CN108840891B - 杜仲叶中综合提取桃叶珊瑚苷、绿原酸和杜仲胶的工艺 - Google Patents
杜仲叶中综合提取桃叶珊瑚苷、绿原酸和杜仲胶的工艺 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了一种从杜仲叶中综合提取桃叶珊瑚苷、绿原酸和杜仲胶的工艺,通过用石油醚提取经干燥粉碎后的杜仲叶,得提取液和滤渣,在提取液中加入乙醇离心取下层固体即为杜仲胶,滤渣用乙醇浸泡提取后去多糖得桃叶珊瑚苷和绿原酸粗提物,用大孔树脂将桃叶珊瑚苷和绿原酸粗提物分离,最后分别用乙醇‑乙酸乙酯溶液提取,过聚酰胺柱和硅胶柱纯化得终产物。该工艺操作简单,生产成本较低,产率较高,可用于桃叶珊瑚苷、绿原酸和杜仲胶工业的大规模生产。
Description
技术领域
本发明属于天然植物提取技术领域,具体涉及一种从杜仲叶中综合提取桃叶珊瑚苷、绿原酸和杜仲胶的工艺。
背景技术
杜仲(Eucommia ulmoides)是杜仲科植物,为我国特有的单科目,单属科,单种属植物,是非常珍贵的树种,在科学上具有重要的研究价值及重要的药用价值。杜仲又名“橡胶树”或是“中国胶树”,它与东南亚或是南美的橡胶树没有亲缘关系。杜仲叶中含有一种天然橡胶——杜仲胶,其化学结构为反式-聚异戊二烯(C5H8)n,为普通天然橡胶三叶橡胶(顺式-聚异戊二烯)的同分异构体,是一种特殊的天然高分子材料。杜仲中叶中富含绿原酸,绿原酸是一种重要的生物活性物质,具有抗菌、抗病毒、增高白血球、保肝利胆、抗肿瘤、降血压、降血脂、清除自由基和兴奋中枢神经系统等作用。绿原酸(chlorogenic acid)在成熟的杜仲叶中含量最高,为同产地杜仲皮的30~60倍。杜仲叶中桃叶珊瑚苷的含量也较为丰富。桃叶珊瑚苷(aucubin)属于环烯醚萜苷类。桃叶珊瑚苷是一种重要的生物活性物质,具有清湿热、利小便、镇痛、降压、保肝护肝、抗肿瘤等作用。
关于杜仲成分的开发利用主要集中在橡胶工业和医药工业。橡胶工业多用剧烈条件破坏纤维获得杜仲胶,但同时破坏了绿原酸等热敏性物质,且制备工艺复杂,工业生产成本高,产品价格昂贵,无法实现大规模的开发应用。医药行业对其开发主要集中在绿原酸和桃叶珊瑚苷等单一成分的提取,且胶质往往作为杂质除去,造成了杜仲资源的极大浪费,产品生产成本高。目前,杜仲胶的提取工艺复杂,绿原酸和桃叶珊瑚苷的提取工艺侧重于单一成分的提取,且多为粗产品的提取,未建立高效的两种有效成分同时提取的工艺。因此,亟需开发一种能够综合提取桃叶珊瑚苷、绿原酸和杜仲胶的工艺。
发明内容
针对上述问题和现有技术的不足,本发明提供了一种从杜仲叶中综合提取桃叶珊瑚苷、绿原酸和杜仲胶的工艺,该工艺包括以下步骤:首先用石油醚提取经干燥粉碎后的杜仲叶,得提取液和滤渣,在提取液中加入乙醇离心取下层固体即为杜仲胶,滤渣用乙醇浸泡提取后去多糖得桃叶珊瑚苷和绿原酸粗提物,用大孔树脂将桃叶珊瑚苷和绿原酸粗提物分离,最后桃叶珊瑚苷粗提物用60%乙醇-40%乙酸乙酯溶液和20%乙醇-80%乙酸乙酯溶液提取后过硅胶柱纯化得终产物,绿原酸粗提物用40%乙醇-60%乙酸乙酯溶液和10%乙醇-90%乙酸乙酯溶液提取后分别过聚酰胺柱和硅胶柱纯化得终产物。
进一步地,该工艺具体包括以下步骤:
①取成熟杜仲叶干燥粉碎,加入提取剂石油醚,在35℃、100Hz的条件下超生波提取3h,过滤后在同等条件下再重复提取一次,过滤将提取液和滤渣分离;
