JP2022510832A - 高速向流クロマトグラフィーによるカンナビジオールの分離精製方法 - Google Patents
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Abstract
本発明は高速向流クロマトグラフィーによるカンナビジオールの分離精製方法に関する。エタノール抽出水沈殿、マクロポーラス樹脂による吸着、高速向流クロマトグラフィーによる分離を含む。本発明はマクロポーラス樹脂クロマトグラフィーカラムと高速向流クロマトグラフとを組み合わせることにより、工程パラメータを最適化することで、産業用大麻の花・葉から分離して高純度なカンナビジオールを得たと共に、向精神毒性成分であるテトラヒドロカンナビノールを除去した。用いられた溶媒は、エコで、残留がなく、コストが安く、リサイクル可能であり、産業的生産に適する。
Description
本発明はカンナビジオール抽出の分野に関し、特に、高速向流クロマトグラフィーによるカンナビジオールの分離精製方法に関する。
大麻(学名：Ｃａｎｎａｂｉｓ ｓａｔｉｖａ Ｌ．)はアサ科で、大麻は一年生草木植物に属する。又の名を麻、ヘンプ、火麻、カンナビス・サティバ、黄麻ともいう。重要な農業用及び薬用的価値を有する。現在、人々は既に大麻株から５００余りの物質を分離した。その中、カンナビノール類化合物が少なくとも８６種ある。主にテトラヒドロカンナビノール(ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｃａｎｎａｂｉｎｏｌ，ＴＨＣ) 、カンナビジオール(ｃａｎｎａｂｉｄｉｏｌ，ＣＢＤ) 、カンナビノール(ｃａｎｎａｂｉｎｏｌ，ＣＢＮ)及びカンナビクロメン(ｃａｎｎａｂｉｃｈｒｏｍｅｎｅ，ＣＢＣ)等を備え、その中、前三者がカンナビノール類化合物の９０％以上を占めており、テトラヒドロカンナビノールは、人に幻覚・依存させることができ、麻薬を作ることができ、相当長い時期に禁じられたことがある。
大麻の経済、薬用的価値が極めて高いため、工業用途の原料に専らに供する大麻は「産業用大麻」と略称され、その生長期に大麻の花・葉におけるテトラヒドロカンナビノール(ＴＨＣ)の含有量が０．３％未満であり、毒性成分であるテトラヒドロカンナビノールを抽出する価値を有しなく、又は直接麻薬として吸い込むことなく、合法的に規模的な栽培及び産業上の開発利用を行うことができる。
近年、大麻の活性成分に対する研究により、カンナビジオール(ｃａｎｎａｂｉｄｉｏｌ)が神経毒性を有しなく、非依存性の活性成分であり、薬用的価値が明らかであることを発見した。薬理研究は、テトラヒドロカンナビノールが人体の神経系に対する影響を拮抗することができ、抗痙攣、睡眠鎮静、抗関節リウマチ、抗不安等の薬理活性を有し、医薬、食品分野で使用の見通しを極めて有する天然活性成分であることを表明している。
肖培雲らは、『中国医薬工業雑誌』（２００８年第３９巻第４号）において、異なる生長期の産業用大麻におけるＴＨＣとＣＢＤの含有量の測定方法についての比較研究を発表した。その中、成長期、開花期及び満開期においてＴＨＣの含有量が千分の３未満であり、産業用大麻の標準に達したと共に、ＣＢＤの含有量も千分の３未満であったことに言及した。ＣＢＤの産業用大麻における含有量もとても低く、如何にできるだけＴＨＣ等による幻覚・依存作用を有する成分を除去して高純度のＣＢＤの収率を保証するかは、ＣＢＤを開発使用する前提であることを証明している。
現在、開示情報には、いくつかの産業用大麻からカンナビジオールを抽出する方法に関する報道があり、各種のカラムクロマトグラフィー技術を多く用い、例えば、ＭＣＩ樹脂又はオクタデシルシラン結合シリカゲル等のようなマクロポーラス吸着樹脂を使用している。比較研究により、従来技術に言及された産業用大麻からカンナビジオールを抽出する方法には、主に以下の問題が存在している。
１ )産業用大麻植物中のカンナビノイド類の成分は複雑であり、知られている種類は８０余りがあり、極性類似の成分が多く、従来の方法を用いて抽出、精製した後、最終製品中のＣＢＤの純度が高くない。
