CN100420680C - 一种千金子甾醇的提取、分离方法 - Google Patents
一种千金子甾醇的提取、分离方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及植物有效部位提取技术领域，具体涉及一种千金子甾醇的提取、分离方法。本发明要克服现有技术存在的工艺复杂、操作困难、收率低的问题。其解决方案，依次包括下述步骤，(1)提取：用低级性溶剂回流提取；(2)柱层析：分别收集含有千金子甾醇流分和不含千金子甾醇流分，含千金子甾醇流分进行浓缩结晶，不含千金子甾醇流分浓缩回收溶剂，浓缩膏弃掉；(3)结晶：将收集的千金子甾醇洗脱流份，常压蒸馏浓缩，室温结晶24～30小时，过滤得结晶粗品；(4)重结晶：将结晶粗品用低级性混合溶剂加热溶解、过滤，得结晶产品。本发明的优点是工艺简单，流程短；操作简单，成本低，收率高，纯度好，易于实现工业化生产。
Description
所属技术领域：
本发明涉及植物有效部位提取技术领域，具体涉及一种千金子甾醇的提取、分离方法。
背景技术：
千金子，英文名Caper Euphorbia Seed，拉丁名Semen Euphorbiae，为双子叶植物药大戟科植物续随子Euphorbia lathyris L.的干燥成熟种子。千金子甾醇(Euphobiasteroid)即环氧续随子醇苯乙酸二乙酸酯(5，10-Diacetyl-6，20-epoxy-3-phenylacetyl-lathyrol)，具有以下作用：1.泻下作用：强度约为蓖麻油的3倍。2.抗肿瘤作用：对急性淋巴细胞型及粒细胞型、慢性粒细胞型、急性单核细胞型白血病均有抑制作用。3.抑制色斑形成作用：主要用于护肤用品，治黑子、去疣赘、美白等作用。目前的提取方法是：原料经粉碎后用含水低级醇回流提取，浓缩回收醇后，将浓缩膏悬浮于水中，用正己烷萃取，萃取物再经柱层析、结晶得到千金子甾醇(Euphobiasteroid)。千金子甾醇目前提取方法存在的问题是：流程长、工艺复杂，溶剂种类多、操作困难，收率低。
发明内容：
本发明要提供一种千金子甾醇的提取、分离方法，以克服现有技术存在的工艺复杂、操作困难、收率低的问题。
为克服现有技术存在的问题，本发明的技术方案是：一种千金子甾醇的提取、分离方法，依次包括下述步骤，
(1)提取：
将千金子原料粉碎后用低级性溶剂回流提取，45～55℃渗漏提取，提取液减压蒸馏浓缩，得到浓缩膏(含溶质30～35％)；
(2)柱层析：
将所得浓缩膏上到等重量硅胶的层析柱上，然后用低级性混合溶剂进行梯度洗脱，TLC进行监控，分别收集含有千金子甾醇流分和不含千金子甾醇流分，含千金子甾醇流分进行浓缩结晶，不含千金子甾醇流分浓缩回收溶剂，浓缩膏弃掉；
(3)结晶：
将收集的千金子甾醇洗脱流份，常压蒸馏浓缩，当浓缩到有结晶析出时放液，放置到室温结晶24～30小时，过滤得结晶粗品，溶剂回收利用。
(4)重结晶：
将结晶粗品用低级性混合溶剂加热溶解、过滤，滤液浓缩到有结晶析出时放液，放置到室温结晶24小时，过滤得结晶产品。
上述步骤(2)中：浓缩膏上到层析柱上，进行吸附上样，上完后用洗脱剂正己烷∶乙酸乙酯＝95∶5洗脱杂质，当洗脱液中含有千金子甾醇时，改用正己烷∶乙酸乙酯＝90∶10洗脱千金子甾醇，并开始收集流出液，合并含千金子甾醇的收集液。
上述步骤(2)中展开剂体系为，石油醚∶乙酸乙酯＝4∶1；薄层板为，硅胶G薄层层析用硅胶；薄层板规格10cm×10cm，厚度0.1mm。
