CN104546966B - 一种具有免疫功能调节作用的抗肿瘤中药组合物 - Google Patents

一种具有免疫功能调节作用的抗肿瘤中药组合物 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种具有免疫功能调节作用的抗肿瘤中药组合物，它由以下重量百分比的原料混配得到：60％～95％的灵芝孢子油、2％～15％的灵芝精粉、2％～15％的桑黄提取物和1％～10％的三七总皂苷通粉。本发明所述的中药组合物不仅对于多种人肿瘤具有显著抑制作用，更重要的是能够有效地调节机体抗肿瘤免疫功能，可与现代传统疗法共同组成多靶向，多疗效，标本兼治的立体综合性抗肿瘤疗法，最大程度降低肿瘤复发和转移的概率，延长患者的生命和提高预后的生存质量。

Description

一种具有免疫功能调节作用的抗肿瘤中药组合物
技术领域
本发明涉及一种中药组合物，具体涉及一种抗肿瘤中药组合物。
背景技术
现今医学领域在治疗肿瘤(癌症)病患时，主要采用的是手术加放、化疗。这些被动的治疗手段均以损伤人体自身免疫功能为代价延用至今。人患肿瘤的主要根源在于，因各种内外因造成的自身免疫功能缺失或损伤，丧失了自身免疫系统对肿瘤Go期细胞(人体均存在的休眠性肿瘤细胞)的管控能力，使肿瘤增殖细胞无限制生长起来。传统疗法虽然治标但不治本，并对免疫功能造成损伤而使肿瘤复发和转移成为必然。虽然近年来采用了干细胞移植和自血活化免疫疗法等新技术，但其疗效仍不尽人意。
发明内容
本发明的目的在于：提供一种中药组合物，以抑制肿瘤细胞无限制生长为目的，以提高抗肿瘤免疫功能调节作用为手段，与现代传统疗法，共同组成多靶向，多疗效，标本兼治的立体综合性抗肿瘤疗法，最大程度降低肿瘤复发和转移的概率，延长患者的生命和提高预后的生存质量。
本发明的上述目的是通过以下技术方案实现的：
提供一种具有免疫功能调节作用的抗肿瘤中药组合物，它由以下重量百分比的原料混配得到：60％～95％的灵芝孢子油、2％～15％的灵芝精粉、2％～15％的桑黄提取物和1％～10％的三七总皂苷通粉。
本发明一种优选的方案中，所述的中药组合物由以下重量百分比的原料混配得到：95％的灵芝孢子油、2％的灵芝精粉、2％的桑黄提取物和1％的三七总皂苷通粉。
本发明另一种优选的方案中，所述的中药组合物由以下重量百分比的原料混配得到：90％的灵芝孢子油、4％的灵芝精粉、4％的桑黄提取物和2％的三七总皂苷通粉。
本发明再一种优选的方案中，所述的中药组合物由以下重量百分比的原料混配得到：80％的灵芝孢子油、10％的灵芝精粉、5％的桑黄提取物和5％的三七总皂苷通粉。
本发明还有一种优选的方案中，所述的中药组合物由以下重量百分比的原料混配得到：75％的灵芝孢子油、10％的灵芝精粉、10％的桑黄提取物和5％的三七总皂苷通粉。
本发明还有一种优选的方案中，所述的中药组合物由以下重量百分比的原料混配得到：70％的灵芝孢子油、10％的灵芝精粉、15％的桑黄提取物和5％的三七总皂苷通粉。
本发明还有一种优选的方案中，所述的中药组合物由以下重量百分比的原料混配得到：60％的灵芝孢子油、15％的灵芝精粉、15％的桑黄提取物和10％的三七总皂苷通粉。
本发明的中药组合物中，所述的灵芝孢子油、灵芝精粉、桑黄提取物和三七总皂苷通粉均为现有产品。
