CN112710768A - 去羟大麻二醇（dh-cbd）的含量测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种去羟大麻二醇(dehydroxylCBD，DH‑CBD)的含量测定方法，采用高效液相色谱法，使用Wonda Cract ODS‑2 C18色谱柱(5um4.6*150mm)，以甲醇：水＝(85：15)为流动相，流速为1.0ml/min，稀释剂为甲醇，柱温为30℃，使用紫外检测器，在波长210nm进行测定。本发明的去羟大麻二醇的含量测定方法前处理简单，具有简便、灵敏、稳定、可靠等优点。得到的高效液相色谱图通过回归方程计算去羟大麻二醇(DH‑CBD)的浓度，从而反应产品的质量信息，有利于监控产品质量。
Description
技术领域
本发明涉及物质含量分析测定技术领域，具体涉及一种去羟大麻二醇 (DH-CBD)的含量测定方法。
背景技术
大麻二酚(Cannabidiol CBD)是大麻的一种活性成分，而去羟大麻二醇(dehydroxylCBD，DH-CBD)是去除CBD的C6’位上的羟基产生的，分子结构如图1所示。
熊伟等报道了去羟大麻二醇(DH-CBD)是一种非精神活性大麻素类药物，它可以治疗甘氨酸受体(Gly R)功能缺陷和夸大的听觉和触觉惊吓反应(Wei Xiong 等人，Presynaptic glycine receptors as a potential therapeutic target forhyperekplexia disease，Nature Neuroscience[J].2014.17(2):232-239)。 GuichangZou等研究发现去羟大麻二醇(DH-CBD)能恢复GABA受体亚型的功能，可能是治疗神经丛亢进的一种有潜在价值的候选药物(Guichang Zou等人，The synthetic cannabinoiddehydroxylcannabidiol restores the function of a major GABAA receptor isoformin a cell model of hyperekplexia，Joumal of Biological Chemistry[J].2020.295(1):138-145)。Jieping Lu等研究显示脱羟大麻二醇(DH-CBD)，能显著地抑制伤害性热刺激所引起的慢性炎症疼痛 (Jieping Lu等人，Involvement of glycine receptorα1subunits in cannabinoid-induced analgesia，Neuropharmacology[J].2018.133:224-232)。熊伟等研究发现去羟大麻二醇(DH-CBD)显著增强大鼠脊髓切片中背角神经元中的甘氨酸电流，可显著抑制慢性炎症性和神经性疼痛，而不会在啮齿类动物中引起明显的镇痛耐受性(Wei Xiong等人，Cannabinoids suppress infl ammatoryand neuropathic painby targetingα3glycine receptors，J.Exp. Med[J].Vol.209No.61121-1134)。
综上可知，化学合成的DH-CBD具有很明显的镇痛作用，与传统的大麻素不同，该化合物在动物体内不产生任何引起体温下降或影响精神活动的副作用，因此具有很高的临床应用价值。目前尚未发现DH-CBD的检测方法。
发明内容
本发明的目的在于提供去羟大麻二醇(DH-CBD)的含量测定方法，从而反应产品的质量信息，有利于监控产品质量。
本发明所要解决的技术问题采用以下技术方案来实现：
一种去羟大麻二醇(DH-CBD)的含量测定方法，包括以下步骤：
S1：制备标准曲线溶液：精密称取DH-CBD对照品，加入甲醇溶解，定容至刻度，摇匀，为DH-CBD对照品母液，精密移取DH-CBD对照品母液，用甲醇稀释成一系列不同质量浓度的标准溶液；
S2：制备供试品溶液：精密称取DH-CBD的供试品，加甲醇溶解、稀释、定容至刻度，摇匀、过滤取续滤液即得浓度为0.1-0.35mg/ml的供试品溶液；
S3：含量测定：分别精密吸取所述标准曲线溶液和所述供试品溶液各10ul，注入高效液相色谱仪进行测定，所述DH-CBD的浓度与其峰面积呈线性关系，以所述DH-CBD浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，所述DH-CBD浓度标准曲线的回归方程为Y＝53471842.74X+12877.9。
优选地，所述高效液相色谱仪的色谱条件为：使用Wonda Cract ODS-2 C18 色谱柱(5um 4.6*150mm)，以甲醇-水＝(85:15)为流动相，等度洗脱。
优选地，所述流动相的流速是1.0ml/min。
优选地，所述色谱柱的柱温30℃。
优选地，所述色谱条件的波长检测为210nm。
本发明的有益效果为：本发明的去羟大麻二醇的含量测定方法处理简单，具有简便、灵敏、稳定、可靠等优点。得到的高效液相色谱图通过回归方程计算去羟大麻二醇(DH-CBD)的浓度，从而反应产品的质量信息，有利于监控产品质量。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例描述所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为DH-CBD的分子式；
图2为空白溶剂的液相色谱图；
图3为DH-CBD标准品的液相色谱图；
图4为DH-CBD供试品的液相色谱图；
图5为定量限浓度下DH-CBD的液相色谱图。
具体实施方式
为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种去羟大麻二醇(DH-CBD)的含量测定方法，包括以下步骤：
