CN103396421B - 一种银杏内酯c的分离纯化方法 - Google Patents

一种银杏内酯c的分离纯化方法 Download PDF

Info

Publication number
CN103396421B
CN103396421B CN201310368286.4A CN201310368286A CN103396421B CN 103396421 B CN103396421 B CN 103396421B CN 201310368286 A CN201310368286 A CN 201310368286A CN 103396421 B CN103396421 B CN 103396421B
Authority
CN
China
Prior art keywords
ginkalide
ethanol
solvent
crystallization
extraction
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201310368286.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN103396421A (zh
Inventor
肖志勇
于垂亮
周力军
吕署一
蒋俊
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
SHANGHAI SINE PROMD PHARMACEUTICAL CO Ltd
Original Assignee
SHANGHAI SINE PROMD PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by SHANGHAI SINE PROMD PHARMACEUTICAL CO Ltd filed Critical SHANGHAI SINE PROMD PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority to CN201310368286.4A priority Critical patent/CN103396421B/zh
Publication of CN103396421A publication Critical patent/CN103396421A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN103396421B publication Critical patent/CN103396421B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Abstract

本发明公开了一种银杏内酯C的分离纯化方法。取银杏叶提取物，有机溶剂萃取，萃取物通过MCI-GEL？CHP吸附树脂，经除杂，洗脱后，洗脱液减压回收溶剂至干后，加入10%-90%乙醇，加热溶解，冷藏放置12-48h后，析出结晶，抽滤，反复结晶，纯化水洗晶，烘干，即得，银杏内酯C纯度可达98%以上。本发明方法分离纯化银杏内酯C的溶媒简单易得，所用设备为常规设备，因此操作简单，能耗少，成本低，采用无毒吸附剂吸附，乙醇解吸，故生产安全，无污染，适于工业化生产。

