CN104072418B - 一种大孔树脂分离纯化异紫堇碱的制备技术 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种大孔树脂分离纯化异紫堇碱的制备技术。本发明采用由聚苯乙烯二乙烯基苯聚合形成的非极性、弱极性以及中等极性的大孔吸附树脂，通过调节吸附液和解吸附液的pH，使目标生物碱化合物形成游离态或成盐来调节其于大孔吸附树脂的分子作用力包括范德华引力，芳香环的共轭作用以及有机化合物中间的氢键作用，达到选择性吸附、解吸附异紫堇碱的目的。
Description
技术领域
本发明涉及一种采用大孔吸附树脂柱色谱技术从植物提取物中选择性分离纯化植物次生代谢产物的制备方法，属天然产物化学分离纯化技术领域。具体地讲，本发明涉及利用聚苯乙烯二乙烯基苯聚合制成的大孔树脂作为选择性吸附剂，从秃疮花、地不容、金钱吊乌龟及紫堇等植物提取物中选择吸附，分离纯化异紫堇碱的制备方法。
背景技术
异紫堇碱（Isocorydine），也叫异紫堇啡碱，异紫堇定，异可利定，属阿朴菲型生物碱植物次生代谢产物，具有较好的药理活性，该化合物广泛分布于木兰科、防己科、大戟科、樟科、马钱科、番荔枝科、马兜铃科、小檗科、罂粟科、毛茛科、芸香科等多科植物中（赵奇志，阿朴菲类生物碱生物活性研究进展，天然产物研究与开发，2006,18，316-324.），异紫堇碱在秃疮花，紫金龙，广西地不容，山胡椒，小藤铃儿草，洋玉兰等植物中含量较高。1992年Ribar确定了异紫堇碱的化学结构（RibarB，Structureofisocorydine，ActaCrystallogrC，1992，48，945-947.），对于异紫堇碱的药理活性已经有过很多研究，ChenZH等在1982年报道异紫堇碱对于内脏平滑肌的非特异解痉作用（ChenZH，Spasmolyticeffectofisocorydineonisolatedvascularstrips，ActaPharmacolSin，1982，3，240-242.），2001年JiangQS等人认为异紫堇碱有舒张血管的作用（JiangQS，Relationofvasodilativeactionofisocorydinetocyclicnucleotides，ChinJPharmToxicol，2001，15，251-255.），2003年，国家药监局批准异可利定盐酸盐作为处方药（H53021977）用于胃、肠、胆、胰、子宫、血管痉挛所致的疼痛。
秃疮花（Dicranostigmaleptopodum），又名红茂草、秃子花，为罂粟科秃疮花属植物，主要分布于我国秦岭以北，甘肃和陕西黄土高原地区，全草有清热解毒、消肿止痛、杀虫等功效（柳军玺，秃疮花生物碱类化学成分研究，中草药，2011，8，1505-1508.）。紫金龙（Dactylicapnosscandens（D.Don））Hutch，又名串枝莲、碗豆七等，为罂粟科紫金龙属植物，主要分布于云南、四川、广西、西藏等地，其根入药有镇痛、止血、消炎、降压之功效，可治疗多种疼痛，是我国云南白族传统习用中草药（钱金栿，白族草药紫金龙成分的研究，西北药学杂志，2000，15，57-58.）。广西地不容（StephaniakwangsiensisH.S.Lo）为防己科千金藤属植物，主要分布于广西中部至西南部、贵州南部及云南文山地区；块根主治感冒头痛、胃痛、咽喉痛、痢疾、疮痈肿痛、外伤疼痛。
