WO2012126308A1 - 从银杏根皮中分离、纯化银杏内酯c的方法 - Google Patents

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ginkgolides
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何珺
康冀川
杨佳年
钱一鑫
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贵州大学
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D493/00—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system
    • C07D493/22—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system in which the condensed system contains four or more hetero rings

Definitions

  • the present invention relates to ginkgolides, and in particular to a method for separating and purifying high-purity ginkgolides c from ginkgo root bark. Background technique
  • Ginkgolide compounds belong to the class of terpenoids, also known as ginkgo lactones. They are composed of sesquiterpene lactones and diterpene lactones and are an important active ingredient in ginkgo leaves.
  • Ginkgolide C is a diterpene lactone compound, which was first isolated from Ginkgo biloba leaves by S. Furukawa in 1932. It was further separated by K. Nakanish, M. Maruyama and O. Okabe in 1967. Determine its chemical structure, the molecular skeleton of ginkgolides is composed of 20 carbon atoms, with 6 five-membered rings, including two five-membered carbon rings, three five-membered lactone rings, and one tetrahydrofuran ring. The five-membered carbon rings are connected together in the form of a spiro ring, and the remaining rings are connected in a fused manner to form a special rigid chemical structure of the following rigid cage.
  • Ginkgolide A OH HH Ginkgolide B OH OH H Ginkgolide C OH OH OH Ginkgolide has strong platelet activating factor antagonist, which is a special active ingredient in various parts of Ginkgo biloba.
  • the highest content in Ginkgo biloba root is about 3 times of Ginkgo biloba.
  • Ginkgolide compound is white crystal, bitter taste, melting point is about 300 °C, because the molecule contains hydroxyl group and multiple oxygen-containing ester groups, it is more polar than ordinary sesquiterpenoids and diterpenoids, soluble in In an organic solvent such as ethanol, acetone, butanone, ethyl acetate or dimethyl sulfoxide.
  • Ginkgolide compounds are stable to concentrated acids and strong oxidizing agents.
  • the ginkgolides are dissolved in concentrated nitric acid and evaporated to dryness. The lactones are not destroyed.
  • the ginkgolides have a plurality of lactone structures in their molecules. It reacts with a base to form a salt, which is soluble in water. Acidification of the resulting salt with an acid produces the original lactone which is insoluble in water but soluble in an organic solvent. This property can be used for the extraction and separation of ginkgolides.
  • the invention aims to provide a method for separating and purifying ginkgolide C from ginkgo root bark, which is a simple method for separating and purifying ginkgolide c suitable for industrial production, so as to solve the process in the prior art. It has the disadvantages of low yield, low yield, poor selectivity for separation and purification, high industrial production cost, and unsuitability for direct use in pharmaceutical raw materials.
  • the ratio of the feed liquid to the first step is 1: 8 and the mass fraction of 50% ethanol is heated and extracted at 70 ° C for 2 hours;
  • the concentration is required to be 0.08 MPa, and the temperature is 60 to 70 ° C to concentrate to an alcohol-free taste, which is about 1/3 of the original extract volume.
  • the resin type is DM130 or D101 or AB-8.
  • the distilled water used for impurity removal is neutral, and the amount of water is 2 column volumes;
  • the amount of ethanol used for elution is 80% to 90%, and the amount of ethanol is 3 to 4 column volumes.
  • the degree of vacuum during concentration is 0.08 MPa, and the temperature is 60 ° C to 70 ° C.
  • the refrigerating time is 12 hours, and the temperature is 2 ° C ⁇ 6 ° C.
  • the degree of vacuum of the concentration is controlled at 0.08 MPa, and the temperature is controlled at 60 °C.
  • the number of recrystallizations is three.
  • step 1 In the extraction process of step 1, the ethanol with a mass fraction of 50% is better than water.
  • the extraction rate of lactone is higher than that of water;
  • the second is that the protein and polysaccharide substances in the aqueous extract are more than Conducive to the upper column, and the use of alcohol liquid can reduce the protein and polysaccharide substances in the aqueous extract, thereby reducing the viscosity of the solution, which is conducive to the separation of the upper column.
  • the inventor also pointed out:
  • the coarse crystal is further dissolved and saturated with 95% by mass of ethanol, and the ginkgolides A and ginkgolides B are removed by stepwise crystallisation according to the polarity of the lactone.
  • Ginkgolide B the mother liquor is properly concentrated to produce ginkgolides A, while the mother liquor is mainly ginkgolides C and a small amount of ginkgolides A; again concentrated to obtain more than 80% of the crystals of ginkgolides C, among which Less than 5% of ginkgolides A.
  • the method of the invention can separate and purify the high-purity ginkgolides C with a purity of more than 97% from the roots of ginkgo biloba, and has the advantages of simple process flow, good product quality, and low industrial production cost.
  • the coarse crystal is further dissolved and saturated with ethanol having a mass fraction of 95%, and the ginkgolides A and ginkgolides B are removed by stepwise crystallization;

