肤显微图(×600)
图2为光镜下模型组豚鼠耳背皮肤显微图(×600)
图3为光镜下阳性对照组豚鼠耳背皮肤显微图(×600)
图4为光镜下受试药物GA组豚鼠耳背皮肤显微图(×600)
图5为光镜下受试药物GB组豚鼠耳背皮肤显微图(×600)
图6为光镜下受试药物GC组豚鼠耳背皮肤显微图(×600)
图7为光镜下受试药物GD组豚鼠耳背皮肤显微图(×600)
图8为混合对照品溶液高效液相色谱图,其中:1号峰为苯甲酰芍药苷,2号峰为齐墩果酸,3号峰为3-甲氧基-4-羟基桂皮醛。
图9为样品高效液相色谱图,其中:1号峰为苯甲酰芍药苷,2号峰为齐墩果酸,3号峰为3-甲氧基-4-羟基桂皮醛。
图10为阴性样品溶液高效液相色谱图。
具体实施方式:
实施例1:
处方:生地黄200g、牡丹皮150g、金银花150g,连翘150g,黄芩150g。
制备方法:(1)取处方量的生地黄、牡丹皮、金银花、连翘、黄芩,加10倍量的仿生提取溶媒,37℃恒温下,搅拌提取3h,收集提取液T1和药渣Z1;提取液T1在3300r·min-1的离心速度下,离心40min,分别收集上清液Q1和沉淀D1;取上清液Q1,减压浓缩,得到浸膏G1,备用;药渣Z1和沉淀D1,均保留备用;上述仿生提取溶媒是由0.1%氯化钠、0.1%胃蛋白酶、0.3%胰蛋白酶及0.02mol·L-1盐酸配制成的溶液;
(2)取步骤(1)得到的药渣Z1,加入10倍量的75%的乙醇溶液,加入盐酸调整pH值为2,在微波功率800W,提取温度75℃的条件下,进行微波提取,得到提取液T2;取提取液T2,滤过,收集滤液,减压浓缩,得到浸膏G2;上述微波提取后的药渣弃去;
(3)取步骤(1)得到的沉淀D1,加8倍量乙酸乙酯,在85℃下进行水浴回流提取2次,每次提取40min,合并提取液,得到提取液T3;取提取液T3,减压回收乙酸乙酯,得到浸膏G3;上述乙酸乙酯提取后的药渣弃去;
(4)取步骤(1)得到的浸膏G1、步骤(2)得到的浸膏G2、步骤(3)得到的浸膏G3,将3种浸膏混合,充分搅拌均匀,得混合浸膏G4,将混合浸膏G4上柱层析进行分离,选用XDA-1B型大孔吸附树脂,柱径高比为1:5,上样体积6BV,用pH 11的氨水溶液8BV进行洗脱,弃去洗脱液,再用95%的乙醇溶液10BV进行洗脱,弃去洗脱液,再用体积比为8:2的乙酸乙酯-5%冰醋酸溶液10BV进行洗脱,流速为2BV·h-1,收集洗脱液,然后在85℃下蒸馏,除去乙酸乙酯和冰醋酸,再减压浓缩,得到浸膏G5;
(5)取步骤(4)得到的浸膏G5,干燥,粉碎成细粉,加入30倍量重量的白凡士林、10倍量重量的羊毛脂,60℃水浴下,搅拌混匀,冷却,即得地黄银丹软膏。
检测方法:
采用高效液相色谱法同时测定3-甲氧基-4-羟基桂皮醛、齐墩果酸、苯甲酰芍药苷含量,测定方法如下:
(1)色谱条件:色谱柱为ODS-3柱,规格:5μm,0.46cm×15cm,流动相:乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液,梯度洗脱:梯度洗脱:从0min至5min,乙腈的比例从0%线性上升至10%,0.1%三氟乙酸水溶液的比例从100%线性下降至90%;从6min至15min,乙腈的比例从10%线性上升至40%,0.1%三氟乙酸水溶液的比例从90%线性下降至60%;从16min至35min,乙腈的比例从40%线性上升至50%,0.1%三氟乙酸水溶液的比例从60%线性下降至50%;体积流量:1.5mL·min-1,检测波长:266nm,柱温:40℃,进样量:10μL;3-甲氧基-4-羟基桂皮醛、齐墩果酸和苯甲酰芍药苷的理论板数均不低于5000;
(2)混合对照品溶液制备:精密称取3-甲氧基-4-羟基桂皮醛对照品、齐墩果酸对照品、苯甲酰芍药苷对照品,混合,加体积比为80:20的乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液制成每1mL含3-甲氧基-4-羟基桂皮醛2.00mg、齐墩果酸3.00mg、苯甲酰芍药苷1.00mg的混合对照品溶液;
