CN102727850B - 一种治疗艾滋病的药物组合物及其制备方法、质量控制方法和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种治疗艾滋病的药物组合物及其制备方法和用途。组合物的原料药由熟附子、淫羊藿、干姜、甘草、人参、丹参、虎杖、茯苓、黄柏、黄芩及Euphorbiasteroid组成。实验数据表明，本发明药物组合物制剂对猴艾滋病病毒感染恒河猴所致艾滋病模型猴具有显著的治疗效果，基于对艾滋病猴模型这种适宜艾滋病动物模型的疗效，本发明药物组合物制剂具有治疗人类艾滋病的用途。给予HIV感染者或艾滋病患者本发明药物组合物制剂，能够缓解病症，包括稳定或者提升HIV病毒感染者和艾滋病病人的CD4+T淋巴细胞计数、改善CD4+/CD8+比值水平，缓解临床症状体征、改善生存质量。

Description

一种治疗艾滋病的药物组合物及其制备方法、质量控制方法和用途
技术领域
本发明涉及一种药物组合物，特别涉及一种用于治疗治疗艾滋病的药物组合物。本发明还涉及该组合物的质量控制方法和用途。
背景技术
艾滋病是HIV感染引起的获得性免疫缺陷综合征，HIV感染进程和发病的不同阶段临床表现复杂多样，包括在后期发生的致命性恶性肿瘤和各类机会性感染。
人感染HIV-1后一般经7-12年进入发病期。照现行的诊疗标准，对于无症状且CD+T细胞数尚未大幅度降低（例如，仍处于300个每微升以上）的HIV病毒携带者，不建议给予抗病毒疗法，否则会使病人和社会承担诱发严重抗药性的巨大风险。根据近十年的临床实践，对于进入发病期特别是发病早、中期的艾滋病患者，在实施HAART主流疗法的同时，同时加服中药进行辅助治疗，已见到在改善乏力、腹泻、恶寒等并发症状、减少西药引起的毒副作用、提高患者治疗依从性、提高患者生存质量等方面的效果。中药应该能够成为艾滋病治疗的选项。 
天然有机化合物Euphorbiasteroid是本发明人发现具有抗HIV作用的一种续随子烷型二萜化合物，单独使用显示具有一定的抗HIV作用。经美国国家肿瘤研究所（NCI）测定，在体外对艾滋病病毒（HIV-1）的复制具有较强的抑制作用，治疗指数（半数细胞毒浓度/半数病毒复制抑制浓度）为600。
本发明人在CN 201210119628.4公开了一种药物组合物，该药物组合物具有一定的抗HIV活性，但是有待进一步提高其活性。
发明内容
本发明的一个目的在于提供一种治疗艾滋病的药物组合物。
本发明的另一个目的在于提供上述药物组合物的质量控制方法。
本发明的再一个目的在于提供上述药物组合物的在治疗艾滋病中的应用。
本发明所采取的技术方案是：
一种药物组合物，其原料药由以下质量份的：
熟附子：20～30份；
淫羊藿、干姜、甘草：各10～15份；
人参、丹参、虎杖、茯苓：各6～12份；
黄柏：2～5份；
黄芩：2～4份；
Euphorbiasteroid 0.1～0.2份组成。
特别的，原料药由以下质量份的：
熟附子：25份；
淫羊藿、干姜、甘草：各12.5份；
红参7.82 份、茯苓7.81 份、虎杖7.81 份、丹参7.81 份；
黄柏：3.75份；
黄芩：2.5份；
Euphorbiasteroid 0.18份组成。
优选的，除Euphorbiasteroid外，原料药的有效成分经水提，之后醇提得到。
上述药物组合物的制备方法，包括如下步骤：
1)  取原料药，用水煎煮，过滤，取滤液；
2)  将滤液离心，取上清液，浓缩，得水提浓液；
3)  在水提浓液中加入乙醇，搅拌，静置，之后离心，取上清液，去除乙醇，得到醇提物；
4)  将醇提物、Euphorbiasteroid与其他可接受的药用辅料，制备得到药物制剂。
制备步骤包括如下操作：
1)  取原料药，加水煎煮3次，每次加入20倍量的水，煎煮2h，放冷，滤过，合并滤液；
2)  将滤液离心，取上清液并浓缩至原料药重，得水提浓液；
3)  在水提浓液加入两倍体积浓度为95%（v/v）的乙醇，搅拌均匀，静置6至10小时，之后离心，取上清液，去除乙醇，浓缩干燥，得到醇提物。
上述药物组合物的质量控制方法，包括定性鉴定和指标化合物的定量测定，包括如下步骤：
