CN103330721A - 用于治疗女性卵巢早衰的海参花提取物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
用于治疗女性卵巢早衰的海参花提取物及其制备方法,涉及从海参花中提取有效物质的工艺技术领域。适量海参花组织,匀浆,加入1.5倍于体积的蒸馏水,于30℃超声波辅助提取25min,水浴搅拌提取2h,4000r/min离心5min,取上清液,残渣重复上述操作,合并滤液,减压浓缩至1/3体积,冷冻干燥,即为海参花提取物,可将海参花提取物制备成片剂和胶囊剂,用于治疗女性卵巢早衰。
Description
技术领域
本发明涉及从海参花中提取有效物质的工艺技术领域。
背景技术
卵巢早衰(POF)是指正常发育的妇女在40岁以前因某种原因引起卵巢功能衰竭,其表现为继发闭经、低雌激素和高促性腺激素状态,习惯称之为早绝经。40岁前卵巢早衰的发病率约为1%~3%,而30岁内的发病率为0.1%。卵巢功能早衰的特点是卵巢产生的雌激素水平很低。迄今为止尚不十分清楚其发病的真正原因,所以对该病的研究已成为国内外生殖发育界的热点和难点。
目前,卵巢早衰尚缺乏理想的治疗方法。西药治疗主要是补充雌激素,使用雌激素与孕激素,虽然可以改善症状,但对卵巢功能的恢复并不理想,停药后,症状重新出现。激素治疗仅仅能改善绝经期症状,但对恢复生育能力和改善性功能,效果不明显,而且长期大量补充外源性雌激素,易使子宫内膜癌发病率增加。
海参,属海参纲(Holothurioidea),不仅是珍贵的食品,也是名贵的药材。据《本草纲目拾遗》中记载:海参,味甘咸,补肾,益精髓,摄小便,其性温补,足敌人参,故名海参。现代研究表明,海参具有提高记忆力、延缓性腺衰老,防止动脉硬化、糖尿病以及抗肿瘤等作用。海参花即海参的生殖系统,海参花不仅含有与海参体壁同样丰富的活性物质,而且许多珍贵的关键营养含量更高,如多糖、钒、核酸、精氨酸等。另海参花中还含有丰富的对人体有特殊功效的内脏色素,也称性腺色素。海参性腺色素,易于消除自由基而具有抗氧化作用,对延缓衰老有显著地功效。海参花在海参加工过程中大多作为废弃物丢弃,且目前国内外还没有海参花对卵巢作用的研究,因此分离提取海参花中有效成分,并应用于防治卵巢衰老具有重要的现实意义。
发明内容
本发明第一目的在于发明一种治疗卵巢衰老的来源于海参花的水溶性物质。
本发明所述海参花提取物为从海参花中提取的水溶性物质。经研究,该提取物对于治疗卵巢早衰效果显著,且无副作用。
本发明的第二个目的在于发明上述水溶性物质的制备方法。
包括以下步骤:
(1)适量的海参花组织,匀浆;
(2)加入1.5倍于体积的蒸馏水,于30℃超声波辅助提取25min;
(3)30℃水浴搅拌提取2h,4000r/min离心5min,取上清液,残渣重复上述操作,合并滤液,减压浓缩至1/3体积后,冷冻干燥得海参花提取物。
本发明工艺简单、易于操作,费用低廉,对于治疗卵巢早衰效果显著,且无副作用。
本发明第三个目的在于发明上述海参花提取物在制备治疗卵巢早衰药物中的应用。
海参花提取物在改善卵巢早衰药物中应用的有益效果如下:
证明了海参花提取物具有改善卵巢早衰作用。已完成临床前在小鼠环磷酰胺卵巢早衰模型中的药效学研究。采用了经典的环磷酰胺所致的小鼠卵巢早衰模型,观察不同剂量的海参花提取物对小鼠子宫及卵巢早衰的改善作用。
研究表明:
1、海参花提取物使环磷酰胺所致的卵巢早衰模型小鼠的卵巢与子宫指数均增加。
2、海参花提取物使环磷酰胺所致的卵巢早衰模型小鼠的雌二醇和孕酮水平显著升高,子宫内膜增厚。
具体实施方式
1、 制备海参花治疗卵巢早衰提取物:
海参花(鲜冻品)由大连棒棰岛海产股份有限公司提供
(1)适量的海参花组织,匀浆;
(2)加入1.5倍于体积的蒸馏水,于30℃超声波辅助提取25min;
(3)30℃水浴搅拌提取2h,4000r/min离心5min,取上清液,残渣重复上述操作,合并滤液,减压浓缩至1/3体积后,冷冻干燥得海参花提取物。
2、制备片剂和胶囊:
(1)本发明海参花提取物胶囊制剂的制备
称取上述步骤制备的海参花提取物200mg,同时称取淀粉295mg、硬脂酸镁5mg,均匀混合,填充成胶囊。
(2)本发明海参花提取物片剂的制备
称取上述步骤制备的海参花提取物200mg,同时称取淀粉195mg、乳糖100mg,均匀混合,用湿法制粒,压成片剂。
3、海参花提取物对雌性小鼠生殖系统的影响
(1)试验对象:
雌性昆明种小鼠,8-10周(25-30g),购于山东省鲁抗医药股份有限公司,清洁级,合格证号:SLXK鲁20080002。室温下饲养,自由饮水和摄食
(2)试剂
戊酸雌二醇片(法国DELPHARM lilleS.A.S),有效成分1mg/片;
注射用环磷酰胺(江苏恒瑞医药股份有限公司),0.2g/瓶,批号:12031425;