Description

一种银杏内酯C的分离纯化方法
技术领域
本发明涉及中药制备，具体涉及银杏内酯C的分离纯化方法。
背景技术
银杏叶内含多种活性成分，主要有黄酮、萜内酯，此外还有有机酸、烷基酚和烷基酚酸、甾体化合物、微量元素等。目前，已知银杏叶中的药用成分主要是银杏黄酮类和银杏内酯类物质。中国自古以来就有银杏叶入药和食疗的记载，其中《本草品汇精要》提到银杏叶能“归肺经，敛肺平喘，益心止痛”。现代药理研究发现银杏内酯具有独特的生理作用和治疗价值，银杏内酯类为强血小板活化因子(PAF)拮抗剂。
血小板活化因子是一种哺乳动物内源性生理活性物质，主要是与过敏、溃疡、哮喘、血栓形成，某些炎症、脏器移植的异体排斥，冠心病人由于缺氧引起的心肌损伤等的发病密切相关，因此，血小板活化因子拮抗剂有可能用于上述疾病的防治。另外，银杏提取物对中枢神经赋活和早老性痴呆的防治具有特殊意义。由于银杏内酯具有独特的药理作用，而且这些成分目前仅发现存在于银杏一种植物中，该成分结构复杂，人工合成难度极大，因此，通过银杏叶的提取得到已成为银杏内酯的主要来源。有关银杏内酯提取分离方法的报道很多，但普遍存在工艺复杂，费时费力，银杏内酯收率不高，纯度不高。中国发明专利《从银杏叶中提取分离银杏内酯C的方法》（专利申请号200710050239.X）中采用硅胶柱层析分离银杏内酯C,此方法的缺点在于硅胶不能回收再利用，要使用大量有机溶剂洗脱，不利于工业化生产，因此，有待于进一步改进银杏内酯提取分离方法。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于克服上述不足之处，研究设计提供一种操作简便，产品得率高，纯度高的银杏内酯C的分离纯化方法。
本发明提供了一种银杏内酯C的分离纯化方法。
该方法包括下列步骤：
（1）银杏叶提取物用有机溶剂萃取得到萃取物；
（2）萃取物通过MCI-GELCHP系列吸附树脂，先用0-20%的乙醇洗脱1-4BV除杂，再用20%-40%乙醇洗脱树脂1-6BV，收集含银杏内酯C的洗脱液；
（3）洗脱液减压蒸干得银杏内酯C粗品，回收溶剂，加入1/2-2倍粗品量的10%-90%乙醇，40℃-70℃加热使粗品全部溶解后，过滤，滤液于2℃-10℃冷藏放置12-48h，析出结晶，反复结晶1-3次，用纯化水洗结晶1-5次，于60℃-120℃真空加热烘干，即得银杏内酯C。
本发明的银杏内酯C的分离纯化方法，所述步骤（1）银杏叶提取物（EGB）为市售，或者自制。
所述自制银杏叶提取物（EGB）操作如下：以银杏干叶为原料，粉碎，用40%-80%乙醇水溶液提取，提取溶剂用量为药材重量的4-8倍V/W，提取次数为3-4次，每次提取时间为1-2小时，合并提取液，减压浓缩回收乙醇至无乙醇味后，过滤，滤液上大孔吸附树脂D101或HP20柱,柱体积为药材量的1-1.5倍量（V/W）,水洗2-3BV去杂，60%-80%乙醇洗脱至洗脱液颜色变淡为止，减压浓缩洗脱液即得银杏叶提取物。
所述步骤（1）有机溶剂选自乙酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、丙酮、甲基乙基酮、正丁醇或异丁醇中的一种或两种混合溶剂萃取，优选乙酸乙酯和丙酮，萃取次数为1-6次，优选3次，每次萃取所用溶剂用量为银杏叶提取物（EGB）5-15倍量（V/W），优选10倍量（V/W）。
步骤（2）所用吸附树脂填料为MCI-GELCHP系列反相吸附树脂，其技术参数为：粒径为75-150μm，平均粒径为120μm，PH范围为0-14，孔径为450埃，基体为聚苯乙烯和二乙烯基共聚物。
所述MCI-GELCHP系列反相吸附树脂为三菱化学株式会社生产，型号为CHP20/P120。
除杂溶剂为0%-20%乙醇溶液，优选10%乙醇溶液，洗脱体积为1-4BV，优选1-2BV。
所述BV为本领域公认的洗脱柱体积单位。
洗脱溶剂为20%-40%乙醇，优选30%乙醇，洗脱体积为1-6BV，优选2-3BV。
所述步骤（3）结晶溶剂为10%-90%乙醇，优选20%-50%乙醇。
