CN103393671B - 银杏内酯的提取和精制方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种银杏内酯的提取和精制方法。本发明方法包括下列步骤：（1）提取；（2）制备银杏内酯富集物；（3）制备银杏内酯粗品；（4）结晶：银杏内酯粗品用含水乙醇分步结晶后得到高纯度的银杏内酯精制品。本发明方法所得银杏内酯含有银杏内酯A、B、C和白果内酯，总含量达95%-98%。本方法设计合理，所用溶剂可以回收再利用，降低了成本。本方法应用大孔树脂洗脱除杂，可以有效增加富集物中银杏内酯的含量。本方法步骤简单、操作方便、成本低、污染少，适于工业化生产；所得高纯度银杏内酯可作为银杏的有效部位用于制备银杏内酯药品或保健品的各种制剂，有较大的应用价值。
Description
技术领域
本发明涉及中药，具体涉及中药的提取方法，尤其涉及从银杏叶中提取和精制活性成分银杏内酯的方法。
背景技术
银杏叶提取物作为制药的有效成分已被广泛应用。目前从银杏中分离得到的有效成分主要是二萜内酯和倍半萜内酯，即银杏内酯A、B、C、J、M和白果内酯。银杏内酯属二萜内酯，分子中都含有6个五元环，其中有3个γ-内酯环和1个四氢呋喃环，它们的侧链上均有一个叔丁基。白果内酯属倍半萜内酯，分子结构中仅含有一个戊烷。20世纪80年代以来，研究发现银杏内酯是血小板活化因子（PAF）的强拮抗剂，被认为是最有临床应用前景的天然PAF受体拮抗剂，对于缺血损伤和中枢神经系统具有保护作用，对于心脑血管疾病具有显著疗效。但由于银杏内酯结构复杂，人工合成难度极大，因此，通过银杏叶的提取得到已成为银杏内酯的主要来源。白果内酯有很强的生物活性，具有多方面的神经保护作用，包括促进神经生长、改善老年记忆功能、防止老年痴呆的发生等。然而，银杏叶中萜内酯（包括二萜内酯和倍半萜内酯）的含量极低，要得到其中具有高药用价值的银杏内酯和白果内酯，则必须将银杏叶或其粗提物进行再提取精制。目前文献报道的银杏内酯提取分离方法主要有：溶剂提取法，溶剂提取-色谱柱分离法、超临界提取分离法、高速逆流色谱法及模拟移动床色谱法等，其中应用最多的是色谱柱分离法，填料多采用硅胶、氧化铝及反相柱填料等。但这些纯化精制方法存在一些缺陷，不能高效、经济、环保地分离出高纯度的银杏内酯。因此寻找简便、经济、环保的银杏内酯提取和精制方法是近年来技术人员所关注的研究热点。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于克服上述不足之处，研究设计一种成本低、纯度高、得率较优、安全性好的银杏内酯提取和精制方法。本发明的目的是通过下述方法实现的：
本发明提供一种银杏内酯的提取和精制方法。
本发明方法包括下列步骤：
（1）提取：取银杏干叶，粉碎，按药材重量加入含水乙醇加热回流提取3-4次，合并提取液，提取液用酸度调节剂调至PH为4-5，回收乙醇后得到提取浓缩液；
（2）制备银杏内酯富集物：提取浓缩液用有机溶剂分步萃取，萃取液减压浓缩干后，得到的萃取物用含水乙醇溶解，过滤，滤液上大孔吸附树脂，用含水乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩干燥得银杏内酯富集物；
（3）制备银杏内酯粗品：银杏内酯富集物用有机溶剂溶解，过滤，滤液蒸干，用含水乙醇溶解，过聚酰胺和/或MCI-GEL层析柱，依次用不同浓度的含水乙醇洗脱，收集洗脱液，洗脱液减压蒸干得银杏内酯粗品；