1)  按照中国药典薄层色谱法项下规定的方法，组合物中的乌头碱限量，不得多于规定限度；
2)  按照中国药典薄层色谱法项下规定的方法，组合物中应至少检测出存在有淫羊藿、甘草、虎杖、干姜、人参、黄芩和Euphorbiasteroid；
3)  按照中国药典一部高效液相色谱法项下规定的方法，组合物中的双酯型生物碱乌头碱、新乌头碱和次乌头碱的总量不得超过规定限度；
4)  按照中国药典一部高效液相色谱法项下规定的方法，组合物中的淫羊藿苷、甘草酸、虎杖苷、黄芩苷和Euphorbiasteroid的含量不低于规定限度。
组合物为口服制剂，优选为胶囊剂、片剂、颗粒剂、冲剂、口服液、水滴丸或蜜丸。
本发明的有益效果是：
通过国际学术界公认的实验评价艾滋病药物体内作用的最佳艾滋病猴模型技术，证实了本发明特定的药物组合物对猴艾滋病病毒感染恒河猴所致艾滋病模型猴具有治疗作用。使用本发明的药物组合物口服治疗艾滋病猴模型，与病毒对照组比较，可提高CD4+T细胞比率达73%，提高CD4+T/CD8+T比值达80%。可见，本发明药物组合物拥有延长生存期、提高生存质量、改善和恢复T3、Cor水平、改善CD4+T细胞比率、改善CD4+/CD8+比值、抑制病毒的综合疗效指标中的全部或部分疗效指标，其效果好于CN 201210119628.4公开的组合物和Euphorbiasteroid。
基于对艾滋病猴模型这种适宜艾滋病动物模型的疗效，可以预见本发明药物组合物制剂具有治疗人类艾滋病的用途，给予HIV感染者和艾滋病患者本发明药物组合物制剂，能够缓解病症，包括稳定或者提升HIV病毒感染者和艾滋病病人的CD4+T淋巴细胞计数水平，缓解临床症状体征、改善生存质量。
具体实施方式
发明人观察研究了猴艾滋病病毒(SIV)感染的艾滋病猴模型的中医证型分布与演变规律，总结归纳出疾病的证型分布和演变规律：由感染初期阶段出现的烦躁等“实证”演变为中期阶段的摄食量减少、腹泻、活动减少，毛发脱落，体重增长缓慢等“脾虚证”，再发展成为晚期的肌肉萎缩、蜷缩、畏寒、精神萎靡不振、机体消瘦、体重急速下降、肢体蜷缩颤抖，甚至眼睑、脸部水肿等中医“脾肾阳虚证”表现。
对于艾滋病模型患猴，特别是能够反映和评价中医证特点的病症复合猴艾滋病模型患猴的实验治疗结果，辨证治疗优于非辨证治疗；温补肾阳法的疗效明显优于清热解毒法的疗效。温补肾阳法采用的中药应立“温补肾阳”原则为君（首要治则），“补益元气、补益脾阳”原则为臣（次要治则），以是否能够延长生存期，提高生存质量为目的，以能否改善和恢复T3、Cor水平、改善CD4+T细胞比率、改善CD4+/CD8+比值作为疗效指标。
一种药物组合物，其原料药由以下质量份的：
熟附子：20～30份；
淫羊藿、干姜、甘草：各10～15份；
人参、丹参、虎杖、茯苓：各6～12份；
黄柏：2～5份；
黄芩：2～4份；
Euphorbiasteroid 0.1～0.2份组成。
特别的，原料药由以下质量份的：
熟附子：25份；
淫羊藿、干姜、甘草：各12.5份；
红参7.82 份、茯苓7.81 份、虎杖7.81 份、丹参7.81 份；
黄柏：3.75份；
黄芩：2.5份；
Euphorbiasteroid 0.18份组成。
优选的，除Euphorbiasteroid外，原料药的有效成分经水提，之后醇提得到。
上述药物组合物的制备方法，包括如下步骤：
1)  取原料药，用水煎煮，过滤，取滤液；
2)  将滤液离心，取上清液，浓缩，得水提浓液；
3)  在水提浓液中加入乙醇，搅拌，静置，之后离心，取上清液，去除乙醇，得到醇提物；
4)  将醇提物、Euphorbiasteroid与其他可接受的药用辅料，制备得到药物制剂。
制备步骤包括如下操作：
1)  取原料药，加水煎煮3次，每次加入20倍量的水，煎煮2h，放冷，滤过，合并滤液；
2)  将滤液离心，取上清液并浓缩至原料药重，得水提浓液；
3)  在水提浓液加入两倍体积浓度为95%（v/v）的乙醇，搅拌均匀，静置6至10小时，之后离心，取上清液，去除乙醇，浓缩干燥，得到醇提物。
上述药物组合物的质量控制方法，包括定性鉴定和指标化合物的定量测定，包括如下步骤：
1)  按照中国药典薄层色谱法项下规定的方法，组合物中的乌头碱限量，不得多于规定限度；