大孔吸附树脂是一类不含交换基团且有大孔结构的高分子吸附树脂，具有良好的大孔网状结构和较大的比表面积，可以通过物理吸附从水溶液中有选择地吸附有机物，是20世纪60年代发展起来的新型有机高聚物吸附剂，已在环保、食品、医药等领域得到了广泛的应用。大孔吸附树脂由于具有选择性吸附有机化合物，尤其对于植物提取物中如黄酮及其苷类化合物的选择性吸附作用而被广泛应用于植物化学成分的分离纯化（YongfengLiu，Preparativeseparationandpurificationoflycopenefromtomatoskinsextractsbymacroporousadsorptionresins，FoodChemistry，2010，123,1027-1034.），大孔吸附树脂具有物理化学稳定性高、比表面积大、吸附容量大、选择性好、吸附速度快、解吸条件温和、再生处理方便、使用周期长、宜于构成闭路循环、节省费用等诸多优点，可以重复使用的特点在柱色谱填料如硅胶、氧化铝、活性炭以及硅藻土中，具有工业化生产的潜在优势。
异紫堇碱的制备技术目前主要利用生物碱类化合物在不同的酸碱溶剂中溶解性不同的差异，分级沉淀和重结晶纯化异紫堇碱（CN1030416A），由于植物成分的复杂性导致该技术对于目标化合物的选择性差，所得异紫堇碱的产品纯度很难达到现行中国药典的标准和原料药纯度要求，另外采用不同的酸碱溶液和有机溶剂萃取相结合的办法（CN101759638A）该方法的不足在于大量使用毒性较大的有机溶剂，容易造成操作工人的身体健康危害和环境污染。
发明内容
本发明的目的在于提供一种利用大孔吸附树脂从植物提取物中选择性吸附分离纯化异紫堇碱的制备技术。
本发明采用由聚苯乙烯二乙烯基苯聚合形成的非极性、弱极性以及中等极性的大孔吸附树脂，通过调节吸附液和解吸附液的pH，使目标生物碱化合物形成游离态或成盐来调节其于大孔吸附树脂的分子作用力包括范德华引力，芳香环的共轭作用以及有机化合物中间的氢键作用，达到选择性吸附、解吸附异紫堇碱的目的。
一种大孔树脂分离纯化异紫堇碱的制备技术，其特征在于该方法按以下步骤完成：
A、异紫堇碱粗提物制备：取经干燥粉碎后的含有异紫堇碱的植物，采用溶剂回流提取法或冷浸提取法，提取植物中的化学成分，制备含有异紫堇碱的植物粗提物，调节该溶液为碱性溶液，作为大孔吸附树脂柱的上样溶液；
B、粗提物中异紫堇碱的大孔树脂选择性吸附：通过乙醇浸泡预处理聚苯乙烯二乙烯基苯聚合制成的大孔吸附树脂，将该大孔吸附树脂填充于层析柱中，制成大孔树脂吸附层析柱，水洗层析柱至无醇味，取于大孔树脂柱床体积相同的A步骤中的异紫堇碱粗提物上样液，恒流循环通过大孔吸附树脂层析柱，循环吸附异紫堇碱，至层析柱流出液中薄层色谱检测无异紫堇碱时，停止循环，循环液弃去；
C、异紫堇碱的选择性解吸附：用1-4倍柱床体积的水洗脱B步骤中吸附有异紫堇碱的大孔吸附树脂柱，流出液弃去除杂；再用1-2倍柱床体积的体积百分含量为10%-60%的乙醇溶液，洗脱大孔树脂层析柱，流出液弃去除杂；然后用1-2倍柱床体积的体积百分含量为60-90%的酸性乙醇溶液，洗脱树脂柱，收集层析柱流份，为选择性解吸附异紫堇碱部位，调节该流份的酸碱度为中性，回收溶剂至干，得异紫堇碱粗品；
D、异紫堇碱的重结晶：步骤C中的异紫堇碱粗品用活性炭脱色，溶剂重结晶得异紫堇碱纯品。
本发明步骤A中含有异紫堇碱的植物选自秃疮花、紫金龙、广西地不容以及紫堇中的一种。
本发明步骤A中碱性溶液其pH范围在8-10之间。
本发明步骤A中的溶剂回流提取法或冷浸提取法为本领域人员了解的采用乙醇和水回流提取或冷浸渗漏提取法提取植物化学成分的常规方法。
本发明步骤A中上样液中异紫堇碱的浓度范围为0.2-10.0mg/mL。
本发明步骤B中的大孔吸附树脂由聚苯乙烯二乙烯基苯聚合制成，是本领域人员所熟悉的型号为LX28、DM-130、D101、LX10G和YWD01F型大孔吸附树脂中的一种。
