CN101407535B - 一种高纯度罗汉果甜甙v的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明将公开一种高纯度罗汉果甜甙V的制备方法，其步骤如下：1)取罗汉果甜甙溶于甲醇中，过滤，得滤液；2)在所得滤液中加入丙酮使其产生沉淀，过滤，得沉淀物；3)取沉淀物用正相硅胶柱进行吸附；4)吸附好的正相硅胶柱，用低碳链酯与乙醇的混合溶液为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液；5)回收洗脱液中的洗脱剂，结晶，得到高纯度罗汉果甜甙V。本发明所述的制备方法与现有技术需经正相硅胶柱和昂贵的反相硅胶柱两次上柱吸附方法相比，只要通过一次的正相硅胶柱分离、洗脱，即可得到品质好、纯度高达98％以上的罗汉果甜甙V。且本发明制备方法与现有技术相比，工艺更简单，缩短了生产周期，降低了生产操作难度及生产成本。

Description

一种高纯度罗汉果甜甙V的制备方法

(一)技术领域    

本发明涉及从天然植物中提取有效成分的方法，特别是一种高纯度罗汉果甜甙V的制备方法。

(二)背景技术：

罗汉果，属葫芦科多年生草质藤本植物的果实，是我国南方特有植物，主要产于桂北地区，以广西桂林地区的罗汉果品质最好。罗汉果长期作为中药和饮料干果而食用，其味极甜、性凉、无毒、入脾肺，具有清肺止咳、润肠通便、清热解毒、祛痰补血、益肝、健脾、镇静、止渴、促进肠胃机能、抑制哮喘以及降压等功效。自从1 97 5年首先报告罗汉果果实中含有二萜甜味甙以来，已经从罗汉果果实中分离并鉴定出了罗汉果甙IV(mogroside IV)、罗汉果甙V、罗汉果甙III、罗汉果甙IIE、罗汉果甙IIIE、罗汉果甙VI、罗汉果甙A、罗汉果新甙(nemogroside)、赛门甙I(siamensideI)、11-oxo-mogroside、罗汉果二醇苯甲酸酯(mogroester)共11种葫芦烷三萜甙类(cucurbitaneglvcosides)化合物，该类化合物是罗汉果果实中的主要活性物质，约占干果重4％，除少数为无甜(如罗汉果甙IV)或苦味(如罗汉果新甙)物质外，大多为甜味成分或微甜物质，其中罗汉果甙V为三萜系糖甙类S-5的强甜物质，是罗汉果果实中含量和甜度均较高的成分，是主要的甜味成分，其甜度相当于蔗糖的300倍。罗汉果甜甙味甜而纯正，无异味，回味感强，热稳定性好，可作为食品、菜肴的甜味剂，是糖尿病人理想的食糖代用品。

现有普遍使用的罗汉果甜甙提取方法，但所得的提取物中，罗汉果甜甙V的纯度均较低，大多不超过80％，为此，申请号为：200510071877.0，名称为《高纯度罗汉果甜苷V的制备方法和用途》，公开了一种高纯度罗汉果甜苷的制备方法，其步骤如下：先将罗汉果粉碎，用乙醇加热回流提取，再将提取物用D101型大孔树脂柱分离，先去离子水和乙醇分别洗脱至无色，再收集其洗脱液，减压浓缩至浸膏状，然后用正相硅胶柱分离，加入氯仿、甲醇、水为洗脱剂，收集洗脱液，减压浓缩，再用反相硅胶C-18柱分离，并对所收集的每一份洗脱液利用HPLC检测，合并保留时间相同而且纯度在90％～98％之间和98％以上的罗汉果甜苷V组分，减压浓缩，即可分别得到纯度在90％～98％之间的罗汉果甜苷V和纯度大于98％的罗汉果甜苷V组分。又如，申请号为：200710039130.6，名称为《从罗汉果中制备高纯度罗汉果苷V的方法》，也公开了一种从罗汉果中制备高纯度罗汉果苷V的方法，该方法步骤为：(1)先将罗汉果粉碎成粗粉，加入乙醇回流提取，滤过，得醇浸膏；(2)将醇浸膏悬浮于水，用乙酸乙酯萃取1次-3次，回收乙酸乙酯母液；(3)继用正丁醇萃取1次-3次母液，回收正丁醇得正丁醇浸膏；(4)将正丁醇浸膏通过聚酰胺柱，水洗液浓缩得粗皂苷；(5)粗皂苷进行硅胶柱层析，氯仿-甲醇-水洗脱，收集得罗汉果苷v粗品；(6)取罗汉果苷v粗品进行C18反相硅胶柱层析，水洗，乙醇洗脱，收集纯度大于95％以上的罗汉果苷V。虽然上述制备方法均可以获得纯度大于90％的罗汉果甜甙V，但均需通过正相硅胶柱和反相硅胶柱两次过柱层析，其工序较多，操作复杂，成本也相应较高，而且采用水与其它有机溶剂混合的洗脱剂，会将杂质一同洗脱出来，从而影响到成品的纯度。

(三)发明内容：

本发明将公开工艺简单、成本低廉、收率高的高纯度罗汉果甜甙V的制备方法。

本发明高纯度罗汉果甜甙V的制备方法，其步骤如下：

1)取罗汉果甜甙溶于甲醇中，过滤，得滤液；其中，所述的罗汉果甜甙可选用现有任意方法制备的罗汉果甜甙；而甲醇的用量以能溶解罗汉果甜甙为准，一般来说，罗汉果甜甙与甲醇之间的配比，按罗汉果甜甙的重量∶甲醇的体积＝1∶5～10较为合适；

