CN104225403A - 一种治疗肺结核的药物组合物及制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗肺结核的药物组合物，该药物组合物是由以下重量份数比的原料组成：猫爪草10～80份、百部8～60份、天门冬8～60份、蛤蚧5～50份、三七3～40份、白及8～60份、川贝母3～40份、北沙参8～60份、海浮石8～60份、天花粉8～60份、紫河车5～50份、阿胶5～50份。本发明还公布了该药物组合物的制备方法和用途。本发明药物组合物组成简单，配方新颖具有成本低、疗效好、无毒副作用、不易产生耐受性、服用及携带方便、普遍适用于肺结核的患者等特点。

Description

一种治疗肺结核的药物组合物及制备方法和用途

技术领域

本发明涉及一种治疗肺结核的药物组合物及其制备方法。

背景技术

结核病是一种严重危及人类生命健康，制约经济发展的慢性传染病。自从1944年抗结核特效药相继问世之后，人们对它的警惕性有所下降。随着抗结核药物的广泛应用，结核杆菌的耐药性也有不断增加的趋势。在20世纪90年代以前，全球新发结核病耐药结核菌小于5％，随后发病率呈逐年上升趋势，2007年WHO发表的《全球肺结核病控制报告》显示全球共有37个国家和地区发现MDR-TB病，2008年WHO报告结核病总耐药率(至少耐一种药物)从0(安道尔)-57.1％(哈萨克斯坦)，平均20.0％。2009年WHO在全球结核控制报告指出：全球MDR-TB发病率达到创记录的水平，截止2008年底，共有55个国家和地区报告了一起或多起广泛耐药病例，耐药结核病例迅速增多，据估计约有2/3的结核病人处于发生MDR-TB病的危险之中，中国和印度的新增耐药结核病例几乎占世界总数的一半，其中中国以11.2万例位居全球第二位。

对于结核病的治疗，临床上常常选用利福平、异烟肼、吡嗪酰胺、乙胺丁醇及氟喹诺酮类药物进行治疗，虽然上述药物对普通型肺结核具有较好的临床疗效，但是对于耐药型肺结核的疗效则较差。现在我国普通结核病人治愈率已超过90％，而耐药结核病人治愈率仅为50％-60％，治疗失败导致传染期延长、耐药结核病传播机会增加致使人群暴露于MDR-TB病的危险之中，进一步导致耐药结核病例数量增加，一旦发生耐药结核病，所用的化学药物价格昂贵、疗效较差、不良反应严重，更重要的是患者病情难以控制、并发症增多、死亡率增高。因此，最近耐药结核病又被WHO宣布为威胁全人类的两大疾病之一，因为一旦耐多药结核病流行，人们将再次面临耐药结核病用药短缺，难以救治的局面。

中医学虽未记载肺结核这一病名，但从其临床表现可归属于中医“肺痨”范畴，认为本病具有“三性”和“四主症”。三性为：传染性、慢性、虚弱性；四主症为：咳嗽、咯血、潮热、盗汗。病情轻者，诸症未必悉具，重者则各种症状大多具呈，或先后相继发病，或合并出现。中医学认为本病的发生是由于痨虫蚀肺先伤肺气，然后肺阴渐耗，虚火灼津所致，历代医家针对肺痨的这一基本病机进行遣方用药，取得了较好的临床疗效。中国专利201010274878.6公布了一种治疗肺结核的药物，该药物是由百部、生地、麦冬、百合、瓜娄皮、野芝麻、浙贝、黄岑、鱼腥草、西洋参、白芍、甘草、桔梗、山慈菇、白芍、三叶青、北沙参组成；中国专利201210211644.6公布了一种治疗肺结核的中药，该中药配方是由山药、白术、半夏、甘草、沙参、紫苑、陈皮、夏枯草、桔梗、砂仁、杏仁组成；中国专利201310532331.5公布了一种治疗肺结核的中药，该中药由沙参、陈皮、百部、杏仁、生地、麦冬、桑皮、半夏、知母、紫菀、橘梗组成；中国专利201410144321.9公布了一种治疗肺结核的内服药物，该药物由铁皮石斛、竹节参、大四块瓦、大蓟、川贝母、五指毛桃、天门冬、石仙桃、白及、吉祥草、麦冬、肺形草、麦斛、盘龙参、黄精、斑叶兰、紫金牛、桔梗组成；上述专利配方对肺结核均具有不同程度的治疗作用，但是上述配方对于肺结核伴随免疫力低下或伴随疼痛症状突出的患者其疗效较差，上述配方均无调节免疫功能、无直接治疗疼痛的作用。