②杜仲胶的提取:合并步骤①中的两次提取液,所得提取液45℃减压蒸馏至溶液呈饱和状态,在充分搅拌的条件下,趁热加入同体积的乙醇溶液中,冷却后离心,下层固体即为杜仲胶;
③桃叶珊瑚苷和绿原酸粗提物的提取:将步骤①中的滤渣用70%的乙醇溶液浸泡,在35℃、100Hz的条件下超生波提取3h,过滤后残渣在同等条件下再重复提取一次,合并两次提取液,减压蒸馏,温度不超过60℃,得杜仲叶粗提物;
④粗提物中多糖的除去:将步骤③中得到的粗提物加入乙醇,体积比为1:2,并进行机械搅拌4小时,将上清液倾出,重复操作一次,将两次所得清液合并;
⑤桃叶珊瑚苷和绿原酸的分离:将步骤④醇沉后的上清液减压浓缩后得浸膏,该浸膏中加入蒸馏水溶解,用分液漏斗除去油层,同时用纱布滤去不溶物,水相过大孔树脂,再依次用蒸馏水、20%、40%的乙醇溶液洗脱,分别收集各浓度梯度的洗脱液减压蒸馏,其中用20%乙醇洗脱的溶液中含有桃叶珊瑚苷,40%乙醇洗脱的溶液中含有绿原酸;
⑥桃叶珊瑚苷的纯化:将步骤⑤中含有桃叶珊瑚苷的20%的乙醇洗脱液减压蒸馏得到桃叶珊瑚苷的粗提物,再加入60%乙醇-40%乙酸乙酯溶液机械搅拌4小时,滤去残渣,滤液减压蒸馏后加入20%乙醇-80%乙酸乙酯溶液机械搅拌4小时,所得沉淀为桃叶珊瑚苷粗品,过硅胶柱,洗脱剂为乙酸乙酯,载样量和硅胶质量相同,得纯化后的桃叶珊瑚苷;
⑦绿原酸的纯化:将步骤⑤中含有绿原酸的40%的乙醇洗脱液减压蒸馏得到绿原酸的粗提物,再加入40%乙醇-60%乙酸乙酯溶液机械搅拌4小时,滤去残渣,滤液减压蒸馏后加入10%乙醇-90%乙酸乙酯溶液机械搅拌4小时,所得沉淀为绿原酸粗品,过聚酰胺柱,载样量为聚酰胺的五分之一,依次用蒸馏水、20%的乙醇溶液洗脱,20%的乙醇洗脱液减压浓缩后所得样品,过硅胶柱,洗脱剂为乙酸乙酯,载样量为硅胶的二分之一,收集洗脱液得纯化后的绿原酸。
进一步地,所述的杜仲叶原料为成熟的杜仲叶。
进一步地,上述步骤⑤中的大孔树脂为NKA-2型大孔树脂。
进一步地,上述步骤⑤中的大孔树脂为XDA-8D型大孔树脂。
本发明的有益效果在于:杜仲胶的提取工艺简单,纯度高;生产成本低;绿原酸和桃叶珊瑚苷可以进行同时提取、分离和纯化,该工艺简单,资源利用率高,终产品的纯度高。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明的一部分,而不是发明的全部。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
实验中所用到的仪器设备:RV10型旋转蒸发仪(德国艾卡公司);EDS-D5型磁力加热搅拌器(德国艾卡公司);石油醚(分析纯,纯度90%,沸程60-90℃,国药集团化学试剂有限公司);丙酮(纯度99.5%,国药集团化学试剂有限公司);乙酸乙酯(分析纯,纯度99.5%,国药集团化学试剂有限公司)。乙醇(分析纯,纯度95%,国药集团化学试剂有限公司)。OSB-2100型旋转蒸发仪(上海爱朗仪器有限公司);CA-1111型冷却水循环装置(上海爱朗仪器有限公司);DW-1型无极恒速搅拌器(巩义市予华仪器有限公司);薄层层析硅胶(化学纯,GF254,青岛海洋化工厂);柱层析硅胶(200-300目,青岛海洋化工厂);聚酰胺(80-120目,RG0007-JXAF,北京慧德易科技有限责任公司)。NKA-2型大孔树脂(西安蓝晓科技新材料股份有限公司)。
实施例1一种从杜仲叶中综合提取桃叶珊瑚苷、绿原酸和杜仲胶的工艺以及对提取得到的桃叶珊瑚苷和绿原酸含量的测定