２ )抽出精製後、依然として向精神毒性成分のＴＨＣを検出することができ、製品安全性の保証を得ることができず、製品の流通が制限され、産業的生産及び使用に影響を及ぼす。
３ )従来技術では、カラムクロマトグラフィーによる分離・精製を繰り返し、必然的にＣＢＤのロスを引き起こし、収率が減り、生産能力を制限させることになる。
大麻の経済、薬用的価値が極めて高いため、工業用途の原料に専らに供する大麻は「産業用大麻」と略称され、その生長期に大麻の花・葉におけるテトラヒドロカンナビノール(ＴＨＣ)の含有量が０．３％未満であり、毒性成分であるテトラヒドロカンナビノールを抽出する価値を有しなく、又は直接麻薬として吸い込むことなく、合法的に規模的な栽培及び産業上の開発利用を行うことができる。
近年、大麻の活性成分に対する研究により、カンナビジオール(ｃａｎｎａｂｉｄｉｏｌ)が神経毒性を有しなく、非依存性の活性成分であり、薬用的価値が明らかであることを発見した。薬理研究は、テトラヒドロカンナビノールが人体の神経系に対する影響を拮抗することができ、抗痙攣、睡眠鎮静、抗関節リウマチ、抗不安等の薬理活性を有し、医薬、食品分野で使用の見通しを極めて有する天然活性成分であることを表明している。
肖培雲らは、『中国医薬工業雑誌』（２００８年第３９巻第４号）において、異なる生長期の産業用大麻におけるＴＨＣとＣＢＤの含有量の測定方法についての比較研究を発表した。その中、成長期、開花期及び満開期においてＴＨＣの含有量が千分の３未満であり、産業用大麻の標準に達したと共に、ＣＢＤの含有量も千分の３未満であったことに言及した。ＣＢＤの産業用大麻における含有量もとても低く、如何にできるだけＴＨＣ等による幻覚・依存作用を有する成分を除去して高純度のＣＢＤの収率を保証するかは、ＣＢＤを開発使用する前提であることを証明している。
現在、開示情報には、いくつかの産業用大麻からカンナビジオールを抽出する方法に関する報道があり、各種のカラムクロマトグラフィー技術を多く用い、例えば、ＭＣＩ樹脂又はオクタデシルシラン結合シリカゲル等のようなマクロポーラス吸着樹脂を使用している。比較研究により、従来技術に言及された産業用大麻からカンナビジオールを抽出する方法には、主に以下の問題が存在している。
１ )産業用大麻植物中のカンナビノイド類の成分は複雑であり、知られている種類は８０余りがあり、極性類似の成分が多く、従来の方法を用いて抽出、精製した後、最終製品中のＣＢＤの純度が高くない。
２ )抽出精製後、依然として向精神毒性成分のＴＨＣを検出することができ、製品安全性の保証を得ることができず、製品の流通が制限され、産業的生産及び使用に影響を及ぼす。
３ )従来技術では、カラムクロマトグラフィーによる分離・精製を繰り返し、必然的にＣＢＤのロスを引き起こし、収率が減り、生産能力を制限させることになる。
本発明の解決しようとする技術課題は、高速向流クロマトグラフィーによるカンナビジオールの分離精製方法を提供するものであり、該方法は、マクロポーラス樹脂クロマトグラフィーカラムと高速向流クロマトグラフとを組み合わせることにより、不純物とテトラヒドロカンナビノールを除去する効果がより良い。
本発明が提供した高速向流クロマトグラフィーによるカンナビジオールの分離精製方法において、
（１）産業用大麻の花又は葉を原料とし、エタノール抽出濃縮、水沈殿、真空回転蒸発を経て大麻の粗抽出物を得たステップと、
（２）得られた大麻の粗抽出物をエタノールで溶解（希釈）した後、マクロポーラス樹脂に注入し、勾配溶離を経て、カンナビジオールに富む溶離部分を回収し、真空回転蒸発でカンナビジオールの粗抽出物を得たステップと、
（３）ｎ－ヘキサン：酢酸エチル：メタノール：水（ｎ－ヘキサン：メタノール：水からなる３溶媒系でもよい）を分離溶媒系として高速向流クロマトグラフィーによる分離精製を行い、カンナビジオールの蒸留部分を収集し、溶媒を回収し、後処理してカンナビジオールを得たステップと、を含む。
