CN103102252B - 一种从大青叶中分离纯化(＋)-异落叶松树脂醇和(－)-落叶松脂素的方法 - Google Patents

一种从大青叶中分离纯化(＋)-异落叶松树脂醇和(－)-落叶松脂素的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN103102252B
CN103102252B CN201210379454.5A CN201210379454A CN103102252B CN 103102252 B CN103102252 B CN 103102252B CN 201210379454 A CN201210379454 A CN 201210379454A CN 103102252 B CN103102252 B CN 103102252B
Authority
CN
China
Prior art keywords
lariciresinol
ethanol
cyclolariciresinol
crude product
methyl alcohol
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN201210379454.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN103102252A (zh
Inventor
付玉杰
祖元刚
魏作富
罗猛
潘有智
李婷婷
齐晓琳
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Northeast Forestry University
Original Assignee
Northeast Forestry University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Northeast Forestry University filed Critical Northeast Forestry University
Priority to CN201210379454.5A priority Critical patent/CN103102252B/zh
Publication of CN103102252A publication Critical patent/CN103102252A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN103102252B publication Critical patent/CN103102252B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Landscapes

  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)

Abstract

本发明涉及一种从大青叶中分离纯化(＋)-异落叶松树脂醇和(－)-落叶松脂素的方法。该方法包括五步骤：A.匀浆破碎酶解：大青叶进行匀浆破碎，加入纤维素酶、果胶酶或两者组成的复合酶进行酶解；B.负压空化强化提取：甲醇、乙醇或醇水混合溶液进行负压空化强化提取；C.树脂富集：上样进入大孔吸附树脂柱，用30%～35%乙醇、50%～60%乙醇分步洗脱吸附有目标物的大孔吸附树脂；D.色谱分离：用90%甲醇溶解样品后，进入Toyopearl HW-40S凝胶树脂柱，梯度洗脱，分段收集流份；E.结晶：(＋)-异落叶松树脂醇粗品和(－)-落叶松脂素粗品用甲醇结晶得到纯度均大于95%的(＋)-异落叶松树脂醇和(－)-落叶松脂素产品。本发明方法步骤少，耗时短，溶剂消耗少，更加经济环保，且得率高，适合于规模化生产，具有较高的经济价值。