本课题组在总结前人治疗肺痨经验的基础上，再根据临证经验总结组成了中药复方“肺痨康”，该复方药物研究先后受四川省科技厅攻关课题(NO：06SG0176)、四川省重点学科课题(NO：2009003084)、四川省教育厅重点项目课题(12ZA032)及国家自然科学基金面上项目(NO：81173382)等资金的资助。最初原始配方是由天门冬、蒸百部、紫河车、阿胶、白及、天花粉、北沙参、蛤蚧、三七粉、猫爪草、海浮石、生地榆、茜草、黄精组成，具有临床研究资料参见：“叶品良，卢润生，黄秀深，等.肺痨康治疗肺结核69例[J].江西中医药，2009，40(2):33.”，该配方对肺结核及耐药肺结核均具有较好的临床疗效，但是该配方药物相对较多，在工业化大生产过程中较难控制其杂质含量，故需对原始配方进行广泛筛选、拆分简化，以期能找出药物少、成本更为低廉、质量可控、且对耐药结核病具有较好临床疗效的新的药物配方。

发明内容

本发明的一个目的在于克服现有技术的不足，提供一种组成简单，配方新颖的治疗肺结核的药物组合物，该药物组合物具有成本低、疗效好、无毒副作用、不易产生耐受性、服用及携带方便、普遍适用于肺结核的患者等特点。

本发明的另一个目的在于提供一种治疗肺结核的药物组合物的制备方法，该制备方法操作简单，可适用于工业化生产。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：一种治疗肺结核的药物组合物，它是由以下重量份数比的原料组成：猫爪草10～80份、百部8～60份、天门冬8～60份、蛤蚧5～50份、三七3～40份。

优选地，所述的各原料的重量份数比为：猫爪草20～60份、百部10～40份、天门冬10～40份、蛤蚧8～30份、三七5～30份。

优选地，所述的各原料的重量份数比为：猫爪草24份、百部15份、天门冬15份、蛤蚧10份、三七6份。

一种治疗肺结核的药物组合物，所述的各原料的重量份数比为：猫爪草10～80份、百部8～60份、天门冬8～60份、蛤蚧5～50份、三七3～40份、白及8～60份、川贝母3～40份、北沙参8～60份、海浮石8～60份、天花粉8～60份、紫河车5～50份、阿胶5～50份。

优选地，所述的各原料的重量份数比为：猫爪草20～60份、百部10～40份、天门冬10～40份、蛤蚧8～30份、三七5～30份、白及10～40份、川贝母5～30份、北沙参10～40份、海浮石10～40份、天花粉10～40份、紫河车8～30份、阿胶8～30份。

优选地，所述的各原料的重量份数比为：猫爪草24份、百部15份、天门冬15份、蛤蚧10份、三七6份、白及15份、川贝母6份、北沙参15份、海浮石20份、天花粉15份、紫河车10份、阿胶10份。

一种制备权利要求上述任意一项药物组合物的方法，它包括以下步骤：按重量比称取各原料，混合后加入药学上可接受的辅料制备成药学上常用的药物制剂。

本发明所述的药物制剂为片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、粉剂、汤剂或口服液。

本发明所述的药学上可接受的辅料包括淀粉、硬脂酸镁、糊精和微晶纤维素。

本发明所述的任一药物组合物在制备治疗肺结核药物中的应用。

本发明的药物组合物可以根据制药领域的常规方法制备成任何一种药剂学上所述的剂型；药物组合物可以通过口服、吸入或肠外给药等方式施用于患者。所述的药剂学上的剂型包括：口服给药时使用的片剂、胶囊剂、丸剂、粉剂、颗粒剂、糖浆、汤剂口服液等；在肠外给药时使用的冻干粉针及注射液等。

为使上述剂型能够实现，需在制备这些剂型时加入药学可接受的辅料，例如：填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、基质等。填充剂包括：淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等；崩解剂包括：淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素钠等；润滑剂包括：硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等；助悬剂包括：聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等；粘合剂包括，淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等；甜味剂包括：糖精钠、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等；矫味剂包括：甜味剂及各种香精；防腐剂包括：尼泊金类、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸及其盐类、苯扎溴铵、醋酸氯乙定、桉叶油等；基质包括：PEG6000，PEG4000，虫蜡等。

本发明所述药物组合物中的猫爪草为为毛莨科植物小毛莨的块根，甘、辛、温，归肝、肺经，具有化痰散结，解毒消肿的作用；百部为为百部科植物直立百部、蔓生百部或对叶百部的干燥块根，甘、苦、微温，归肺经，具有润肺止咳，杀虫灭虱的作用；天门冬为为百合科天门冬属植物的块根，甘、苦、寒，归肺、肾经。养阴生津，润肺清心的作用；蛤蚧为壁虎科动物蛤蚧除去内脏的干燥体，咸、平，归肺、肾经，具有助肾阳，益精血，补肺气，定喘嗽的作用；三七为五加科多年生草本植物三七的根，甘、微苦、温，归肝、胃经，具有化瘀止血，活血定痛的作用；白及为兰科多年生草本植物白及的块茎，苦、甘、涩、寒，归肺、胃、肝经，具有收敛止血，消肿生肌的作用；川贝母为百合科植物暗紫贝母、卷叶贝母、梭砂贝母、甘肃贝母、康定贝母等的鳞茎，苦、甘、微寒，归肺、心经，具有清热化痰，润肺止咳，散结消肿的作用；北沙参为伞形科植物珊瑚菜的根，甘、微苦、微寒，归肺、胃经，具有养阴清肺，益胃生津的作用；海浮石为胞孔科动物脊突苔虫、瘤苔虫的骨骼，或火山喷出的岩浆形成的多孔状石块，咸、寒，归肺经，具有清肺化痰、软坚散结、通淋的作用；天花粉为葫芦科植物栝蒌或日本栝蒌的干燥块根，甘、微苦、微寒，归肺、胃经，具有清热生津，清肺润燥，解毒消痈的作用；紫河车为健康人的干燥胎盘，甘、咸、温，归心、肺、肾经，具有温肾补精，益气养血的作用；阿胶为马科动物驴的皮经煎煮、浓缩制成的固体胶，甘、平，归肺、肝、肾经，具有补血止血，滋阴润燥的作用。