本发明所述的灵芝孢子油为黄色透明液体，主要成分是灵芝酸、不饱和脂肪酸、有机锗和灵芝多糖等，能够诱导或促进巨噬细胞的吞噬作用，增强NK细胞的活性，促进辅助细胞产生白介素(IL-2)和干扰素，提高淋巴细胞的转化率，促进免疫球蛋白形成，全面提高机体的非特异性免疫功能，破坏肿瘤细胞的端粒酶，消除肿瘤细胞的无限分裂能力；临床及药理实验证实灵芝三萜类物质具有直接和间接毒杀肿瘤细胞的作用，并可刺激化疗药物难以杀死的Go期肿瘤细胞，使之进入细胞生长期，然后联合化疗药物或单独毒杀肿瘤细胞，防止其结束休眠期后大量繁殖或转移，同时迅速提高免疫力；赤芝孢子酸A具有提高淋巴细胞、巨噬细胞活性的作用。本发明优选的灵芝孢子油是通过超临界二氧化碳萃取法制得的灵芝孢子油。
灵芝精粉也称灵芝提取物，是采收成熟的新鲜灵芝子实体经烘干、提取、浓缩和干燥等工艺制得的灵芝浸膏粉，是灵芝粉高倍浓缩而成的灵芝精华，含有丰富的灵芝多糖、三萜类灵芝酸等有效成分。本发明优选的灵芝精粉是通过醇提的方法制得的灵芝精粉。
本发明所述的桑黄提取物通常为棕黄色粉末，主要含有桑黄三萜、桑黄碱和桑黄多糖，能够有效抑制肿瘤细胞生长和防止其转移，并且通过细胞调节和体液免疫产生作用，对正常生成纤维细胞不会产生没有细胞毒性作用。本发明优选的桑黄提取物是以桑黄子实体为原料通过热水浸提法、微波辅助法和/或复合酶法中的任意一种或多种提取法制得的桑黄提取物。
本发明所述的三七总皂苷通粉即三七总皂甙粉，为淡黄色无定性超微粉末，味苦，微甘；主要成分是人参皂苷Rb1，人参皂苷Rg1，三七皂苷R1；主要药理作用体现为降低机体耗氧量、提高机体缺氧耐受力、抑制由ADP引起的家兔血小板聚集、扩张脑血管、增加脑血流量、抗血栓和抗凝血；通常应用于治疗心脑血管疾病的药物中。本发明优选的三七总皂苷通粉是通过超微粉碎法或超临界二氧化碳萃取法制得的三七总皂苷通粉；优选通过超微粉碎法制得的三七总皂苷通粉。
本发明人经过研究发现，将上述几种现有的中药提取物按照本发明所述的比例配伍后，各原料药的有效成分之间发生了明显的协同增效作用，基础医学研究发现对于多种肿瘤都体现出显著的抑制作用，同时还能够有效地调节机体免疫功能，可有效弥补传统疗法对肿瘤患者免疫系统带来的损害。
本发明所述的药物组合物通过将所述的原料按所述比例简单混合即得。
本发明所述的药物组合物可进一步按照常规方法制备成软胶囊制剂。
本发明所述的药物组合物的人临床用量推荐为3.0g/60kg/d。
本发明所述的中药组合物对多种肿瘤细胞的影响参见以下动物试验：
采用人肿瘤细胞裸小鼠移植瘤模型观察本发明实施例1所述的抑制肿瘤生长作用及抗肿瘤免疫调节作用：
1试验材料
1.1受试药物：本发明实施例1、2和3的中药组合物，每种体积：2000ml；性状：棕色浸膏。储存条件：阴凉干燥处。有效期：24个月。
1.2阳性对照药：贞芪扶正颗粒，甘肃扶正药业科技股份有限公司产品。适应症：有提高人体免疫功能，保护骨髓和肾上腺皮质功能；用于各种疾病引起的虚损；配合手术、放射线、化学治疗，促进正常功能的恢复。
1.3试验动物：BALB/c-nu小鼠(SPF级)，雌雄兼用，由北京维通利华试验动物技术有限公司提供，动物许可证：SCXK(京)2012-0001；体重：18～20g。合格证号：11400700040160、11400700042654、11400700045060。
1.4肿瘤细胞株：人结肠癌细胞株(HCT-8)、人纤维肉瘤细胞株(HT-1080)购于北京协和细胞资源中心，人肺腺癌细胞株(A-549)由中国中医科学院中药研究所唐氏中药研究中心馈赠。