Description

一种从大青叶中分离纯化(+)-异落叶松树脂醇和(-)-落叶松脂素的方法
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种从大青叶中快速大量分离纯化高纯度(＋)-异落叶松树脂醇和(－)-落叶松脂素的方法。
背景技术
大青叶是我国的传统中药，为十字花科植物菘蓝(Isatis indigotica Fort.)的叶子。性味苦寒，归心、胃经。具有清热解毒、凉血消斑的功效，临床上则用作治疗各种病毒性流行感冒、流行性腮腺炎和病毒性肝炎等感染性疾病(仲卫国等，2011)。药理研究表明，其具有抗病毒、增强免疫力、抗内毒素、抗肿瘤、保肝利胆、抗菌、解热、抗炎等生物学活性(郑雪花，2007)。
(＋)-异落叶松树脂醇和(－)-落叶松脂素是大青叶的重要的有效成分。中国专利(公开号1704066)“异落叶松树脂醇的药物用途”，该专利公开的结果表明(＋)-异落叶松树脂醇能显著降低内毒素诱发的多脏器功能衰竭所致的小鼠死亡率。体内活性研究表明(－)-落叶松脂素具有显著的抗炎和抗感受伤害作用(KüpeliE.et al，2003)。另有研究表明落叶松脂素还具有抗真菌和调控树突状细胞功能的作用(Hwang B.et al，2011；戴先坤，2010)。尽管从植物中获得的(＋)-异落叶松树脂醇和(－)-落叶松脂素的活性突出，但目前关于其分离纯化的报道较少(柳继锋等，2006；李彬等，2005；刘海利等，2002)，并且在这些报道中采用传统的提纯技术手段，需要进行有机溶剂萃取和正相硅胶柱层析，过程漫长、目标化合物易损失，而且毒性较大的有机试剂氯仿、二氯甲烷等使用量大，不利于环保与健康。
发明内容
本发明旨在克服上述缺陷，提供一种从大青叶中快速大量分离纯化高纯度(＋)-异落叶松树脂醇和(－)-落叶松脂素的方法。
为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：
一种从大青叶中分离纯化(＋)-异落叶松树脂醇和(－)-落叶松脂素的方法，其特征在于按如下工艺步骤进行：
A.匀浆破碎酶解：新鲜或干燥大青叶按质量体积比加入4～10倍原料质量的水进行匀浆破碎3～10min，用柠檬酸、冰醋酸或盐酸调节浆液pH为4.0～5.5，加入纤维素酶、果胶酶或两者组成的复合酶使酶浓度为350～750U/mL，然后在35～55°C条件下酶解1～5h，过滤，收集滤液、滤渣。
B.负压空化强化提取：上述滤渣按质量体积比加入8～25倍滤渣质量的甲醇、乙醇或醇水混合溶液进行负压空化强化提取，提取温度为室温至50°C，提取压力为-0.05～-0.09MPa，提取2～4次，每次20min～60min，合并提取液与步骤A所得滤液，减压回收除去溶剂，得到大青叶浸膏。
C.树脂富集：上述大青叶浸膏按质量体积比分散于10～30倍浸膏质量的20%乙醇中后，上样进入大孔吸附树脂柱，上样体积为3～15倍柱体积，然后先用30%～35%乙醇充分洗脱，弃去洗脱液，再用50%～60%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收除去溶剂，得到树脂富集物。所述的大孔吸附树脂包括AB-8、X-5、H1020、D101、HPD826、HPD600、ADS-5和NKA-9型大孔吸附树脂。
D.色谱分离：上述树脂富集物加入90%甲醇至刚好溶解后进行连续中压色谱柱层析。其中，层析柱填料为Toyopearl HW-40S凝胶树脂；上样体积为柱体积的1/12～1/6；梯度洗脱依次选用的洗脱剂为90%甲醇、纯甲醇和丙酮，分段收集流份，得到(＋)-异落叶松树脂醇流份和(－)-落叶松脂素流份，然后分别减压浓缩至干，得到(＋)-异落叶松树脂醇粗品和(－)-落叶松脂素粗品。
E.结晶：(＋)-异落叶松树脂醇粗品和(－)-落叶松脂素粗品用甲醇反复重结晶得到纯度均大于95%的(＋)-异落叶松树脂醇和(－)-落叶松脂素。
本发明具有如下优点：
(1)步骤少，耗时短，得率高，操作简便，适合大规模生产。
(2)采用匀浆破碎酶解技术，粉碎过程不产生粉尘，安全绿色，并具有破坏细胞壁、使植物细胞和酶充分接触以及瞬时刺激诱发内源性酶活性的作用。
(3)树脂富集步骤中，分步洗脱使大部分大极性的糖苷和有机酸以及弱极性的生物碱被除去，大大提高了富集物中(＋)-异落叶松树脂醇和(－)-落叶松脂素的含量。
(4)采用连续中压凝胶树脂柱色谱分离，无死吸附，极大提高得率，并且试剂毒性小，替代了硅胶柱层析常用的氯仿、二氯甲烷等高毒性试剂，更加快速、安全、环保。
附图说明
图1为(＋)-异落叶松树脂醇的结构
图2为(－)-落叶松脂素的结构
具体实施方式
实施例1
一种从大青叶中快速大量分离纯化高纯度(＋)-异落叶松树脂醇和(－)-落叶松脂素的方法，按如下工艺步骤进行：
A.匀浆破碎酶解：1kg干燥大青叶加入5L水进行匀浆破碎5min，用盐酸调节浆液pH为4.0，加入纤维素酶使酶浓度为500U/mL，然后在40°C条件下酶解3h，过滤，收集滤液、滤渣。
B.负压空化强化提取：上述滤渣加入17L乙醇进行负压空化强化提取，提取温度为45°C，提取压力为-0.06MPa，提取2次，每次50min，合并提取液与步骤A所得滤液，减压回收除去溶剂，得到大青叶浸膏170g。
C.树脂富集：上述大青叶浸膏分散于4.5L20%乙醇中后，上样进入NKA-9大孔吸附树脂柱，上样体积为12倍柱体积，然后先用35%乙醇充分洗脱，弃去洗脱液，再用55%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收除去溶剂，得到树脂富集物9.3g。
D.色谱分离：上述树脂富集物加入90%甲醇至刚好溶解后进行连续中压色谱柱层析。层析柱填料为Toyopearl HW-40S凝胶树脂；上样体积为柱体积的1/7；梯度洗脱依次选用的洗脱剂为90%甲醇、纯甲醇和丙酮，分段收集流份，得到(＋)-异落叶松树脂醇流份和(－)-落叶松脂素流份，然后分别减压浓缩至干，得到(＋)-异落叶松树脂醇粗品和(－)-落叶松脂素粗品。
E.结晶：(＋)-异落叶松树脂醇粗品和(－)-落叶松脂素粗品用甲醇反复重结晶得到纯度为96%的(＋)-异落叶松树脂醇295mg和纯度为96.6%的(－)-落叶松脂素276mg。
实施例2
一种从大青叶中快速大量分离纯化高纯度(＋)-异落叶松树脂醇和(－)-落叶松脂素的方法，按如下工艺步骤进行：
A.匀浆破碎酶解：1kg干燥大青叶加入7L水进行匀浆破碎8min，用冰醋酸调节浆液pH为5.0，加入纤维素酶和果胶酶的复合酶使纤维素酶浓度为350U/mL、果胶酶浓度为200U/mL，然后在45°C条件下酶解2h，过滤，收集滤液、滤渣。
B.负压空化强化提取：上述滤渣加入10L80%乙醇进行负压空化强化提取，提取温度为35°C，提取压力为-0.075MPa，提取3次，每次30min，合并提取液与步骤A所得滤液，减压回收除去溶剂，得到大青叶浸膏195g。
C.树脂富集：上述大青叶浸膏分散于3.5L20%乙醇中后，上样进入H1020大孔吸附树脂柱，上样体积为6倍柱体积，然后先用30%乙醇充分洗脱，弃去洗脱液，再用50%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收除去溶剂，得到树脂富集物11.2g。
D.色谱分离：上述树脂富集物加入90%甲醇至刚好溶解后进行连续中压色谱柱层析。层析柱填料为Toyopearl HW-40S凝胶树脂；上样体积为柱体积的1/10；梯度洗脱依次选用的洗脱剂为90%甲醇、纯甲醇和丙酮，分段收集流份，得到(＋)-异落叶松树脂醇流份和(－)-落叶松脂素流份，然后分别减压浓缩至干，得到(＋)-异落叶松树脂醇粗品和(－)-落叶松脂素粗品。
E.结晶：(＋)-异落叶松树脂醇粗品和(－)-落叶松脂素粗品用甲醇反复重结晶得到纯度为97.5%的(＋)-异落叶松树脂醇393mg和纯度为96.9%的(－)-落叶松脂素356mg。

