CN101926815A - 一种芍药苷和甘草次酸组合物及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种芍药苷和甘草次酸组合物及其制备方法与应用,其组成包括芍药苷和甘草次酸,其重量份比为芍药苷∶甘草次酸=1∶0.25~10。本发明可以制备成药剂学上的各种剂型,如片剂、胶囊剂、丸剂等,并且可以与其他活性成分组成多组分的药物组合物,提供便于服用、疗效确切的药物。对治疗类风湿关节炎和湿诊有很好的效果。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域,具体涉及由芍药苷和甘草次酸组成的组合物、该组合物的制备方法及其在治疗类风湿关节炎和湿疹方面的应用。
背景技术
类风湿关节炎(rheuma toid arthritis,RA)是严重危害人类健康并影响劳动力的慢性全身性、多发性、常见性、致残率很高的自身免疫性疾病。是一种以关节滑膜炎症为主要病理表现的慢性自身免疫性关节疾病。其病因和发病机制极为复杂,目前,尚无确切有效的治疗药物。湿疹的病因及发病机制相当复杂,涉及体内、外多种因素,是发生在皮肤的迟发性超敏反应(delayed type hypersensitivity,DTH),牵涉到体内的免疫失衡。现在主要是用H1受体拮抗剂、糖皮质激素生物制剂、中药、抗菌药等进行局部或全身药物治疗。
芍药苷是从中药芍药中提取的有效成分。对芍药苷的药理研究表明:具有免疫调节作用,对风湿性关节炎有确切的疗效,能够改善风湿性关节炎患者的病情,减轻患者的症状和体征,并能调节患者的免疫功能;对二硝基氯苯(DNCB)诱导的慢性湿疹模型有治疗作用。其治疗慢性湿疹的作用机制可能与调节辅助性T细胞Th1和Th2之间的平衡、纠正免疫紊乱有关。
甘草次酸为甘草中提取的有效成分,近年来的药理研究发现,甘草次酸具有广泛的生物活性和药理作用,如抗炎、抗氧化、降血脂、抗病毒等作用。
芍药和甘草配伍用药历史悠久,为张仲景《伤寒论.辩太阳病脉证并治上》中经典古方芍药甘草汤,并经过长期临床实践证明,芍药甘草汤具有缓急止痛、对多种疼痛具有治疗作用,但同时也存在药效物质基础不明确、作用机理难以确定等缺点,中药化学成分是发挥药效作用的物质基础,也是对中药进一步深入研究的前提。基于对芍药苷这一有效成分对类风湿关节炎具有治疗作用这一研究成果,在古方的基础上,将芍药和甘草中确定的主要有效成分芍药苷和甘草次酸单独组方,既保持了复方作用的特点,又能达到质量可控的目的,开发出芍药苷和甘草次酸组成的组合物。
发明内容
本发明的目的是提供一种从芍药中提取得到的有效成分芍药苷和甘草中提取得到的有效成分甘草次酸的组合物及其制备方法。
本发明的目的是提供芍药苷和甘草次酸组成的组合物在治疗类风湿关节炎疾病中的应用。
本发明的目的是提供芍药苷和甘草次酸组成的组合物在治疗湿疹疾病中的应用。
上述目的通过以下的技术方案实现:一种药物组合物,其组成包括芍药苷和甘草次酸,其重量份比为芍药苷∶甘草次酸=1∶0.25~10。所述甘草次酸可以由甘草次酸盐或甘草次酸衍生物代替。
芍药苷制备方法为:将芍药粉碎,40-90%乙醇回流提取,提取三次,合并提取液,浓缩液为生药量35%-45%时,在浓缩液中加入饱和NaHCO3溶液将PH值调至5.9-6.1。上述药液中加入乙酸乙酯萃取2次,合并萃取液,萃取液中加入正丁醇∶乙酸乙酯混合液(30∶70V/V)进行萃取,合并正丁醇乙酸乙酯萃取液。将萃取液浓缩、干燥、粉碎、混合,得芍药有效部位提取物,再将有效部位经大孔树脂富集,用水及20-95%乙醇洗脱,洗脱液减压浓缩,得到芍药苷,含量为90%以上。甘草次酸是由甘草酸水解、重结晶制成,其分子式为C30H46O4,甘草次酸的纯度为90%以上。