前記ステップ（１）におけるエタノール抽出濃縮は、体積％濃度が５０～９５％であるエタノール溶液を用い、産業用大麻の花又は葉とエタノール溶液との質量体積比は、１ｇ：５～１０ｍＬである。
前記ステップ（１）における水沈殿温度は、５～８℃であり、水沈殿時間は、２４ｈである。
前記ステップ（２）におけるマクロポーラス樹脂は、Ｄ１０１型、ＡＢ－８型又はＨＰＤ－１００型である。
前記ステップ（２）における勾配溶離は、体積％濃度が５～８５％であるエタノール溶液を用いて勾配溶離を行い、体積％濃度が７０～８５％であるエタノール溶液の溶離部分を回収する。
前記ステップ（３）におけるｎ－ヘキサン：酢酸エチル：メタノール：水の体積比は、５：０～１：５：１～３である。
前記ステップ（３）における高速向流クロマトグラフィーによる分離精製は、具体的に、分離溶媒系のうちの一方の相を固定相とし、他方の相を移動相として、３０～５０ｍＬ／ｍｉｎの流速で前記固定相を高速向流クロマトグラフへ汲み入れ、２５～３５℃、機器本体の回転速度が７００～１０００ｒ／ｍｉｎである条件下で、５～１０ｍＬ／ｍｉｎの流速で前記移動相を汲み入れ、２相のバランスがとれた後、カンナビジオールの粗抽出物を移動相で溶解してから試料を導入し、検出器による検出を経て、カンナビジオールの蒸留部分を回収する。
ここで、溶媒系の上相を固定相とし、下相を移動相とする。又は、溶媒系の下相を固定相とし、上相を移動相とする。高速向流クロマトグラフは、正接続状態における正回転モードを用いてもよく、正接続状態における逆回転モードを用いてもよい。前記正接続は、即ち首端と尾端からの接続モードである。
前記カンナビジオールの粗抽出物を移動相で溶解した後の濃度は、５０～１００ｍｇ／ｍＬであり、導入した試料の体積は、２０ｍＬであり、検出した波長は、２２０ｎｍである。
前記ステップ（３）における後処理は、減圧濃縮、結晶及び真空冷凍乾燥を行うことを含む。
本発明の試料は、マクロポーラス吸着樹脂により粗分離された後、試料中の大部分の不純物が除去され、カンナビジオールに富み、それから、高速向流クロマトグラフによりさらに精分離され不純物を除去し、特に、テトラヒドロカンナビノールを除去したものであり、ロスを低減し、カンナビジオールの規模的な調製を実現させた。
本発明に用いられた高速向流クロマトグラフィーをカラムクロマトグラフィー等の方法に比べて、固体状担体を使用しないため、固体状担体による試料の不可逆吸着及びロスが存在せず、分離の効果が高く、最大限に原料を利用し、生産コストを低減することができる。かつ、分離工程全体がシール装置内に行われ、調製工程が簡便、安全、エコであり、連続に行うことができ、効率が高くて素早い産業用大麻から高純度なＣＢＤを分離する方法である。
本発明が提供した高速向流クロマトグラフィーによるカンナビジオールの分離精製方法において、
（１）産業用大麻の花又は葉を原料とし、エタノール抽出濃縮、水沈殿、真空回転蒸発を経て大麻の粗抽出物を得たステップと、
（２）得られた大麻の粗抽出物をエタノールで溶解（希釈）した後、マクロポーラス樹脂に注入し、勾配溶離を経て、カンナビジオールに富む溶離部分を回収し、真空回転蒸発でカンナビジオールの粗抽出物を得たステップと、
（３）ｎ－ヘキサン：酢酸エチル：メタノール：水（ｎ－ヘキサン：メタノール：水からなる３溶媒系でもよい）を分離溶媒系として高速向流クロマトグラフィーによる分離精製を行い、カンナビジオールの蒸留部分を収集し、溶媒を回収し、後処理してカンナビジオールを得たステップと、を含む。
前記ステップ（１）におけるエタノール抽出濃縮は、体積％濃度が５０～９５％であるエタノール溶液を用い、産業用大麻の花又は葉とエタノール溶液との質量体積比は、１ｇ：５～１０ｍＬである。
前記ステップ（１）における水沈殿温度は、５～８℃であり、水沈殿時間は、２４ｈである。
前記ステップ（２）におけるマクロポーラス樹脂は、Ｄ１０１型、ＡＢ－８型又はＨＰＤ－１００型である。
前記ステップ（２）における勾配溶離は、体積％濃度が５～８５％であるエタノール溶液を用いて勾配溶離を行い、体積％濃度が７０～８５％であるエタノール溶液の溶離部分を回収する。