Claims (1)

1.一种从大青叶中分离纯化(+)-异落叶松树脂醇和(-)-落叶松脂素的方法，其特征在于按如下工艺步骤进行：
A.匀浆破碎酶解：新鲜或干燥大青叶按质量体积比加入4～10倍原料质量的水进行匀浆破碎3～10min，用柠檬酸、冰醋酸或盐酸调节浆液pH为4.0～5.5，加入纤维素酶、果胶酶或两者组成的复合酶使酶浓度为350～750U/mL，然后在35～55℃条件下酶解1～5h，过滤，收集滤液、滤渣；
B.负压空化强化提取：上述滤渣按质量体积比加入8～25倍滤渣质量的甲醇、乙醇或醇水混合溶液进行负压空化强化提取，提取温度为室温至50℃，提取压力为-0.05～-0.09MPa，提取2～4次，每次20min～60min，合并提取液与步骤A所得滤液，减压回收除去溶剂，得到大青叶浸膏；
C.树脂富集：上述大青叶浸膏按质量体积比分散于10～30倍浸膏质量的20%乙醇中后，上样进入NKA-9或H1020大孔吸附树脂柱，上样体积为3～15倍柱体积，然后先用30%～35%乙醇充分洗脱，弃去洗脱液，再用50%～60%乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收除去溶剂，得到树脂富集物；
D.色谱分离：上述树脂富集物加入90%甲醇至刚好溶解后进行连续中压色谱柱层析，其中，层析柱填料为Toyopearl HW-40S凝胶树脂；上样体积为柱体积的1/12～1/6；梯度洗脱依次选用的洗脱剂为90%甲醇、纯甲醇和丙酮，分段收集流份，得到(+)-异落叶松树脂醇流份和(-)-落叶松脂素流份，然后分别减压浓缩至干，得到(+)-异落叶松树脂醇粗品和(-)-落叶松脂素粗品；
E.结晶：(＋)-异落叶松树脂醇粗品和(－)-落叶松脂素粗品用甲醇反复重结晶得到纯度均大于95%的(+)-异落叶松树脂醇和(－)-落叶松脂素。
CN201210379454.5A 2012-10-09 2012-10-09 一种从大青叶中分离纯化(＋)-异落叶松树脂醇和(－)-落叶松脂素的方法 Expired - Fee Related CN103102252B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201210379454.5A CN103102252B (zh) 2012-10-09 2012-10-09 一种从大青叶中分离纯化(＋)-异落叶松树脂醇和(－)-落叶松脂素的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201210379454.5A CN103102252B (zh) 2012-10-09 2012-10-09 一种从大青叶中分离纯化(＋)-异落叶松树脂醇和(－)-落叶松脂素的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN103102252A CN103102252A (zh) 2013-05-15
CN103102252B true CN103102252B (zh) 2014-02-26