本发明的有益效果是：本发明药物组合物经临床试验研究证明对肺结核、肺结核耐药患者具有较好的治疗效果，同时本发明药物组合物具有调节免疫功能及止痛的作用。本发明药物组合物的配方新颖，原料简单，兼顾性好，可适用于工业化生产。

具体实施方式

下面结合具体实施例进一步详细描述本发明的技术方案，但本发明的保护范围不局限于以下所述。

实施例1：

称取原料猫爪草10g，百部8g，天门冬8g，蛤蚧5g，三七3g，加入辅料淀粉40g制粒，硬脂酸镁4g，糊精20g、微晶纤维素20g，均匀制得颗粒，压片，得到片剂。

实施例2：

称取原料猫爪草80g，百部60g，天门冬60g，蛤蚧50g，三七40g，加入辅料淀粉300g制粒，硬脂酸镁30g，糊精150g、微晶纤维素150g，均匀制得颗粒，压片，得到片剂。

实施例3：

称取原料猫爪草20g，百部10g，天门冬10g，蛤蚧8g，三七5g，加入辅料淀粉50g制粒，硬脂酸镁5g，糊精25g、微晶纤维素25g，均匀制得颗粒，压片，得到片剂。

实施例4：

称取原料猫爪草60g，百部40g，天门冬40g，蛤蚧30g，三七30g，入辅料淀粉200g制粒，硬脂酸镁20g，糊精100g、微晶纤维素100g，均匀制得颗粒，压片，得到片剂。

实施例5：

称取原料猫爪草24g，百部15g，天门冬15g，蛤蚧10g，三七6g，加入辅料淀粉60g制粒，硬脂酸镁5g，糊精30g、微晶纤维素30g，均匀制得颗粒，压片，得到片剂。

实施例6：

称取原料猫爪草10g，百部8g，天门冬8g，蛤蚧5g，三七3g，白及8g、川贝母3g、北沙参8g、海浮石8g、天花粉8g、紫河车5g、阿胶5g，加入辅料淀粉80g制粒，硬脂酸镁6g，糊精40g、微晶纤维素40g，均匀制得颗粒，压片，得到片剂。

实施例7：

称取原料猫爪草80g、百部60g、天门冬60g、蛤蚧50g、三七40g、白及60g、川贝母40g、北沙参60g、海浮石60g、天花粉60g、紫河车50g、阿胶50g，加入辅料淀粉200g制粒，硬脂酸镁20g，糊精150g、微晶纤维素150g，均匀制得颗粒，装入胶囊，得到胶囊剂。

实施例8：

称取原料猫爪草20g，百部10g，天门冬10g，蛤蚧8g，三七5g，白及10g、川贝母5g、北沙参10g、海浮石10g、天花粉10g、紫河车8g、阿胶8g，加入辅料淀粉60g制粒，硬脂酸镁5g，糊精50g、微晶纤维素50g，按照常规工艺制备成散剂。

实施例9：

称取原料猫爪草60g，百部40g，天门冬40g，蛤蚧30g，三七30g，白及40g、川贝母30g、北沙参40g、海浮石40g、天花粉40g、紫河车30g、阿胶30g，加入辅料淀粉400g制粒，硬脂酸镁40g，糊精300g、微晶纤维素300g，按照常规工艺制备成口服液。

实施例10：

称取原料猫爪草24g，百部15g，天门冬15g，蛤蚧10g，三七6g，白及15g、川贝母6g、北沙参15g、海浮石20g、天花粉15g、紫河车10g、阿胶10g，加入辅料淀粉150g制粒，硬脂酸镁12g，糊精70g、微晶纤维素70g，按照常规工艺制备成粉剂。

实施例11：

称取原料猫爪草10g，百部8g，天门冬8g，蛤蚧5g，三七3g，按照常规制备工艺制备成汤剂。

实施例12：

称取原料猫爪草80g，百部60g，天门冬60g，蛤蚧50g，三七40g，按照常规制备工艺制备成散剂。

实施例13：

称取原料猫爪草20g，百部10g，天门冬10g，蛤蚧8g，三七5g，按照常规制备工艺制备成颗粒剂。

实施例14：

称取原料猫爪草60g，百部40g，天门冬40g，蛤蚧30g，三七30g，按照常规制备工艺制备成泡腾片。

实施例15：

称取原料猫爪草24g，百部15g，天门冬15g，蛤蚧10g，三七6g，按照常规制备工艺制备成冻干粉针。

实施例16：

称取原料猫爪草10g，百部8g，天门冬8g，蛤蚧5g，三七3g，白及8g、川贝母3g、北沙参8g、海浮石8g、天花粉8g、紫河车5g、阿胶5g，按照常规制备工艺制备成颗粒剂。