前記ステップ（３）におけるｎ－ヘキサン：酢酸エチル：メタノール：水の体積比は、５：０～１：５：１～３である。
前記ステップ（３）における高速向流クロマトグラフィーによる分離精製は、具体的に、分離溶媒系のうちの一方の相を固定相とし、他方の相を移動相として、３０～５０ｍＬ／ｍｉｎの流速で前記固定相を高速向流クロマトグラフへ汲み入れ、２５～３５℃、機器本体の回転速度が７００～１０００ｒ／ｍｉｎである条件下で、５～１０ｍＬ／ｍｉｎの流速で前記移動相を汲み入れ、２相のバランスがとれた後、カンナビジオールの粗抽出物を移動相で溶解してから試料を導入し、検出器による検出を経て、カンナビジオールの蒸留部分を回収する。
ここで、溶媒系の上相を固定相とし、下相を移動相とする。又は、溶媒系の下相を固定相とし、上相を移動相とする。高速向流クロマトグラフは、正接続状態における正回転モードを用いてもよく、正接続状態における逆回転モードを用いてもよい。前記正接続は、即ち首端と尾端からの接続モードである。
前記カンナビジオールの粗抽出物を移動相で溶解した後の濃度は、５０～１００ｍｇ／ｍＬであり、導入した試料の体積は、２０ｍＬであり、検出した波長は、２２０ｎｍである。
前記ステップ（３）における後処理は、減圧濃縮、結晶及び真空冷凍乾燥を行うことを含む。
本発明の試料は、マクロポーラス吸着樹脂により粗分離された後、試料中の大部分の不純物が除去され、カンナビジオールに富み、それから、高速向流クロマトグラフによりさらに精分離され不純物を除去し、特に、テトラヒドロカンナビノールを除去したものであり、ロスを低減し、カンナビジオールの規模的な調製を実現させた。
本発明に用いられた高速向流クロマトグラフィーをカラムクロマトグラフィー等の方法に比べて、固体状担体を使用しないため、固体状担体による試料の不可逆吸着及びロスが存在せず、分離の効果が高く、最大限に原料を利用し、生産コストを低減することができる。かつ、分離工程全体がシール装置内に行われ、調製工程が簡便、安全、エコであり、連続に行うことができ、効率が高くて素早い産業用大麻から高純度なＣＢＤを分離する方法である。
本発明は、マクロポーラス樹脂クロマトグラフィーカラムと高速向流クロマトグラフとを組み合わせることにより、工程パラメータを最適化することで、産業用大麻の花・葉から分離して高純度なカンナビジオールを得たと共に、向精神毒性成分であるテトラヒドロカンナビノールを除去した。用いられた溶媒は、エコで、残留がなく、コストが安く、リサイクル可能であり、産業的生産に適する。
以下、具体的な実施例を合わせて、本発明についてさらに説明する。また、これらの実施例は本発明を説明するのみに用いられ、本発明の範囲を制限するものではない。なおまた、本発明に記載の内容を読んだ後、当業者は本発明について種々の変更や修正を行うことができ、これらの等価形式も同様に本出願に添付された特許請求の範囲に限定された範囲に入る。
実施例１
（１）１０ｋｇの産業用大麻を粉砕して乾燥し、固液比が１：５(ｗ／ｖ、ｇ／ｍＬ)の割合で７０％のエタノール水溶液に加えて十分に混合し、１２０ｍｉｎ、超音波抽出(温度を４５℃以下に制御し、遮光)を行い、超音波処理が完了した後、真空吸引ろ過し、得られたケーキを上記条件に従って２回繰り返し抽出し、濾液を合併し、４５℃下で真空回転蒸発によりエタノールを除去し、相対密度が１．２になるまで濃縮し、５～７倍の精製水を加え、５～８℃の条件下で、２４ｈ、水沈殿を行い、濾過し、沈殿物を減圧乾燥して大麻の粗抽出物を得た。
（２）ＡＢ－８型のマクロポーラス樹脂をエタノールに２４時間浸した後、クロマトグラフィーカラムに入れ、エタノールを用いて溶出液＋等体積の脱イオン水が透明溶液になるまで洗い、それから、脱イオン水を用いて流出液が中性になるまで洗う。大麻の粗抽出物をエタノールで溶解した後、ＡＢ－８型のマクロポーラス樹脂に注入し、吸着体積が樹脂総体積の２／３に達するまでとする。まず、脱イオン水を用いて２ＢＶ／ｈの流速で樹脂をリンスし、それから、それぞれ１０％、３０％、５０％、７０％のエタノール水溶液を用いて２ＢＶ／ｈの流速でリンスして、７０％の溶離部分を回収する。４５℃下で真空回転蒸発によりエタノールを除去し、カンナビジオールの粗抽出物を得、ハイパフォーマンス液体クロマトグラムは、図１に示される。