上述步骤中所述提取用低极性有机溶剂是指石油醚、6号油、正己烷或这些溶剂的任意组合。
上述步骤中所述层析用低极性混合有机溶剂是指石油醚、6号油或正己烷与乙酸乙酯或丙酮的适宜比例混合溶剂。
与现有技术相比，本发明的优点是：
本工艺简单，流程短；操作简单，不需要液液萃取，各步骤中所用溶剂基本相近，可互为利用，从而减少使用的溶剂种类，生产成本低，易于实现工业化生产；本发明收率高，纯度好。
具体实施方式：
以下实施例进一步对本发明进行详述，是有助于理解本发明内容。
实施例1：
(1)提取：取粉碎后的千金子原料500kg，投入到渗漏柱中，然后用50℃石油醚，渗漏提取，得提取液3000kg提取液，提取液减压蒸馏浓缩至400kg(含溶质30％)。放置室温，经高压液相(HPLC)检测得：提取液中含有千金子甾醇2.16kg，计算得提取率为92％。
(2)柱层析：浓缩膏上到装有150kg硅胶层析柱上，进行吸附上样，上完后用洗脱剂石油醚∶乙酸乙酯＝95∶5洗脱杂质，当洗脱液中含有千金子甾醇时，改用石油醚∶乙酸乙酯＝90∶10洗脱千金子甾醇，并开始收集流出液，合并含千金子甾醇的收集液。
展开剂体系为，石油醚∶乙酸乙酯＝4∶1；薄层板为，硅胶G薄层层析用硅胶；薄层板规格10cm×10cm，厚度0.1mm。
经高压液相(HPLC)检测得：千金子甾醇洗脱液中含千金子甾醇2.1kg。
(3)结晶：将收集的千金子甾醇洗脱液常压蒸馏浓缩，当浓缩液中出现结晶时放液，得浓缩膏13kg，放置到室温结晶24小时，过滤烘干得结晶1.68kg，母液浓缩回收溶剂，浓缩膏收集重新进行柱层析。
经高压液相(HPLC)检测得：结晶中千金子甾醇含量95％。
(4)重结晶：将所得1.68kg结晶加入20kg石油醚∶乙酸乙酯＝90∶10混合溶剂加热搅拌溶解1小时，过滤得溶解液，将溶解液浓缩至8kg，放置到室温结晶24小时，过滤结晶烘干得结晶产品1.43kg。结晶母液与层析收集液合并浓缩结晶。
经高压液相(HPLC)检测得：结晶中千金子甾醇含量98％。
本发明实例最终结果(反复层析结晶后)为：千金子甾醇结晶收率为0.29％，含量为98％。
实施例2：
(1)提取：取粉碎后的千金子原料500kg，投入到渗漏柱中，然后用50℃正己烷，渗漏提取，得提取液3500kg提取液，提取液减压蒸馏浓缩至420kg(含溶质33％)。放置室温，经高压液相(HPLC)检测得：提取液中含有千金子甾醇2.18kg，计算得提取率为95％。
(2)柱层析：浓缩膏上到装有150kg硅胶层析柱上，进行吸附上样，上完后用洗脱剂正己烷∶乙酸乙酯＝95∶5洗脱杂质，当洗脱液中含有千金子甾醇时，改用正己烷∶乙酸乙酯＝90∶10洗脱千金子甾醇，并开始收集流出液，合并含千金子甾醇的收集液。
展开剂体系为，石油醚∶乙酸乙酯＝4∶1；薄层板为，硅胶G薄层层析用硅胶；薄层板规格10cm×10cm，厚度0.1mm。
经高压液相(HPLC)检测得：千金子甾醇洗脱液中含千金子甾醇2.2kg。
(3)结晶：将收集的千金子甾醇洗脱液常压蒸馏浓缩，当浓缩液中出现结晶时放液，得浓缩膏13kg，放置到室温结晶24小时，过滤烘干得结晶1.7kg，母液浓缩回收溶剂，浓缩膏收集重新进行柱层析。
经高压液相(HPLC)检测得：结晶中千金子甾醇含量94.5％。