2)  按照中国药典薄层色谱法项下规定的方法，组合物中应至少检测出存在有淫羊藿、甘草、虎杖、干姜、人参、黄芩和Euphorbiasteroid；
3)  按照中国药典一部高效液相色谱法项下规定的方法，组合物中的双酯型生物碱乌头碱、新乌头碱和次乌头碱的总量不得超过规定限度；
4)  按照中国药典一部高效液相色谱法项下规定的方法，组合物中的淫羊藿苷、甘草酸、虎杖苷、黄芩苷和Euphorbiasteroid的含量不低于规定限度。
组合物为口服制剂，优选为胶囊剂、片剂、颗粒剂、冲剂、口服液、水滴丸或蜜丸。
本发明药物组合物使用的药材如下，均应符合中国药典对药材的质量要求。
附子是毛茛科植物乌头Aconitum carmichaeli Debx.的子根的加工品。包括黑顺片和白附片。
淫羊藿是小檗科植物淫羊藿Epimedium brevicornum Maxim.、箭叶淫羊藿Epimedium sagittatum(Sieb.et.Zucc. ) Maxim. 、柔毛淫羊藿Epimedium pubescens Maxim. 、巫山淫羊藿Epimedium wushanense T. S. Ying 或朝鲜淫羊藿Epimedium koreanum Nakai 的地上部分。
干姜是姜科植物姜Zingiber officinale Rosc. 的干燥根茎。
甘草是豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch. 、胀果甘草Glycyrrhiza inflata Bat. 或光果甘草Glycyrrhiza glabra L. 的干燥根及根茎。
人参是五加科植物人参Panax ginseng C. A. Mey.的干燥根及根茎。包括生晒参和红参，优选红参。
丹参是唇形科植物丹参Salvia miotiorrhiza Bge.的干燥根及根茎。
虎杖是蓼科植物虎杖Polygonum cuspidatum Sieb. et Zucc.的干燥根及根茎。
茯苓是多孔菌科真菌茯苓Poria cocos (Schw.) Wolf.的干燥菌核。
黄柏是芸香科植物黄柏Phellodendron chinensis Schneid.的干燥树皮。
黄芩是唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根。
下面结合实施例，进一步说明本发明。
以下实施例中，如无特别说明，份数均指质量份，乙醇的浓度以体积浓度计。
实施例1 硬胶囊的制备
原料药组成：
熟附子25 份、淫羊藿12.5 份、干姜12.5 份、甘草12.5 份、红参7.82 份、茯苓7.81 份、虎杖7.81 份、丹参7.81 份、黄柏3.75 份、黄芩2.5 份、Euphorbiasteroid 0.18份。
实施例2
熟附子20份、淫羊藿12 份、干姜12 份、甘草10 份、红参10 份、茯苓10份、虎杖8 份、丹参10份、黄柏5 份、黄芩3 份、Euphorbiasteroid 0.15份。
实施例3
原料药组成：
熟附子30份、淫羊藿10 份、干姜12 份、甘草12 份、红参8 份、茯苓8份、虎杖7 份、丹参8份、黄柏2 份、黄芩3 份、Euphorbiasteroid 0.20份。
实施例4
原料药组成：
熟附子27 份、淫羊藿10 份、干姜12 份、甘草12 份、红参6 份、茯苓9 份、虎杖12 份、丹参6 份、黄柏4 份、黄芩2 份、Euphorbiasteroid 0.12份。
实施例5
原料药组成：
熟附子20 份、淫羊藿15 份、干姜10 份、甘草15 份、红参12 份、茯苓6 份、虎杖6份、丹参12 份、黄柏4 份、黄芩2 份、Euphorbiasteroid 0.10份。
实施例6
原料药组成：
熟附子27 份、淫羊藿10 份、干姜12 份、甘草12 份、红参6 份、茯苓9 份、虎杖12 份、丹参6 份、黄柏4 份、黄芩2 份、Euphorbiasteroid 0.16份。
原料药中药材有效成分的提取：
1)  照处方比例称取原料药中的各种中药材，加纯水煎煮3次，每次加入20倍量的纯水，煎煮2h，放冷，滤过，合并滤液；