实施例17：

称取原料猫爪草80g、百部60g、天门冬60g、蛤蚧50g、三七40g、白及60g、川贝母40g、北沙参60g、海浮石60g、天花粉60g、紫河车50g、阿胶50g，按照常规制备工艺制备成胶囊剂。

实施例18：

称取原料猫爪草20g，百部10g，天门冬10g，蛤蚧8g，三七5g，白及10g、川贝母5g、北沙参10g、海浮石10g、天花粉10g、紫河车8g、阿胶8g，按照常规工艺制备成散剂。

实施例19：

称取原料猫爪草60g，百部40g，天门冬40g，蛤蚧30g，三七30g，白及40g、川贝母30g、北沙参40g、海浮石40g、天花粉40g、紫河车30g、阿胶30g，按照常规工艺制备成口服液。

实施例20：

称取原料猫爪草24g，百部15g，天门冬15g，蛤蚧10g，三七6g，白及15g、川贝母6g、北沙参15g、海浮石20g、天花粉15g、紫河车10g、阿胶10g，按照常规工艺制备成丸剂。

本发明药物配方先后受四川省科技厅攻关课题(NO：06SG0176)、四川省重点学科课题(NO：2009003084)、四川省教育厅重点项目课题(12ZA032)及国家自然科学基金面上项目(NO：81173382)等资金的资助，对本发明药物组合物肺痨康药物组成进行广泛筛选、不断总结、深入简化，已分别对原始处方的疗效进行临床试验验证，并在此基础方之上进行药物拆方简化，开展一系列的药效学试验，最终确定的本发明药物组合物可以促进肺结核患者临床症状和肺部体征消失，促进肺部病变吸收，痰涂转阴，在体内和体外抗菌试验中发现，本发明药物对结核杆菌，尤其是对耐药结核分枝杆菌具有明显的抗菌作用。下面通过具体的临床研究来验证本发明的有益效果：

1 原始处方临床疗效试验

1.1 一般资料

观察病例为1996～2006年就诊于成都中医药大学北巷子门诊部肺结核患者，共69例，病例来源于四川省内及湖北孝感、湖南长沙、新疆伊犁等28个县市。其中男性45例，女性24例；年龄最大78岁，最小17岁。

1.2 诊断标准

诊断符合《传染性肺结核诊断标准及处理原则》制定的肺结核诊断标准。临床表现以咳嗽、咯血，或痰中带血、胸痛、潮热、盗汗、消瘦乏力、舌红少苔，脉细数为主要特征。多数患者曾服用过异烟肼、利福平、丁胺卡那等药物，经化疗效果不明显；有的是因为用药种类过多，肝功能受损副作用明显。

1.3 治疗方法

中药复方基本药物组成为天门冬、蒸百部、紫河车、阿胶、白及、天花粉、北沙参、蛤蚧、三七粉、猫爪草、海浮石，上药研为细末，另以生地榆、茜草、黄精各等份，煎取浓汁泛丸如绿豆大，每次6g，每日3次，饭前服用。2个月为一个疗程，一般治疗3-6个疗程可愈，服本药期间不再服用西药抗痨药。

1.4 疗效观察

疗效标准：参照《中医病证诊断疗效标准》及《临床诊疗指南-结核病分册》。临床治愈：临床症状和肺部体征消失，胸片显示病变全部吸收或无活动性，痰菌连续阴性(或连续阴转)。显效：症状和肺部体征基本消失，胸片示病灶吸收或基本吸收，空洞缩小1/2以上，痰涂片3次阴性。有效：症状和体征明显好转，胸片示病灶部分吸收，空洞缩小1/3以上，痰涂片3次阴性。无效：症状无好转或略有好转或病情恶化，病灶及空洞无变化或扩大，痰涂片持续阳性或反复阳性。

1.5 治疗结果

临床治愈16例，显效23例，有效22例，无效8例，总有效率为88.4％。

上述实验结果表明，由天门冬、蒸百部、紫河车、阿胶、白及、天花粉、北沙参、蛤蚧、三七粉、猫爪草、海浮石、生地榆、茜草、黄精组成的药物组合物其总有效率已达到88.4％，表明该药物组合物对肺结核患者具有较好的临床疗效。

2 筛选处方对耐多药结核分枝杆菌抑菌效力的体外研究

本次实验配方为如下十一味药物：“蒸百部、白及、天冬、川贝、紫河车、蛤蚧、三七、北沙参、海浮石、天花粉、猫爪草”。

2.1 材料

试验药品：肺痨康水煎液，药品用常规方法煎煮，所需药品均购自同仁堂药店成都分店。对照药物:利福平(纯度98.3％，批号:030508。由中国疾病预防控制中心结核病预防控制分中心提供。配制方法:RFP先用二甲基甲酰胺一滴溶解后，再用蒸馏水稀释)。