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  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)

Description

从银杏根皮中分离、 纯化银杏内酯 c的方法
技术领域
本发明涉及银杏内酯， 具体而言， 涉及从银杏根皮中分离提纯高纯度 银杏内酯 c的方法。 背景技术
银杏内酯化合物属于萜类化合物， 又称为银杏萜内酯， 由倍半萜 内酯和二萜内酯组成， 是银杏叶中一类重要的活性成分。 银杏内酯 C ( ginkgolide C) 为二萜内酯化合物， 于 1932 年由 S. Furukawa首次从银杏叶中分离出来， 1967年才由 K. Nakanish, M. maruyama和 Κ· Okabe等人进一步分离和确定其化学结构， 银杏内酯类 化合物的分子骨架由 20个碳原子组成， 具有 6个五元环， 其中有 2个 五元碳环， 3个五元内酯环， 1个四氢呋喃环， 2个五元碳环以螺环的 形式连接在一起， 其余的环以稠合的方式连接， 形成一个如下的刚性 笼状的特殊立体化学结构。
Figure imgf000002_0001
银杏内酯 A OH H H 银杏内酯 B OH OH H 银杏内酯 C OH OH OH 银杏内酯均具有强血小板活化因子拮抗剂， 是银杏植株各部位中 特殊活性成分， 其中在银杏根皮中含量最高， 约为银杏叶含量的 3 倍 左右。 银杏内酯化合物为白色结晶， 味苦， 熔点为 300 °C左右， 因分子 中含有羟基和多个含氧酯基， 比一般的倍半萜和二萜类化合物的极性 大， 易溶于乙醇、 丙酮、 丁酮、 乙酸乙酯、 二甲基亚砜等有机溶剂中。
银杏内酯类化合物对浓酸和强氧化剂很稳定， 用浓硝酸溶解银杏 内酯类化合物后蒸发至干， 其内酯仍不破坏。 银杏内酯类化合物分子 中含有多个内酯结构。 与碱作用生成盐， 可溶于水。 将生成的盐用酸 酸化， 则生成原来的内酯而不溶于水， 却溶解于有机溶剂， 这一特性 可用于银杏内酯的提取分离。
目前， 对银杏叶中银杏内酯分离纯化工艺研究较多， 但对于从银杏根 皮中分离纯化银杏内酯的报道较少。 从银杏叶中提取的银杏内酯大多是在 提取后柱分离再釆用高效液相制备分离银杏内酯，使其纯度达到 95 % ; 即 大孔吸附树脂在工艺过程中只起到除杂和富集的作用， 并未起到真正的纯 化作用， C18柱的应用增加了工艺流程及生产成本， 使整个分离纯化工艺相 对复杂、 得率降低、 成本较高、 难以适应大规模生产。 从银杏根皮中分离 纯化银杏内酯的专利申请仅有 201010294667. 9号《一种从银杏树根皮中提 取银杏内酯 A、 C的制作工艺》 ， 但该技术方案得到的是银杏内酯 A、 C的混 合物， 并不能直接得到高纯度的银杏内酯 C。
发明内容
本发明目的在于提供从银杏根皮中分离、 纯化银杏内酯 C的方法， 是适 合工业化生产的分离纯化银杏内酯 c的简便方法，以解决现有技术中流程复 杂、 得率低、 分离纯化选择性差、 以及工业化生产成本高、 不适宜直接用 于医药原料的缺点。
发明人提供的方法是通过以下步骤来实现的：
( 1 ) 以银杏根皮为原料， 用质量分数 50%的乙醇进行提取；
(2)提取液经真空浓缩去乙醇；
( 3) 浓缩液上大孔树脂柱进行层析分离；
(4) 上柱后先用 2倍柱体积纯净水洗杂质， 再用质量分数为 80% ~ 95%的乙醇溶液洗脱；
(5)将洗脱液真空浓缩至干， 得黄色粗提物；
(6)再将粗提物用水煮沸溶解， 之后冷藏；
(7)取上清液浓缩到原液体积的 1/5, 有内酯颗粒大量出现， 釆用滤 纸真空抽滤， 即得白色银杏内酯混合粗晶；
(8)粗晶再釆用质量分数为 95%的乙醇溶解过饱合冷藏结晶去除银 杏内酯 A和银杏内酯 B;
( )母液再浓缩结晶即得含量大于 80%银杏内酯 C晶体；
( 10)再用乙醇多次重结晶， 即得高纯度的银杏内酯 C晶体。
上述第 1步提取过程中釆用料液比为 1： 8加入质量分数 50%的乙醇 在 70°C下加热提取 2小时；
上述第 2步浓缩时要求真空度为 0.08MPa、温度为 60至 70°C下浓缩至 无醇味， 约为原提取液体积 1/3。
上述第 3步上柱层析过程中， 所述树脂型号为 DM130或 D101或 AB-8。 上述第 4步中， 用于除杂的蒸馏水为中性， 水的用量为 2倍柱体积； 所述用于洗脱的质量分数为 80% ~ 90%的乙醇用量为 3~4倍柱体积。 上述第 5步中， 浓缩时真空度为 0.08MPa, 温度为 60°C至 70°C。
上述第 6步， 所述冷藏时间为 12小时， 温度为 2°C ~6°C。
上述第 7步中， 浓缩的真空度控制在 0.08MPa, 温度控制在 60°C。 上述第 10步中， 所述重结晶的次数为 3次。
发明人指出： 在第 1步提取过程中， 釆用质量分数为 50%的乙醇比用 水提好， 一是提取内酯提取率比水高； 二是水提液中蛋白、 多糖物质多， 不利于上柱， 而釆用醇水液可以减少水提液中蛋白、 多糖物质， 从而降低 溶液粘性， 有利于上柱分离。
发明人又指出： 在第 8步中粗晶再釆用质量分数为 95%的乙醇溶解过 饱合， 按内酯的极性分步结晶去除银杏内酯 A和银杏内酯 B, 先结出银杏 内酯 B, 母液适当浓缩则结出银杏内酯 A, 而母液中主要是银杏内酯 C和少 量的银杏内酯 A; 再次浓缩就可得银杏内酯 C 80%以上的晶体， 其中有低 于 5%的银杏内酯 A。
本发明的方法可以从银杏根皮中分离纯化得到纯度大于 97%的高纯度 银杏内酯 C, 具有工艺流程简单、 产品质量好、 以及工业化生产成本低等 1¾点。
具体实施方式
以下实例可以进一步说明本发明：
实施例 1
( 1 )取银杏根或皮 100kg,加入 800L50%乙醇在 70°C加热提取 2小时； (2)提取液经真空浓缩去乙醇， 浓缩时真空度为 0.08MPa, 温度为 60 至 70°C，浓缩至无醇味， 约为 200L。
( 3 )浓缩液上大孔树脂柱进行层析分离， 树脂型号为 AB-8,树脂量为 100kg, 柱径高比为 1： 8或 1 ： 10;
( 4 )上柱后先用 200L纯净水洗杂质， 再用 300L 至 400L倍柱体积的 80% - 95%乙醇溶液洗脱；
( 5 )将洗脱液真空浓缩， 浓缩时真空度为 0.08Mpa, 温度为 60至 70 °C，得红综色浸膏；
( 6 )再将红综色浸膏水煮沸溶解， 溶液 2 ~ 6°C冷藏一晚；
( 7 )取上清液浓缩到原液体积的 1/5, 有内酯颗粒大量出现， 釆用滤 纸真空抽滤， 即得白色银杏内酯 A、 B、 C混合粗晶；
( 8 )粗晶再釆用质量分数为 95%的乙醇溶解过饱合， 分步结晶去除 银杏内酯 A和银杏内酯 B;
( 9 )母液再浓缩至有大量晶体出现， 经抽滤即得含量大于 80%银杏 内酯 C晶体；
( 10 )再用 95%乙醇溶解， 多次重结晶， 即得高纯度的银杏内酯 C晶 体 110g。
实施例 2
( 1 )取银杏根皮 50kg, 加入 500L水同实施例 1提取条件提取；
( 2 )滤液上大孔树脂柱，用型号为 D101树脂进行动态吸附分离；
( 3 ) - ( 9 ) 同实施例 1, 制得纯度 97%以上的银杏内酯 C晶体 50g。