(3)供试品溶液制备:取本品0.5g,精密称定,置于具塞锥形瓶中,加0.15moL·L-1磷酸二氢钠水溶液5mL,精密加入1%冰醋酸溶液15mL,密塞,称定质量,超声处理30min,超声功率220W,超声频率60kHz,放冷,在3000r·min-1的离心速度下,离心25min,取离心后的上清液,减压回收至干,残渣加体积比为80:20的乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液溶解并转移至10mL量瓶中,摇匀,即得供试品溶液;
(4)测定:吸取混合对照品溶液、供试品溶液各10μL,注入高效液相色谱仪,进行测定;
(5)测定结果:每克本发明的地黄银丹软膏中含3-甲氧基-4-羟基桂皮醛15.20mg、齐墩果酸30.25mg、苯甲酰芍药苷12.32mg。
Claims (6)
1.一种治疗寻常性银屑病的药物,该药物是由以下重量份的药味原料制成:生地黄3~5重量份,牡丹皮2~4重量份,金银花2~4重量份、连翘2~4重量份、黄芩2~4重量份,其特征在于,该药物采用如下方法制备:
制备方法:(1)取处方量的生地黄、牡丹皮、金银花、连翘、黄芩,加8~12倍量的仿生提取溶媒,35~39℃恒温下,搅拌提取2~4h,收集提取液T1和药渣Z1;提取液T1在3000~3500r·min-1的离心速度下,离心30~50min,分别收集上清液Q1和沉淀D1;取上清液Q1,减压浓缩,得到浸膏G1,备用;药渣Z1和沉淀D1,均保留备用;上述仿生提取溶媒是由0.1%氯化钠、0.1%胃蛋白酶、0.3%胰蛋白酶及0.02mol·L-1盐酸配制成的溶液;
(2)取步骤(1)得到的药渣Z1,加入8~12倍量的70~80%的乙醇溶液,加入盐酸调整pH值为1~3,在微波功率700~900W,提取温度70~80℃的条件下,进行微波提取,提取时间25~35min,得到提取液T2;取提取液T2,滤过,收集滤液,减压浓缩,得到浸膏G2;上述微波提取后的药渣弃去;
(3)取步骤(1)得到的沉淀D1,加6~10倍量乙酸乙酯,在80~90℃下进行水浴回流提取1~3次,每次提取35~45min,合并提取液,得到提取液T3;取提取液T3,减压回收乙酸乙酯,得到浸膏G3;上述乙酸乙酯提取后的药渣弃去;
(4)取步骤(1)得到的浸膏G1、步骤(2)得到的浸膏G2、步骤(3)得到的浸膏G3,将3种浸膏混合,充分搅拌均匀,得混合浸膏G4,将混合浸膏G4上柱层析进行分离,选用XDA-1B型大孔吸附树脂,柱径高比为1:4~6,上样体积5~7BV,用pH 10~12的氨水溶液7~9BV进行洗脱,弃去洗脱液,再用95%的乙醇溶液9~11BV进行洗脱,弃去洗脱液,再用体积比为8:1~3的乙酸乙酯-5%冰醋酸溶液9~11BV进行洗脱,流速为1.5~2.5BV·h-1,收集洗脱液,然后在85℃下蒸馏,除去乙酸乙酯和冰醋酸,再减压浓缩,得到浸膏G5;
(5)取步骤(4)得到的浸膏G5,干燥,粉碎成细粉,加入25~35倍量重量的白凡士林、5~15倍量重量的羊毛脂,55~65℃水浴下,搅拌混匀,冷却,即得软膏。
2.根据权利要求1所述的药物,该药物是由以下重量份的药味原料制成:生地黄4重量份,牡丹皮3重量份,金银花3重量份、连翘3重量份、黄芩3重量份,其特征在于,该药物采用如下方法制备:
(1)取处方量的生地黄、牡丹皮、金银花、连翘、黄芩,加10倍量的仿生提取溶媒,37℃恒温下,搅拌提取3h,收集提取液T1和药渣Z1;提取液T1在3300r·min-1的离心速度下,离心40min,分别收集上清液Q1和沉淀D1;取上清液Q1,减压浓缩,得到浸膏G1,备用;药渣Z1和沉淀D1,均保留备用;上述仿生提取溶媒是由0.1%氯化钠、0.1%胃蛋白酶、0.3%胰蛋白酶及0.02mol·L-1盐酸配制成的溶液;
(2)取步骤(1)得到的药渣Z1,加入10倍量的75%的乙醇溶液,加入盐酸调整pH值为2,在微波功率800W,提取温度75℃的条件下,进行微波提取,得到提取液T2;取提取液T2,滤过,收集滤液,减压浓缩,得到浸膏G2;上述微波提取后的药渣弃去;