试验菌株：H37RV标准菌(ATCC:27294编号1)；单耐链霉素(SM编号2)；单耐利副平(RFP编号3)；单耐异烟肼(INH编号4)；耐RFP+INH编号5均由中国疾病预防控制中心临床分中心提供。

改良苏通式培养基的配制：按照《化学治疗实验法》“抗结核药物实验法”所推荐的方法配制。

改良罗氏培养基的配制：按照《结核病诊断实验室检验规程》推荐方法配制。

2.2 方法

含药培养基的制备：配制苏通氏培养基基础液，试管分装每支加1.8ml。将肺痨康水煎液稀释成一系列梯度，分别为每毫升100mg(原药浓度)、50mg、25mg、12.5mg、6.25mg、3.125mg高压灭菌；在无菌环境下加入到苏通氏培养基内，每支加0.2ml。阳性对照药RFP的浓度分别为每毫升500μg、250μg、125μg、62.5μg、31.25μg、15.62μg。

分别称取1mgH37RV，耐INH，耐RFP，耐SM，耐INH+RFP菌落，用磨菌器研磨，加生理盐水稀释成每1mg/ml的菌悬液，以灭菌吸管准确的吸取浓度为1mg/ml的菌液0.1ml种入含有6种不同浓度含药培养基，同时接种0.1ml于不含药物的培养基里作为空白对照，重复2次。上述所有的培养基均置于37℃培养箱中孵育2周后，每支吸取0.1ml转种于改良罗氏培养基斜面。37℃培养四周观察结果(-:未见结核菌生长；+:菌落占斜面的1/4；++:菌落占斜面的1/2；+++以上:菌落生长于整个斜面)，结果见表1、表2。

表1 不同浓度药液对菌落生长的影响

表2 对各菌的MIC和MBC的影响

从上表可知虽然该处方对结核分枝杆菌的杀菌作用在毫克级，但仍不难看出肺痨康在体外试验中高浓度时对H37RV、耐SM、耐RFP、耐RFP+INH的菌株均有明显的杀菌或抑菌作用。在高剂量和中剂量时对H37RV、耐RFP、耐RFP+INH有较好的抗结核作用，特别是对常见耐药结核菌都有较好的抑菌效果。但需注意的是对耐RFP+INH的抑菌作用并不随着药物浓度的不断增高而增加，含25mg/ml和50mg/ml药液的培养基上反而有耐RFP+INH菌落生长，而一般化疗药则是药物浓度越高抑或杀菌效果越好。该研究结果说明该处方对耐RFP+INH菌的体外作用具有双向性。从其作用机制而言，药物的双向性作用大多是药物配伍组方后通过多成分、多靶点、多途径调节人体功能所反映出的治疗效果。因此，该处方对耐多药结核杆菌抑制的量效关系、各有效成分的确定及抗结核机理还需进一步深入研究。

3 筛选处方对结核杆菌体内抑菌实验研究

本次实验所确定的肺痨康配方为如下十一味药物：“蒸百部、白及、天冬、川贝、紫河车、蛤蚧、三七、北沙参、海浮石、天花粉、猫爪草”。

3.1 材料与方法

实验药品:肺痨康水煎液，药品用常规方法煎煮，所需药品均购自同仁堂药店成都分店。(1)对照药物:利福平(成都锦华药业有限公司，批号:071101。配制方法:RFP先用二甲基甲酰胺一滴溶解后，再用蒸馏水稀释。)(2)实验菌株:H37RV标准菌(ATCC:27294)；由中国疾病预防控制中心结核病预防控制分中心提供。(3)实验动物:昆明种小鼠，120只，一级，雌性，体重18～22g。由成都中医药大学动物实验中心提供(合格证号:SCXK(川)2008-11)。

实验方法：小鼠经PPD测试阴性后，完全随机分组，分为空白组，模型组，阳性组(RFP，灌胃150mg/kg)，肺痨康高剂量组，肺痨康中剂量组，肺痨康低剂量组(分别按6g/kg、3g/kg、115g/kg灌胃给药)6组，空白组，模型组给予等容积的生理盐水。实验当天，将结核菌配制成1mg/ml生理盐水菌悬液，尾静脉注射012ml/只。于第二天灌胃药物，每日一次，连续56天。一周后死亡的动物作解剖记录；观察肝，脾，肺的重量指数(脏器重g/体重g×100)，及每个脏器的结核结节，脏器的病理形态学变化(HE染色)与结核菌数(Z-N染色)。观察并记录各组动物的存活时间。