孕酮放射免疫试剂盒(北京北方生物技术研究所);
雌二醇放射免疫分析药盒(深圳拉尔文生物工程技术有限公司
(3)实验方法
正常雌性昆明小鼠,分为青年对照组、衰老模型组、海参花取提物低、高剂量组和阳性药5组,每组10只。除对照组每天注射生理盐水,其余各实验组连续腹腔注射环磷酰胺(28mg/kg)5d,制备卵巢早衰模型。本发明海参花提物低、高剂量组及阳性药物组,分别用海参花提取物300mg/kg、600mg/kg及戊酸雌二醇0.085mg/kg灌胃给药,连续4周。实验结束,小鼠眼球取血,用于检测血清中雌二醇(E2)和孕酮(P)水平。脱颈椎处死,取卵巢、子宫,迅速称重,分别计算脏器指数;将左侧子宫和卵巢用10%福尔马林固定,石蜡切片,HE染色,在显微镜下用测微尺测量子宫内膜平均厚度;计数卵巢总卵泡的数量,观察颗粒细胞形态和层数,组织有无纤维化和坏死。
(4)数据分析与处理
用SPSS软件对实验数据进行统计分析,计算观察指标的平均值与标准差,另外均用t检验比较组间差异。
(5)结果与分析
1)、本发明提取物对雌性小鼠子宫及卵巢指数的影响
如表1所示,与空白组相比,模型组小鼠的子宫及卵巢卵巢指数显著降低(○P<0.01);与模型组相比,本发明海参花提物组与戊酸雌二醇组均显著提高子宫及卵巢卵巢指数(▲P<0.05、▼P<0.01)。
表1本发明海参花提取物对小鼠子宫及卵巢指数的影响
组别 | 子宫指数/% | 卵巢指数/% |
空白 | 142.75±40.48 | 31.76±5.04 |
模型 | 75.31±18.58○ | 20.66±2.67○ |
提取物低剂量 | 128.41±23.54▼ | 30.55±5.24▼ |
提取物高剂量 | 112.54±17.31▲ | 29.99±4.80▼ |
戊酸雌二醇 | 142.13±37.46▼ | 32.74±4.58▼ |
与空白组比较○P<0.01,与模型组相比▲P<0.05、▼P<0.01
2)本发明提取物对雌性小鼠血清E2和P含量的影响
由表2所示,与空白组相比,模型组小鼠的E2及P水平显著降低(○ P<0.01),与模型组相比,本发明海参花提物组与戊酸雌二醇组显著提高雌二醇及孕酮水平( ▲ P<0.05、 ▼ P<0.01)。
表2 各用药组血清中雌二醇(E2)、孕酮(P)含量测定结果
组别 | E2(pg/mL) | P(ng/mL) |
空白 | 3.14±0.25 | 14.12±3.38 |
模型 | 1.18±0.13○ | 7.03±2.65○ |
提取物低剂量 | 2.84±0.50▼ | 11.89±1.96▼ |
提取物高剂量 | 2.86±0.51▼ | 10.71±0.92▲ |
戊酸雌二醇 | 3.09±0.23▼ | 16.22±3.44▼ |
与空白组比较○ P<0.01,与模型组相比 ▲ P<0.05、 ▼ P<0.01
3)、本发明提取物对雌性小鼠子宫内膜平均厚度的影响
由表3可知,本发明海参花提取物组的子宫内膜平均厚度均明显高于模型组,差异显著。
表3本发明提取物对小鼠子宫内膜平均厚度的影响
组别 | 子宫内膜厚度(um) |
空白 | 394.33±18.81 |
模型 | 290.33±46.46○ |
提取物低剂量 | 412.50±20.67▼ |
提取物高剂量 | 381.67±13.66▼ |
戊酸雌二醇 | 406.33±12.98▼ |
与 空白组比较○ P<0.01,与模型组相比▼ P<0.01
Claims (4)
1.用于治疗女性卵巢早衰的海参花提取物,为从海参加工废弃物海参花中提取的水溶性物质;该海参花提取物的制备方法包括以下步骤:
(1)适量的海参花组织,匀浆;
(2)加入1.5倍于体积的蒸馏水,于30℃超声波辅助提取25min;
(3)30℃水浴搅拌提取2h,4000r/min离心5min,取上清液,残渣重复上述操作,合并滤液,减压浓缩至1/3体积后,冷冻干燥得海参花提取物。
2.一种如权利要求1所述用于治疗女性卵巢早衰的海参花提取物的制备方法,其特征在于包括以下步骤:
(1)适量的海参花组织,匀浆;
(2)加入1.5倍于体积的蒸馏水,于30℃超声波辅助提取25min;
(3)30℃水浴搅拌提取2h,4000r/min离心5min,取上清液,残渣重复上述操作,合并滤液,减压浓缩至1/3体积后,冷冻干燥得海参花提取物。
3.如权利要求2所述的海参花提取物的制备方法,其特征在于还包括:将步骤(3)制得的产品进一步通过常规的制药手段制成含有海参花提取物100mg或200mg规格的胶囊或片剂。
4.如权利要求1所述的海参花提取物在制备治疗女性卵巢早衰药物中的用途。
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