(3)取步骤(1)得到的沉淀D1,加8倍量乙酸乙酯,在85℃下进行水浴回流提取2次,每次提取40min,合并提取液,得到提取液T3;取提取液T3,减压回收乙酸乙酯,得到浸膏G3;上述乙酸乙酯提取后的药渣弃去;
(4)取步骤(1)得到的浸膏G1、步骤(2)得到的浸膏G2、步骤(3)得到的浸膏G3,将3种浸膏混合,充分搅拌均匀,得混合浸膏G4,将混合浸膏G4上柱层析进行分离,选用XDA-1B型大孔吸附树脂,柱径高比为1:5,上样体积6BV,用pH 11的氨水溶液8BV进行洗脱,弃去洗脱液,再用95%的乙醇溶液10BV进行洗脱,弃去洗脱液,再用体积比为8:2的乙酸乙酯-5%冰醋酸溶液10BV进行洗脱,流速为2BV·h-1,收集洗脱液,然后在85℃下蒸馏,除去乙酸乙酯和冰醋酸,再减压浓缩,得到浸膏G5;
(5)取步骤(4)得到的浸膏G5,干燥,粉碎成细粉,加入30倍量重量的白凡士林、10倍量重量的羊毛脂,60℃水浴下,搅拌混匀,冷却,即得软膏。
3.一种治疗寻常性银屑病的药物的检测方法,该药物是由以下重量份的药味原料制成:生地黄4重量份,牡丹皮3重量份,金银花3重量份、连翘3重量份、黄芩3重量份,该药物采用如下方法制备:
(1)取处方量的生地黄、牡丹皮、金银花、连翘、黄芩,加10倍量的仿生提取溶媒,37℃恒温下,搅拌提取3h,收集提取液T1和药渣Z1;提取液T1在3300r·min-1的离心速度下,离心40min,分别收集上清液Q1和沉淀D1;取上清液Q1,减压浓缩,得到浸膏G1,备用;药渣Z1和沉淀D1,均保留备用;上述仿生提取溶媒是由0.1%氯化钠、0.1%胃蛋白酶、0.3%胰蛋白酶及0.02mol·L-1盐酸配制成的溶液;
(2)取步骤(1)得到的药渣Z1,加入10倍量的75%的乙醇溶液,加入盐酸调整pH值为2,在微波功率800W,提取温度75℃的条件下,进行微波提取,得到提取液T2;取提取液T2,滤过,收集滤液,减压浓缩,得到浸膏G2;上述微波提取后的药渣弃去;
(3)取步骤(1)得到的沉淀D1,加8倍量乙酸乙酯,在85℃下进行水浴回流提取2次,每次提取40min,合并提取液,得到提取液T3;取提取液T3,减压回收乙酸乙酯,得到浸膏G3;上述乙酸乙酯提取后的药渣弃去;
(4)取步骤(1)得到的浸膏G1、步骤(2)得到的浸膏G2、步骤(3)得到的浸膏G3,将3种浸膏混合,充分搅拌均匀,得混合浸膏G4,将混合浸膏G4上柱层析进行分离,选用XDA-1B型大孔吸附树脂,柱径高比为1:5,上样体积6BV,用pH 11的氨水溶液8BV进行洗脱,弃去洗脱液,再用95%的乙醇溶液10BV进行洗脱,弃去洗脱液,再用体积比为8:2的乙酸乙酯-5%冰醋酸溶液10BV进行洗脱,流速为2BV·h-1,收集洗脱液,然后在85℃下蒸馏,除去乙酸乙酯和冰醋酸,再减压浓缩,得到浸膏G5;
(5)取步骤(4)得到的浸膏G5,干燥,粉碎成细粉,加入30倍量重量的白凡士林、10倍量重量的羊毛脂,60℃水浴下,搅拌混匀,冷却,即得软膏;
其特征在于,采用高效液相色谱法同时测定3-甲氧基-4-羟基桂皮醛、齐墩果酸、苯甲酰芍药苷含量,测定方法如下:
(1)色谱条件:色谱柱为ODS-3柱,流动相:乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液,梯度洗脱:梯度洗脱:从0min至5min,乙腈的比例从0%线性上升至10%,0.1%三氟乙酸水溶液的比例从100%线性下降至90%;从6min至15min,乙腈的比例从10%线性上升至40%,0.1%三氟乙酸水溶液的比例从90%线性下降至60%;从16min至35min,乙腈的比例从40%线性上升至50%,0.1%三氟乙酸水溶液的比例从60%线性下降至50%;体积流量:1.0~2.0mL·min-1,检测波长:260~270nm,柱温:35~45℃,进样量:5~20μL;3-甲氧基-4-羟基桂皮醛、齐墩果酸和苯甲酰芍药苷的理论板数均不低于5000;