本发明步骤C中的酸性乙醇溶液其pH范围在3-6之间。
本发明的优点在于：
1、通过调节吸附液和解吸附液的pH，使目标生物碱化合物形成游离态或成盐来调节其于大孔吸附树脂的分子作用力包括范德华引力，芳香环的共轭作用以及有机化合物分子之间的氢键作用，达到选择性吸附、解吸附异紫堇碱的目的。该技术对于目标化合物的选择性强，分离产物纯度相对较高。
2、克服异紫堇碱现有柱色谱和萃取分离技术中采用氯仿、甲醇、乙酸乙酯和丙酮等环境污染有机溶剂的缺点，选择常规的水和乙醇为生产溶剂；该技术工艺简单，异紫堇碱提取回收率较高，适合工业化生产等优点。
3、本发明应用的大孔树脂材料基本是由聚苯乙烯二乙烯基苯聚合形成的材料，属非极性、弱极性以及中等极性的大孔树脂，该材料在极性溶剂吸附和解吸附溶剂中的材料残留较少，便于目标物的分离纯化；分离介质物理化学性质稳定，可以重复循环使用，便于工业化生产和降低生产成本。
附图说明
图1为异紫堇碱纯化前、纯化后及标准品HPLC色谱图。
图2为异紫堇碱在不同树脂上的吸附／解吸率（X轴上的数字代表1、YWD12G，2、DM130，3、07C，4、LX28，5、HPD450，6、LSA40，7、XDA6，8、YWD01F）。
图3为异紫堇碱在不同树脂上的吸附／解吸率（X轴上的数字代表1、D101，2、XDA1，3、LX16，4、LX10G，5、LSA21，6、LSD001，7、HPD600，8、ADS17）。
具体实施方式
为了更清楚的理解本发明，以下结合实施例对本发明作进一步的说明，但本发明不限于以下实施例。
实施例1：秃疮花中异紫堇碱的分离纯化
A、异紫堇碱粗提物制备：取秃疮花20g，加入200mL水，水回流提取2次，每次2h，过滤，合并滤液，减压浓缩，取样，HPLC测定异紫堇碱的含量，至异紫堇碱的含量达3.17mg/mL时停止浓缩，调节溶液的pH值为10，得到异紫堇碱粗提物。
B、大孔树脂对粗提物中异紫堇碱的选择性吸附：室温下，采用直径和柱高比（径高比）为1:10的色谱柱，填充预处理过的聚苯乙烯二乙烯基苯大孔吸附树脂（LX-28），填充体积为2cmx20cm，成为大孔树脂吸附色谱柱，取A步骤中的异紫堇碱粗提物40mL，以1mL/min的流速上样，加于大孔树脂吸附色谱柱上吸附异紫堇碱，硅胶GF254薄层色谱（展开剂氯仿：甲醇：氨水为10：1：0.1，喷碘-碘化铋钾溶液显色，异紫堇碱的Rf值在0.5，或与标准品对照）检测柱下流份，至无异紫堇碱斑点时，表明粗提物中异紫堇碱完全吸附。
C、异紫堇碱的选择性解吸附：用120mL水，以1mL/min的流速，洗脱B步骤中吸附有异紫堇碱的大孔吸附树脂柱，流份废弃；再用150mL体积比为60：40的乙醇水溶液，，以1mL/min的流速，洗脱树脂柱除杂，回收溶剂；然后用盐酸调节pH为4的60mL体积比为70：30的乙醇水溶液洗脱树脂柱，收集流份，为选择性解吸附异紫堇碱部位，氨水调节pH为7，回收溶剂蒸干，得异紫堇碱粗品0.1g，HPLC检测异紫堇碱纯度为85.34%，回收率为68.64%，结果见附图1。
D、异紫堇碱的重结晶：步骤C中的异紫堇碱粗品用活性炭脱色，乙醇重结晶，异紫堇碱的纯度达到90.00%。
实施例2：秃疮花中异紫堇碱的分离纯化
A、异紫堇碱粗提物制备：取秃疮花20g，加入150mL乙醇，回流提取2次，每次1h，过滤，合并滤液，减压浓缩，回收溶剂至干，浓缩物加水溶解，配制成上样溶液，HPLC测定异紫堇碱的浓度为4.10mg/mL时，氢氧化钠调节pH为9，得到异紫堇碱粗提物。