统计学方法：结果采用SPSS17.0统计软件处理，测定结果以(x±s)表示，组间计量资料比较采用组间t检验，计数资料用秩和检验。

3.2 实验结果

3.2.1 小鼠脏器重量指数，体重，肺脏结核结节，存活时间的比较，见表3。

3.2.2 小鼠脏器病理组织学结果(HE染色)，见表4。

3.2.3 小鼠脏器结核菌检查(Z-N染色)，见表5。

表3 小鼠脏器重量指数、体重、肺脏结核结节、存活时间的比较(x±s)

与空白组比较，#P＜0.05，##P＜0.01，※P＜0.05，※※P＜0.01，&P＜0.05，&&P＜0.01

表4 小鼠脏器病理组织学结果(只，n＝20)

表5 小鼠脏器结核菌检查(只，n＝20)

上述实验表明，高剂量与空白组、阳性组在存活时间、脏器指数等各指标方面均无显著性差异，证明高剂量能达到理想的治疗效果。中剂量组与空白组有一定的差异，但与阳性组无显著性差异，证明中剂量虽然有一定的治疗作用，但不及RFP和高剂量。低剂量显著性差异明显。可以得出高剂量、中剂量有较好的抗结核杆菌的作用，但中剂量效果次于RFP。因此，有必要进一步对中剂量进行抗菌筛选，确定抗菌范围，另外，高剂量、中剂量对其他耐药性结核杆菌的体内实验、有效成分、物质基础、抗菌机制，也有待一步的研究。

4 对实验性结核小鼠抗结核药物疗效的影响

4.1 材料与方法

4.1.1 实验材料

4.1.1.1 实验动物

昆明种小鼠，雌性，体重18～22g。四川省医学科学院四川省人民医院实验动物研究所，合格证号：SCXK(川)2008-15。

4.1.1.2 实验药物

实验配方：猫爪草24份、海浮石20份、蒸百部15份、白及15份、天门冬15份、川贝10份、紫河车10份、蛤蚧10份、三七6份、北沙参15份、天花粉15份，上述配方以重量份计算，按照常规方法煎煮，均制备成每毫升含生药1g的药液，所需药品均购自同仁堂药店成都分店。对照药物：利福平、异烟肼，购自成都锦华药业有限公司。

4.1.1.3 实验用菌

结核杆菌H37Rv株，由中国疾病预防控制中心临床分中心提供。

4.1.1.4 试剂

IFN-γ试剂盒、IgG试剂盒均购自美国ADL公司。

4.1.1.5 实验仪器

电子分析天平PA2003：上海天平仪器厂。电热恒温水浴锅DSY-2-4孔：北京国华医疗仪器厂。可调式移液器：芬兰Finnpipette公司。酶标仪：Model550MicroplateReader BIORAD公司。离心机LcgendRT+230V：北京雷勃尔，型号LDZ4-1.2。

4.1.2 实验方法

4.1.2.1 动物造模

参照文献(阎邦首.中草药抗结核作用的实验方法[J].中华结核病和呼吸系统疾病杂志，1980，3(2)：123.)固定小鼠，尾部用75％酒精消毒，每只小鼠尾静脉注射1mg/mL的结核杆菌悬液0.2mL，注射后穿刺部位压迫止血1min。

4.1.2.2 动物分组

动物造模后观察1天，选用符合要求的130只小鼠随机分为：模型组，实验小剂量+利福平小剂量组(简称：实验A组)，实验小剂量+异烟肼小剂量组(简称：实验B组)，实验中剂量+利福平大剂量组(简称：实验C组)，实验中剂量+异烟肼大剂量组(简称：实验D组)，利福平小、大剂量组，异烟肼小、大剂量组，另设空白组，模型组20只，其余每组12只。

4.1.2.3 给药方法

自由取水、饮食。造模后第2天给药，以临床用药剂量为标准，按小鼠与人的体表面积折算(0.0026)，空白对照组与模型组每日灌胃生理盐水0.1mL/10g，连续灌胃28天；各实验组按小鼠与人的体表面积折算，等剂量灌饲相应药液0.1mL/10g，每日1次联合组中药与西药间隔1h，连续灌胃28天。

4.1.2.4 标本采集与检测

各组小鼠均于末次给药测量体重后，在清醒状态下，摘眼球取血，装人肝素抗凝的EP管中。并分离肝、肺做病理切片；ELISA法检测小鼠血浆IFN-γ及IgG水平严格按说明书操作进行。

4.1.2.5 统计方法

计量资料结果以x±s表示。计数资料作秩和及等级秩和检验。

4.2 结果

4.2.1 各组小鼠体重、IFN-γ、小鼠IgG测定

表6 各实验组小鼠体重、IFN-γ、小鼠IgG的影响

注：与正常组比较，△△P<0.01，△P<0.05，P<0.05；与模型组比较，★★P<0.01，★P<0.05。

与空白对照组比较，模型组体重明显减轻，其有显著性差异(P<0.01)；和模型组比较，实验各组均能明显减轻体重下降，其有差异(P<0.05)；各治疗组比较，联合组与西药组之间无显著性差异(P>0.05)；实验C、D组减轻体重下降作用最明显，与利福平、异烟肼组比较其有差异(P<0.05)。