(2)混合对照品溶液制备:精密称取3-甲氧基-4-羟基桂皮醛对照品、齐墩果酸对照品、苯甲酰芍药苷对照品,混合,加体积比为80:20的乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液制成每1mL含3-甲氧基-4-羟基桂皮醛1.00~3.00mg、齐墩果酸2.00~4.00mg、苯甲酰芍药苷0.50~2.00mg的混合对照品溶液;
(3)供试品溶液制备:取本品0.3~0.8g,精密称定,置于具塞锥形瓶中,加0.15moL·L-1磷酸二氢钠水溶液3~8mL,精密加入1%冰醋酸溶液10~20mL,密塞,称定质量,超声处理25~35min,超声功率200~240W,超声频率50~70kHz,放冷,在2500~3500r·min-1的离心速度下,离心20~30min,取离心后的上清液,减压回收至干,残渣加体积比为80:20的乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液溶解并转移至10mL量瓶中,摇匀,即得供试品溶液;
(4)测定:吸取混合对照品溶液、供试品溶液各5~20μL,注入高效液相色谱仪,进行测定。
4.根据权利要求3所述的药物的检测方法,该药物是由以下重量份的药味原料制成:生地黄4重量份,牡丹皮3重量份,金银花3重量份、连翘3重量份、黄芩3重量份,该药物采用如下方法制备:
(1)取处方量的生地黄、牡丹皮、金银花、连翘、黄芩,加10倍量的仿生提取溶媒,37℃恒温下,搅拌提取3h,收集提取液T1和药渣Z1;提取液T1在3300r·min-1的离心速度下,离心40min,分别收集上清液Q1和沉淀D1;取上清液Q1,减压浓缩,得到浸膏G1,备用;药渣Z1和沉淀D1,均保留备用;上述仿生提取溶媒是由0.1%氯化钠、0.1%胃蛋白酶、0.3%胰蛋白酶及0.02mol·L-1盐酸配制成的溶液;
(2)取步骤(1)得到的药渣Z1,加入10倍量的75%的乙醇溶液,加入盐酸调整pH值为2,在微波功率800W,提取温度75℃的条件下,进行微波提取,得到提取液T2;取提取液T2,滤过,收集滤液,减压浓缩,得到浸膏G2;上述微波提取后的药渣弃去;
(3)取步骤(1)得到的沉淀D1,加8倍量乙酸乙酯,在85℃下进行水浴回流提取2次,每次提取40min,合并提取液,得到提取液T3;取提取液T3,减压回收乙酸乙酯,得到浸膏G3;上述乙酸乙酯提取后的药渣弃去;
(4)取步骤(1)得到的浸膏G1、步骤(2)得到的浸膏G2、步骤(3)得到的浸膏G3,将3种浸膏混合,充分搅拌均匀,得混合浸膏G4,将混合浸膏G4上柱层析进行分离,选用XDA-1B型大孔吸附树脂,柱径高比为1:5,上样体积6BV,用pH 11的氨水溶液8BV进行洗脱,弃去洗脱液,再用95%的乙醇溶液10BV进行洗脱,弃去洗脱液,再用体积比为8:2的乙酸乙酯-5%冰醋酸溶液10BV进行洗脱,流速为2BV·h-1,收集洗脱液,然后在85℃下蒸馏,除去乙酸乙酯和冰醋酸,再减压浓缩,得到浸膏G5;
(5)取步骤(4)得到的浸膏G5,干燥,粉碎成细粉,加入30倍量重量的白凡士林、10倍量重量的羊毛脂,60℃水浴下,搅拌混匀,冷却,即得软膏;
其特征在于,采用高效液相色谱法同时测定3-甲氧基-4-羟基桂皮醛、齐墩果酸、苯甲酰芍药苷含量,测定方法如下:
(1)色谱条件:色谱柱为ODS-3柱,规格:5μm,0.46cm×15cm,流动相:乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液,梯度洗脱:梯度洗脱:从0min至5min,乙腈的比例从0%线性上升至10%,0.1%三氟乙酸水溶液的比例从100%线性下降至90%;从6min至15min,乙腈的比例从10%线性上升至40%,0.1%三氟乙酸水溶液的比例从90%线性下降至60%;从16min至35min,乙腈的比例从40%线性上升至50%,0.1%三氟乙酸水溶液的比例从60%线性下降至50%;体积流量:1.5mL·min-1,检测波长:266nm,柱温:40℃,进样量:10μL;3-甲氧基-4-羟基桂皮醛、齐墩果酸和苯甲酰芍药苷的理论板数均不低于5000;