（4）结晶：银杏内酯粗品用含水乙醇分步结晶后得到高纯度的银杏内酯精制品。
本方法所得的银杏内酯含有银杏内酯A、B、C和白果内酯，总含量达95%-98%。
本发明方法所述步骤(1)银杏干叶提取所用的含水乙醇浓度为40%-80%，乙醇的用量为药材重量的4-8倍（W/W），提取次数为3-4次，每次提取时间为1-2小时。
步骤(1)所用酸度调节剂为有机酸或无机酸；有机酸选自柠檬酸、苹果酸、酒石酸或乙二酸，优选柠檬酸；无机酸选自2%-10%的稀盐酸或2%-10%的稀硫酸，优选5%的稀盐酸。
所述步骤(2)的分步萃取为：第一步用石油醚、庚烷、正己烷或环己烷中的一种或多种溶剂萃取，优选石油醚，溶剂用量为浓缩液量的1-1.5倍量，萃取3-4次，萃取液弃去，去除部分脂溶性杂质；第二步用乙酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、丙酮、甲基乙基酮、正丁醇或异丁醇中的一种或多种溶剂萃取,优选乙酸乙酯溶剂用量为浓缩液量的1-1.5倍量，萃取3-6次。
步骤(2)分步萃取得到的萃取物用5%-50%含水乙醇溶解，优选10%-20%乙醇,含水乙醇用量为萃取物的0.5-3倍量（V/W）萃取物，乙醇溶解的溶液减压过滤后，滤液用大孔吸附树脂除杂。
步骤(2)所用大孔吸附树脂选自D101、DA201、ADS-17、HP20或HP20SS，优选D101，柱体积为药材量的1-1.5倍量（V/W），洗脱剂为50%-60%乙醇，洗脱剂用量为2-5个柱体积，洗脱至洗脱液颜色变浅为止。
步骤(2)得到的银杏内酯富集物，经HPLC-ELSD检测，银杏总内酯（含银杏内酯A、B、C及白果内酯）总含量为9%-30%。
所述步骤(3)银杏内酯富集物使用丙酮或乙酸乙酯溶解、过滤，滤液蒸干，萃取物用乙醇溶解，过聚酰胺柱和/或MCI-GEL层析柱，使用0-50%乙醇水溶液洗脱，洗脱物减压浓缩至干得到粗品银杏总内酯。
所述减压浓缩操作条件为本领域内所熟知的操作，即于65℃以内和-0.09--0.1MPa条件下减压浓缩。
步骤(3)所述乙醇为5%-50%乙醇，优选10%-15%乙醇，乙醇用量为萃取物的0.1-1倍量（V/W），优选0.2-0.5倍量（V/W）。
步骤(3)聚酰胺柱层析所用聚酰胺为30-60目，柱体积为萃取物的0.5-2倍量（V/W），优选0.8-1.5倍量（V/W），洗脱剂为0-50%乙醇，优选10%-30%乙醇，洗脱剂用量为2-8个柱体积，洗脱至洗脱液中不含银杏内酯为止。
步骤(3)所述MCI-GEL层析柱所用吸附树脂填料为MCI-GELCHP系列反相吸附树脂，其技术参数为：粒径为75-150μm，平均粒径为120μm，PH范围为0-14，孔径为450埃，基体为聚苯乙烯和二乙烯基共聚物。
步骤(3)所述MCI-GEL柱层析，柱体积为萃取物的0.1-2倍量（V/W），优选0.5-1倍量（V/W），洗脱剂为0-50%乙醇，优选30%-50%乙醇，洗脱剂用量为2-8个柱体积，洗脱至洗脱液中不含银杏内酯为止。
步骤(3)所得粗品银杏总内酯总含量达60%-85%。
步骤(4)粗品银杏总内酯使用10%-80%乙醇分步结晶，将所得晶体合并后粉碎得到银杏内酯精制品，其分步结晶操作步骤为：
a)第一步结晶：将银杏总内酯粗品加入10倍量的水中，用等体积乙酸乙酯萃取3-4次，合并萃取液，减压蒸干，加入5-10倍量40%-80%乙醇加热溶解，趁热过滤，滤液于2℃‐10℃条件下放置2‐24小时，析出晶体，过滤，滤液a备用，用纯化水洗晶1‐5次，于60℃‐120℃烘干，得晶体a；