含量测定标准品及仪器:绿原酸:纯度大于99%,CAS号327-97-9(ACROSORGANICS),桃叶珊瑚苷:纯度大于99%,CAS号479-98-1(SICMA-ALDRICH);高效液相色谱仪:沃特世1525,PDA检测器。
色谱条件:桃叶珊瑚苷的色谱条件:Waters XBridge C18(5μm,4.6×250mm)色谱柱,柱温30℃,流动相为水92%-甲醇8%,流速1mL/min,检测波长212nm,保留时间8.82min;绿原酸的色谱条件:Waters XBridge C18(5μm,4.6×250mm)色谱柱,柱温30℃,流动相为水80%(含乙酸0.2%)-甲醇20%,流速0.8mL/min,检测波长325nm,保留时间10.8min。外标法定量分析。
一、杜仲胶的提取纯化
取1000g经过粉碎成熟干燥的杜仲叶,加入提取剂石油醚8700mL,在35℃、100Hz的条件下超生波提取3h。重复上述步骤一次,即加入提取剂石油醚7600mL,在35℃、100Hz的条件下超生波提取3h。合并两次溶液,所得提取液45℃减压蒸馏至溶液呈饱和状态,在充分搅拌的条件下,趁热加入同体积的乙醇溶液中,冷却后,离心,倾倒出上层液体。下层固体即为杜仲胶。重复上述操作一次,得白色精胶4g。
二、桃叶珊瑚苷和绿原酸粗提物的提取
将1000g提取完杜仲胶的杜仲叶残渣用6100mL70%的乙醇溶液浸泡,在35℃、100Hz的条件下超生波提取3h。过滤后残渣重复提取一次,即用6000mL70%的乙醇溶液浸泡,在35℃、100Hz的条件下超生波提取3h。合并两次提取液,减压蒸馏(温度不超过60℃),得杜仲叶粗提物。
三、粗提物中多糖的除去
用醇沉的方法除去粗提物中的多糖。将粗提物加入乙醇(体积比1/2),并进行机械搅拌4小时,将上清液倾出,重复操作一次,将两次所得清液合并,用薄板检测法进行检测,清液中含有绿原酸和桃叶珊瑚苷,而固体残留物中不含绿原酸和桃叶珊瑚苷。由此说明醇沉的方法能达到除去粗提物中多糖的目的。
四、桃叶珊瑚苷和绿原酸的分离
醇沉后的上清液减压浓缩后得135.0g浸膏,经检测其中桃叶珊瑚苷含量为10.7%,绿原酸含量为3.8%,该浸膏中加入270.0g蒸馏水溶解,用分液漏斗除去油层,同时用纱布滤去不溶物。水相过NKA-2型大孔树脂。依次用蒸馏水、20%、40%的乙醇溶液洗脱。分别收集各浓度梯度的洗脱液减压蒸馏,用薄板检测法进行检测,用蒸馏水洗脱的溶液中不含桃叶珊瑚苷和绿原酸,用20%乙醇洗脱的溶液中含有桃叶珊瑚苷,用聚酰胺薄膜未检测到绿原酸;在40%乙醇洗脱的溶液中可检测到绿原酸,说明NKA-2型大孔树脂对桃叶珊瑚苷和绿原酸有较好的分离效果。
五、桃叶珊瑚苷的纯化
含有桃叶珊瑚苷的20%的乙醇洗脱液减压蒸馏得到桃叶珊瑚苷的粗提物12.2g(桃叶珊瑚苷含量为31.4%)。上述桃叶珊瑚苷粗提物中加入60%乙醇-40%乙酸乙酯溶液机械搅拌4小时,滤去残渣,滤液减压蒸馏后加入20%乙醇-80%乙酸乙酯溶液机械搅拌4小时,所得沉淀为桃叶珊瑚苷粗品,经测定桃叶珊瑚苷含量为50.1%,该桃叶珊瑚苷粗品过硅胶柱,洗脱剂为乙酸乙酯,载样量和硅胶质量相同,得到较纯净的桃叶珊瑚苷2.8g,经测定桃叶珊瑚苷含量为82.9%。
六、绿原酸的纯化