（３）ｎ－ヘキサン：酢酸エチル：メタノール：水を５：０．５：５：１の体積比で分液漏斗に置き、十分に均一に振り動かし、２０ｍｉｎ静置した後、上相と下相を分け、超音波で２０ｍｉｎ脱ガスする。上相を固定相とし、下相を移動相とする。高速向流クロマトグラフを始動させ３０ｍｉｎ予熱した後、プール循環水を２５℃に設置し、固定相を３０ｍＬ／ｍｉｎの流速で機器へ汲み入れ、それから、正接続状態で正回転させるように、機器を始動させ、機器本体の回転速度を８００ｒ／ｍｉｎにさせる。回転速度が安定した後、５ｍＬ／ｍｉｎの流速で移動相を汲み入れ、２相は管路においてバランスがとれた後、１０００ｍｇのカンナビジオールの粗抽出物を２０ｍｌの移動相に溶け、試料を導入して紫外線検出器にて検出を行い、目標ピークの成分を収集して減圧濃縮し有機相を除去し、減圧する過程の中で析出の沈殿物を吸引ろ過して冷凍乾燥すると、カンナビジオール単量体を得、純度が９９．１２％であり、ＴＨＣを検出しておらず、図２及び３に示される。
実施例２
（１）１０ｋｇの産業用大麻を粉砕して乾燥し、固液比が１：１０(ｗ／ｖ、ｇ／ｍＬ)の割合で８０％のエタノール水溶液に加えて十分に混合し、１００ｍｉｎ、超音波抽出(温度を４５℃以下に制御し、遮光)を行い、超音波処理が完了した後、真空吸引ろ過し、得られたケーキを上記条件に従って２回繰り返し抽出し、濾液を合併し、４５℃下で真空回転蒸発によりエタノールを除去し、相対密度が１．２になるまで濃縮し、５～７倍の精製水を加え、５～８℃の条件下で、２４ｈ、水沈殿を行い、濾過し、沈殿物を減圧乾燥して大麻の粗抽出物を得た。
（２）Ｄ１０１型のマクロポーラス樹脂をエタノールに２４時間浸した後、クロマトグラフィーカラムに入れ、エタノールを用いて溶出液＋等体積の脱イオン水が透明溶液になるまで洗い、それから、脱イオン水を用いて流出液が中性になるまで洗う。大麻の粗抽出物をエタノールで溶解した後、Ｄ１０１型のマクロポーラス樹脂に注入し、吸着体積が樹脂総体積の２／３に達するまでとする。まず、脱イオン水を用いて２．５ＢＶ／ｈの流速で樹脂をリンスし、それから、それぞれ１０％、３０％、７０％、８０％のエタノール水溶液を用いて２．５ＢＶ／ｈの流速でリンスして、７０～８０％の溶離部分を回収する。４５℃下で真空回転蒸発によりエタノールを除去し、カンナビジオールの粗抽出物を得た。
（３）ｎ－ヘキサン：メタノール：水を５：５：２．５の体積比で分液漏斗に置き、十分に均一に振り動かし、２０ｍｉｎ静置した後、上相と下相を分け、超音波で２０ｍｉｎ脱ガスする。下相を固定相とし、上相を移動相とする。高速向流クロマトグラフを始動させ３０ｍｉｎ予熱した後、プール循環水を２５℃に設置し、固定相を３０ｍＬ／ｍｉｎの流速で機器へ汲み入れ、それから、正接続状態で逆回転させるように、機器を始動させ、機器本体の回転速度を８５０ｒ／ｍｉｎにさせる。回転速度が安定した後、１０ｍＬ／ｍｉｎの流速で移動相を汲み入れ、２相は管路においてバランスがとれた後、１０００ｍｇのカンナビジオールの粗抽出物を２０ｍＬの固定相に溶け、試料を導入して紫外線検出器にて検出を行い、目標ピークの成分を収集して減圧濃縮し有機相を除去し、得られた粉末を８０％のエタノールで結晶処理を行い、濾過して結晶体を得、減圧し真空乾燥すると、カンナビジオール単量体を得、純度が９９．７５％であり、ＴＨＣを検出していない。
実施例３
（１）１０ｋｇの産業用大麻を粉砕して乾燥し、固液比が１：８(ｗ／ｖ、ｇ／ｍＬ)の割合で８０％のエタノール水溶液に加えて十分に混合し、１２０ｍｉｎ、超音波抽出(温度を４５℃以下に制御し、遮光)を行い、超音波処理が完了した後、真空吸引ろ過し、得られたケーキを上記条件に従って２回繰り返し抽出し、濾液を合併し、４５℃下で真空回転蒸発によりエタノールを除去し、相対密度が１．２になるまで濃縮し、５～７倍の精製水を加え、５～８℃の条件下で、２４ｈ、水沈殿を行い、濾過し、沈殿物を減圧乾燥して大麻の粗抽出物を得た。