其中重结晶步骤为反复重结晶1-3次，优选2次。
洗结晶步骤为用纯化水洗结晶1-5次，优选3次。
所述步骤（3）结晶：将MCI-GEL柱层析所得含银杏内酯C流份于65℃以内和-0.09--0.1MPa条件下减压旋蒸干至无溶剂，40℃-70℃加热溶解于10%-90%乙醇中，趁热过滤，滤液于2℃-10℃条件下放置12-48小时，析出结晶，过滤即得银杏内酯C。
银杏内酯C的含量检测HPLC-ELSD检测法(参考文献为医药导报，2010年3月，29（3）：377-378)。
本发明所使用的填料为MCI-GELCHP系列反相吸附树脂，该填料对银杏内酯C具有很好的选择性，能大大提高银杏内酯C的分离效率，所得产品纯度高，含量达98%-99%。本发明由于分离纯化银杏内酯C的溶媒简单易得，所用设备为常规设备，因此操作简单，能耗少，成本低，采用无毒吸附剂吸附，乙醇解吸，故生产安全，无污染，适于工业化生产。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明做进一步说明，而不是为了限制本发明的范围。
实施例1
取银杏叶提取物（EGB）（市售，银杏总内酯含量≥6%）1g悬浮于10mL水中，用乙酸乙酯萃取三次，每次10mL，萃取溶液于60℃减压回收溶剂，萃取物60℃加热溶于20mL水中，用50mL的MCI-GEL树脂进行吸附，吸附时间为0.5h，先用10%的乙醇洗脱2BV除杂，再用30%乙醇洗脱树脂2BV，洗脱液于60℃减压蒸干得银杏内酯C粗品，回收溶剂，加入50%乙醇（1.5mL），60℃加热溶解后，放置冰箱12h，析出结晶，反复重结晶2次，用纯化水（1mL）洗晶3次，于65℃真空加热烘干，得到银杏内酯C（16mg，HPLC-ELSD检测含量为98.3%）。
实施例2
取银杏叶提取物（EGB）（市售，银杏总内酯含量≥6%）2g悬浮于20mL水中，用乙酸乙酯萃取三次，每次20mL，萃取溶液于60℃减压回收溶剂，萃取物60℃加热溶解于40mL水中，用70mL的MCI-GEL树脂进行吸附，吸附时间为2h，先用水洗脱3BV除杂，再用30%乙醇洗脱树脂2BV，洗脱液于60℃减压蒸干得银杏内酯C粗品，回收溶剂，加入40%乙醇(2.5mL)，60℃加热溶解后，放置冰箱24h，析出结晶，反复重结晶2次，用纯化水洗晶3次，于80℃真空加热烘干，得到银杏内酯C（29mg，HPLC-ELSD检测含量为99.0%）。
实施例3
取干银杏叶（市售）300g，粉碎，80%乙醇回流提取三次，溶剂用量依次为2.4L、1.5L和1.5L，每次提取2h,合并提取液，60℃减压浓缩至无乙醇味，过滤，滤液上大孔吸附树脂D101柱，纯化水（1000mL）洗柱去杂，70%乙醇（2000mL）洗脱至洗脱液颜色变淡，洗脱液于60℃减压浓缩干得银杏叶提取物（6g），提取物用乙酸乙酯萃取三次，每次150mL，萃取溶液于60℃减压蒸干回收溶剂，萃取物60℃加热溶解于20mL水中，用70mL的MCI-GEL树脂进行吸附，吸附时间为1h，先用10%乙醇洗脱3BV除杂，再用30%乙醇洗脱树脂1.5BV，洗脱液于60℃减压浓缩干得银杏内酯C粗品，加入30%乙醇3mL，60℃加热溶解后，放置冰箱12h，析出结晶，反复重结晶3次，用纯化水(1.5mL)洗晶3次，于100℃真空加热烘干，得到银杏内酯C（41mg，HPLC-ELSD检测含量为98.7%）。
实施例4
取银杏叶提取物（EGB）10g（市售，银杏总内酯含量≥6%）悬浮于100mL水中，用乙酸乙酯萃取三次，每次100mL，萃取溶液于60℃减压旋蒸回收溶剂，萃取物60℃加热溶解于100mL水中，用200mL的MCI-GEL树脂进行吸附，吸附时间为1h，先用10%乙醇洗脱3BV除杂，再用30%乙醇洗脱树脂1.5BV，洗脱液于60℃减压蒸干得银杏内酯C粗品，加入8mL的30%乙醇，60℃加热溶解后，放置冰箱12h，析出结晶，反复重结晶2次，用纯化水(2mL)洗晶3次，于100℃真空加热烘干，得到银杏内酯C（132mg，HPLC-ELSD检测含量为98.4%）。