1.5试验试剂：DMEM高糖培养基，Hyclone公司产品，批号：NYL1023；MEM培养基，Hyclone公司产品，批号：NYG0929；胎牛血清，天津市灏祥生物制品科技有限责任公司产品，批号：TBD31HB；小鼠IL2测定试剂盒，上海泛科公司产品，生产批号：2014.5，有效期：2014.11；小鼠IFN-γ测定试剂盒，上海泛科公司产品，生产批号：2014.5，有效期：2014.11；小鼠NK测定试剂盒，上海泛科公司产品，生产批号：2014.5，有效期：2014.11；小鼠CD4测定试剂盒，上海泛科公司产品，生产批号：2014.5，有效期：2014.11；小鼠CD8测定试剂盒，上海泛科公司产品，生产批号：2014.5，有效期：2014.11；小鼠PD1测定试剂盒，上海泛科公司产品，生产批号：2014.5，有效期：2014.11；小鼠PDL1测定试剂盒，上海泛科公司产品，生产批号：2014.5，有效期：2014.11；小鼠TNF测定试剂盒，上海泛科公司产品，生产批号：2014.5，有效期：2014.11。
1.6试验仪器:小鼠动物电子天平：sartorius BSA3202S-cw；电子天平：YP/0001，上海越平科学仪器有限公司；多功能酶标仪：PerkinElmerEnspire；A2型生物安全柜(MSC1.8)：德国Thermo；二氧化碳培养箱：Thermo-371，Thermo公司；超净工作台：SW-CJ-2FD，苏净安泰公司；相差倒置显微镜：IX71，Olympus公司；HZQ-F160震荡培养箱：哈尔滨东联电子技术开发有限公司；电子天平：AL204，梅特勒-托利多仪器有限公司；低温高速离心机，5810R，德国Eppendorf。
2方法及结果
取裸小鼠40只，将经体内传代3次以上，肿瘤生长均匀的瘤组织制备成0.25g/ml的肿瘤组织匀浆，按0.2ml/只接种裸小鼠，共接种40只；接种后随机分为试验A组、试验B组、试验C组、阳性对照组和模型对照组共5组，每组8只(雌雄兼用)，接种后第二天各给药组按0.2ml/10g灌胃给药(试验A、B、C组分别给予实施例1、2、3的中药组合物550mg/kg/d；阳性对照组给予贞芪扶正颗粒5.5g/kg/d；各组按等容不等浓度灌胃给药)，每天1次，连续给药15天，模型对照组在同等条件下给予蒸馏水灌胃。期间每天观察动物精神状态、饮食和排便，待能看到肿瘤生长时用数显游标卡尺测量肿结节的最长径(a)和最短径(b)，并计算肿瘤体积，肿瘤体积(TV)的计算公式为：TV＝(1/2)ab2。末次给药1天后将小鼠摘除眼球取血，摘取脾脏和瘤块，称量瘤块重量，-80℃保存备用。并计算抑瘤率，抑瘤率计算公式为：
结果采用SPSS软件进行统计分析，采用单因素方差分析进行组间差异的比较，p<0.05为差异具有显著性。
按照上述方法分别进行人结肠癌细胞株(HCT-8)、人纤维肉瘤细胞株(HT-1080)和人肺腺癌细胞株(A-549)的接种和给药，最终试验结果如下：
2.1.对人纤维肉瘤细胞株(HT-1080)裸小鼠移植瘤模型的抑制作用
在整个观察期间，各试验组HT-1080荷瘤裸小鼠肿瘤体积生长明显小于模型对照组；其中A组、B组在接种后第8天、第10天与模型对照组比较有显著性差异，C组在接种后第13、15天与模型对照组比较有显著性差异；抑瘤率分别为36.27％、38.35％、40.25％。