S1：制备标准曲线溶液：精密称取DH-CBD对照品，加入甲醇溶解，定容至刻度，摇匀，为DH-CBD对照品母液，精密移取DH-CBD对照品母液，用甲醇稀释成一系列不同质量浓度的标准溶液；
S2：制备供试品溶液：精密称取DH-CBD的供试品，加甲醇溶解、稀释、定容至刻度，摇匀、过滤取续滤液即得浓度为0.1-0.35mg/ml的供试品溶液；
S3：含量测定：分别精密吸取所述标准曲线溶液和所述供试品溶液各10ul，注入高效液相色谱仪进行测定，所述DH-CBD的浓度与其峰面积呈线性关系，以所述DH-CBD浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，所述DH-CBD浓度标准曲线的回归方程为Y＝53471842.74X+12877.9。
优选地，所述高效液相色谱仪的色谱条件为：使用Wonda Cract ODS-2 C18 色谱柱(5um 4.6*150mm)，以甲醇-水＝(85:15)为流动相，等度洗脱。
优选地，所述流动相的流速是1.0ml/min。
优选地，所述色谱柱的柱温30℃。
优选地，所述色谱条件的波长检测为210nm。
实施例2
本实施例提供去羟大麻二醇(DH-CBD)含量测定的方法学验证，具体包括以下几方面专属性实验
空白溶剂：取甲醇过滤进样10ul检测，色谱图如图2所示，为空白溶剂。
DH-CBD专属性溶液配制：精密称取DH-CBD对照品，加甲醇溶解、稀释、定容至刻度，摇匀、过滤、取续滤液即得。进样10ul检测，液相色谱图如图3。
供试品专属性溶液配制：精密称取供试品，加甲醇溶解、稀释、定容至刻度，摇匀、过滤、取续滤液即得。进样10ul检测，液相色谱图如图4。
2)精密度实验
配制好的DH-CBD专属性溶液重复进样6次，考察进样方法精密度，实验结果见表1
表1、精密度实验结果
| 进样次数 | DH-CBD峰面积 |
| 平行1 | 9310528 |
| 平行2 | 9473717 |
| 平行3 | 9370198 |
| 平行4 | 9277316 |
| 平行5 | 9346739 |
| 平行6 | 9378207 |
| 平均值 | 9359450 |
| RSD％ | 0.72 |
3)定量限
定量限：用稀释剂逐步稀释DH-CBD专属性溶液至0.6ug/ml，进样10ul，色谱图如图5所示，得S/N＝12.81，由此可知DH-CBD的定量限为0.06ug。
4)标准曲线的绘制
精密称取对照品9.3mg,加入甲醇溶解，定容至25ml容量瓶，摇匀，为DH-CBD 对照品母液，精密移取DH-CBD对照品母液，用甲醇稀释成一系列不同质量浓度的标准溶液，浓度分别为0.0744、0.1488、0.2232、0.2976、0.3720mg/ml的标准曲线溶液。进样10ul检测，以目标化合物峰面积(Y)及DH-CBD的质量浓度(X)，进行线性回归，得到回归方程和相关系数，结果见表2。
表2、标准曲线
实施例3
本实施例提供实际样品含量测定实验
两批DH-CBD样品均按照上述含量测定方法测定，结果见表3。
表3：实际DH-CBD样品的含量测定结果
| 样品名称 | 称样量(mg) | 稀释倍数 | 峰面积 | 含量％ |
| DH-CBD样品1 | 19.6 | 125 | 8442548 | 100.64 |
| DH-CBD样品2 | 8.9 | 50 | 8933280 | 93.80 |
结论：
综上所述，本发明的去羟大麻二醇(DH-CBD)的含量测定方法处理简单，具有简便、灵敏、稳定、可靠等优点。得到的高效液相色谱图通过回归方程计算去羟大麻二醇(DH-CBD)的浓度，从而反应产品的质量信息，有利于监控产品质量。
以上公开的本发明优选实施例只是用于帮助阐述本发明。优选实施例并没有详尽叙述所有的细节，也不限制该发明仅为所述的具体实施方式。显然，根据本说明书的内容，可作很多的修改和变化。本说明书选取并具体描述这些实施例，是为了更好地解释本发明的原理和实际应用，从而使所属技术领域技术人员能很好地理解和利用本发明。本发明仅受权利要求书及其全部范围和等效物的限制。
Claims (5)
1.一种去羟大麻二醇(DH-CBD)的含量测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：制备标准曲线溶液：精密称取DH-CBD对照品，加入甲醇溶解，定容至刻度，摇匀，为DH-CBD对照品母液，精密移取DH-CBD对照品母液，用甲醇稀释成一系列不同质量浓度的标准溶液；
S2：制备供试品溶液：精密称取DH-CBD的供试品，加甲醇溶解、稀释、定容至刻度，摇匀、过滤取续滤液即得浓度为0.1-0.35mg/ml的供试品溶液；
S3：含量测定：分别精密吸取所述标准曲线溶液和所述供试品溶液各10ul，注入高效液相色谱仪进行测定，所述DH-CBD的浓度与其峰面积呈线性关系，以所述DH-CBD浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，所述DH-CBD浓度标准曲线的回归方程为Y＝53471842.74X+12877.9。
2.如权利要求1所述的去羟大麻二醇(DH-CBD)的含量测定方法，其特征在于，所述高效液相色谱仪的色谱条件为：使用Wonda Cract ODS-2C18色谱柱(5um 4.6*150mm)，以甲醇-水＝(85:15)为流动相，等度洗脱。
3.如权利要求2所述的去羟大麻二醇(DH-CBD)的含量测定方法，其特征在于，所述流动相的流速是1.0ml/min。
4.如权利要求2所述的去羟大麻二醇(DH-CBD)的含量测定方法，其特征在于，所述色谱柱的柱温30℃。
5.如权利要求2所述的去羟大麻二醇(DH-CBD)的含量测定方法，其特征在于，所述色谱条件的波长检测为210nm。
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