Claims (6)

1.一种银杏内酯C的分离纯化方法，其特征在于，该方法包括下列步骤：
(1)银杏叶提取物用有机溶剂萃取得到萃取物；
(2)萃取物通过MCI-GELCHP系列吸附树脂，先用0-20％的乙醇洗脱1-4BV除杂，再用20％-40％乙醇洗脱树脂1-6BV，收集含银杏内酯C的洗脱液；
(3)洗脱液减压蒸干得银杏内酯C粗品，回收溶剂，加入1/2-2倍粗品量的10％-90％乙醇，40℃-70℃加热使粗品全部溶解后，过滤，滤液于2-10℃冷藏放置12-48h，析出结晶，反复结晶1-3次，用纯化水洗结晶1-5次，于60℃-120℃真空加热烘干，即得银杏内酯C；所述步骤(1)银杏叶提取物通过下列方法制备：以银杏干叶为原料，粉碎，用40％-80％乙醇水溶液提取，提取溶剂用量为药材量的4-8倍V/W，提取次数为3-4次，每次提取时间为1-2小时，合并提取液，减压浓缩回收乙醇至无乙醇味后，过滤，滤液上大孔吸附树脂D101或HP20柱,柱体积为药材量的1-1.5倍量V/W,水洗2-3BV去杂，60％-80％乙醇洗脱至洗脱液颜色变淡为止，减压浓缩洗脱液即得银杏叶提取物；所述步骤(1)有机溶剂选自乙酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、丙酮、甲基乙基酮、正丁醇或异丁醇中的一种或两种混合溶剂萃取，萃取次数为1-6次，每次萃取所用溶剂用量为银杏叶提取物5-15倍量V/W；所述步骤(2)吸附树脂填料为MCI-GELCHP系列反相吸附树脂，其技术参数为：粒径为75-150μm，平均粒径为120μm，pH范围为0-14，孔径为450埃，基体为聚苯乙烯和二乙烯基共聚物；除杂溶剂为0-20％乙醇溶液，洗脱体积为1-4BV；洗脱溶剂为20％-40％乙醇,洗脱体积为1-6BV。
2.根据权利要求1所述一种银杏内酯C的分离纯化方法，其特征在于，所述步骤(1)有机溶剂选自乙酸乙酯或丙酮，萃取3次，每次萃取所用溶剂用量为银杏叶提取物10倍量V/W。
3.根据权利要求1所述一种银杏内酯C的分离纯化方法，其特征在于，所述步骤(2)所述MCI-GELCHP系列反相吸附树脂为三菱化学株式会社生产，型号为CHP20/P120；除杂溶剂为10％乙醇溶液，洗脱体积为1-2BV；洗脱溶剂为30％乙醇，洗脱体积为2-3BV。
4.根据权利要求1所述一种银杏内酯C的分离纯化方法，其特征在于，
所述步骤(3)结晶溶剂为20％-50％乙醇；重结晶步骤为反复重结晶2次；洗结晶步骤为用纯化水洗结晶3次。
5.根据权利要求1所述一种银杏内酯C的分离纯化方法，其特征在于，
所述步骤(3)结晶为：将MCI-GEL柱层析所得含银杏内酯C流份于65℃以内和-0.09至-0.1MPa条件下减压旋蒸干至无溶剂，40℃-70℃加热溶解于10％-90％乙醇中，趁热过滤，滤液于2℃-10℃条件下放置12-48小时，析出结晶，过滤即得银杏内酯C。
6.根据权利要求1所述一种银杏内酯C的分离纯化方法，其特征在于，步骤(3)结晶后得到的银杏内酯C含量为98％-99％。
CN201310368286.4A 2013-08-21 2013-08-21 一种银杏内酯c的分离纯化方法 Active CN103396421B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201310368286.4A CN103396421B (zh) 2013-08-21 2013-08-21 一种银杏内酯c的分离纯化方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201310368286.4A CN103396421B (zh) 2013-08-21 2013-08-21 一种银杏内酯c的分离纯化方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN103396421A CN103396421A (zh) 2013-11-20
CN103396421B true CN103396421B (zh) 2016-03-30