2)  将滤液以15000 rpm的转速离心10分钟，取上清液，将上清液浓缩至药液体积以升计等于药材总质量以千克计（约与原中药材等量）； 
3)  加入两倍药液体积的含体积分数为95%的药用乙醇，搅拌均匀，静置6至10小时，以15000 rpm的转速离心，取上清液，减压下回收乙醇并减压下浓缩成稠膏，喷雾干燥，或在80℃以下真空干燥、粉碎，即得中药材有效成分的提取物。
药物制剂的制备：
硬胶囊：按上述方法，使用实施例1的原料药配比，提取得到原料药中药材的有效成分，记为药物组合物GZY提取物，提取物的得率为13.2%。将GZY提取物、Euphorbiasteroid与辅料混合均匀，过80目筛，制粒，加入硬脂酸镁混合均匀，装填得到硬胶囊，规格：0.5 g提取物/粒。制得的硬胶囊记为GZE硬胶囊。
经检验，测得本品含淫羊藿苷2.0 mg/g、含乌头碱为0、Euphorbiasteroid（C32H40O8）14.2 mg/g。
片剂：按上述方法，使用实施例1的原料药配比，提取得到原料药的有效成分，将提取物粉碎，过100目筛，与Euphorbiasteroid和辅料混合均匀，过80目筛，制粒，加硬脂酸镁，经60目筛整粒，压片，即得。
颗粒剂：按上述方法，使用实施例1的原料药配比，提取得到原料药的有效成分，加入Euphorbiasteroid、适量糖粉、苯甲酸钠和其他辅料，加纯水，加热至沸，搅拌下于80℃保温2h，冷却至室温，过滤，取滤液分装，即得。
质量控制方法：
取实施例1的方法制得的药物组合物胶囊内容物进行检验。 
（1）按照中国药典薄层色谱法项下规定的方法，本发明所说的中药制剂中熟附子的指标化合物的乌头碱限量，不得多于规定限度。具体方法如下：取胶囊内容物10.0 g，加氨试液10 mL，拌匀，放置2小时，加乙醚100 mL，分两次提取，每次振摇0.5小时，放置分层，取乙醚层蒸干，残渣用无水乙醇溶解使成1 mL，作为供试品溶液。取乌头碱对照品适量，加无水乙醇制成每1 mL含1.0 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10 μL、对照品5 μL，分别点于用0.1% 氢氧化钠溶液处理过的干燥硅胶G板上，以环己烷：乙酸乙酯：甲醇（6.4:3.6:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上出现的斑点应小于对照品斑点，或不出现斑点。表示按照此方法，每10 g内容物中的乌头碱可以不被检出；如果被检出，其中的乌头碱限度不得多于0.5 mg。
（2）按照中国药典薄层色谱法项下规定的方法，本发明所说的中药制剂中至少应该检查出如下药材的存在：淫羊藿、甘草、虎杖、干姜、人参、黄芩。本实施例以淫羊藿和甘草为例说明如下。其他药材参照药典质量检查标准，按照本领域专业人员能够理解的方法进行检测。其中，淫羊藿的检测方法为：取胶囊内容物5 g，加水20 mL，加热使溶解，放冷，加二氯甲烷脱脂，振摇2次，每次20mL；水层加正丁醇振摇提取3次，每次20 mL，合并正丁醇液，减压蒸干，残渣加甲醇5 mL使溶解，作为供试品溶液。取淫羊藿苷对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典一部附录VI B）试验，吸取供试品溶液及对照品溶液各5 μL，分别点于同一块硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-稀氨水（8.5 : 1.5 : 1.5）的上层为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛高氯酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与淫羊藿苷对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。其中，甘草的检测方法为：取胶囊内容物5 g，加水20 mL加热使溶解，放冷，加入氨水调pH9～10，放置，滤过，滤液加稀盐酸调pH 2~3，放置，滤过，留取固体不溶物，加正丁醇20 mL溶解，用正丁醇饱和水溶液萃取3次，每次20 mL，合并正丁醇液，蒸干，加甲醇2 mL溶解，作为供试品溶液。另取甘草酸单铵盐对照品，加甲醇制成每1 mL含2 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典一部附录）试验，吸取上述溶液各5 μL，分别点于同一块硅胶G薄层板上，以正丁醇－95％乙醇－氨水（5:1:2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
