CN109970838B - 一种长梗冬青苷的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种长梗冬青苷的制备方法。该方法以救必应药材为原料，经乙醇水溶液加热回流提取，水沉，滤液聚酰胺柱吸附，水洗脱除杂质，乙醇溶液洗脱，采用30‑60％乙醇重结晶即得。本发明方法相对于现有技术，长产品产率纯度明显提高。采用HPLC外标法测定，所得到的长梗冬青苷产品纯度达95％以上。且操作简单，无特殊及有毒溶剂，环保，成本低，周期短，有利于工业化生产。

Description

一种长梗冬青苷的制备方法

技术领域

本发明涉及中药材有效成分的分离技术，具体涉及一种长梗冬青苷的制备方法。

背景技术

铁冬青(Ilex rotunda Thunb)是一种冬青科的常绿灌木或者乔木，是中国南方广泛种植的景观或经济作物。救必应是铁冬青的干燥树皮，是一种传统中药，清热解毒，利湿止痛，可以用于治疗感冒、咽喉炎、急性胃肠炎、痢疾、扁桃体炎和心血管疾病，并且对多种需氧菌和厌氧菌有较好的抑制效果。现代药理学表明，救必应的水煎剂对金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌等多种病菌有抑制作用，可以治疗多种感染性疾病。长梗冬青苷，是救必应药材中主要存在的一种五环三萜皂苷类化合物。由救必应酸与一分子葡萄糖酯化而成，主要分布于冬青科植物中，在树皮中的含量最高。2010年版《中国药典》首次收载救必应时将从中分离出的苦味物质称为长梗冬青苷，并且，由于其含量较高、性质稳定等特点将其作为含量测定的指标性成分。长梗冬青苷具有治疗心率失常、心肌缺血、脑缺血等心血管疾病的作用。近期发现长梗冬青苷还具有降血脂、抗炎症、保肝等功效，这使它获得更多的关注。寻找简洁高效的从救必应中提取纯化长梗冬青苷的方法有非常重要的意义。

对于救必应药材中长梗冬青苷的提取纯化方法一般结合色谱方法和一些传统方法，常见的包括：大孔树脂层析分离、高速逆流色谱以及硅胶柱层析法等。但是这些方法还是具有一些缺点，比如产量较低、操作复杂、并且价格昂贵。专利CN102643322A公开的同时制备长梗冬青苷和紫丁香苷的方法也获得了很好的纯化效果，但是进行了多次重结晶并使用了制备液相等方法，仪器价格昂贵，操作复杂。专利CN103351419A公开了一种两步法同时制备长梗冬青苷和紫丁香苷的方法，使用乙醇溶液对药材粗粉提取后使用重结晶法或柱层析法纯化，获得的长梗冬青苷纯度达到98％，但是纯化过程相对复杂且损失较大，涉及使用制备液相，且使用甲醇丙酮等有机溶剂毒性较大。专利CN105646638A公开了一种操作简单的长梗冬青苷制备方法，但相对产率较低，长梗冬青苷损失较多，并使用了乙酸乙酯等有机试剂，毒性较大。聚酰胺柱层析法有较好的分离效果，被广泛用于中药成分提纯，将其应用于长梗冬青苷的分离仍研究较少。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种制备长梗冬青苷的方法，该方法操作简单、成本低，制备的长梗冬青苷产品产率纯度较高。

本发明方法包括以下步骤：

1、取救必应药材，适度粉碎后，用乙醇水溶液加热回流提取，过滤，集滤液；

2、将滤液回收乙醇，进行浓缩浓缩后加水，过滤，将固体部分烘干获得固体提取物I并收集滤液，滤液加入聚酰胺柱吸附，先用水洗脱除去杂质，再用乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液；将洗脱液浓缩或蒸干后，过滤得固体提取物II，在烘箱中干燥，所得固体提取物I和II合并，采用30-60％乙醇重结晶即得长梗冬青苷。

优选的制备参数为：

所述步骤1中，乙醇水溶液中乙醇体积浓度为30％-60％，料液比为1g:8-16mL。回流的温度为70-90℃。提取次数为1-2次，每次120-360min。

所述步骤2的乙醇溶液洗脱的具体方法为：用10-40％乙醇溶液洗脱，洗脱体积为3-10倍柱体积，洗脱液浓缩至无醇味，过滤。

最优方法包括以下步骤：

1、救必应中药材，用16倍量的60％乙醇水溶液90℃加热回流提取2小时，过滤，集滤液；

2、将滤液回收乙醇，加水，搅拌过滤，得固体提取物I；所得滤液加入聚酰胺柱吸附后，先用3倍柱体积水洗脱除杂质，再用40％乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩小体积后过滤得固体提取物II，合并提取物I与II，采用10倍量60％乙醇两次重结晶即得长梗冬青苷。