B、大孔树脂对粗提物中异紫堇碱的选择性吸附：室温下，采用直径和柱高比（径高比）为5:1的层析柱，填充预处理过的聚苯乙烯二乙烯基苯大孔吸附树脂（LX-10G），填充体积为3cmx15cm，成为大孔树脂吸附层析柱，取A步骤中的异紫堇碱粗提物40mL，以1mL/min的流速上样，加于大孔树脂吸附层析柱上，循环吸附，硅胶GF254薄层色谱（展开剂氯仿：甲醇：氨水为10：1：0.1，喷碘-碘化铋钾溶液显色，异紫堇碱的Rf值在0.5，或与标准品对照）检测柱下流份，至无异紫堇碱斑点时，表明粗提物中异紫堇碱完全吸附，停止循环。
C、异紫堇碱的选择性解吸附：用120mL水，以1mL/min的流速，洗脱B步骤中吸附有异紫堇碱的大孔吸附树脂柱，流份废弃；再用200mL体积比50：40的乙醇溶液，以1mL/min的流速，洗脱树脂柱除杂，流份回收溶剂；然后用盐酸调节pH为5的60mL体积比70：30的乙醇溶液洗脱树脂柱，收集流份，为选择性解吸附异紫堇碱部位，氨水调节pH为7，回收溶剂至干，得异紫堇碱粗品0.3g，HPLC检测异紫堇碱纯度为83.00%，回收率为70.24%。
D、异紫堇碱的重结晶：步骤C中的异紫堇碱粗品用活性炭脱色，甲醇重结晶，异紫堇碱的纯度达到90.00%。
实施例3：紫金龙中异紫堇碱的分离纯化
A、异紫堇碱粗提物制备：取紫金龙20g，加入200mL蒸馏水，90℃回流提取2次，每次2h，过滤，合并滤液，减压浓缩，取样，HPLC测定异紫堇碱的含量，至异紫堇碱的含量达3.00mg/mL时停止浓缩，氨水调节pH为8，得到异紫堇碱粗提物。
B、粗提物中异紫堇碱的大孔树脂选择性吸附：室温下，采用直径和柱高比（径高比）为10:1的层析柱，填充预处理过的聚苯乙烯二乙烯基苯大孔吸附树脂（LX-28），填充体积为2cmx20cm，成为大孔树脂吸附层析柱，取A步骤中的异紫堇碱粗提物40mL，用氨水调节pH至10，然后以1mL/min的流速上样，加于大孔树脂吸附层析柱上，循环吸附，硅胶GF254薄层色谱（展开剂氯仿：甲醇：氨水为10：1：0.1，喷碘-碘化铋钾溶液显色，异紫堇碱的Rf值在0.5，或与标准品对照）检测柱下流份，至无异紫堇碱斑点时，表明粗提物中异紫堇碱完全吸附，停止循环。
C、异紫堇碱的选择性解吸附：用120mL水，以1mL/min的流速，洗脱B步骤中吸附有异紫堇碱的大孔吸附树脂柱，流份废弃；再用200mL体积比为60：40的乙醇溶液，以1mL/min的流速，洗脱树脂柱除杂，流份回收溶剂；然后用盐酸调节pH为5的体积比为70：30的乙醇溶液60mL洗脱树脂柱，收集流份，为选择性解吸附异紫堇碱部位，氨水调节pH为7，回收溶剂至干，得异紫堇碱粗品0.25g，HPLC检测异紫堇碱纯度为90.23%，回收率为75.21%。
D、异紫堇碱的重结晶：步骤C中的异紫堇碱粗品用活性炭脱色，乙醇重结晶，异紫堇碱的纯度达到95.00%。
实施例4：广西地不容中异紫堇碱的分离纯化
A、异紫堇碱粗提物制备：取秃疮花20g，加入200mL蒸馏水，90℃回流提取2次，每次2h，过滤，合并滤液，减压浓缩，取样，HPLC测定异紫堇碱的含量，至异紫堇碱的含量达4.00mg/mL时停止浓缩，氢氧化钠水溶液调节pH为10，得到异紫堇碱粗提物。
B、粗提物中异紫堇碱的大孔树脂选择性吸附：室温下，采用直径和柱高比（径高比）为10:1的层析柱，填充预处理过的DM-130大孔吸附树脂，填充体积为2cmx20cm，成为大孔树脂吸附层析柱，取A步骤中的异紫堇碱粗提物40mL，以1mL/min的流速上样，加于大孔树脂吸附层析柱上，循环吸附，硅胶GF254薄层色谱（展开剂氯仿：甲醇：氨水为10：1：0.1，喷碘-碘化铋钾溶液显色，异紫堇碱的Rf值在0.5，或与标准品对照）检测柱下流份，至无异紫堇碱斑点时，表明粗提物中异紫堇碱完全吸附，停止循环。