Family

ID=48310487

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201210379454.5A Expired - Fee Related CN103102252B (zh) 2012-10-09 2012-10-09 一种从大青叶中分离纯化(＋)-异落叶松树脂醇和(－)-落叶松脂素的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN103102252B (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104004034B (zh) * 2014-05-14 2016-02-03 中国科学院华南植物园 一种制备开环异落叶松脂素9’-O-β-木糖苷的方法
CN107325138B (zh) * 2016-11-08 2020-04-28 东北林业大学 一种从黑加仑果渣中提取分离纯化四种主要花色苷的方法
CN111116329B (zh) * 2019-12-11 2022-07-19 海南师范大学 异落叶松脂素的制备方法和应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101993424A (zh) * 2009-08-18 2011-03-30 上海金昊药业开发有限公司 落叶松树脂醇及其衍生物、制备方法和用途

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FI114022B (fi) * 2002-01-17 2004-07-30 Hormos Nutraceutical Oy Ltd Menetelmä kasvislignaanien valmistamiseksi ja uusi välituote

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101993424A (zh) * 2009-08-18 2011-03-30 上海金昊药业开发有限公司 落叶松树脂醇及其衍生物、制备方法和用途

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
大青叶的化学成分与药理作用;郑雪花;《怀化学院学报》;200705;第26卷(第5期);55-57 *
大青叶的化学成分研究;柳继锋等;《中国中药杂志》;200612;第31卷(第23期);1961-1965 *
柳继锋等.大青叶的化学成分研究.《中国中药杂志》.2006,第31卷(第23期),
郑雪花.大青叶的化学成分与药理作用.《怀化学院学报》.2007,第26卷(第5期),

Also Published As

Publication number Publication date
CN103102252A (zh) 2013-05-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107337586A (zh) 一种从汉麻中提取纯化大麻二酚的方法
CN103420970B (zh) 一种花青素的提取纯化方法
CN102976909B (zh) 一种从生姜中提取纯化6-姜酚的方法
CN102219824B (zh) 甘草酸的酶解生产方法
CN102643322A (zh) 一种同时制备长梗冬青苷和紫丁香苷的方法
CN102453075A (zh) 一种甘草酸的分离纯化工艺
CN103570779A (zh) 模拟移动床分离制备甘草苷的方法
CN103102252B (zh) 一种从大青叶中分离纯化(＋)-异落叶松树脂醇和(－)-落叶松脂素的方法
CN102228515B (zh) 一种分离和富集莲子心总黄酮和总生物碱的方法
CN109879919B (zh) 一种从酸枣仁中分离制备三种黄酮苷的方法
CN101234147B (zh) 注射用金莲花总黄酮的制备方法
CN104610417A (zh) 一种从山楂中提取熊果酸和齐墩果酸的方法
CN102659864B (zh) 一种抗过敏天然产物thbp的制备方法
CN103450000B (zh) 一种从贯叶连翘中提取金丝桃素的方法
CN103113433A (zh) 一种从巧玲花中提取橄榄苦苷的方法
CN103554209B (zh) 从三七中制备人参皂苷Rg1的方法
CN107722080A (zh) 一种从岩白菜叶中提取熊果苷的方法
CN105440095A (zh) 一种富含β-蜕皮甾酮的露水草提取纯化方法
CN103665067A (zh) 一种Thonningianin A单体的分离纯化方法
CN103396421A (zh) 一种银杏内酯c的分离纯化方法
CN103655642A (zh) 一种银杏叶提取物的制备方法
CN110386861A (zh) 从工业大麻里提取大麻二酚的新型工艺方法
CN104610418A (zh) 一种从锁阳中提取熊果酸的方法
CN104906216A (zh) 一种虎皮楠生物碱的制备方法
CN108997359A (zh) 一种从甜菊糖生产废渣中提取叶绿素的方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20140226

Termination date: 20141009

EXPY Termination of patent right or utility model