本发明方法相对于现有技术具有以下优势：1、长梗冬青苷产品产率较高、纯度较高。采用HPLC外标法测定，所得到的长梗冬青苷产品纯度大于95％。2、该方法操作简单，无特殊及有毒溶剂，环保，成本低，周期短，有利于工业化生产。

具体实施方式

下面结合具体的实施例对本发明做进一步的详细说明，但本发明并不局限于此。

实施例1

称取救必应药材1千克，加入8倍量30％乙醇溶液，置于恒温水浴锅上90℃加热回流提取4小时，滤过，滤渣弃去。将提取液浓缩至无醇味，加水至6倍量，4℃放置过夜，析出固体，滤过后，将固体在105℃烘干5小时，获得第一部分产物25.63克。将滤液待用。

平行分成四份，分别上到四根装有300克聚酰胺的柱上，上述前聚酰胺用纯净水浸泡24小时后，湿法装入柱中，均分别先用3倍柱体积纯净水洗涤，弃去。再分别用3倍量10％乙醇溶液、20％乙醇溶液、30％乙醇溶液及40％乙醇溶液洗脱。分别收集流出液。将用乙醇溶液洗脱的流出液回收乙醇至无醇味，放置，析出固体，分别获得富集后的第二部分长梗冬青苷粗产物，干燥，分别得到1.72克，3.33克，7.54克，9.27克。

以长梗冬青苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号111868-201202)为外标，使用HPLC法检测得到的产物纯度，色谱条件为使用C18色谱柱(柱长：250mm，粒径：5μm)，以乙腈为流动相A，水为流动相B，梯度洗脱：0→10min，A：10％；10→20min，A：10→40％，20→35min，A：40％，检测波长为210nm，柱温为25℃。经测定上述提取物纯度分别为85.64％、65.33％、70.21％、77.90％、82.32％。

合并后取10克，采用30％乙醇10倍量两次重结晶干燥，得白色块状物4.57克，经检测纯度为97.32％。

实施例2

称取救必应药材1千克，加入16倍量60％乙醇溶液，置于恒温水浴锅上90℃加热回流提取2小时，滤过，滤渣弃去。将提取液浓缩至无醇味，加水至6倍量，4℃放置过夜，析出固体，滤过后，将固体在105℃烘干5小时，获得第一部分产物20.56克。将滤液待用。

平行分成四份，分别上到四根装有300克聚酰胺的柱上，上述前聚酰胺用纯净水浸泡24小时后，湿法装入柱中，均分别先用3倍柱体积纯净水洗涤，弃去。再分别用7倍量10％乙醇溶液、20％乙醇溶液、30％乙醇溶液及40％乙醇溶液洗脱。分别收集流出液。将用乙醇溶液洗脱的流出液回收乙醇至无醇味，放置，析出固体，分别获得富集后的第二部分长梗冬青苷粗产物，干燥，分别得到4.63克，5.67克，8.01克，10.32克。

按前述方法测定，上述提取物纯度分别为75.35％、67.89％、72.55％、75.64％、85.31％。

合并后取10克，采用60％乙醇10倍量两次重结晶干燥，得白色块状物5.23克，经检测纯度为95.48％。

实施例3

称取救必应药材1千克，加入8倍量20％乙醇溶液，置于恒温水浴锅上90℃加热回流提取4小时，滤过，滤渣弃去。将提取液浓缩至无醇味，加水至6倍量，放置后有少量固体析出，加热干燥胶化糖浆状。试验不成功。

实施例4

称取救必应药材1千克，加入8倍量70％乙醇溶液，置于恒温水浴锅上90℃加热回流提取4小时，滤过，滤渣弃去。将提取液浓缩至无醇味，为水不溶深色胶状物。试验不成功。

Claims (3)

1.一种长梗冬青苷的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)救必应中药材，按料液比1g:8-16mL，用浓度为30％-60％的乙醇水溶液，70-90℃下回流提取1-2次，每次120-360min，过滤，集滤液；

(2)将滤液回收乙醇，加水，搅拌过滤，得固体提取物I，滤液加入聚酰胺柱吸附后，先用水洗脱除去杂质，再用乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩后过滤得固体提取物II，合并提取物I与II，采用30-60％乙醇重结晶即得长梗冬青苷。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(2)的乙醇溶液洗脱的具体方法为：用10-40％乙醇溶液洗脱，洗脱体积为3-10倍柱体积，洗脱液浓缩至无醇味，过滤。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)救必应中药材，用16倍量的60％乙醇水溶液90℃加热回流提取2小时，过滤，集滤液；

(2)将滤液回收乙醇，加水，搅拌过滤，得固体提取物I；所得滤液加入聚酰胺柱吸附后，先用3倍柱体积水洗脱除杂质，再用40％乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩后过滤得固体提取物II，合并提取物I与II，采用10倍量60％乙醇两次重结晶即得长梗冬青苷。