C、异紫堇碱的选择性解吸附：用120mL水，以1mL/min的流速，洗脱B步骤中吸附有异紫堇碱的大孔吸附树脂柱，流份废弃；再用150mL乙醇溶液(乙醇：水为60：40，v/v)，以1mL/min的流速，洗脱树脂柱除杂，流份回收溶剂；然后用盐酸调节PH为3的乙醇溶液60mL（乙醇：水为70：30，v/v）洗脱树脂柱，收集流份，为选择性解吸附异紫堇碱部位，氨水调节PH为7，回收溶剂至干，得异紫堇碱粗品0.30g，HPLC检测异紫堇碱纯度为89.25%，回收率为79.56%。
D、异紫堇碱的重结晶：步骤C中的异紫堇碱粗品用活性炭脱色，乙醇重结晶，异紫堇碱的纯度达到90.00%。
实施例5：紫堇中异紫堇碱的分离纯化
A、异紫堇碱粗提物制备：取秃疮花20g，加入200mL蒸馏水，90℃回流提取2次，每次2h，过滤，合并滤液，减压浓缩，取样，HPLC测定异紫堇碱的含量，至异紫堇碱的含量达4.00mg/mL时停止浓缩，氢氧化钠水溶液调节pH为10，得到异紫堇碱粗提物。
B、粗提物中异紫堇碱的大孔树脂选择性吸附：室温下，采用直径和柱高比（径高比）为10:1的层析柱，填充预处理过的聚苯乙烯二乙烯基苯大孔吸附树脂（DM-130），填充体积为2cmx20cm，成为大孔树脂吸附层析柱，取A步骤中的异紫堇碱粗提物40mL，以1mL/min的流速上样，加于大孔树脂吸附层析柱上，循环吸附，硅胶GF254薄层色谱（展开剂氯仿：甲醇：氨水为10：1：0.1，喷碘-碘化铋钾溶液显色，异紫堇碱的Rf值在0.5，或与标准品对照）检测柱下流份，至无异紫堇碱斑点时，表明粗提物中异紫堇碱完全吸附，停止循环。
C、异紫堇碱的选择性解吸附：用120mL水，以1mL/min的流速，洗脱B步骤中吸附有异紫堇碱的大孔吸附树脂柱，流份废弃；再用150mL体积比为60：40的乙醇溶液，以1mL/min的流速，洗脱树脂柱除杂，流份回收溶剂；然后用盐酸调节PH为6的体积比为70：30的乙醇溶液洗脱树脂柱，收集流份，为选择性解吸附异紫堇碱部位，氨水调节PH为7，回收溶剂至干，得异紫堇碱粗品0.30g，HPLC检测异紫堇碱纯度为89.25%，回收率为79.56%。
D、异紫堇碱的重结晶：步骤C中的异紫堇碱粗品用活性炭脱色，乙醇重结晶，异紫堇碱的纯度达到90.00%。
实施例6：大孔吸附树脂对于异紫堇碱的吸附和解吸附能力优选
通过16种不同聚合材料、不同生产厂家的大孔吸附树脂对于异紫堇碱的选择性吸附和解吸附行为研究，确定优选的大孔吸附树脂。
称取大孔树脂各一定量（相当于干重1.0g），加入100mL三角瓶中，加入30mL的秃疮花粗提液，25oC，摇床振摇吸附5h，HPLC测定吸附异紫堇碱后溶液的终浓度，通过式A(%)=(C0－Ce)／C0×100%计算异紫堇碱的吸附率，通过式:qe=(C0－Ce)Vi／(1-M)W计算异紫堇碱的吸附容量；其中A为吸附率，qe为吸附容量，C0为秃疮花粗提液中异紫堇碱浓度，Ce为吸附平衡以后溶液中异紫堇碱浓度，M为大孔树脂的水分含量，W为大孔树脂的质量；
用HPLC检测，吸附达到饱和和平衡以后，过滤大孔吸附树脂，将吸附有异紫堇碱的大孔树脂投入加入100mL三角瓶中，加入30mL乙醇/水(70:30,V/V)的解析液中，25oC，摇床震摇解吸附2h，通过式D(%)=CdVd／(C0－Ce)Vi×100%计算异紫堇碱的解析率，通过式qd=CdVd／(1-M)W计算解析容量，其中D为解析率，qd为解析容量，Ce为解析平衡后溶液中异紫堇碱的浓度。十六种大孔树脂的吸附容量和解吸附容量结果见表1，吸附率，解吸率见附图2和附图3。
表1十六种大孔树脂的吸附容量和解吸附容量
| 大孔树脂 | 吸附容量 (mg/g) | 解吸附容量 (mg/g) |
| YWD12G | 22.37 | 13.08 |