Claims

权 利 要 求 书
1.从银杏根皮中分离、 纯化银杏内酯 c的方法， 其特征包括以下步骤:
( 1 ) 以银杏根皮为原料， 用质量分数 50%的乙醇进行提取；
(2)提取液经真空浓缩去乙醇；
( 3) 浓缩液上大孔树脂柱进行层析分离；
(4)上柱后先用 2倍柱体积纯净水洗杂质， 再用质量分数为 80%~95% 的乙醇溶液洗脱；
(5)将洗脱液真空浓缩至干， 得黄色粗提物；
(6)再将粗提物用水煮沸溶解， 之后冷藏；
(7)取上清液浓缩到原液体积的 1/5, 有内酯颗粒大量出现， 釆用滤 纸真空抽滤， 即得白色银杏内酯混合粗晶；
(8)粗晶再釆用质量分数为 95%的乙醇溶解过饱合冷藏结晶去除银杏 内酯 A和银杏内酯 B;
( )母液再浓缩结晶即得含量大于 80%银杏内酯 C晶体；
( 10)再用乙醇多次重结晶， 即得高纯度的银杏内酯 C晶体。
2.如权利要求 1所述的方法， 其特征在于所述第 1步提取过程中， 釆 用料液比为 1： 8加入质量分数 50%的乙醇在 70°C下加热提取 2小时。
3.如权利要求 1所述的方法， 其特征在于所述第 2步浓缩中， 要求在 真空度为 0.08MPa、 温度为 60至 70°C下浓缩至无醇味。
4.如权利要求 1所述的方法， 其特征在于所述第 3步上柱层析过程中， 所用树脂型号为 DM130或 D101或 AB-8。
5.如权利要求 1所述的方法， 其特征在于所述第 4步中， 用于除杂的 蒸馏水为中性， 水的用量为 2倍柱体积； 所述用于洗脱的质量分数为 80%~ 90%的乙醇用量为 3~4倍柱体积。
6.如权利要求 1所述的方法， 其特征在于所述第 5步中， 浓缩时真空 度为 0.08MPa, 温度为 60至 70°C。
7.如权利要求 1所述的方法， 其特征在于所述第 6步， 所述冷藏时间 为 12小时， 温度为 2~6°C。
8.如权利要求 1所述的方法， 其特征在于所述第 7步中， 浓缩的真空 度控制在 0.08MPa, 温度控制在 60°C。
9.如权利要求 1所述的方法， 其特征在于所述第 10步中， 所述重结晶
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