上述芍药苷和甘草次酸组合物的制备方法是:芍药苷干粉、甘草次酸粉末和药用辅料制备成口服制剂和注射剂或输液,口服制剂可以是片剂(包括普通片、分散片、缓释片、控释片、口腔崩解片、含片)、丸剂、粉末混合物、颗粒剂、胶囊剂、包衣剂、溶液、乳剂、分散剂,也可以用注射剂、栓剂或其它适宜的形式。这些制剂按照本领域的技术人员熟知的方法制备。如制造片剂、胶囊剂、包衣剂所用的辅料是常规的辅料,例如淀粉,明胶,阿拉伯胶,聚乙二醇,液体剂型所用的溶剂例如水,乙醇,丙二醇,植物油类如玉米油,花生油,橄榄油等。含有本发明芍药苷和甘草次酸组合物制剂中还可有其他的辅料,例如表面活性剂,润滑剂,崩解剂,防腐剂,矫味剂,色素等,制备这些可能的制剂也属于本发明的应用。
这个技术方案有以下有益效果:
1、本发明,芍药苷和甘草次酸组合物可以制备成药剂学上的各种剂型,如片剂、胶囊剂、丸剂等,并且可以与其他活性成分组成多组分的药物组合物,提供便于服用、疗效确切的药物。
2、本发明,芍药苷与甘草次酸组成的组合物,在类风湿关节炎方面,取得了良好的效果。
3、本发明,芍药苷与甘草次酸组成的组合物,对湿疹这一疾病具有很好的治疗作用。
具体实施方式:
实施例1:
一种芍药苷和甘草次酸的组合物,其组成包括:90%的芍药苷和90%的甘草次酸,所述芍药苷与甘草次酸重量比为1∶1,其制备工艺如下:取芍药苷100g甘草次酸100g,粉碎后过100目筛,混匀,得芍药苷和甘草次酸组合物。
实施例2:
取实施例1制备的芍药苷和甘草次酸组合物,加入微晶纤维素20g,加入适当的淀粉调至500g,加入硬脂酸镁,混合均匀,粉末直接压成1000片,,制成片剂。
实施例3:
取实施例1制备的芍药苷和甘草次酸组合物,加适量淀粉至300g,混合均匀,装入0号胶囊,制成1000粒胶囊剂。
实施例4:
取实施例1制备的芍药苷和甘草次酸组合物400g,加入适量糖粉,混合均匀,以乙醇为粘合剂,过40目筛,60℃烘干,整粒后进行分装、制成颗粒剂。
实施例5:
取实施例1制备的芍药苷和甘草次酸组合物,加注射用水约6000ml,用5%NaOH溶液调PH7.3-7.5。加注射用水至1000ml,用3号垂熔漏斗过滤。灌封于安瓿中,灭菌,制成注射剂。
实施例6:
一种芍药苷和甘草次酸的组合物,其组成包括:90%芍药苷和98%的甘草次酸,所述芍药苷与甘草次酸重量比为2∶1,其制备工艺如下:取芍药苷100g甘草次酸50g,粉碎后过100目筛,混匀,得芍药苷和甘草次酸组合物。
实施例7:
取实施例6制备的芍药苷和甘草次酸组合物,加入微晶纤维素20g,加入适当的淀粉调至500g,加入硬脂酸镁,混合均匀,粉末直接压成1000片,,制成片剂。
实施例8:
取实施例6制备的芍药苷和甘草次酸组合物150g,加入可溶性淀粉850g,蔗糖1000g,混合均匀,制成颗粒过24目标准筛整粒,每袋装1g,即得。
本发明对大鼠佐剂性关节炎的治疗作用的实验。
建立大鼠佐剂性关节炎模型,计数法测定多发性关节炎指数,称重法测定体重、胸腺指数、脾脏指数,用足容积仪测定继发侧关节肿胀度,ELISA法检测巨噬细胞分泌IL-1水平,3H-TdR掺入法测定T、B淋巴细胞增殖反应,HE染色法光镜观察关节病理形态学变化等。
1、对AA大鼠关节炎指数的影响:
将同一批号的卡介苗(bacillus calmette guerin,BCG)80℃灭活1h,以高压灭菌的液体石蜡配制成10g·L-1的乳剂,充分碾磨混匀即得弗氏完全佐剂(Freund’s completeadjuvant,FCA),于大鼠左后足趾皮内注射FCA 0.1ml致炎。
致炎后d16、d20、d24采用关节分数评分法记录各组大鼠多发性关节炎病变的发生及严重程度。每只足爪按下列标准评分:0=正常;1=踝关节红斑和轻微肿胀;2=踝关节到跖关节或掌关节红斑和轻微肿胀;3=踝关节到跖趾关节或掌关节红斑和中度肿胀;4=踝关节到趾关节红斑和重度肿胀。最大评分为12分。