（3）按照中国药典高效液相色谱法项下规定的方法，本发明所说的中药制剂中熟附子中的双酯型生物碱乌头碱、新乌头碱和次乌头碱总量，不得超过规定限度。
以乌头碱为例，其测定方法如下：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.04 mol/L醋酸铵（53:47）为流动相，检测波长为235 nm。理论板数按乌头碱峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备：取乌头碱对照品适量，精密称定，加甲醇溶液制成每1 mL含20 μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备：取本品粉末，研细粉，取约5 g，精密称定， 置具塞锥形瓶中，加浓氨液4 mL，混匀， 加入乙醚30 mL，密塞，超声处理15分钟，放置过夜，搅拌，分取乙醚液，残渣加入乙醚提取3次（每次10 mL），合并乙醚液，减压蒸干，残渣加甲醇溶液溶解，定容至10 mL，摇匀，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定，即得。
（4）按照中国药典薄层色谱法项下规定的方法，制剂中应该检查出Euphorbiasteroid的存在。具体方法如下：取胶囊内容物0.2 g，加二氯甲烷20 mL，分两次提取，每次超声处理10分钟，滤过，取滤液浓缩至1 mL，作为供试品溶液。取本发明Euphorbiasteroid对照品适量，加二氯甲烷制成每1 mL含1.0 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10 μL、对照品10 μL，分别点于用硅胶G板上，以石油醚（沸程60-90℃）: 丙酮（7:3）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇试液，热风吹干，105℃烘烤至显色。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上出现颜色相同的斑点。
（2）按照中国药典一部高效液相色谱法项下规定的方法分析，制剂中Euphorbiasteroid的含量不得少于规定限度。具体方法如下：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(8: 2)为流动相；检测波长为270 nm，流速1 mL·min-1，柱温25℃。理论板数按Euphorbiasteroid峰计算应不低于3000。
对照品液的制备：取Euphorbiasteroid对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，即得。
供试品液的制备：取本品，研细，取约1 g，精密称定，置50 mL量瓶中，加甲醇40 mL，超声处理（功率250W，频率25 kHz）30分钟，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定：分别精密吸取对照品液与供试品液各10 μL，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品含Euphorbiasteroid（C32H40O8）的量，不得少于10 mg/g。
（5）按照中国药典高效液相色谱法项下规定的方法，本发明所说的中药制剂中其他一些中药材的指标化合物，不得少于规定限度，特别地，淫羊藿以淫羊藿苷计、甘草以甘草酸计、虎杖以虎杖苷计、黄芩以黄芩苷计，分别不得少于规定限度。