（２）ＡＢ－８型のマクロポーラス樹脂をエタノールに２４時間浸した後、クロマトグラフィーカラムに入れ、エタノールを用いて溶出液＋等体積の脱イオン水が透明溶液になるまで洗い、それから、脱イオン水を用いて流出液が中性になるまで洗う。大麻の粗抽出物をエタノールで溶解した後、ＡＢ－８型のマクロポーラス樹脂に注入し、吸着体積が樹脂総体積の２／３に達するまでとする。まず、脱イオン水を用いて２ＢＶ／ｈの流速で樹脂をリンスし、それから、それぞれ１０％、３０％、５０％、８０％のエタノール水溶液を用いて２ＢＶ／ｈの流速でリンスして、８０％の溶離部分を回収する。４５℃下で真空回転蒸発によりエタノールを除去し、カンナビジオールの粗抽出物を得た。
（３）ｎ－ヘキサン：メタノール：水を５：５：１の体積比で分液漏斗に置き、十分に均一に振り動かし、２０ｍｉｎ静置した後、上相と下相を分け、超音波で２０ｍｉｎ脱ガスする。上相を固定相とし、下相を移動相とする。高速向流クロマトグラフを始動させ３０ｍｉｎ予熱した後、プール循環水を２５℃に設置し、固定相を３０ｍＬ／ｍｉｎの流速で機器へ汲み入れ、それから、正接続状態で正回転させるように、機器を始動させ、機器本体の回転速度を８００ｒ／ｍｉｎにさせる。回転速度が安定した後、５ｍＬ／ｍｉｎの流速で移動相を汲み入れ、２相は管路においてバランスがとれた後、２０００ｍｇのカンナビジオールの粗抽出物を２０ｍＬの移動相に溶け、試料を導入して紫外線検出器にて検出を行い、目標ピークの成分を収集して減圧濃縮し有機相を除去し、減圧する過程の中で析出の沈殿物を吸引ろ過して冷凍乾燥すると、カンナビジオール単量体を得、純度が９９．５０％であり、ＴＨＣを検出していない。
実施例１
（１）１０ｋｇの産業用大麻を粉砕して乾燥し、固液比が１：５(ｗ／ｖ、ｇ／ｍＬ)の割合で７０％のエタノール水溶液に加えて十分に混合し、１２０ｍｉｎ、超音波抽出(温度を４５℃以下に制御し、遮光)を行い、超音波処理が完了した後、真空吸引ろ過し、得られたケーキを上記条件に従って２回繰り返し抽出し、濾液を合併し、４５℃下で真空回転蒸発によりエタノールを除去し、相対密度が１．２になるまで濃縮し、５～７倍の精製水を加え、５～８℃の条件下で、２４ｈ、水沈殿を行い、濾過し、沈殿物を減圧乾燥して大麻の粗抽出物を得た。
（２）ＡＢ－８型のマクロポーラス樹脂をエタノールに２４時間浸した後、クロマトグラフィーカラムに入れ、エタノールを用いて溶出液＋等体積の脱イオン水が透明溶液になるまで洗い、それから、脱イオン水を用いて流出液が中性になるまで洗う。大麻の粗抽出物をエタノールで溶解した後、ＡＢ－８型のマクロポーラス樹脂に注入し、吸着体積が樹脂総体積の２／３に達するまでとする。まず、脱イオン水を用いて２ＢＶ／ｈの流速で樹脂をリンスし、それから、それぞれ１０％、３０％、５０％、７０％のエタノール水溶液を用いて２ＢＶ／ｈの流速でリンスして、７０％の溶離部分を回収する。４５℃下で真空回転蒸発によりエタノールを除去し、カンナビジオールの粗抽出物を得、ハイパフォーマンス液体クロマトグラムは、図１に示される。
（３）ｎ－ヘキサン：酢酸エチル：メタノール：水を５：０．５：５：１の体積比で分液漏斗に置き、十分に均一に振り動かし、２０ｍｉｎ静置した後、上相と下相を分け、超音波で２０ｍｉｎ脱ガスする。上相を固定相とし、下相を移動相とする。高速向流クロマトグラフを始動させ３０ｍｉｎ予熱した後、プール循環水を２５℃に設置し、固定相を３０ｍＬ／ｍｉｎの流速で機器へ汲み入れ、それから、正接続状態で正回転させるように、機器を始動させ、機器本体の回転速度を８００ｒ／ｍｉｎにさせる。回転速度が安定した後、５ｍＬ／ｍｉｎの流速で移動相を汲み入れ、２相は管路においてバランスがとれた後、１０００ｍｇのカンナビジオールの粗抽出物を２０ｍｌの移動相に溶け、試料を導入して紫外線検出器にて検出を行い、目標ピークの成分を収集して減圧濃縮し有機相を除去し、減圧する過程の中で析出の沈殿物を吸引ろ過して冷凍乾燥すると、カンナビジオール単量体を得、純度が９９．１２％であり、ＴＨＣを検出しておらず、図２及び３に示される。