大鼠造模后,致炎侧足爪关节肿胀明显,造模后d 16左右致炎侧以外的其他足爪关节开始肿胀,与模型组相比,d24药物均能明显降低AA大鼠的关节炎指数评分。
表1本发明芍药苷和甘草次酸组合物对大鼠佐剂性关节炎关关节指数的影响
2、对AA大鼠足肿胀的影响
分别在致炎前和致炎后的d0、d16、d20、d24用足趾容积测量仪测量非致炎侧足爪容积,以大鼠足爪的增长率(d16-d0)/d0、(d20-d0)/d0、(d24-d0)/d0作为肿胀指标。
大鼠造模后致炎侧以外的其他足爪出现肿胀,d24与模型组相比芍药苷和甘草次酸组合物能不同程度的降低大鼠足爪肿胀。
表2本发明芍药苷和甘草次酸组合物对大鼠佐剂性关节炎足爪肿胀度的影响
3、对胸腺指数和脾脏指数的影响
致炎后d28称重后脱颈处死大鼠,剥离胸腺和脾脏,分别称重,用胸腺和脾脏的重量与大鼠的体重相比,得到胸腺和脾脏指数。
大鼠造模后脾脏指数升高,芍药苷和甘草次酸组合物能不同程度的降低脾脏指数,大鼠造模后胸腺指数降低,芍药苷和甘草次酸组合物药物对胸腺指数无明显影响。
表3本发明芍药苷和甘草次酸组合物对大鼠佐剂性关节炎大鼠脾脏指数和胸腺指数的影响
4、ConA和LPS诱导的T和B淋巴细胞增殖反应的影响
无菌取脾脏、胸腺,制备淋巴细胞悬液(1×107/ml),在96孔培养板上,每孔加入100μl细胞悬液(终浓度为5×106/ml)及LPS(终浓度4mg/L)或ConA(终浓度3mg/L),终容积为200μl,各设3个复孔,置37oC、5%CO2培养箱培养42h,诱导T、B淋巴细胞增殖。终止培养前6h,每孔加入25μCi 3H-TdR,培养结束后将细胞抽滤于玻璃纤维滤纸上,干燥后用液体闪烁计数仪检测,结果以3个复孔cpm的均值表示。
与正常组相比,AA大鼠T细胞增殖水平升高,芍药苷和甘草次酸组合物药物可以不同程度的降低T细胞的增殖水平,与正常组相比,AA大鼠B细胞增殖水平升高,芍药苷和甘草次酸组合物药物可不同程度的降低B细胞的增殖水平。
5、IL-1的诱生与检测
制备大鼠腹腔巨噬细胞悬液(1×107/ml),加入24孔培养板,每孔1ml,置37oC、5%CO2培养箱培养2h,弃取上清液,用D-Hank`s液洗3遍,除去非粘附细胞,获单层细胞,然后各加入500μl DMEM和LPS(终浓度4mg/L),置37oC、5%CO2培养箱培养48h,诱导产生IL-1,收取上清,-20oC保存,ELISA法检测IL-1含量。
与正常组相比,AA大鼠腹腔巨噬细胞在LPS的刺激下分泌IL-1的水平升高,芍药苷和甘草次酸组合物可不同程度的降低巨噬细胞在LPS的刺激下分泌IL-1的水平。
6、芍药苷和甘草次酸组合物对大鼠AA关节病理变化的作用
大鼠踝关节以10%甲醛液固定,脱钙,脱水,石蜡包埋,切片,HE染色后在光学显微镜下观察踝关节的病理形态。
与正常大鼠相比,光镜下可见AA模型组大鼠的滑膜组织中滑膜细胞增生明显,层次增多,排列紊乱,滑膜下层纤维组织增生,炎性细胞浸润及血管翳形成,软骨中炎性细胞浸润,软骨组织破坏。各用药组均可不同程度改善以上病理变化,主要表现为滑膜细胞层未见明显增多,少量炎性细胞浸润。
与模型组比较,芍药苷和甘草次酸组合物各剂量组均明显改善滑膜下层炎性细胞浸润和滑膜血管充血。
通过上述研究实验综合表明,芍药苷和甘草次酸组合物对类风湿关节炎具有治疗作用,芍药苷和甘草次酸组合物具有降低关节炎指数、降低升高的脾脏指数、下调升高的T、B细胞增殖反应、抑制巨噬细胞分泌IL-1等作用。病理图片显示,芍药苷和甘草次酸组合物可不同程度改善类风湿关节炎的病理变化,主要表现为滑膜细胞层未见明显增多,少量炎性细胞浸润。
本发明芍药苷和甘草次酸组合物对小鼠慢性湿疹影响实验。
实验方法: 小鼠慢性湿疹模型的制备:将昆明种小鼠于实验前1天于腹部去毛,面积约2cm×2cm,实验当天以7%二硝基氯苯丙酮溶液100μl涂于小鼠的腹部致敏,5天后在小鼠右耳内侧外涂1%二硝基氯苯丙酮溶液5μl激发,同时左耳涂予丙酮,每隔3天激发一次,共激发4次。