(4)重结晶：将所得1.7kg结晶加入20kg石油醚∶乙酸乙酯＝90∶10混合溶剂加热搅拌溶解1小时，过滤得溶解液，将溶解液浓缩至8kg，放置到室温结晶24小时，过滤结晶烘干得结晶产品1.45kg。结晶母液与层析收集液合并浓缩结晶。
经高压液相(HPLC)检测得：结晶中千金子甾醇含量98％。
本发明实例最终结果(反复层析结晶后)为：千金子甾醇结晶收率为0.29％，
含量为98.5％。
实施例3：
(1)提取：取粉碎后的千金子原料500kg，投入到渗漏柱中，然后用50℃正己烷，渗漏提取，得提取液3300kg提取液，提取液减压蒸馏浓缩至400kg(含溶质35％)。放置室温，经高压液相(HPLC)检测得：提取液中含有千金子甾醇2.17kg，计算得提取率为94％。
(2)柱层析：浓缩膏上到装有150kg硅胶层析柱上，进行吸附上样，上完后用洗脱剂正己烷∶丙酮＝96∶4洗脱杂质，当洗脱液中含有千金子甾醇时，改用正己烷∶乙酸乙酯＝92∶8洗脱千金子甾醇，并开始收集流出液，合并含千金子甾醇的收集液。
经高压液相(HPLC)检测得：千金子甾醇洗脱液中含千金子甾醇2.1kg。
(3)结晶：将收集的千金子甾醇洗脱液常压蒸馏浓缩，当浓缩液中出现结晶时放液，得浓缩膏13kg，放置到室温结晶24小时，过滤烘干得结晶1.62kg，母液浓缩回收溶剂，浓缩膏收集重新进行柱层析。
经高压液相(HPLC)检测得：结晶中干金子甾醇含量95.5％。
(4)重结晶：将所得1.62kg结晶加入25kg石油醚∶丙酮＝92∶8混合溶剂加热搅拌溶解1小时，过滤得溶解液，将溶解液浓缩至10kg，放置到室温结晶24小时，过滤结晶烘干得结晶产品1.40kg。结晶母液与层析收集液合并浓缩结晶。
经高压液相(HPLC)检测得：结晶中千金子甾醇含量98.4％。
本发明实例最终结果(反复层析结晶后)为：千金子甾醇结晶收率为0.28％，含量98.4％。
实施例4：
(1)提取：取粉碎后的千金子原料500kg，投入到渗漏柱中，然后用45℃6号油，渗漏提取，得提取液3500kg提取液，提取液减压蒸馏浓缩至420kg(含溶质31％)。放置室温，经高压液相(HPLC)检测得：提取液中含有千金子甾醇2.18kg，计算得提取率为95％。
(2)柱层析：浓缩膏上到装有150kg硅胶层析柱上，进行吸附上样，上完后用洗脱剂6号油∶乙酸乙酯＝95∶5洗脱杂质，当洗脱液中含有千金子甾醇时，改用6号油∶乙酸乙酯＝90∶10洗脱千金子甾醇，并开始收集流出液，合并含千金子甾醇的收集液。
展开剂体系为，石油醚∶乙酸乙酯＝4∶1；薄层板为，硅胶G薄层层析用硅胶；薄层板规格10cm×10cm，厚度0.1mm。
经高压液相(HPLC)检测得：千金子甾醇洗脱液中含千金子甾醇2.2kg。
(3)结晶：将收集的千金子甾醇洗脱液常压蒸馏浓缩，当浓缩液中出现结晶时放液，得浓缩膏13kg，放置到室温结晶24小时，过滤烘干得结晶1.7kg，母液浓缩回收溶剂，浓缩膏收集重新进行柱层析。
经高压液相(HPLC)检测得：结晶中千金子甾醇含量94.5％。
(4)重结晶：将所得1.7kg结晶加入25kg6号油∶乙酸乙酯＝90∶10混合溶剂加热搅拌溶解1小时，过滤得溶解液，将溶解液浓缩至8kg，放置到室温结晶28小时，过滤结晶烘干得结晶产品1.45kg。结晶母液与层析收集液合并浓缩结晶。
经高压液相(HPLC)检测得：结晶中千金子甾醇含量98.1％。
本发明实例最终结果(反复层析结晶后)为：千金子甾醇结晶收率为0.29％，含量为98.5％。
实施例5：