Family

ID=49560189

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201310368286.4A Active CN103396421B (zh) 2013-08-21 2013-08-21 一种银杏内酯c的分离纯化方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN103396421B (zh)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103588785B (zh) * 2013-11-28 2016-04-20 上海信谊百路达药业有限公司 一种银杏内酯a与银杏内酯b的精制方法
CN105687263B (zh) * 2016-03-16 2016-10-26 浙江新昌天然保健品有限公司 水溶性银杏叶提取物的制备工艺及水溶性银杏叶提取物
CN111714953B (zh) * 2020-06-18 2022-09-02 劲牌持正堂药业有限公司 一种脱除提取物中邻苯二甲酸酯类塑化剂的方法
CN113801133B (zh) * 2021-10-28 2022-08-19 江苏得乐康生物科技有限公司 一种银杏内酯及其所含单体的制备方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6590109B2 (en) * 2001-07-11 2003-07-08 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Method for isolating terpene trilactones (ginkgolides, bilobalide) from leaves and pharmaceutical powders of ginkgo biloba
CN101412722A (zh) * 2007-10-15 2009-04-22 桂林市振达生物科技有限责任公司 从银杏叶中提取分离银杏内酯c的方法
CN102078343A (zh) * 2010-12-21 2011-06-01 上海信谊百路达药业有限公司 银杏叶总内酯在制备预防或治疗耳聋耳鸣药物中的应用
CN102464666A (zh) * 2010-11-09 2012-05-23 上海医药工业研究院 一种银杏内酯c的制备方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6590109B2 (en) * 2001-07-11 2003-07-08 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Method for isolating terpene trilactones (ginkgolides, bilobalide) from leaves and pharmaceutical powders of ginkgo biloba
CN101412722A (zh) * 2007-10-15 2009-04-22 桂林市振达生物科技有限责任公司 从银杏叶中提取分离银杏内酯c的方法
CN102464666A (zh) * 2010-11-09 2012-05-23 上海医药工业研究院 一种银杏内酯c的制备方法
CN102078343A (zh) * 2010-12-21 2011-06-01 上海信谊百路达药业有限公司 银杏叶总内酯在制备预防或治疗耳聋耳鸣药物中的应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN103396421A (zh) 2013-11-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101559088B (zh) 穿心莲总内酯与新穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯、去氧穿心莲内酯的生产工艺
CN103393671B (zh) 银杏内酯的提取和精制方法
CN103396421B (zh) 一种银杏内酯c的分离纯化方法
CN103102375B (zh) 从连翘叶中复合提取连翘苷、连翘酯苷a和芦丁的方法
CN1290850C (zh) 银杏叶中银杏内酯b和白果内酯的提取方法
CN101037467B (zh) 从枇杷叶中分离纯化熊果酸的方法
CN102816066A (zh) 一种从金银花叶中提取绿原酸和金丝桃苷的方法
CN111960930A (zh) 一种从工业大麻花叶中分离纯化大麻二酚的方法
CN101074188B (zh) 利用大孔吸附树脂富集纯化花生根中白藜芦醇的方法
CN105440092B (zh) 一种油茶粕中黄酮苷的快速制备方法
CN104000840A (zh) 一种含天麻素和天麻多糖的提取物的制备方法
CN109879919B (zh) 一种从酸枣仁中分离制备三种黄酮苷的方法
CN102659864B (zh) 一种抗过敏天然产物thbp的制备方法
CN101234147B (zh) 注射用金莲花总黄酮的制备方法
CN102731592A (zh) 一种从橄榄叶提取橄榄苦甙和穗花杉双黄酮的方法
CN103524526B (zh) 一种白果内酯的分离纯化方法
CN102078341A (zh) 高纯度银杏黄酮及组合物
CN102302539B (zh) 一种红车轴草异黄酮的生产方法
CN102060693B (zh) 一种富集纯化升麻中阿魏酸的方法
CN105175426B (zh) 一种从四方藤中提取纯化岩白菜素的方法
CN102060822A (zh) 一种从紫花地丁中提取七叶内酯的方法
CN106117284B (zh) 一种同时提取富集金银花中六种环烯醚萜苷类成分的方法
CN102887909B (zh) 一种从银杏叶中提取分离银杏内酯b的方法
CN103102252B (zh) 一种从大青叶中分离纯化(＋)-异落叶松树脂醇和(－)-落叶松脂素的方法
CN102690359B (zh) 一种从罗汉果块根中提取淀粉和葫芦素的方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant