CN102199159B - 从银杏根皮中分离、纯化银杏内酯c的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了从银杏根皮中分离、纯化银杏内酯C的方法，该方法包括：(1)用乙醇提取银杏树根皮；(2)提取液经真空浓缩去乙醇；(3)浓缩液上大孔树脂柱进行层析分离；(4)上柱后先用纯净水洗杂质，再用乙醇溶液洗脱；(5)将洗脱液真空浓缩至干，得黄色粗提物；(6)再将粗提物用水煮沸溶解，之后冷藏；(7)取上清液浓缩，真空抽滤，得银杏内酯混合粗晶；(8)粗晶再用乙醇溶解过饱和，冷藏结晶去除银杏内酯A和B；(9)母液再浓缩结晶即得银杏内酯C晶体；(10)再用乙醇多次重结晶，即得高纯度银杏内酯C晶体。本发明的方法可以从银杏根皮中分离纯化得到纯度大于97％的高纯度银杏内酯C，具有工艺流程简单、产品质量好、以及工业化生产成本低等优点。
Description
技术领域
本发明涉及银杏内酯，具体而言，涉及从银杏根皮中分离提纯高纯度银杏内酯C的方法。
背景技术
银杏内酯化合物属于萜类化合物，又称为银杏萜内酯，由倍半萜内酯和二萜内酯组成，是银杏叶中一类重要的活性成分。
银杏内酯C(ginkgolide C)为二萜内酯化合物，于1932年由S.Furukawa首次从银杏叶中分离出来，1967年才由K.Nakanish、M.maruyama和K.Okabe等人进一步分离和确定其化学结构，银杏内酯类化合物的分子骨架由20个碳原子组成，具有6个五元环，其中有2个五元碳环，3个五元内酯环，1个四氢呋喃环，2个五元碳环以螺环的形式连接在一起，其余的环以稠合的方式连接，形成一个如下的刚性笼状的特殊立体化学结构。
银杏内酯均具有强血小板活化因子拮抗剂，是银杏植株各部位中特殊活性成分，其中在银杏根皮中含量最高，约为银杏叶含量的3倍左右。银杏内酯化合物为白色结晶，味苦，熔点为300℃左右，因分子 中含有羟基和多个含氧酯基，比一般的倍半萜和二萜类化合物的极性大，易溶于乙醇、丙酮、丁酮、乙酸乙酯、二甲基亚砜等有机溶剂中。
银杏内酯类化合物对浓酸和强氧化剂很稳定，用浓硝酸溶解银杏内酯类化合物后蒸发至干，其内酯仍不破坏。银杏内酯类化合物分子中含有多个内酯结构。与碱作用生成盐，可溶于水。将生成的盐用酸酸化，则生成原来的内酯而不溶于水，却溶解于有机溶剂，这一特性可用于银杏内酯的提取分离。
目前，对银杏叶中银杏内酯分离纯化工艺研究较多，但对于从银杏根皮中分离纯化银杏内酯的报道较少。从银杏叶中提取的银杏内酯大多是在提取后柱分离再采用高效液相制备分离银杏内酯，使其纯度达到95％；即大孔吸附树脂在工艺过程中只起到除杂和富集的作用，并未起到真正的纯化作用，C18柱的应用增加了工艺流程及生产成本，使整个分离纯化工艺相对复杂、得率降低、成本较高、难以适应大规模生产。从银杏根皮中分离纯化银杏内酯的专利申请仅有201010294667.9号《一种从银杏树根皮中提取银杏内酯A、C的制作工艺》，但该技术方案得到的是银杏内酯A、C的混合物，并不能直接得到高纯度的银杏内酯C。
发明内容
本发明目的在于提供从银杏根皮中分离、纯化银杏内酯C的方法，是适合工业化生产的分离纯化银杏内酯C的简便方法，以解决现有技术中流程复杂、得率低、分离纯化选择性差、以及工业化生产成本高、不适宜直接用于医药原料的缺点。
发明人提供的方法是通过以下步骤来实现的：
(1)以银杏根皮为原料，用质量分数50％的乙醇进行提取；
(2)提取液经真空浓缩去乙醇；
(3)浓缩液上大孔树脂柱进行层析分离；
(4)上柱后先用2倍柱体积纯净水洗杂质，再用质量分数为80％～95％的乙醇溶液洗脱；
(5)将洗脱液真空浓缩至干，得黄色粗提物；
(6)再将粗提物用水煮沸溶解，之后冷藏；
(7)取上清液浓缩到原液体积的1/5，有内酯颗粒大量出现，采用滤纸真空抽滤，即得白色银杏内酯混合粗晶；
(8)粗晶再采用质量分数为95％的乙醇溶解过饱合冷藏结晶去除银杏内酯A和银杏内酯B；
(9)母液再浓缩结晶即得含量大于80％银杏内酯C晶体；
(10)再用乙醇多次重结晶，即得高纯度的银杏内酯C晶体。
上述第1步提取过程中采用料液比为1∶8加入质量分数50％的乙醇在70℃下加热提取2小时；
上述第2步浓缩时要求真空度为0.08MPa、温度为60至70℃下浓缩至无醇味，约为原提取液体积1/3。
上述第3步上柱层析过程中，所述树脂型号为DM130或D101或AB-8。
上述第4步中，用于除杂的纯净水为中性，水的用量为2倍柱体积；所述用于洗脱的质量分数为80％～90％的乙醇用量为3～4倍柱体积。
上述第5步中，浓缩时真空度为0.08MPa，温度为60℃至70℃。
上述第6步，所述冷藏时间为12小时，温度为2℃～6℃。
上述第7步中，浓缩的真空度控制在0.08MPa，温度控制在60℃。
上述第10步中，所述重结晶的次数为3次。
发明人指出：在第1步提取过程中，采用质量分数为50％的乙醇比用 水提好，一是提取内酯提取率比水高；二是水提液中蛋白、多糖物质多，不利于上柱，而采用醇水液可以减少水提液中蛋白、多糖物质，从而降低溶液粘性，有利于上柱分离。
发明人又指出：在第8步中粗晶再采用质量分数为95％的乙醇溶解过饱合，按内酯的极性分步结晶去除银杏内酯A和银杏内酯B，先结出银杏内酯B，母液适当浓缩则结出银杏内酯A，而母液中主要是银杏内酯C和少量的银杏内酯A；再次浓缩就可得银杏内酯C 80％以上的晶体，其中有低于5％的银杏内酯A。
本发明的方法可以从银杏根皮中分离纯化得到纯度大于97％的高纯度银杏内酯C，具有工艺流程简单、产品质量好、以及工业化生产成本低等优点。
具体实施方式
以下实例可以进一步说明本发明：
实施例1
(1)取银杏根或皮100kg，加入800L50％乙醇在70℃加热提取2小时；
(2)提取液经真空浓缩去乙醇，浓缩时真空度为0.08MPa，温度为60至70℃，浓缩至无醇味，约为200L。
(3)浓缩液上大孔树脂柱进行层析分离，树脂型号为AB-8，树脂量为100kg，柱径高比为1∶8或1∶10；
(4)上柱后先用200L纯净水洗杂质，再用300L至400L倍柱体积的80％～95％乙醇溶液洗脱；
(5)将洗脱液真空浓缩，浓缩时真空度为0.08Mpa，温度为60至70℃，得红综色浸膏；
(6)再将红综色浸膏水煮沸溶解，溶液2～6℃冷藏一晚；
(7)取上清液浓缩到原液体积的1/5，有内酯颗粒大量出现，采用滤纸真空抽滤，即得白色银杏内酯A、B、C混合粗晶；
(8)粗晶再采用质量分数为95％的乙醇溶解过饱合，分步结晶去除银杏内酯A和银杏内酯B；
(9)母液再浓缩至有大量晶体出现，经抽滤即得含量大于80％银杏内酯C晶体；
(10)再用95％乙醇溶解，多次重结晶，即得高纯度的银杏内酯C晶体110g。
实施例2
(1)取银杏根皮50kg，加入500L水同实施例1提取条件提取；
(2)滤液上大孔树脂柱，用型号为D101树脂进行动态吸附分离；
(3)-(9)同实施例1，制得纯度97％以上的银杏内酯C晶体50g。
Claims (9)
1.从银杏根皮中分离、纯化银杏内酯C的方法，其特征包括以下步骤：
(1)以银杏根皮为原料，用质量分数50％的乙醇进行提取；
(2)提取液经真空浓缩去乙醇；
(3)浓缩液上大孔树脂柱进行层析分离；
(4)上柱后先用2倍柱体积纯净水洗杂质，再用质量分数为80％～95％的乙醇溶液洗脱；
(5)将洗脱液真空浓缩至干，得黄色粗提物；
(6)再将粗提物用水煮沸溶解，之后冷藏；
(7)取上清液浓缩到原液体积的1/5，有内酯颗粒大量出现，采用滤纸真空抽滤，即得白色银杏内酯混合粗晶；
(8)采用质量分数为95％的乙醇溶解混合粗晶至过饱合，按内酯的极性分步结晶，先结出银杏内酯B，母液浓缩则结出银杏内酯A，而母液中主要是银杏内酯C和少量的银杏内酯A；
(9)母液再浓缩结晶即得含量大于80％银杏内酯C晶体；
(10)再用乙醇多次重结晶，即得高纯度的银杏内酯C晶体。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述第1步提取过程中，采用料液比为1∶8加入质量分数50％的乙醇在70C下加热提取2小时。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述第2步浓缩中，要求在真空度为0.08MPa、温度为60至70C下浓缩至无醇味。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述第3步上柱层析过程中，所用树脂型号为DM130或D101或AB-8。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述第4步中，用于除杂的纯净水为中性，水的用量为2倍柱体积；所述用于洗脱的质量分数为80％～90％的乙醇用量为3～4倍柱体积。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述第5步中，浓缩时真空度为0.08MPa，温度为60至70℃。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述第6步，所述冷藏时间为12小时，温度为2～6℃。
8.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述第7步中，浓缩的真空度控制在0.08MPa，温度控制在60C。
9.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述第10步中，所述重结晶的次数为3次。
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