(2)混合对照品溶液制备:精密称取3-甲氧基-4-羟基桂皮醛对照品、齐墩果酸对照品、苯甲酰芍药苷对照品,混合,加体积比为80:20的乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液制成每1mL含3-甲氧基-4-羟基桂皮醛2.00mg、齐墩果酸3.00mg、苯甲酰芍药苷1.00mg的混合对照品溶液;
(3)供试品溶液制备:取本品0.5g,精密称定,置于具塞锥形瓶中,加0.15moL·L-1磷酸二氢钠水溶液5mL,精密加入1%冰醋酸溶液15mL,密塞,称定质量,超声处理30min,超声功率220W,超声频率60kHz,放冷,在3000r·min-1的离心速度下,离心25min,取离心后的上清液,减压回收至干,残渣加体积比为80:20的乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液溶解并转移至10mL量瓶中,摇匀,即得供试品溶液;
(4)测定:吸取混合对照品溶液、供试品溶液各10μL,注入高效液相色谱仪,进行测定。
5.一种药物软膏在制备治疗寻常性银屑病药物中的制药用途,其特征在于,该药物是由以下重量份的药味原料制成:生地黄4重量份,牡丹皮3重量份,金银花3重量份、连翘3重量份、黄芩3重量份,该药物采用如下方法制备:
(1)取处方量的生地黄、牡丹皮、金银花、连翘、黄芩,加10倍量的仿生提取溶媒,37℃恒温下,搅拌提取3h,收集提取液T1和药渣Z1;提取液T1在3300r·min-1的离心速度下,离心40min,分别收集上清液Q1和沉淀D1;取上清液Q1,减压浓缩,得到浸膏G1,备用;药渣Z1和沉淀D1,均保留备用;上述仿生提取溶媒是由0.1%氯化钠、0.1%胃蛋白酶、0.3%胰蛋白酶及0.02mol·L-1盐酸配制成的溶液;
(2)取步骤(1)得到的药渣Z1,加入10倍量的75%的乙醇溶液,加入盐酸调整pH值为2,在微波功率800W,提取温度75℃的条件下,进行微波提取,得到提取液T2;取提取液T2,滤过,收集滤液,减压浓缩,得到浸膏G2;上述微波提取后的药渣弃去;
(3)取步骤(1)得到的沉淀D1,加8倍量乙酸乙酯,在85℃下进行水浴回流提取2次,每次提取40min,合并提取液,得到提取液T3;取提取液T3,减压回收乙酸乙酯,得到浸膏G3;上述乙酸乙酯提取后的药渣弃去;
(4)取步骤(1)得到的浸膏G1、步骤(2)得到的浸膏G2、步骤(3)得到的浸膏G3,将3种浸膏混合,充分搅拌均匀,得混合浸膏G4,将混合浸膏G4上柱层析进行分离,选用XDA-1B型大孔吸附树脂,柱径高比为1:5,上样体积6BV,用pH 11的氨水溶液8BV进行洗脱,弃去洗脱液,再用95%的乙醇溶液10BV进行洗脱,弃去洗脱液,再用体积比为8:2的乙酸乙酯-5%冰醋酸溶液10BV进行洗脱,流速为2BV·h-1,收集洗脱液,然后在85℃下蒸馏,除去乙酸乙酯和冰醋酸,再减压浓缩,得到浸膏G5;
(5)取步骤(4)得到的浸膏G5,干燥,粉碎成细粉,加入30倍量重量的白凡士林、10倍量重量的羊毛脂,60℃水浴下,搅拌混匀,冷却,即得软膏;
采用高效液相色谱法同时测定3-甲氧基-4-羟基桂皮醛、齐墩果酸、苯甲酰芍药苷含量,测定方法如下:
(1)色谱条件:色谱柱为ODS-3柱,规格:5μm,0.46cm×15cm,流动相:乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液,梯度洗脱:梯度洗脱:从0min至5min,乙腈的比例从0%线性上升至10%,0.1%三氟乙酸水溶液的比例从100%线性下降至90%;从6min至15min,乙腈的比例从10%线性上升至40%,0.1%三氟乙酸水溶液的比例从90%线性下降至60%;从16min至35min,乙腈的比例从40%线性上升至50%,0.1%三氟乙酸水溶液的比例从60%线性下降至50%;体积流量:1.5mL·min-1,检测波长:266nm,柱温:40℃,进样量:10μL;3-甲氧基-4-羟基桂皮醛、齐墩果酸和苯甲酰芍药苷的理论板数均不低于5000;