以淫羊藿为例，其测定方法如下：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(27:73)为流动相；检测波长为270 nm。理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于4000。
对照品溶液的制备：取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含0.1 mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备：取本品，研细，取约0.5 g，精密称定，置50 mL量瓶中，加稀乙醇45 mL，超声处理（功率250W，频率25 kHz）30分钟，放冷，加稀乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定，即得。
其他药材参照药典质量检查标准，按照本领域专业人员能够理解的方法进行检测。
本发明药物组合物的质量标准主要要求如下：
按照高效液相色谱法（中国药典一部附录）试验，本品含Euphorbiasteroid（C32H40O8）的量，不得少于10 mg/g；含附子双酯型生物碱以乌头碱（C34H47NO11）、新乌头碱（C33H45NO11）、次乌头碱（C33H45NO10）等的总量计，不得过0.10 mg/g；含淫羊藿以淫羊藿苷（C33H40O15）计，不得少于1.5 mg/g。
在猴艾滋病病毒 (SIV) 感染的艾滋病猴模型上的疗效试验结果
1、实验材料
1.1实验动物、场地及其等相关方面
实验动物选择：恒河猴，排除TB感染（PPD试验阴性和胸片X光片正常）、沙门氏菌、志贺氏菌和体内外寄生虫、血清SRV、血清STLV-I、血清SIV等项目检测阴性，外观健康，经体检无浅表淋巴结肿大的3-6岁龄，体重4～7Kg健康恒河猴35只。
实验场地：生物安全2级实验室。
动物的饲养和管理：动物单笼饲养在不锈钢笼具中，摄食专用的饲料及自由饮水。室温20-25℃，相对湿度50-70%。按照有关规定给予动物福利。
1.2 猴艾滋病病毒感染 
1.2.1  猴艾滋病病毒株：SIVmac239
1.2.2  感染剂量及感染途径：接种剂量1:3000，使用1640稀释液进行稀释，静脉注射感染，注射量1 mL。
1.3 实验动物分组与给药量：
雄性恒河猴随机分组。①组：健康空白对照组5只；②组：病毒感染模型对照组4只；③-④组：GZY提取物的低、高剂量组各4只，高剂量 2.0 g/kg.d，低剂量 1.0 g/kg.d；⑤组：Euphorbiasteroid组4只，剂量 15 mg/kg.d；⑥组：GZE硬胶囊内容物组4只，剂量 1.0 g/kg.d。
2、观察及检测指标
2.1    SIV病毒感染相关检测指标：
病毒载量、血常规、淋巴细胞亚群（CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+）。
2.2    病理检测：1、无菌手术取淋巴结，固定于10%中性甲醛液，石蜡包埋，H.E染色后光镜观察病理形态学。2、部分组织器官免疫组化检查。
2.3 死亡动物处理：试验期间死亡动物做尸检。
3、实验方案
（1）实验动物检疫合格后移入实验室适应环境，期间进行观察，测量基本数据，确定感染前各恒河猴临床基线特征。分组。 
（2）分组完成后用SIVmac 239株静脉注射进行SIV病毒感染，于感染后14天左右抽血测病毒载量判定感染情况，确认感染病毒。待感染后血浆病毒载量降至调定点（setpoint），即平台期时实施给药治疗8周。期间定期检测SIV病毒载量和其他指标。
4、实验结果
（1）一般情况，见表1。 表1结果说明本发明药物组合物有助于治疗，在治疗期间不治疗的SIV病毒模型组有1只患猴死亡（死亡率为1/4），健康对照组和给药治疗组均无患猴死亡。
Figure 2012102100170100002DEST_PATH_IMAGE002
（2）对CD4+比率变化的影响，见表2。 艾滋病发展进程中，无论人类还是其他灵长类动物的CD4+T淋巴细胞计数或比率都是呈现出渐进性下降，至患者死亡时可降低为0。提升、稳定、甚至延缓CD4+T淋巴细胞计数的降低，都反映出积极和有效的治疗效果。表2结果说明，与健康动物相比，SIV病毒模型对照组明显降低，符合艾滋病模型特征。与SIV病毒感染模型对照组相比，治疗4周或8周，Euphorbiasteroid药以及中药GZY提取物的小剂量、大剂量组能够促使CD4+比率保持稳定或略有提升；本发明GZE硬胶囊内容物组的CD4+比率，则由治疗前的26.36±9.85分别提升到31.51±16.03和38.51±15.93，分别提高了19.5%和46.1%；与同期SIV病毒感染模型对照组相比，分别提高了62.6%和73.2%，治疗8周时出现了显著改善（P<0.05）。其中治疗8周时的CD4+T细胞比率接近健康空白组（42.83±8.74）。说明本发明药物组合物具有明显改善CD4+T细胞比率、改善艾滋病猴细胞免疫的作用。
Figure 2012102100170100002DEST_PATH_IMAGE004
附注：◆ SIV病毒模型对照组在治疗4周时死亡1头，最后检测数据为31.89。
* 同组治疗前后比较P<0.05。
（3）对CD4+/CD8+比率变化的影响，见表3。结果说明，与健康动物相比，SIV病毒模型对照组明显降低，符合艾滋病模型特征，治疗4周或8周，本发明药物组合物GZY各剂量组对CD4/CD8比率未见明显改善，而Euphorbiasteroid组由治疗前的1.00±0.39，分别提升到1.43±0.75和1.54±0.29，出现了明显改善（P=0.087）；本发明GZE硬胶囊内容物组由治疗前的1.07±0.46，分别提升到1.33±0.74和1.62±0.83，分别提升了24.3%和51.4%；与同期SIV病毒感染模型对照组相比，分别提高了40%和80%，表明在治疗8周时出现了明显改善（P=0.06）。说明本发明药物组合物具有明显改善艾滋病猴CD4+/CD8+比值、改善细胞免疫的作用。
Figure DEST_PATH_IMAGE006
附注：◆ SIV病毒模型对照组在治疗4周时死亡1头，最后检测数据为0.75。*同组治疗前后比较P<0.05。GZ硬胶囊内容物组P=0.06，Euphorbiasteroid组：P=0.087。

Claims (8)

1.一种药物组合物，其原料药由以下质量份的：
熟附子：20～30份；
淫羊藿、干姜、甘草：各10～15份；
人参、丹参、虎杖、茯苓：各6～12份；
黄柏：2～5份；
黄芩：2～4份；
续随二萜酯 0.1～0.2份组成。
2.根据权利要求1所述的一种药物组合物，其原料药由以下质量份的：
熟附子：25份；
淫羊藿、干姜、甘草：各12.5份；
红参7.82 份、茯苓7.81 份、虎杖7.81 份、丹参7.81 份；
黄柏：3.75份；
黄芩：2.5份；
续随二萜酯 0.18份组成。
3.根据权利要求1或2所述的一种药物组合物，其特征在于：除续随二萜酯外，原料药的有效成分经水提，之后醇提得到。
4.权利要求1或2所述药物组合物的制备方法，包括如下步骤：
1)    取除续随二萜酯外的原料药，用水煎煮，过滤，取滤液；
2)    将滤液离心，取上清液，浓缩，得水提浓液；
3)    在水提浓液中加入乙醇，搅拌，静置，之后离心，取上清液，去除乙醇，得到醇提物；
4)    将醇提物、续随二萜酯与其他可接受的药用辅料混合，制备得到药物制剂。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：所述制备步骤包括如下操作：
1)        取原料药，加水煎煮3次，每次加入20倍量的水，煎煮2h，放冷，滤过，合并滤液；
2)        将滤液离心，取上清液并浓缩至原料药重，得水提浓液；
3)        在水提浓液加入两倍体积浓度为95%的乙醇，搅拌均匀，静置6至10小时，之后离心，取上清液，去除乙醇，浓缩干燥，得到醇提物。
6.权利要求1或2所述药物组合物在制备治疗艾滋病药物中的应用。
7.根据权利要求1或2所述药物组合物，其特征在于：所述组合物为口服制剂。
8.根据权利要求7所述药物组合物，其特征在于：口服制剂为胶囊剂、片剂、颗粒剂、冲剂、口服液、水滴丸或蜜丸。
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