b)第二步结晶：滤液a减压蒸干，用5‐10倍量30%-50%乙醇加热溶解，趁热过滤，滤液于2℃‐10℃条件下放置2‐24小时，析出晶体，过滤，滤液b备用，用纯化水洗晶1‐5次，于60℃‐120℃烘干，得晶体b；或
晶体a用5‐10倍量30%-50%乙醇加热溶解重结晶，滤液b备用，用纯化水洗晶1‐5次，于60℃‐120℃烘干，过滤得晶体b；
c)第三步结晶：滤液b减压蒸干，用5‐10倍量30%-50%乙醇加热溶解，趁热过滤，滤液于2℃‐10℃条件下放置2‐24小时，析出晶体，过滤，滤液c备用，用纯化水洗晶1‐5次，于60℃‐120℃烘干，得晶体c；
d)第四步结晶：滤液c中加入0.5%‐1%活性碳脱色，过滤，滤液减压蒸干，用5‐10倍量20%-30%乙醇加热溶解，趁热过滤，滤液于2℃‐10℃条件下放置12‐48小时，析出晶体，过滤，滤液d备用，用纯化水洗晶1‐5次，于60℃‐120℃烘干，得晶体d；
e)第五步结晶：滤液d减压浓缩蒸干后，5‐10倍量20%-30%乙醇60℃水浴加热溶解，4℃下冷藏结晶12小时，过滤得晶体e，将所得晶体a,b,c,d,e或b,c,d,e合并后得银杏内酯精制品。
所得的银杏内酯精制品含有银杏内酯A、B、C和白果内酯，总含量达95%-98%。
本发明用的洗脱剂为乙醇水溶液，并且树脂填料可以再生利用，比其它硅胶、氧化铝等柱层析所用的有机溶剂毒性低、成本低。本方法设计合理，所用溶剂可以回收再利用，降低了成本。本方法应用大孔树脂洗脱除杂，可以有效增加富集物中银杏内酯的含量，富集物经过结晶和重结晶，银杏内酯的纯度可达95%-98%。本方法步骤简单、操作方便、成本低、污染少，适于工业化生产；所得高纯度银杏内酯可作为银杏的有效部位用于制备银杏内酯药品或保健品的各种制剂，有较大的应用价值。
具体实施方式
参考下列实施例将更易于理解本发明，给出实施例是为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。
实施例所用原料通过市售得到。
实施例1
取干燥银杏叶300g，粉碎，用50%乙醇回流提取三次，溶剂用量分别为2.4L、2.1L、1.8L，每次提取2小时，合并提取液，加入柠檬酸调PH值为4，60℃减压浓缩回收乙醇,浓缩液体积为150mL,石油醚萃取3次，每次150mL，萃取液弃去，再用乙酸乙酯萃取6次，每次150mL，合并萃取液，回收乙酸乙酯，萃取物50%乙醇150mL溶解后，上D101大孔吸附树脂，60%乙醇（1.5L）洗脱，洗脱液于60℃减压浓缩干得银杏内酯富集物（4.2g），经HPLC-ELSD检测，银杏总内酯（含银杏内酯A、B、C及白果内酯）总含量为15.7%。
银杏内酯富集物乙酸乙酯（50mL）溶解，过滤，滤液于60℃减压浓缩蒸干，丙酮（50mL）溶解，过滤，滤液于60℃减压浓缩蒸干，50%乙醇（35mL）溶解，上MCIgel柱，20%乙醇200ml洗脱，30%乙醇200ml洗脱，50%乙醇200ml洗脱，合并洗脱物,60℃减压浓缩蒸干得银杏内酯粗品，HPLC-ELSD检测，银杏总内酯（含银杏内酯A、B、C及白果内酯）含量为64.6%。