(1)提取：取粉碎后的千金子原料500kg，投入到渗漏柱中，然后用45℃混合溶剂(石油醚/6号油/正己烷＝1/1/1)渗露提取，得提取液3300kg提取液，提取液减压蒸馏浓缩至400kg(含溶质34％)。放置室温，经高压液相(HPLC)检测得：提取液中含有千金子甾醇2.17kg，计算得提取率为94％。
(2)柱层析：浓缩膏上到装有150kg硅胶层析柱上，进行吸附上样，上完后用洗脱剂混合溶剂∶丙酮＝96∶4洗脱杂质，当洗脱液中含有千金子甾醇时，改用正己烷：混合溶剂∶丙酮＝92∶8洗脱千金子甾醇，并开始收集流出液，合并含千金子甾醇的收集液。
经高压液相(HPLC)检测得：千金子甾醇洗脱液中含千金子甾醇2.1kg。
(3)结晶：将收集的千金子甾醇洗脱液常压蒸馏浓缩，当浓缩液中出现结晶时放液，得浓缩膏13kg，放置到室温结晶24小时，过滤烘干得结晶1.62kg，母液浓缩回收溶剂，浓缩膏收集重新进行柱层析。
经高压液相(HPLC)检测得：结晶中千金子甾醇含量95.5％。
(4)重结晶：将所得1.62kg结晶加入25kg混合溶剂∶丙酮＝92∶8混合溶剂加热搅拌溶解1小时，过滤得溶解液，将溶解液浓缩至10kg，放置到室温结晶24小时，过滤结晶烘干得结晶产品1.40kg。结晶母液与层析收集液合并浓缩结晶。
经高压液相(HPLC)检测得：结晶中千金子甾醇含量98.4％。
本发明实例最终结果(反复层析结晶后)为：千金子甾醇结晶收率为0.28％，含量98.4％。
Claims (5)
1. 一种千金子甾醇的提取、分离方法，依次包括下述步骤，
(1)提取：
将千金子原料粉碎后用低极性溶剂回流提取，45～55℃渗漏提取，提取液减压蒸馏浓缩，得到含溶质30～35％的浓缩膏；
(2)柱层析：
将所得浓缩膏上到等重量硅胶的层析柱上，然后用低极性混合溶剂进行梯度洗脱，TLC进行监控，分别收集含有千金子甾醇流分和不含千金子甾醇流分，含千金子甾醇流分进行浓缩结晶，不含千金子甾醇流分浓缩回收溶剂，浓缩膏弃掉；
(3)结晶：
将收集的千金子甾醇洗脱流份，常压蒸馏浓缩，当浓缩到有结晶析出时放液，放置到室温结晶24～30小时，过滤得结晶粗品，溶剂回收利用；
(4)重结晶：
将结晶粗品用低级性混合溶剂加热溶解、过滤，滤液浓缩到有结晶析出时放液，放置到室温结晶24小时，过滤得结晶产品。
2. 根据权利要求1所述的一种千金子甾醇的提取、分离方法，其特征在于，所述步骤(2)中：浓缩膏上到层析柱上，进行吸附上样，上完后用洗脱剂正己烷∶乙酸乙酯＝95∶5洗脱杂质，当洗脱液中含有千金子甾醇时，改用正己烷∶乙酸乙酯＝90∶10洗脱千金子甾醇，并开始收集流出液，合并含千金子甾醇的收集液。
3. 根据权利要求1或2所述的一种千金子甾醇的提取、分离方法，其特征在于，所述步骤(2)中展开剂体系为，石油醚∶乙酸乙酯＝4∶1；薄层板为，硅胶G薄层层析用硅胶；薄层板规格10cm×10cm，厚度0.1mm。
4. 根据权利要求3所述的一种千金子甾醇的提取、分离方法，其特征在于，所述步骤中所述提取用低极性有机溶剂是指石油醚、6号油、正己烷或这些溶剂的任意组合。
5. 根据权利要求4所述的一种于金子甾醇的提取、分离方法，其特征在于，所述步骤中所述层析用低极性混合有机溶剂是指：石油醚、6号油或正己烷与乙酸乙酯或丙酮的适宜比例混合溶剂。
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