昆明种小鼠随机分为6组:正常对照组,模型组,芍药苷和甘草次酸组合物30,60和120mg.kg-1组和阳性药物对照组(Pre 5mg.kg-1)。各用药组于致敏当天给予灌胃给药,qd,正常对照组和模型组灌以等体积的0.5%羧甲基纤维素钠。末次激发后24小时处死小鼠,检测各项指标。
观察指标:
1.耳厚度差:于诱导前及每次激发后24小时用千分卡尺单盲法测量右耳中部厚度,计算激发前后右耳厚度差。
2.耳重量差:末次激发后24小时处死实验动物,用直径0.9cm的金属打孔器在耳中部打孔,用电子天平称得每个组织块重量,计算左右耳重量差,同时将右耳片制成石蜡块备用。
3.HE染色及观察:将石蜡块切为5um厚的切片,HE染色,在光镜下观察炎症细胞浸润情况。
4.血清IL-2和IL-4值检测:小鼠经眼球,豚鼠经股动脉取血1ml,1500r/min离心20分钟,取出血清置于微量离心管内,-80冰箱保存备用,采用放射免疫测定法测定血清IL-2和IL-4值,步骤按IL-2和IL-4试剂盒说明进行。
统计学处理测定结果以x±s表示,采用单因素方差分析和q检验进行组间差异。
结果:
芍药苷和甘草次酸组合物对小鼠慢性湿疹模型的影响1、芍药苷和甘草次酸组合物治疗给药对慢性湿疹小鼠耳肿胀度的影响:与正常组相比,模型组小鼠右耳明显肿胀,芍药苷和甘草次酸组合物(30、60和120mg.kg-1)和Pre(5mg.kg-1)能明显改善慢性湿疹小鼠右耳肿胀情况(表4)。
表4
**p<0.01vs正常对照组;#p<0.05,##p<0.01vs模型对照组
2、芍药苷和甘草次酸组合物对慢性湿疹小鼠左右耳重量差的影响:与正常组相比,模型组小鼠右耳明显肿胀,重量比左耳明显增加,芍药苷和甘草次酸组合物(120mg·kg-1)和Pre(5mg.kg-1)能改善右耳肿胀情况(表5)。
表5
**p<0.01vs正常对照组;#p<0.05vs模型对照组
3、芍药苷和甘草次酸组合物对慢性湿疹小鼠血清中IL-2和IL-4水平的影响:与正常组相比,模型组小鼠血清IL-2水平明显降低,IL-4水平明显升高,芍药苷和甘草次酸组合物(30、60和120mg·kg-1)和Pre(5mg·kg-1)能升高小鼠降低的IL-2水平,降低小鼠升高的IL-4水平(表6)。
表6
*p<0.05,**p<0.01v s正常对照组;#p<0.05,##p<0.01vs模型对照组。
4、芍药苷和甘草次酸组合物对慢性湿疹小鼠耳病理学改变的影响:与正常组相比,模型组小鼠耳片表皮角化过度、增厚,真皮以单核有细胞浸润为主,血管扩张.芍药苷和甘草次酸组合物(30、60和120mg·kg-1)和Pre(5mg·kg-1)能减轻炎症细胞的浸润,改善耳片病理改变。
5、芍药苷和甘草次酸组合物在治疗湿疹方面的药物试验。
实验方案:
采用开放、随机、对照临床试验方法,各单位观察合格病例40例。受试者按随机数字分配至以下两组中,治疗组:芍药苷和甘草次酸组合物+艾洛松(糠酸莫米松)+开瑞坦(氯雷他定);对照组:艾洛松(糠酸莫米松)+开瑞坦(氯雷他定)。进行为期12-24周的临床观察。在治疗4周后观察疗效指标,12-24周结束后观察病情复发指标。
计划入组400例,实际入组病例373例,脱落67例,最终完成合格试验病例306例。其中芍药苷和甘草次酸组合物组141例(46.08%),对照例165(53.92%)。
观察记录入组病例一般资料、治疗前后EASI评分与瘙痒评分、治愈时间及复发时间等,统一录入数据库进行分析。
所有统计均利用SPSS统计软件进行分析。所有的统计意义检验采用双侧检验,检验水准(α)定为0.05。根据数据的分布特征用参数统计方法或非参数统计方法检验治疗时间对各种指标的影响。分类病例治疗前后变化的比较采用配对卡方检验。入组病例基线情况为男167占54.58%,女139占45.42%.