银杏内酯粗品30%乙醇（60mL）溶解，上聚酰胺柱，5%、10%乙醇各200ml洗脱，合并洗脱物于60℃减压浓缩蒸干，加入50%乙醇（15mL）60℃水浴加热溶解，4℃下冷藏结晶12小时，过滤得晶体a（96mg），母液于60℃减压浓缩蒸干后，加入50%乙醇（7mL）60℃水浴加热溶解，4℃下冷藏结晶12小时，过滤得晶体b（71mg），母液减压浓缩干后，30%乙醇（7mL）60℃水浴加热溶解，4℃下冷藏结晶24小时，过滤得晶体c（69mg），滤液中加入活性碳（50mg）脱色，过滤，滤液于60℃减压浓缩蒸干后，25%乙醇（5mL）60℃水浴加热溶解，4℃下冷藏结晶48小时，过滤得晶体d（57mg），将晶体a、b、c和d合并后，真空加热干燥（-0.1MPa,80℃,10h）得银杏内酯精制品（293mg），经HPLC-ELSD检测，银杏内酯含量为98.0%。
实施例2
取干燥银杏叶300g，粉碎，用50%乙醇回流提取三次，溶剂用量分别为2.4L、2.1L、1.8L，每次提取2小时，合并提取液，加入柠檬酸调PH值为4，60℃减压浓缩回收乙醇,浓缩液体积为150mL,石油醚萃取3次，每次150mL，萃取液弃去，再用乙酸乙酯萃取5次，每次150mL,合并有机相，回收乙酸乙酯，萃取物30%乙醇（100mL）溶解后，过滤，滤液上D101大孔吸附树脂，60%乙醇(1.5L)洗脱，洗脱液于60℃减压浓缩蒸干得银杏内酯富集物(4.8g)，经HPLC-ELSD检测，银杏总内酯（含银杏内酯A、B、C及白果内酯）含量为10.1%。
银杏内酯富集物丙酮(50mL)溶解，过滤，滤液于60℃减压浓缩蒸干，15%乙醇(80mL)溶解，上聚酰胺柱，水洗脱200ml，5%乙醇洗脱200ml，10%乙醇洗脱200ml，合并水与乙醇洗脱物于60℃减压浓缩蒸干得粗品银杏内酯。粗品银杏内酯用70%乙醇（8mL）60℃水浴加热溶解，4℃下冷藏结晶5小时，过滤得晶体a（70mg），母液于60℃减压浓缩蒸干后，加入50%乙醇（8mL）60℃水浴加热溶解，4℃下冷藏结晶12小时，过滤得晶体b（110mg），母液于60℃减压浓缩蒸干后，30%乙醇（10mL）60℃水浴加热溶解，4℃下冷藏结晶12小时，过滤得晶体c（85mg），滤液中加入活性碳（50mg）脱色，过滤、浓缩干后，25%乙醇（10mL）60℃水浴加热溶解，4℃下冷藏结晶24小时，过滤得晶体d（82mg），将晶体a、b、c和d合并后，真空加热干燥（-0.1MPa,80℃,10h）得银杏内酯精制品（347mg），银杏内酯含量为97.4%。
实施例3
取干燥银杏叶300g，粉碎，用60%乙醇回流提取三次，溶剂用量分别为2.4L、2.1L、1.8L，每次提取2小时，合并提取液，加入5%稀盐酸调PH值为4，60℃减压回收乙醇，浓缩液体积为150mL,石油醚萃取3次，每次150mL，萃取液弃去，再用乙酸乙酯萃取4次，每次150mL,合并有机相，回收乙酸乙酯，萃取物15%乙醇（200mL）溶解后，过滤，滤液上D101大孔吸附树脂，60%乙醇(1.5L)洗脱，洗脱液于60℃减压浓缩蒸干得银杏内酯富集物（5.3g），经HPLC-ELSD检测，银杏总内酯（含银杏内酯A、B、C及白果内酯）含量为9.2%。
银杏内酯富集物丙酮(50mL)溶解，过滤，滤液于60℃减压浓缩蒸干，15%乙醇(80mL)溶解，上聚酰胺柱，15%乙醇洗脱300ml，洗脱物于60℃减压浓缩蒸干得粗品银杏内酯。粗品银杏内酯用40%乙醇（15mL）60℃水浴加热溶解，4℃下冷藏结晶7小时，过滤得晶体a（90mg），母液减压蒸干后，加入40%乙醇（10mL）60℃水浴加热溶解，4℃下冷藏结晶12小时，过滤得晶体b（88mg），母液于60℃减压浓缩蒸干后，30%乙醇（10mL）60℃水浴加热溶解，4℃下冷藏结晶12小时，过滤得晶体c（105mg），滤液中加入活性碳（50mg）脱色，过滤、浓缩干后，25%乙醇（10mL）60℃水浴加热溶解，4℃下冷藏结晶24小时，过滤得晶体d（79mg），将晶体a、b、c和d合并后，真空加热干燥（-0.1MPa,80℃,10h）得银杏内酯精制品（362mg），银杏内酯含量为95.6%。