(2)混合对照品溶液制备:精密称取3-甲氧基-4-羟基桂皮醛对照品、齐墩果酸对照品、苯甲酰芍药苷对照品,混合,加体积比为80:20的乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液制成每1mL含3-甲氧基-4-羟基桂皮醛2.00mg、齐墩果酸3.00mg、苯甲酰芍药苷1.00mg的混合对照品溶液;
(3)供试品溶液制备:取本品0.5g,精密称定,置于具塞锥形瓶中,加0.15moL·L-1磷酸二氢钠水溶液5mL,精密加入1%冰醋酸溶液15mL,密塞,称定质量,超声处理30min,超声功率220W,超声频率60kHz,放冷,在3000r·min-1的离心速度下,离心25min,取离心后的上清液,减压回收至干,残渣加体积比为80:20的乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液溶解并转移至10mL量瓶中,摇匀,即得供试品溶液;
(4)测定:吸取混合对照品溶液、供试品溶液各10μL,注入高效液相色谱仪,进行测定。
6.一种药物软膏在制备治疗神经性皮炎药物中的制药用途,其特征在于,该药物是由以下重量份的药味原料制成:生地黄4重量份,牡丹皮3重量份,金银花3重量份、连翘3重量份、黄芩3重量份,该药物采用如下方法制备:
(1)取处方量的生地黄、牡丹皮、金银花、连翘、黄芩,加10倍量的仿生提取溶媒,37℃恒温下,搅拌提取3h,收集提取液T1和药渣Z1;提取液T1在3300r·min-1的离心速度下,离心40min,分别收集上清液Q1和沉淀D1;取上清液Q1,减压浓缩,得到浸膏G1,备用;药渣Z1和沉淀D1,均保留备用;上述仿生提取溶媒是由0.1%氯化钠、0.1%胃蛋白酶、0.3%胰蛋白酶及0.02mol·L-1盐酸配制成的溶液;
(2)取步骤(1)得到的药渣Z1,加入10倍量的75%的乙醇溶液,加入盐酸调整pH值为2,在微波功率800W,提取温度75℃的条件下,进行微波提取,得到提取液T2;取提取液T2,滤过,收集滤液,减压浓缩,得到浸膏G2;上述微波提取后的药渣弃去;
(3)取步骤(1)得到的沉淀D1,加8倍量乙酸乙酯,在85℃下进行水浴回流提取2次,每次提取40min,合并提取液,得到提取液T3;取提取液T3,减压回收乙酸乙酯,得到浸膏G3;上述乙酸乙酯提取后的药渣弃去;
(4)取步骤(1)得到的浸膏G1、步骤(2)得到的浸膏G2、步骤(3)得到的浸膏G3,将3种浸膏混合,充分搅拌均匀,得混合浸膏G4,将混合浸膏G4上柱层析进行分离,选用XDA-1B型大孔吸附树脂,柱径高比为1:5,上样体积6BV,用pH 11的氨水溶液8BV进行洗脱,弃去洗脱液,再用95%的乙醇溶液10BV进行洗脱,弃去洗脱液,再用体积比为8:2的乙酸乙酯-5%冰醋酸溶液10BV进行洗脱,流速为2BV·h-1,收集洗脱液,然后在85℃下蒸馏,除去乙酸乙酯和冰醋酸,再减压浓缩,得到浸膏G5;
(5)取步骤(4)得到的浸膏G5,干燥,粉碎成细粉,加入30倍量重量的白凡士林、10倍量重量的羊毛脂,60℃水浴下,搅拌混匀,冷却,即得软膏;
采用高效液相色谱法同时测定3-甲氧基-4-羟基桂皮醛、齐墩果酸、苯甲酰芍药苷含量,测定方法如下:
(1)色谱条件:色谱柱为ODS-3柱,规格:5μm,0.46cm×15cm,流动相:乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液,梯度洗脱:梯度洗脱:从0min至5min,乙腈的比例从0%线性上升至10%,0.1%三氟乙酸水溶液的比例从100%线性下降至90%;从6min至15min,乙腈的比例从10%线性上升至40%,0.1%三氟乙酸水溶液的比例从90%线性下降至60%;从16min至35min,乙腈的比例从40%线性上升至50%,0.1%三氟乙酸水溶液的比例从60%线性下降至50%;体积流量:1.5mL·min-1,检测波长:266nm,柱温:40℃,进样量:10μL;3-甲氧基-4-羟基桂皮醛、齐墩果酸和苯甲酰芍药苷的理论板数均不低于5000;