实验结果:
表7.两组病例治疗前后总积分的比较
表8.两组病例治疗后复发次数的比较
表9两组病例治疗后复发间隔时间的比较
表10.两组病例治疗后综合疗效评估的分析
注:临床治愈(疗效指数90%~100%);显效(疗效指数60%~89%);有效(疗效指数20%~59%);无效(疗效指数<19%)
从病例入组上看,两组在一般资料上无显著差异。其中治疗组141例,对照组165例,男167例,女139例,年龄为18~70岁。
从治疗4周后的疗效指标上来看,治疗组与对照组在总有效率上来看,并没有显著性差异,但从治愈、显效、有效及无效的分级分析上来看,治疗组要优于对照组,并具有统计学差异。说明两组治疗方法对慢性湿都有效,但联合芍药苷和甘草次酸组合物可以提高慢性湿疹的治疗效果。
从抗复发指标上来看,治疗组复发间隔天数要长于对照,而且在观察期间内的平均复发次数也要少于对照组,两者均具有统计学差异。说明芍药苷和甘草次酸组合物有减少慢性湿疹反复发作的作用。
Claims (7)
1.一种芍药苷和甘草次酸组合物,其特征是由芍药苷和甘草次酸组成的药物组合物,其重量份比为芍药苷∶甘草次酸=1∶0.25~10。
2.根据权利要求1所述的组合物,其特征在于:甘草次酸为白色结晶粉末,其分子式为C30H46O4,组合物中所用甘草次酸的纯度为90%以上。
3.根据权利要求1所述的组合物,其特征在于:甘草次酸可以由甘草次酸盐或甘草次酸衍生物代替。
4.根据权利要求1所述的组合物,其特征是:芍药苷干粉、甘草次酸粉末和药用辅料制备成口服制剂和注射剂或输液,口服制剂可以是片剂、丸剂、粉末混合物、颗粒剂、胶囊剂、包衣剂、溶液、乳剂、分散剂。
5.一种制备权利要求1所述的组合物的方法,将芍药粉碎、40-90%乙醇回流提取,提取三次,合并提取液,浓缩液为生药量35%-45%时,在浓缩液中加入饱和NaHCO3溶液将PH值调至5.9-6.1,上述药液中加入乙酸乙酯萃取2次,合并萃取液,萃取液中加入正丁醇∶乙酸乙酯混合液(30∶70V/V)进行萃取,合并正丁醇乙酸乙酯萃取液,将萃取液浓缩、干燥、粉碎、混合,得芍药有效部位提取物,再将有效部位经大孔树脂富集,用水及20-95%乙醇洗脱,洗脱液减压浓缩,得到芍药苷,所述甘草次酸是由甘草酸水解、重结晶制成,将芍药苷干粉与甘草次酸粉末按重量份比为芍药苷∶甘草次酸=1∶0.25~10的比例混合均匀,即制得组合物。
6.一种芍药苷和甘草次酸组合物在治疗类风湿性关节炎中的应用。
7.一种芍药苷和甘草次酸组合物在治疗湿疹中的应用。
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