实施例4
取干燥银杏叶300g，粉碎，用60%乙醇回流提取三次，溶剂用量分别为2.4L、1.5L、1.5L，每次提取2小时，合并提取液，加入柠檬酸调PH值为4，减压回收乙醇,浓缩液体积为150mL,石油醚萃取3次，每次150mL，萃取液弃去，再用乙酸乙酯萃取4次，每次150mL,合并有机相，回收乙酸乙酯，萃取物10%乙醇（200mL）溶解后，过滤，滤液上D101大孔吸附树脂，60%乙醇(1.5L)洗脱，洗脱液于60℃减压浓缩蒸干得银杏内酯富集物（4.9g），经HPLC-ELSD检测，银杏总内酯（含银杏内酯A、B、C及白果内酯）含量为12.9%。
银杏内酯富集物丙酮(50mL)溶解，过滤，滤液于60℃减压浓缩蒸干，10%乙醇(100mL)溶解，上聚酰胺柱，5%乙醇洗脱350ml，洗脱物于60℃减压浓缩蒸干得粗品银杏内酯。粗品银杏内酯用40%乙醇（16mL）60℃水浴加热溶解，4℃下冷藏结晶12小时，过滤得晶体a（120mg），晶体a用40%乙醇（15mL）60℃水浴加热溶解重结晶，4℃下冷藏结晶12小时，过滤得晶体b（94mg），母液合并于60℃减压浓缩蒸干后，40%乙醇（15mL）60℃水浴加热溶解，4℃下冷藏结晶12小时，过滤得晶体c（98mg），母液于60℃减压浓缩蒸干后，20%乙醇（20mL）60℃水浴加热溶解，4℃下冷藏结晶12小时，过滤得晶体d（80mg），滤液中加入活性碳（50mg）脱色，过滤、于60℃减压浓缩蒸干后，20%乙醇（10mL）60℃水浴加热溶解，4℃下冷藏结晶12小时，过滤得晶体e（75mg），将晶体b、c、d和e合并后，真空加热干燥（-0.1MPa,80℃,10h）得银杏内酯精制品（347mg），银杏内酯含量为98.2%。
实施例5
取干燥银杏叶300g，粉碎，用40%乙醇回流提取三次，溶剂用量分别为2.4L、1.8L、1.8L，每次提取2小时，合并提取液，加入柠檬酸调PH值为4，60℃减压浓缩回收乙醇,浓缩液体积为150mL,石油醚萃取3次，每次150mL，萃取液弃去，再用乙酸乙酯萃取4次，每次150mL,乙酸乙酯萃取4次，每次150mL,合并有机相，回收乙酸乙酯，萃取物15%乙醇（150mL）溶解后，上D101大孔吸附树脂，60%乙醇(1.5L)洗脱，于60℃减压浓缩蒸干得银杏内酯富集物(3.8g)，经HPLC-ELSD检测，银杏总内酯（含银杏内酯A、B、C及白果内酯）含量为11.3%。
银杏内酯富集物丙酮(50mL)溶解，过滤，60℃减压浓缩蒸干，10%乙醇(100mL)溶解，上聚酰胺柱，5%乙醇洗脱300ml、10%乙醇洗脱200ml，合并浓缩至有固体析出，4℃下冷藏析晶5小时，晶体再用40%乙醇（14mL）重结晶，过滤得晶体a（78mg），母液合并60℃减压浓缩蒸干后，40%乙醇（10mL）60℃水浴加热溶解，4℃下冷藏结晶5小时，过滤得晶体b（80mg），母液于60℃减压浓缩蒸干后，20%乙醇（15mL）60℃水浴加热溶解，4℃下冷藏结晶5小时，过滤得晶体c（65mg），滤液中加入活性碳（50mg）脱色，过滤、浓缩后，25%乙醇（10mL）60℃水浴加热溶解，4℃下冷藏结晶24小时，过滤得晶体d（44mg），将晶体a、b、c和d合并后，真空加热干燥（-0.1MPa,80℃,10h）得银杏内酯精制品（267mg），银杏内酯含量为97.6%。