実施例２
（１）１０ｋｇの産業用大麻を粉砕して乾燥し、固液比が１：１０(ｗ／ｖ、ｇ／ｍＬ)の割合で８０％のエタノール水溶液に加えて十分に混合し、１００ｍｉｎ、超音波抽出(温度を４５℃以下に制御し、遮光)を行い、超音波処理が完了した後、真空吸引ろ過し、得られたケーキを上記条件に従って２回繰り返し抽出し、濾液を合併し、４５℃下で真空回転蒸発によりエタノールを除去し、相対密度が１．２になるまで濃縮し、５～７倍の精製水を加え、５～８℃の条件下で、２４ｈ、水沈殿を行い、濾過し、沈殿物を減圧乾燥して大麻の粗抽出物を得た。
（２）Ｄ１０１型のマクロポーラス樹脂をエタノールに２４時間浸した後、クロマトグラフィーカラムに入れ、エタノールを用いて溶出液＋等体積の脱イオン水が透明溶液になるまで洗い、それから、脱イオン水を用いて流出液が中性になるまで洗う。大麻の粗抽出物をエタノールで溶解した後、Ｄ１０１型のマクロポーラス樹脂に注入し、吸着体積が樹脂総体積の２／３に達するまでとする。まず、脱イオン水を用いて２．５ＢＶ／ｈの流速で樹脂をリンスし、それから、それぞれ１０％、３０％、７０％、８０％のエタノール水溶液を用いて２．５ＢＶ／ｈの流速でリンスして、７０～８０％の溶離部分を回収する。４５℃下で真空回転蒸発によりエタノールを除去し、カンナビジオールの粗抽出物を得た。
（３）ｎ－ヘキサン：メタノール：水を５：５：２．５の体積比で分液漏斗に置き、十分に均一に振り動かし、２０ｍｉｎ静置した後、上相と下相を分け、超音波で２０ｍｉｎ脱ガスする。下相を固定相とし、上相を移動相とする。高速向流クロマトグラフを始動させ３０ｍｉｎ予熱した後、プール循環水を２５℃に設置し、固定相を３０ｍＬ／ｍｉｎの流速で機器へ汲み入れ、それから、正接続状態で逆回転させるように、機器を始動させ、機器本体の回転速度を８５０ｒ／ｍｉｎにさせる。回転速度が安定した後、１０ｍＬ／ｍｉｎの流速で移動相を汲み入れ、２相は管路においてバランスがとれた後、１０００ｍｇのカンナビジオールの粗抽出物を２０ｍＬの固定相に溶け、試料を導入して紫外線検出器にて検出を行い、目標ピークの成分を収集して減圧濃縮し有機相を除去し、得られた粉末を８０％のエタノールで結晶処理を行い、濾過して結晶体を得、減圧し真空乾燥すると、カンナビジオール単量体を得、純度が９９．７５％であり、ＴＨＣを検出していない。
実施例３
（１）１０ｋｇの産業用大麻を粉砕して乾燥し、固液比が１：８(ｗ／ｖ、ｇ／ｍＬ)の割合で８０％のエタノール水溶液に加えて十分に混合し、１２０ｍｉｎ、超音波抽出(温度を４５℃以下に制御し、遮光)を行い、超音波処理が完了した後、真空吸引ろ過し、得られたケーキを上記条件に従って２回繰り返し抽出し、濾液を合併し、４５℃下で真空回転蒸発によりエタノールを除去し、相対密度が１．２になるまで濃縮し、５～７倍の精製水を加え、５～８℃の条件下で、２４ｈ、水沈殿を行い、濾過し、沈殿物を減圧乾燥して大麻の粗抽出物を得た。
（２）ＡＢ－８型のマクロポーラス樹脂をエタノールに２４時間浸した後、クロマトグラフィーカラムに入れ、エタノールを用いて溶出液＋等体積の脱イオン水が透明溶液になるまで洗い、それから、脱イオン水を用いて流出液が中性になるまで洗う。大麻の粗抽出物をエタノールで溶解した後、ＡＢ－８型のマクロポーラス樹脂に注入し、吸着体積が樹脂総体積の２／３に達するまでとする。まず、脱イオン水を用いて２ＢＶ／ｈの流速で樹脂をリンスし、それから、それぞれ１０％、３０％、５０％、８０％のエタノール水溶液を用いて２ＢＶ／ｈの流速でリンスして、８０％の溶離部分を回収する。４５℃下で真空回転蒸発によりエタノールを除去し、カンナビジオールの粗抽出物を得た。