2)在所得滤液中加入丙酮使其产生沉淀，过滤，得沉淀物；最好在滤液中加入等体积量的丙酮；

3)取沉淀物用正相硅胶柱进行吸附；所用硅胶的重量一般为上样量的30～100倍；

4)吸附好的正相硅胶柱，用低碳链酯与乙醇的混合溶液为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液；一般来说，低碳链酯与乙醇的体积比＝2～7∶1；洗脱时，洗脱剂的流速一般在2～5ml/min较为适合；所述低碳链酯最好选用乙酸乙酯、乙酸正丙酯、乙酸异丙酯、乙酸丁酯或乙酸异戊酯等；

5)回收洗脱液中的洗脱剂，结晶，得到高纯度罗汉果甜甙V；所述结晶最好是用甲醇与丙酮的混合溶液结晶及重结晶，所述甲醇与丙酮的体积比＝1∶2～7；一般来说，先在回收洗脱液中洗脱剂后得到的粗粉中，加入甲醇加热使其溶解，甲醇体积与粗粉重量之比最好为10∶1，溶解后再加入2～7倍于甲醇体积的丙酮，然后自然冷却，放置直至结晶；再取所得的结晶以上述方法进行重结晶。

本发明所述的制备方法与现有技术需经正相硅胶柱和昂贵的反相硅胶柱两次上柱吸附方法相比，只要通过一次的正相硅胶柱分离、洗脱，即可得到品质好、纯度高达98％以上的罗汉果甜甙V。而且本发明制备方法与现有技术相比，工艺更简单，缩短了生产周期，降低了生产操作难度及生产成本，更利于工业化大规模生产。

(四)具体实施方式：

实施例1：

1)取2千克罗汉果甜甙(罗汉果甜甙V含量为60％)溶于10升甲醇中，过滤，得滤液；

2)在所得滤液中加入等体积量的丙酮使其产生沉淀，过滤，得沉淀物；

3)取沉淀物用正相硅胶柱进行吸附；沉淀物与硅胶的重量比为1∶30；

4)吸附好的正相柱，用乙酸乙酯与乙醇的混合溶液为洗脱剂进行洗脱，洗脱剂流速为3ml/min，收集洗脱液；其中，乙酸乙酯与乙醇的体积比为2∶1；

5)回收洗脱液中洗脱剂，得到粗粉，在粗粉中加入甲醇，加热至50℃使其溶解，甲醇的体积与粗粉的重量之比为10∶1，溶解后再加入2倍于甲醇体积的丙酮，然后自然冷却，放置直至结晶，再取所得的结晶以上述方法进行重结晶，得到高纯度罗汉果甜甙V，经HPLC方法检测，罗汉果甜甙V纯度为99.9％。

实施例2：

1)取700克罗汉果甜甙(罗汉果甜甙V含量为50％)溶于5L甲醇中，过滤，得滤液；

2)在所得滤液中加入等体积量的丙酮使其产生沉淀，过滤，得沉淀物；

3)取沉淀物用正相硅胶柱进行吸附；沉淀物与硅胶的重量比为1∶70；

4)吸附好的正相柱，用乙酸异丙酯与乙醇的混合溶液为洗脱剂进行洗脱，洗脱剂流速为5ml/min，收集洗脱液；其中，乙酸异丙酯与乙醇的体积比为3∶1；

5)回收洗脱液中洗脱剂，得到粗粉，在粗粉中加入甲醇，加热至50℃使其溶解，甲醇的体积与粗粉的重量之比为10∶1，溶解后再加入7倍于甲醇体积的丙酮，然后自然冷却，放置直至结晶，再取所得的结晶以上述方法进行重结晶，得到高纯度罗汉果甜甙V，经HPLC方法检测，罗汉果甜甙V纯度为99.9％。

实施例3：

1)取500克罗汉果甜甙(罗汉果甜甙V含量为30％)溶于5L甲醇中，过滤，得滤液；

2)在所得滤液中加入等体积量的丙酮使其产生沉淀，过滤，得沉淀物；

3)取沉淀物用正相硅胶柱进行吸附；沉淀物与硅胶的重量比为1∶50；

4)吸附好的正相柱，用乙酸正丙酯与乙醇的混合溶液为洗脱剂进行洗脱，洗脱剂流速为2ml/min，收集洗脱液；其中，乙酸正丙酯与乙醇的体积比为5∶1    

5)回收洗脱液中洗脱剂，得到粗粉，在粗粉中加入甲醇，加热至50℃使其溶解，甲醇的体积与粗粉的重量之比为10∶1，溶解后再加入4倍于甲醇体积的丙酮，然后自然冷却，放置直至结晶，再取所得的结晶以上述方法进行重结晶，得到高纯度罗汉果甜甙V，经HPLC方法检测，罗汉果甜甙V纯度为99.9％。

Claims (1)

1.一种高纯度罗汉果甜甙V的制备方法，其步骤如下：

1)取罗汉果甜甙溶于甲醇中，过滤，得滤液；其中罗汉果甜甙与甲醇之间的配比，按罗汉果甜甙的重量∶甲醇的体积＝1千克∶5～10升；

2)在所得滤液中加入等体积量的丙酮使其产生沉淀，过滤，得沉淀物；

3)取沉淀物用正相硅胶柱进行吸附；

4)吸附好的正相硅胶柱，用低碳链酯与乙醇的混合溶液为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液；其中低碳链酯与乙醇的体积比＝2～7∶1，所述的低碳链酯为乙酸乙酯，或乙酸正丙酯，或乙酸异丙酯，或乙酸丁酯，或乙酸异戊酯；

5)回收洗脱液中的洗脱剂，用甲醇与丙酮的混合溶液结晶及重结晶，得到高纯度罗汉果甜甙V；所述甲醇与丙酮的体积比＝1∶2～7。