2.2.对人肺腺癌细胞株(A-549)裸小鼠移植瘤模型的抑制作用
在整个观察期间，各试验组A549荷瘤裸小鼠肿瘤体积生长明显小于模型对照组；其中A组在接种后第9、11天与模型对照组比较有显著性差异，B、C组在接种后第11、13天与模型对照组比较有显著性差异，并与良好的剂量效应相关性；抑瘤率分别为25.03％、24.02％、28.43％。
2.3.对人结肠癌细胞株(HCT-8)裸小鼠移植瘤模型的抑制作用
在整个观察期间，各试验组HCT-8荷瘤裸小鼠肿瘤体积生长均明显小于模型对照组，抑瘤率分别为18.84％、17.62％、19.61％。
2.4.对人纤维肉瘤细胞株(HT-1080)抗肿瘤免疫功能的调节作用
①各试验组均可降低HT-1080荷瘤裸小鼠血清IFN-γ、TNF含量，与模型对照组比较均有显著性差异，与阳性对照组比较也有显著性差异，对比结果见图1。
②各试验组均可降低HT-1080荷瘤裸小鼠脾脏PD1、PDL1含量，与模型对照组比较均有显著性差异，与阳性对照组比较也有显著性差异，对比结果见图2。
2.5.对人肺腺癌细胞株(A-549)抗肿瘤免疫功能的调节作用
①各试验组均可提高A-549荷瘤裸小鼠血清IL-2含量，降低血清IFN-γ含量，与模型对照组比较均有显著性差异，与阳性对照组比较也有显著性差异，对比结果见图3；
②各试验组均可提高A-549荷瘤裸小鼠脾脏中PD1含量，与模型对照组比较有显著性差异，与阳性对照组比较也有显著性差异，对比结果见图4。
由上述实验可知，本发明的中药组合物不仅对于多种人肿瘤具有显著抑制作用，更重要的是能够有效地调节机体抗肿瘤免疫功能。
附图说明
图1是本发明实施例1-3的中药组合物对HT-1080荷瘤裸小鼠血清IFN-γ、TNF含量的影响。
图2是本发明实施例1-3的中药组合物对HT-1080荷瘤裸小鼠脾脏PD1、PDL1含量的影响。
图3是本发明实施例1-3的中药组合物对A-549荷瘤裸小鼠血清IL-2、IFN-γ含量的影响。
图4是本发明实施例1-3的中药组合物对A-549荷瘤裸小鼠脾脏中PD1含量的影响。
具体实施方式
实施例1.
一种抗癌中药组合物，由以下重量百分比的原料混配得到：95％的灵芝孢子油、2％的灵芝精粉、2％的桑黄提取物和1％的三七总皂苷通粉；所述的灵芝孢子油是通过超临界二氧化碳萃取法制得的灵芝孢子油；所述的桑黄提取物是以桑黄子实体为原料通过热水浸提法制得的桑黄提取物；所述的三七总皂苷通粉是通过超微粉碎法制得的三七总皂苷通粉。将上述原料经简单混合后得到棕色浸膏。
实施例2.
一种抗癌中药组合物，由以下重量百分比的原料混配得到：90％的灵芝孢子油、4％的灵芝精粉、4％的桑黄提取物和2％的三七总皂苷通粉；所述的灵芝孢子油是通过超临界二氧化碳萃取法制得的灵芝孢子油；所述的桑黄提取物是以桑黄子实体为原料通过热水浸提法和微波辅助提取法制得的桑黄提取物；所述的三七总皂苷通粉是通过超微粉碎法制得的三七总皂苷通粉。将上述原料经简单混合后得到棕色浸膏。
实施例3.
一种抗癌中药组合物，由以下重量百分比的原料混配得到：80％的灵芝孢子油、10％的灵芝精粉、5％的桑黄提取物和5％的三七总皂苷通粉；所述的灵芝孢子油是通过超临界二氧化碳萃取法制得的灵芝孢子油；所述的桑黄提取物是以桑黄子实体为原料通过复合酶法提取制得的桑黄提取物；所述的三七总皂苷通粉是通过超微粉碎法制得的三七总皂苷通粉。将上述原料经简单混合后得到棕色浸膏。
实施例4.