与空白对照组比较，模型组血浆IFN-γ明显降低，有显著性差异(P<0.01)；药物中剂量与利福平大剂量及异烟肼大剂量联合组有明显减轻血浆IFN-γ水平下降作用，有显著性差异(P<0.01)；药物小剂量与利福平小剂量及异烟肼小剂量联合组有减轻血浆IFN-r水平下降作用，有差异(P<0.05)；模型组血浆IgG显著低于正常对照组，有显著性差异(P<0.01)；而药物中剂量与利福平大剂量及异烟肼大剂量联合组较明显增加血浆IgG水平，有差异(P<0.05)；药物小剂量与利福平小剂量及异烟肼小剂量组有增加血浆IgG水平作用，有差异(P<0.05)。

4.2.2 肺、肝组织的病理情况

表7 各实验组的脏器病理结果(只，HE染色，n＝6)

注：HE染色：轻：细胞轻微肿胀；中：渗出，白细胞浸润；重：白细胞聚集，伴坏死灶。无病变为－；病变小于10％为+；10％～24％为++；25％～50％为+++；大于50％为++++。

由表7知模型组肝脏与其他组的炎症比较有显著性差异(χ²＝22.266，P＝0.004)；阳性组肝脏的炎症与药物中剂量加利福平、异烟肼组无差异(P>0.05)；利福平、异烟肼小剂量组肝脏的炎症重于药物中剂量加利福平、异烟肼大剂量组有差异(Z＝-2.218，P＝0.027)；模型组脾脏的炎症均重于其它各组有差异(χ²＝20.002，P＝0.01)；阳性组脾脏的炎症与药物小剂量加利福平、异烟肼小剂量组无差异(P>0.05)；模型组肺脏的炎症均重于其它各组有显著性差异(χ²＝24.99，P<0.01)，模型组肺与其他组比较有显著性差异(P<0.01)；阳性组肺脏的炎症与药物小剂量加利福平、异烟肼小剂量组无差异(P>0.05)；药物加利福平、异烟肼联合小剂量组肺脏的炎症重于联合大剂量组肺脏的炎症比较有差异(P<0.05)。

5 不同配方对实验性结核小鼠抗结核药物疗效的影响

根据前期上述研究结果，初步确定肺痨康的基本配方：猫爪草24g、海浮石20g、蒸百部15g、白及15g、天门冬15g、川贝10g、紫河车10g、蛤蚧10g、三七6g、北沙参15g、天花粉15g。由于中药化学成分复杂，加一味药物、或者减去某一味药物均可引起功效(作用)的改变，甚至是重大改变，而且各原料药间的剂量配比关系与药效存在着某种特定的对应关系。对此，在该配方基础上进行拆方及加减变化研究。拆方变化后配方为：(1)猫爪草24g、百部15g、天门冬15g、蛤蚧10g、三七6g；(2)海浮石20g、白及15g、川贝6g、北沙参15g、天花粉15g、紫河车10g；(3)猫爪草24g、海浮石20g、蒸百部15g、白及15g、天门冬15g、三七6g、北沙参15g、天花粉15g；(4)猫爪草24g、海浮石20g、百部15g、天门冬15g、蛤蚧10g、三七6g、白及15g、川贝6g、北沙参15g、天花粉15g、紫河车10g、阿胶10g；(5)天门冬15g、蒸百部15g、紫河车10g、阿胶10g、白及15g、天花粉15g、北沙参15g、蛤蚧10g、三七6g、猫爪草24g、海浮石20g、生地榆15g、茜草15g、黄精15g。

将拆方变化后的各个配方与基础配方进行疗效比较，实验用菌、试剂、仪器、实验方法、标本采集与检测方法均同实验四，结果显示上述各配方对肺结核均具有不同程度的治疗作用，其中第(2)、第(5)配方的疗效低于基础配方的疗效，第(1)、第(3)配方的疗效与基础配方的疗效接近，且无显著性差异，第(4)配方的疗效则优于基础配方。

6 不同配方对于醋酸模型小鼠的镇痛试验

6.1 试验材料

选用健康成年昆明小鼠70只，雌雄各半，体重20±2g。试验前将动物称重，编号，随机分成空白对照组、阿司匹林阳性对照组，5个配方组，一共7组，每组10只。

6.2 试验方法及步骤

A配方比例：猫爪草24g、百部15g、天门冬15g、蛤蚧10g、三七6g；B配方比例：海浮石20g、白及15g、川贝6g、北沙参15g、天花粉15g、紫河车10g；C配方比例：猫爪草24g、海浮石20g、蒸百部15g、白及15g、天门冬15g、三七6g、北沙参15g、天花粉15g；D配方比例：猫爪草24g、海浮石20g、百部15g、天门冬15g、蛤蚧10g、三七6g、白及15g、川贝6g、北沙参15g、天花粉15g、紫河车10g、阿胶10g；E配方比例：天门冬15g、蒸百部15g、紫河车10g、阿胶10g、白及15g、天花粉15g、北沙参15g、蛤蚧10g、三七6g、猫爪草24g、海浮石20g、生地榆15g、茜草15g、黄精15g。上述配方均按常规方法煎煮为浓度为1g/ml的药液，空白对照组采用蒸馏水灌胃给药，阳性对照组采用阿司匹林按照20mg/kg/天剂量灌胃，各配方组均按照50mg/kg/天剂量灌胃给药。连续灌胃5天后进行热板法镇痛实验，用秒表记录每只小鼠放入热板至小鼠出现舔足的时间(S)作为该小鼠的痛阀值。给药30分钟后，每只小鼠腹腔内注射0.2ml的0.6％醋酸溶液，观察记录注射醋酸溶液后30分钟扭体次数。