实施例6
取干燥银杏叶300g，粉碎，用80%乙醇回流提取三次，溶剂用量分别为2.4L、2.1L、1.8L，每次提取2小时，合并提取液，加入5%稀盐酸调PH值为4，60℃减压回收乙醇,浓缩液体积为150mL,石油醚萃取3次，每次150mL，萃取液弃去，再用乙酸乙酯萃取4次，每次150mL,乙酸乙酯萃取5次，每次150mL,合并有机相，回收乙酸乙酯，萃取物15%乙醇（150mL）溶解后，过滤，上D101大孔吸附树脂，60%乙醇(1.5L)洗脱，60℃减压浓缩蒸干得银杏内酯富集物(5.3g)，经HPLC-ELSD检测，银杏总内酯（含银杏内酯A、B、C及白果内酯）含量为9.1%。
银杏内酯富集物丙酮(50mL)溶解，过滤，滤液于60℃减压浓缩蒸干，15%乙醇(80mL)溶解，上聚酰胺柱，20%乙醇洗脱300ml、30%乙醇洗脱200ml，合并浓缩至有固体析出，4℃下冷藏析晶5小时，晶体再用40%乙醇（16mL）重结晶，过滤得晶体a（91mg），母液合并60℃减压浓缩蒸干后，40%乙醇（10mL）60℃水浴加热溶解，4℃下冷藏结晶10小时，过滤得晶体b（87mg），母液于60℃减压浓缩蒸干后，25%乙醇（12mL）60℃水浴加热溶解，4℃下冷藏结晶24小时，过滤得晶体c（73mg），滤液中加入活性碳（50mg）脱色，过滤、浓缩干后，25%乙醇（10mL）60℃水浴加热溶解，4℃下冷藏结晶24小时，过滤得晶体d（68mg），将晶体a、b、c和d合并后，真空加热干燥（-0.1MPa,80℃,10h）得银杏内酯精制品（319mg），银杏内酯含量为96.4%。
实施例7
取干燥银杏叶300g，粉碎，用70%乙醇回流提取三次，溶剂用量分别为2.4L、2.1L、1.8L，每次提取2小时，合并提取液，加入5%稀盐酸调PH值为4，减压回收乙醇，浓缩液体积为150mL,石油醚萃取3次，每次150mL，萃取液弃去，再用乙酸乙酯萃取4次，每次150mL,乙酸乙酯萃取5次，每次150mL,合并有机相，回收乙酸乙酯，萃取物15%乙醇（150mL）溶解后，过滤，上D101大孔吸附树脂，60%乙醇洗脱，洗脱液于60℃减压浓缩蒸干得银杏内酯富集物（4.7g），经HPLC-ELSD检测，银杏总内酯（含银杏内酯A、B、C及白果内酯）含量为12.5%。
银杏内酯富集物丙酮(50mL)溶解，过滤，滤液于60℃减压浓缩蒸干，15%乙醇(80mL)溶解，上聚酰胺柱，20%乙醇洗脱300ml、30%乙醇洗脱200ml，合并浓缩至有固体析出，4℃下冷藏析晶5小时，晶体再用40%乙醇重结晶，过滤得晶体a（112mg），母液合并60℃减压浓缩蒸干后，40%乙醇（10mL）60℃水浴加热溶解，4℃下冷藏结晶10小时，过滤得晶体b（68mg），母液于60℃减压浓缩蒸干后，25%乙醇（12mL）60℃水浴加热溶解，4℃下冷藏结晶24小时，过滤得晶体c（71mg），滤液中加入活性碳（50mg）脱色，过滤、60℃减压浓缩蒸干后，25%乙醇（10mL）60℃水浴加热溶解，4℃下冷藏结晶24小时，过滤得晶体d（80mg），将晶体a、b、c和d合并后，真空加热干燥（-0.1MPa,80℃,10h）得银杏内酯精制品（331mg），银杏内酯含量为97.3%。
实施例8