| DM-130 | 26.65 | 26.41 |
| 07C | 16.07 | 14.43 |
| LX28 | 27.25 | 27.16 |
| HPD450 | 26.79 | 13.46 |
| LSA40 | 24.96 | 10.64 |
| XDA6 | 27.38 | 21.88 |
| YWD01F | 26.69 | 26.03 |
| D101 | 27.50 | 20.06 |
| XDA1 | 27.28 | 14.21 |
| LX16 | 27.60 | 19.87 |
| LX10G | 27.48 | 21.66 |
| LSA21 | 27.58 | 19.88 |
| LSD001 | 17.28 | 2.82 |
| HPD600 | 20.79 | 19.01 |
| ADS17 | 17.86 | 11.45 |
通过十六种树脂的吸附行为考察，相对其他树脂，LX28（中等极性，聚苯乙烯二乙烯基苯聚合树脂）、DM-130（弱极性，聚苯乙烯二乙烯基苯聚合树脂）、D101（非极性，聚苯乙烯二乙烯基苯聚合树脂）、LX10G（弱极性，聚苯乙烯二乙烯基苯聚合树脂）和YWD01F（非极性，聚苯乙烯二乙烯基苯聚合树脂），树脂展示了更好的分离效果。通过以上筛选结果可以确定聚苯乙烯二乙烯基苯聚合树脂结构的非极性、弱极性以及中等极性的大孔树脂对于植物提取液中的异紫堇碱具有较好的选择性吸附作用。
Claims (5)
1.一种大孔树脂分离纯化异紫堇碱的制备方法，其特征在于该方法按以下步骤完成：
A、异紫堇碱粗提物制备：取经干燥粉碎后的含有异紫堇碱的植物，采用溶剂回流提取法或冷浸提取法，提取植物中的化学成分，制备含有异紫堇碱的植物粗提物，调节该溶液为碱性溶液，作为大孔吸附树脂柱的上样溶液；所述含有异紫堇碱的植物选自秃疮花、紫金龙、广西地不容以及紫堇中的一种；
B、粗提物中异紫堇碱的大孔树脂选择性吸附：通过乙醇浸泡预处理聚苯乙烯二乙烯基苯聚合制成的大孔吸附树脂，将该大孔吸附树脂填充于层析柱中，制成大孔树脂吸附层析柱，水洗层析柱至无醇味，取大孔树脂柱床体积相同的A步骤中的异紫堇碱粗提物上样液，恒流循环通过大孔吸附树脂层析柱，循环吸附异紫堇碱，至层析柱流出液中薄层色谱检测无异紫堇碱时，停止循环，循环液弃去；
C、异紫堇碱的选择性解吸附：用1-4倍柱床体积的水洗脱B步骤中吸附有异紫堇碱的大孔吸附树脂柱，流出液弃去除杂；再用1-2倍柱床体积的体积百分含量为10%-60%的乙醇溶液，洗脱大孔树脂层析柱，流出液弃去除杂；然后用1-2倍柱床体积的体积百分含量为60-90%的酸性乙醇溶液，洗脱树脂柱，收集层析柱流份，为选择性解吸附异紫堇碱部位，调节该流份的酸碱度为中性，回收溶剂至干，得异紫堇碱粗品；
D、异紫堇碱的重结晶：步骤C中的异紫堇碱粗品用活性炭脱色，溶剂重结晶得异紫堇碱纯品。
2.如权利要求1所述的大孔树脂分离纯化异紫堇碱的制备方法，其特征在于步骤A中碱性溶液其pH范围在8-10之间。
3.如权利要求1所述的大孔树脂分离纯化异紫堇碱的制备方法，其特征在于步骤A中上样液中异紫堇碱的浓度范围为0.2-10.0mg/mL。
4.如权利要求1所述的大孔树脂分离纯化异紫堇碱的制备方法，其特征在于步骤B中的大孔吸附树脂由聚苯乙烯二乙烯基苯聚合制成，型号为LX28、DM-130、D101、LX10G和YWD01F型大孔吸附树脂中的一种。
5.如权利要求1所述的大孔树脂分离纯化异紫堇碱的制备方法，其特征在于步骤C中的酸性乙醇溶液其pH范围在3-6之间。
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