含有绿原酸的40%的乙醇洗脱液减压蒸馏得到绿原酸的粗提物10.1g(绿原酸含量15.16%)。上述绿原酸粗提物中加入40%乙醇-60%乙酸乙酯溶液机械搅拌4小时,滤去残渣,滤液减压蒸馏后加入10%乙醇-90%乙酸乙酯溶液机械搅拌4小时,所得沉淀为绿原酸粗品,上述绿原酸粗品过聚酰胺柱,载样量为聚酰胺的五分之一,依次用蒸馏水、20%的乙醇溶液洗脱,20%的乙醇洗脱液减压浓缩后所得样品2.3g,经测定绿原酸含量52.0%,过硅胶柱,洗脱剂为乙酸乙酯,载样量为硅胶的二分之一。收集洗脱液得绿原酸产品1.5g,经测定绿原酸含量为85.54%。
Claims (4)
1.一种从杜仲叶中综合提取桃叶珊瑚苷、绿原酸和杜仲胶的工艺,其特征在于,该工艺具体包括以下步骤:
①取杜仲叶干燥粉碎,加入提取剂石油醚,在35℃、100Hz的条件下超生波提取3h,过滤后在同等条件下再重复提取一次,过滤将提取液和滤渣分离;
②杜仲胶的提取:合并步骤①中的两次提取液,所得提取液45℃减压蒸馏至溶液呈饱和状态,在充分搅拌的条件下,趁热加入同体积的乙醇溶液中,冷却后离心,下层固体即为杜仲胶;
③桃叶珊瑚苷和绿原酸粗提物的提取:将步骤①中的滤渣用70%的乙醇溶液浸泡,在35℃、100Hz的条件下超生波提取3h,过滤后残渣在同等条件下再重复提取一次,合并两次提取液,减压蒸馏,温度不超过60℃,得杜仲叶粗提物;
④粗提物中多糖的除去:将步骤③中得到的粗提物加入乙醇,体积比为1:2,并进行机械搅拌4小时,将上清液倾出,重复操作一次,将两次所得清液合并;
⑤桃叶珊瑚苷和绿原酸的分离:将步骤④醇沉后的上清液减压浓缩后得浸膏,该浸膏中加入蒸馏水溶解,用分液漏斗除去油层,同时用纱布滤去不溶物,水相过大孔树脂,再依次用蒸馏水、20%、40%的乙醇溶液洗脱,分别收集各浓度梯度的洗脱液减压蒸馏,其中用20%乙醇洗脱的溶液中含有桃叶珊瑚苷,40%乙醇洗脱的溶液中含有绿原酸;
⑥桃叶珊瑚苷的纯化:将步骤⑤中含有桃叶珊瑚苷的20%的乙醇洗脱液减压蒸馏得到桃叶珊瑚苷的粗提物,再加入60%乙醇-40%乙酸乙酯溶液机械搅拌4小时,滤去残渣,滤液减压蒸馏后加入20%乙醇-80%乙酸乙酯溶液机械搅拌4小时,所得沉淀为桃叶珊瑚苷粗品,过硅胶柱,洗脱剂为乙酸乙酯,载样量和硅胶质量相同,得纯化后的桃叶珊瑚苷;
⑦绿原酸的纯化:将步骤⑤中含有绿原酸的40%的乙醇洗脱液减压蒸馏得到绿原酸的粗提物,再加入40%乙醇-60%乙酸乙酯溶液机械搅拌4小时,滤去残渣,滤液减压蒸馏后加入10%乙醇-90%乙酸乙酯溶液机械搅拌4小时,所得沉淀为绿原酸粗品,过聚酰胺柱,载样量为聚酰胺的五分之一,依次用蒸馏水、20%的乙醇溶液洗脱,20%的乙醇洗脱液减压浓缩后所得样品,过硅胶柱,洗脱剂为乙酸乙酯,载样量为硅胶的二分之一,收集洗脱液得纯化后的绿原酸。
2.如权利要求1所述的一种从杜仲叶中综合提取桃叶珊瑚苷、绿原酸和杜仲胶的工艺,其特征在于,所述的杜仲叶原料为成熟的杜仲叶。
3.如权利要求1所述的一种从杜仲叶中综合提取桃叶珊瑚苷、绿原酸和杜仲胶的工艺,其特征在于,所述步骤⑤中的大孔树脂为NKA-2型大孔树脂。
4.如权利要求1所述的一种从杜仲叶中综合提取桃叶珊瑚苷、绿原酸和杜仲胶的工艺,其特征在于,所述步骤⑤中的大孔树脂为XDA-8D型大孔树脂。
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CN108840891A (zh) | 2018-11-20 |
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