取干燥银杏叶3kg，粉碎，用50%乙醇回流提取三次，溶剂用量分别为24L、15L、15L，每次提取2小时，合并提取液，加入柠檬酸调PH值为4，60℃减压浓缩回收乙醇，浓缩液体积为1.5L,石油醚萃取3次，每次1.50L，萃取液弃去，再用乙酸乙酯萃取4次，每次2.5L,合并有机相，回收乙酸乙酯，萃取物15%乙醇（1.5L）溶解后，过滤，滤液上D101大孔吸附树脂，60%乙醇(10L)洗脱，60℃减压浓缩蒸干得银杏内酯富集物(56g)，经HPLC-ELSD检测，银杏总内酯（含银杏内酯A、B、C及白果内酯）含量为12.6%。
银杏内酯富集物丙酮(500mL)溶解，过滤，滤液于60℃减压浓缩蒸干，10%乙醇(800mL)溶解，上聚酰胺柱，依次用水，10%乙醇、20%乙醇、30%乙醇洗脱，合并60℃减压浓缩蒸干得粗品银杏内酯。粗品银杏内酯用50%乙醇（110mL）60℃水浴加热溶解，4℃下冷藏结晶5小时，过滤得晶体a（1.3g），母液减压蒸干后，40%乙醇（90mL）60℃水浴加热溶解，4℃下冷藏结晶12小时，过滤得晶体b（1.2g），母液于60℃减压浓缩蒸干后，30%乙醇（90mL）60℃水浴加热溶解，4℃下冷藏结晶12小时，过滤得晶体c（1.0g），滤液中加入活性碳（500mg）脱色，过滤、于60℃减压浓缩蒸干后，25%乙醇（70mL）60℃水浴加热溶解，4℃下冷藏结晶24小时，过滤得晶体d（0.8g），将晶体a、b、c和d合并后，真空加热干燥（-0.1MPa,80℃,10h）得银杏内酯精制品（4.3g），银杏内酯含量为96.9%。
Claims (1)
1.银杏内酯的提取和精制方法，其特征在于，干燥银杏叶300g，粉碎，用50％乙醇回流提取三次，溶剂用量分别为2.4L、2.1L、1.8L，每次提取2小时，合并提取液，加入柠檬酸调pH值为4，60℃减压浓缩回收乙醇,浓缩液体积为150mL,石油醚萃取3次，每次150mL，萃取液弃去，再用乙酸乙酯萃取6次，每次150mL，合并萃取液，回收乙酸乙酯，萃取物50％乙醇150mL溶解后，上D101大孔吸附树脂，60％乙醇1.5L洗脱，洗脱液于60℃减压浓缩干得银杏内酯富集物4.2g，经HPLC‐ELSD检测，银杏总内酯含银杏内酯A、B、C及白果内酯总含量为15.7％；
银杏内酯富集物用乙酸乙酯50mL溶解，过滤，滤液于60℃减压浓缩蒸干，丙酮50mL溶解，过滤，滤液于60℃减压浓缩蒸干，50％乙醇35mL溶解，上MCIgel柱，20％乙醇200ml洗脱，30％乙醇200ml洗脱，50％乙醇200ml洗脱，合并洗脱物，60℃减压浓缩蒸干得银杏内酯粗品，HPLC‐ELSD检测，银杏内酯粗品含银杏内酯A、B、C及白果内酯含量为64.6％；
银杏内酯粗品用30％乙醇60mL溶解，上聚酰胺柱，5％、10％乙醇各200ml洗脱，合并洗脱物于60℃减压浓缩蒸干，加入50％乙醇15mL60℃水浴加热溶解，4℃下冷藏结晶12小时，过滤得晶体a96mg，母液于60℃减压浓缩蒸干后，加入50％乙醇7mL60℃水浴加热溶解，4℃下冷藏结晶12小时，过滤得晶体b71mg，母液减压浓缩干后，30％乙醇7mL60℃水浴加热溶解，4℃下冷藏结晶24小时，过滤得晶体c69mg，滤液中加入活性炭 50mg脱色，过滤，滤液于60℃减压浓缩蒸干后，25％乙醇5mL60℃水浴加热溶解，4℃下冷藏结晶48小时，过滤得晶体d57mg，将晶体a、b、c和d合并后，真空加热干燥‐0.1MPa,80℃,10h，得银杏内酯精制品293mg，经HPLC‐ELSD检测，银杏内酯含量为98.0％。
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