一种抗癌中药组合物，由以下重量百分比的原料混配得到：75％的灵芝孢子油、10％的灵芝精粉、10％的桑黄提取物和5％的三七总皂苷通粉；所述的灵芝孢子油是通过超临界二氧化碳萃取法制得的灵芝孢子油；所述的桑黄提取物是以桑黄子实体为原料通过热水浸提法制得的桑黄提取物；所述的三七总皂苷通粉是通过超微粉碎法制得的三七总皂苷通粉。将上述原料经简单混合后得到棕色浸膏。
实施例5.
一种抗癌中药组合物，由以下重量百分比的原料混配得到：70％的灵芝孢子油、10％的灵芝精粉、15％的桑黄提取物和5％的三七总皂苷通粉；所述的灵芝孢子油是通过超临界二氧化碳萃取法制得的灵芝孢子油；所述的桑黄提取物是以桑黄子实体为原料通过复合酶法提取制得的桑黄提取物；所述的三七总皂苷通粉是通过超微粉碎法制得的三七总皂苷通粉。将上述原料经简单混合后得到棕色浸膏。
实施例6.
一种抗癌中药组合物，由以下重量百分比的原料混配得到：60％的灵芝孢子油、15％的灵芝精粉、15％的桑黄提取物和10％的三七总皂苷通粉；所述的灵芝孢子油是通过超临界二氧化碳萃取法制得的灵芝孢子油；所述的桑黄提取物是以桑黄子实体为原料通过复合酶法提取制得的桑黄提取物；所述的三七总皂苷通粉是通过超微粉碎法制得的三七总皂苷通粉。将上述原料经简单混合后得到棕色浸膏。
实施例7
将实施例1制备得到的棕色浸膏进一步按常规方法灌装制成软胶囊。该软胶囊的人临床推荐用量为：按内容物重量计，3.0g/60kg/d。

Claims (10)

1.一种具有免疫功能调节作用的抗肿瘤中药组合物，其特征在于，它由以下重量百分比的原料混配得到：60％～95％的灵芝孢子油、2％～15％的灵芝精粉、2％～15％的桑黄提取物和1％～10％的三七总皂苷通粉。
2.权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，它由以下重量百分比的原料混配得到：95％的灵芝孢子油、2％的灵芝精粉、2％的桑黄提取物和1％的三七总皂苷通粉。
3.权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，它由以下重量百分比的原料混配得到：90％的灵芝孢子油、4％的灵芝精粉、4％的桑黄提取物和2％的三七总皂苷通粉。
4.权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，它由以下重量百分比的原料混配得到：80％的灵芝孢子油、10％的灵芝精粉、5％的桑黄提取物和5％的三七总皂苷通粉。
5.权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，它由以下重量百分比的原料混配得到：75％的灵芝孢子油、10％的灵芝精粉、10％的桑黄提取物和5％的三七总皂苷通粉。
6.权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，它由以下重量百分比的原料混配得到：70％的灵芝孢子油、10％的灵芝精粉、15％的桑黄提取物和5％的三七总皂苷通粉。
7.权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，它由以下重量百分比的原料混配得到：60％的灵芝孢子油、15％的灵芝精粉、15％的桑黄提取物和10％的三七总皂苷通粉。
8.权利要求1-7任意一项所述的中药组合物，其特征在于：所述的灵芝孢子油是通过超临界二氧化碳萃取法制得的灵芝孢子油。
9.权利要求1-7任意一项所述的中药组合物，其特征在于：所述的桑黄提取物是以桑黄子实体为原料通过热水浸提法、微波辅助法和/或复合酶法中的任意一种或多种提取方法制得的桑黄提取物。
10.权利要求1-7任意一项所述的中药组合物，其特征在于：所述的三七总皂苷通粉是通过超微粉碎法或超临界二氧化碳萃取法制得的三七总皂苷通粉。
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