（３）ｎ－ヘキサン：メタノール：水を５：５：１の体積比で分液漏斗に置き、十分に均一に振り動かし、２０ｍｉｎ静置した後、上相と下相を分け、超音波で２０ｍｉｎ脱ガスする。上相を固定相とし、下相を移動相とする。高速向流クロマトグラフを始動させ３０ｍｉｎ予熱した後、プール循環水を２５℃に設置し、固定相を３０ｍＬ／ｍｉｎの流速で機器へ汲み入れ、それから、正接続状態で正回転させるように、機器を始動させ、機器本体の回転速度を８００ｒ／ｍｉｎにさせる。回転速度が安定した後、５ｍＬ／ｍｉｎの流速で移動相を汲み入れ、２相は管路においてバランスがとれた後、２０００ｍｇのカンナビジオールの粗抽出物を２０ｍＬの移動相に溶け、試料を導入して紫外線検出器にて検出を行い、目標ピークの成分を収集して減圧濃縮し有機相を除去し、減圧する過程の中で析出の沈殿物を吸引ろ過して冷凍乾燥すると、カンナビジオール単量体を得、純度が９９．５０％であり、ＴＨＣを検出していない。
Claims (9)
- 高速向流クロマトグラフィーによるカンナビジオールの分離精製方法において、
（１）産業用大麻の花又は葉を原料とし、エタノール抽出濃縮、水沈殿、真空回転蒸発を経て大麻の粗抽出物を得たステップと、
（２）得られた大麻の粗抽出物をエタノールで溶解した後、マクロポーラス樹脂に注入し、勾配溶離を経て、カンナビジオールに富む溶離部分を回収し、真空回転蒸発によりカンナビジオールの粗抽出物を得たステップと、
（３）ｎ－ヘキサン：酢酸エチル：メタノール：水を分離溶媒系として高速向流クロマトグラフィーによる分離精製を行い、カンナビジオールの蒸留部分を収集し、溶媒を回収し、後処理してカンナビジオールを得たステップと、を含むことを特徴とする高速向流クロマトグラフィーによるカンナビジオールの分離精製方法。 - 前記ステップ（１）におけるエタノール抽出濃縮は、体積％濃度が５０～９５％であるエタノール溶液を用い、産業用大麻の花又は葉とエタノール溶液との質量体積比は、１ｇ：５～１０ｍＬであることを特徴とする請求項１に記載の高速向流クロマトグラフィーによるカンナビジオールの分離精製方法。
- 前記ステップ（１）における水沈殿温度は、５～８℃であり、水沈殿時間は、２４ｈであることを特徴とする請求項１に記載の高速向流クロマトグラフィーによるカンナビジオールの分離精製方法。
- 前記ステップ（２）におけるマクロポーラス樹脂は、Ｄ１０１型、ＡＢ－８型又はＨＰＤ－１００型であることを特徴とする請求項１に記載の高速向流クロマトグラフィーによるカンナビジオールの分離精製方法。
- 前記ステップ（２）における勾配溶離は、体積％濃度が５～８５％であるエタノール溶液を用いて勾配溶離を行い、体積％濃度が７０～８５％であるエタノール溶液の溶離部分を回収することを特徴とする請求項１に記載の高速向流クロマトグラフィーによるカンナビジオールの分離精製方法。
- 前記ステップ（３）におけるｎ－ヘキサン：酢酸エチル：メタノール：水の体積比は、５：０～１：５：１～３であることを特徴とする請求項１に記載の高速向流クロマトグラフィーによるカンナビジオールの分離精製方法。
- 前記ステップ（３）における高速向流クロマトグラフィーによる分離精製は、具体的に、分離溶媒系のうちの一方の相を固定相とし、他方の相を移動相として、３０～５０ｍＬ／ｍｉｎの流速で前記固定相を高速向流クロマトグラフへ汲み入れ、２５～３５℃、機器本体の回転速度が７００～１０００ｒ／ｍｉｎである条件下で、５～１０ｍＬ／ｍｉｎの流速で前記移動相を汲み入れ、２相のバランスがとれた後、カンナビジオールの粗抽出物を移動相で溶解してから試料を導入し、検出器による検出を経て、カンナビジオールの蒸留部分を回収することを特徴とする請求項１に記載の高速向流クロマトグラフィーによるカンナビジオールの分離精製方法。
- 前記カンナビジオールの粗抽出物を移動相で溶解した後の濃度は、５０～１００ｍｇ／ｍＬであり、導入した試料の体積は、２０ｍＬであり、検出した波長は、２２０ｎｍであることを特徴とする請求項７に記載の高速向流クロマトグラフィーによるカンナビジオールの分離精製方法。
- 前記ステップ（３）における後処理は、減圧濃縮、結晶及び真空冷凍乾燥を行うことを含むことを特徴とする請求項１に記載の高速向流クロマトグラフィーによるカンナビジオールの分離精製方法。
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