(2)混合对照品溶液制备:精密称取3-甲氧基-4-羟基桂皮醛对照品、齐墩果酸对照品、苯甲酰芍药苷对照品,混合,加体积比为80:20的乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液制成每1mL含3-甲氧基-4-羟基桂皮醛2.00mg、齐墩果酸3.00mg、苯甲酰芍药苷1.00mg的混合对照品溶液;
(3)供试品溶液制备:取本品0.5g,精密称定,置于具塞锥形瓶中,加0.15moL·L-1磷酸二氢钠水溶液5mL,精密加入1%冰醋酸溶液15mL,密塞,称定质量,超声处理30min,超声功率220W,超声频率60kHz,放冷,在3000r·min-1的离心速度下,离心25min,取离心后的上清液,减压回收至干,残渣加体积比为80:20的乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液溶解并转移至10mL量瓶中,摇匀,即得供试品溶液;
(4)测定:吸取混合对照品溶液、供试品溶液各10μL,注入高效液相色谱仪,进行测定。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201810019853.8A CN108143825B (zh) | 2018-01-09 | 2018-01-09 | 一种治疗银屑病的药物及其制备方法与检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201810019853.8A CN108143825B (zh) | 2018-01-09 | 2018-01-09 | 一种治疗银屑病的药物及其制备方法与检测方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN108143825A CN108143825A (zh) | 2018-06-12 |
CN108143825B true CN108143825B (zh) | 2020-07-28 |
Family
ID=62460997
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201810019853.8A Active CN108143825B (zh) | 2018-01-09 | 2018-01-09 | 一种治疗银屑病的药物及其制备方法与检测方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN108143825B (zh) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110840934A (zh) * | 2018-07-25 | 2020-02-28 | 上海凯宝药业股份有限公司 | 痰热清的药物新用途 |
CN109907145A (zh) * | 2019-04-24 | 2019-06-21 | 湖南省定生保健品经营有限公司 | 茶疗饮品的制备方法和应用 |
CN113750140A (zh) * | 2021-04-14 | 2021-12-07 | 宁波职业技术学院 | 白芍总苷在制备治疗类风湿关节炎药物中的应用 |
-
2018
- 2018-01-09 CN CN201810019853.8A patent/CN108143825B/zh active Active
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
曾祖平等.芩柏软膏与凝胶的含量测定.《北京中医》.2007,第26卷(第11期),734-736. * |