6.3 实验结果

各组经治疗后镇痛效果情况。结果见下表8。

表8 各组治疗后镇痛效果

与空白组比较，★P<0.05。

上述实验表明，A配方、D配方及E配方均具有止痛的作用，B配方、C配方则不具有止痛的效果。

7 不同配方对小鼠免疫功能的影响

实验动物：昆明小鼠60只，体重20±2g，鼠龄45～50天，雌雄各半，均由四川省医学科学院实验动物研究所提供，动物许可证号：SCXK(川)2012-26，在室温22-24℃，明暗周期12h/12h条件下饲养，自由饮水摄食。

实验方法：昆明小鼠，雌雄各半，按体重及性别随机分为正常对照组、5个实验配方组，各组配伍剂量参见实验六，按常规方法煎煮，制备为浓度为1g/ml的药液，空白对照组采用蒸馏水灌胃给药，各组动物按0.2ml/10g体重/天灌胃给药，正常对照组灌胃等量的生理盐水。连续给药8周后，观察各组对免疫器官的影响，考察指标为脾脏指数和胸腺指数。脾脏指数＝脾脏重量/体重×100％；胸腺指数＝胸腺重量/体重×100％，实验结果见表9。

表9 各组小鼠不同脏器指数的比较

注：与正常对照组比较，*P<0.05；**P<0.01.

由表9可知，与正常对照组比较，A配方、B配方、D配方均具有提高小鼠的脾脏指数和胸腺指数，说明具有提高机体免疫力的作用。

上述实验结果表明，A配方、D配方具有抗结核、止疼痛及提高机体免疫力的治疗作用；B配方对结核有一定治疗作用、可以提高机体免疫力的治疗作用，但不具备止疼痛的作用；C配方对结核有一定治疗作用、但不具备止疼痛、抗结核的作用；E配方具有一定的抗结核、止疼痛作用、但不具备提高免疫力的作用。

Claims (10)

1.一种治疗肺结核的药物组合物，其特征在于：它是由以下重量份数比的原料组成：猫爪草10～80份、百部8～60份、天门冬8～60份、蛤蚧5～50份、三七3～40份。

2.根据权利要求1所述的一种治疗肺结核的药物组合物，其特征在于：所述的各原料的重量份数比为：猫爪草20～60份、百部10～40份、天门冬10～40份、蛤蚧8～30份、三七5～30份。

3.根据权利要求1所述的一种治疗肺结核的药物组合物，其特征在于：所述的各原料的重量份数比为：猫爪草24份、百部15份、天门冬15份、蛤蚧10份、三七6份。

4.一种治疗肺结核的药物组合物，其特征在于：所述的各原料的重量份数比为：猫爪草10～80份、百部8～60份、天门冬8～60份、蛤蚧5～50份、三七3～40份、白及8～60份、川贝母3～40份、北沙参8～60份、海浮石8～60份、天花粉8～60份、紫河车5～50份。

5.根据权利要求4所述的一种治疗肺结核的药物组合物，其特征在于：所述的各原料的重量份数比为：猫爪草24份、百部15份、天门冬15份、蛤蚧10份、三七6份、白及15份、川贝母10份、北沙参15份、海浮石20份、天花粉15份、紫河车10份。

6.一种治疗肺结核的药物组合物，其特征在于：所述的各原料的重量份数比为：猫爪草10～80份、百部8～60份、天门冬8～60份、蛤蚧5～50份、三七3～40份、白及8～60份、川贝母3～40份、北沙参8～60份、海浮石8～60份、天花粉8～60份、紫河车5～50份、阿胶5～50份。

7.根据权利要求6所述的一种治疗肺结核的药物组合物，其特征在于：所述的各原料的重量份数比为：猫爪草24份、百部15份、天门冬15份、蛤蚧10份、三七6份、白及15份、川贝母6份、北沙参15份、海浮石20份、天花粉15份、紫河车10份、阿胶10份。

8.一种制备权利要求1～7中任意一项所述的治疗肺结核药物组合物的方法，其特征在于：它包括以下步骤：按重量比称取各原料，混合后加入药学上可接受的辅料制备成药学上常用的药物制剂。

9.根据权利要求8所述的一种治疗肺结核的药物组合物的制备方法，其特征在于：所述的药物制剂为片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、粉剂、汤剂或口服液。

10.如权利要求1～7中任意一项权利要求所述的药物组合物在制备治疗肺结核药物中的应用。