芩柏软膏与凝胶的含量测定;曾祖平等;《北京中医》;20071130;第26卷(第11期);734-736 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN108143825A (zh) | 2018-06-12 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US6569468B2 (en) | Cinnamomi and poria composition, method to prepare same and uses thereof | |
CN108143825B (zh) | 一种治疗银屑病的药物及其制备方法与检测方法 | |
CN103705754B (zh) | 一种治疗系统性红斑狼疮的中药组合物 | |
WO2021253742A1 (zh) | 无比山药丸在制备治疗早发性卵巢功能不全药物中的应用 | |
CN103463156B (zh) | 一种黑骨藤提取物及其制备方法和用途 | |
CN103412059A (zh) | 一种妇炎康分散片质量控制方法 | |
Zhang et al. | The antihyperuricemia activity of Astragali Radix through regulating the expression of uric acid transporters via PI3K/Akt signalling pathway | |
CN102579519A (zh) | 翼首草总苷提取物及其制备方法和用途 | |
CN101926815A (zh) | 一种芍药苷和甘草次酸组合物及其制备方法与应用 | |
CN101829291B (zh) | 一种治疗风湿病的中药制剂及其制备方法 | |
CN111317791A (zh) | 一种清热通淋片及其制备方法 | |
Du et al. | Data mining-guided alleviation of hyperuricemia by Paeonia veitchii Lynch through inhibition of xanthine oxidase and regulation of renal urate transporters | |
CN101028348A (zh) | 一种中药胶囊及其制备方法和质量控制方法 | |
CN107308317B (zh) | 一种防治辐射损伤的中药组合物 | |
CN105477361B (zh) | 一种治疗胃炎的中药组合物制备方法及制剂 | |
Du et al. | Effects of Zingiber officinalis (WILLD.) ROSC. Membranes on minor recurrent aphthous stomatitis: a randomized pragmatic trial | |
CN102697932A (zh) | 治疗皮肤瘙痒的药物组合物及质量检测方法 | |
CN108309999B (zh) | 一种防治动脉粥样硬化的药物组合物 | |
CN104547514A (zh) | 治疗系统性红斑狼疮合并血管炎的中药组合物及其用途 | |
CN104096130A (zh) | 一种治疗类风湿关节炎的中药组合物 | |
CN104138448B (zh) | 一种组合物在制备治疗汽车尾气造成肺损伤药物中的应用 | |
CN108403793B (zh) | 一种治疗原发性痛经的药物及其制法 | |
CN102028839B (zh) | 一种妇科调经用中药制剂湿消丸的检测方法 | |
CN102727850B (zh) | 一种治疗艾滋病的药物组合物及其制备方法、质量控制方法和用途 | |
CN101926884A (zh) | 一种牙痛清火药物的质量控制方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |