CN102068627B - 一种中药制剂心脑静片的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于中成药的技术领域，涉及以中药材为原料制成的一种中药制剂心脑静片的质量控制方法，质量标准中设置的以珍珠母、朱砂的显微特征为对照，显微镜鉴别心脑静片处方中否含有珍珠母、朱砂；以盐酸小檗碱、冰片、槐花为对照品，薄层色谱法鉴别心脑静片处方中是否含有盐酸小檗碱、冰片、槐米成分的鉴别项目；以黄芩苷为对照品用高效液相色谱法测定该药物中黄芩苷的含量；供试样品含黄芩以黄芩苷(C₂₁H₁₈O₁₁)计，不得少于10.0mg的定量指标及检验方法，使质量标准较为完善，修订后的质量标准，提高了药品的质量控制。

Description

一种中药制剂心脑静片的检测方法

技术领域

本发明属于中成药的技术领域，涉及以中药材为原料制成的一种中药制剂心脑静片的检测方法。

背景技术

心脑静片是一种经典中成药，卫生部标准WS₃-B-0234-90记载处方及质量标准：

处方：莲子心15g  珍珠母65g  槐米90g         黄柏90g

      木香10g    黄芩400g   夏枯草300g      钩藤300g

      龙胆100g   淡竹叶50g  铁丝威灵仙250g  制天南星80g

      甘草20g    牛黄10g    朱砂10g         冰片27g

制法：以上十六味，朱砂水飞或粉碎成极细粉；莲子心、珍珠母、槐米、黄柏、木香粉碎成细粉，过筛；牛黄、冰片分别研细，过筛；其余黄芩等八味加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.30(50℃)的清膏，加入莲子心等粉末及辅料，混匀，与朱砂配研，制成颗粒，干燥，放冷，加入牛黄、冰片粉末，混匀，应出颗粒1506g，压片，包糖衣，即得。

检查：应符合片剂项下有关的各项规定(附录6页)。

目前有关心脑静片的检测方法的文献有很多，如天津药学，2002年10月，第14卷第5期记载张莉，胡靖，柳长青(天津中新药业集团股份有限公司乐仁堂制药厂，天津300380)“高效液相色谱法测定心脑静片中黄芩苷的含量”目的：测定心脑静片组方中黄芩苷的含量。方法：以甲醇2水2磷酸为流动相，采用高效液相色谱法测定。

结果：黄芩苷在0.0125～0.1375范围内线性良好，平均加样回收率为101.42％，R SD为1.81％。结论：此法操作简单，精密度高，为心脑静片的质量检测提供了方法。

长春中医药大学学报，第23卷第4期，2007年8月记载汪涵源1，王春福2，董金香1(1.长春中医药大学，吉林长春130117；2.四平市食品药品检验所，吉林四平，136000)“心脑静胶囊质量标准研究”目的：建立心脑静胶囊质量标准。方法：采用薄层色谱法鉴别黄柏，高效液相法测定黄芩苷的含量。结果：定性定量方法简便、灵敏、准确、专属性强。结论：可作为心脑静胶囊的质量控制。

黑龙江医药，2001年6月，第425页记载杨景红、陈晓艳、王少波、赵凤欣(哈高科佳木斯中药有限公司、黑龙江省卫生学校)“心脑静片的质量控制研究”目的：制定心脑静片的质量标准，方法：采用薄层色谱法鉴别槐米、黄柏。结果：定性方法简便、准确、专属性强。结论：建立方法可作为质量控制用。

但是尚未见与上述公开的卫生部标准WS₃-B-0234-90心脑静片处方相似或相同，配比不同，功效相似的产品标准的文献，但是现有技术的标准中还存在鉴别项目、鉴别手段、含量测定方法不完善等缺点，为提高中药的产品质量，需要完善产品质量标准。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的心脑静片标准不足之处，提供一种能够定性、定量检测药物成分的脑静片的检测方法。

为了达到本发明的目的采用的技术方案是：一种中药制剂心脑静片的检测方法，其中所述的药物配方由中药材：

莲子心11g  珍珠母46g     槐米64g         黄柏64g

木香7g     黄芩286g      夏枯草214g      钩藤214g

龙胆71g    淡竹叶36g     铁丝威灵仙179g  制天南星57g

甘草14g    人工牛黄7.1g  朱砂7.1g        冰片19.3g组成，制法：以上十六味，朱砂水飞成极细粉；莲子心、珍珠母、槐米、黄柏、木香粉碎成细粉，过筛；人工牛黄、冰片分别研细，过筛；其余黄芩等八味加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至80℃测定相对密度为1.24～1.28的清膏，加入莲子心等粉末及辅料，混匀，与朱砂配研，制成颗粒，干燥，放冷，加入人工牛黄、冰片粉末，混匀，压制成1000片，包糖衣，即得，其特征在于：其方法的步骤是：

(1)以珍珠母、朱砂的显微特征为对照，显微镜鉴别心脑静片处方中否含有珍珠母、朱砂；以盐酸小檗碱、冰片、槐花为对照品，薄层色谱法鉴别心脑静片处方中是否含有盐酸小檗碱、冰片、槐米成分；

(2)以黄芩苷为对照品，高效液相色谱法检测心脑静片处方中黄芩苷的含量。

2、根据权利要求1所述的中药制剂心脑静片的检测方法，其特征在于：所述的置显微镜鉴别心脑静片处方中否含有珍珠母和朱砂的方法为：取本品，置显微镜下观察：不规则块片灰白色或近无色，表面多不平整，呈明显的颗粒性，有的块片呈较松散的片层状结构，边缘呈不规则锯齿状为珍珠母；不规则细小颗粒暗棕红色，有光泽，边缘暗黑色为朱砂；

所述的薄层色谱法鉴别心脑静片处方中是否含有盐酸小檗碱成分的方法为：取本品3片，除去包衣，研细，加三氯甲烷30ml，超声处理15分钟，滤过，残渣备用，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷2ml使溶解，作为供试品溶液。另取盐酸小檗碱对照品，加三氯甲烷制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液2～6μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水为展开剂，甲苯∶乙酸乙酯∶异丙醇∶甲醇∶水＝6∶3∶1.5∶1.5∶0.3，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点；

所述的薄层色谱法鉴别心脑静片处方中是否含有冰片成分的方法为：取冰片对照品，加三氯甲烷制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取鉴别盐酸小檗碱项下的供试品溶液2～6μl、上述对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯为展开剂，甲苯∶乙酸乙酯＝19∶1，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

所述的薄层色谱法鉴别心脑静片处方中是否含有槐米成分的方法为：取鉴别盐酸小檗碱项下的残渣，加甲醇25ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取槐花对照药材0.2g，加甲醇10ml，同法制成对照药材溶液；再取芦丁对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各4～8μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水为展开剂，乙酸乙酯∶甲醇∶水＝8∶1∶1，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热约3分钟，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；置碘缸中熏数分钟；供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

3、根据权利要求1所述的中药制剂心脑静片的检测方法，其特征在于：以黄芩苷为对照品，液相色谱法检测心脑静片处方中黄芩苷的含量的方法为：

(1)色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇∶水∶磷酸＝47∶53∶0.2为流动相，检测波长为280nm；理论板数按黄芩苷峰计算不低于6000；

(2)对照品溶液的制备：取黄芩苷对照品适量，精密称定，加70％甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得；

(3)供试品溶液的制备：取本品10片，除去包衣，精密称定，研细，取0.5g，精密称定，精密加入70％甲醇50ml，称定重量，超声处理，功率50W，频率50kHz，45分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置10ml量瓶中，用70％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得；

(4)测定法：分别精密量取对照品溶液10μl与供试品溶液5～10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；本品每片含黄芩以黄芩苷(C₂₁H₁₈O₁₁)计，不得少于10.0mg。

发明有益效果：质量标准中设置的以珍珠母、朱砂的显微特征为对照，显微镜鉴别心脑静片处方中否含有珍珠母、朱砂；以盐酸小檗碱、冰片、槐花为对照品，薄层色谱法鉴别心脑静片处方中是否含有盐酸小檗碱、冰片、槐米成分的鉴别项目；以黄芩苷为对照品用高效液相色谱法测定该药物中黄芩苷的含量；供试样品含黄芩以黄芩苷(C₂₁H₁₈O₁₁)计，不得少于10.0mg的定量指标及检验方法，使质量标准较为完善，严格控制药品的质量，确保提高产品质量，修订后的质量标准，提高了药品的质量控制。

附图说明

图1-1图1-2是朱砂显微鉴别图。

图1-3图1-4是珍珠母显微鉴别图。

图2-1是盐酸小檗碱鉴别薄层色谱图。

图2-2、图2-3、图2-4、图2-5是各种不同薄层板盐酸小檗碱鉴别薄层色谱图。

图3-1冰片鉴别薄层色谱图。

图3-2图3-3、图3-4、图3-5各种不同薄层板冰片薄层色谱图。

图4-1、图4-2是槐花鉴别薄层色谱图。

图4-3、图4-4、图4-5、图4-6、图4-7、图4-8是各种不同薄层板槐花鉴别薄层色谱图。

图5是对照品色谱图。

图6是样品色谱图。

图7是阴性样品色谱图。

图8是黄芩苷标准曲线图。

具体实施方式

下面结合实施例，对本发明进一步说明，实施例1改进后的心脑静片质量标准：

处方：莲子心11g  珍珠母46g     槐米64g         黄柏64g

      木香7g     黄芩286g      夏枯草214g      钩藤214g

      龙胆71g    淡竹叶36g     铁丝威灵仙179g  制天南星57g

      甘草14g    人工牛黄7.1g  朱砂7.1g        冰片19.3g

制法：以上十六味，朱砂水飞成极细粉；莲子心、珍珠母、槐米、黄柏、木香粉碎成细粉，过筛；人工牛黄、冰片分别研细，过筛；其余黄芩等八味加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.24～1.28(80℃)的清膏，加入莲子心等粉末及辅料，混匀，与朱砂配研，制成颗粒，干燥，放冷，加入人工牛黄、冰片粉末，混匀，压制成1000片，包糖衣即得。

性状：本品为糖衣片，除去包衣后棕褐色；气香，味微苦、凉。

鉴别：(1)取本品，置显微镜下观察：不规则块片灰白色或近无色，表面多不平整，呈明显的颗粒性，有的块片呈较松散的片层状结构，边缘呈不规则锯齿状(珍珠母)。不规则细小颗粒暗棕红色，有光泽，边缘暗黑色(朱砂)。

(2)取本品3片，除去包衣，研细，加三氯甲烷30ml，超声处理15分钟，滤过，(残渣备用)，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷2ml使溶解，作为供试品溶液。另取盐酸小檗碱对照品，加三氯甲烷制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取供试品溶液2～6μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水(6∶3∶1.5∶1.5∶0.3)为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点。

(3)取冰片对照品，加三氯甲烷制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取〔鉴别〕(1)项下的供试品溶液2～6μl、上述对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯(19∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

(4)取〔鉴别〕(2)项下的残渣，加甲醇25ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取槐花对照药材0.2g，加甲醇10ml，同法制成对照药材溶液。再取芦丁对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各4～8μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水(8∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热约3分钟，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。置碘缸中熏数分钟。供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

检查：应符合片剂项下有关的各项规定(附录I D)。

含量测定：照高效液相色谱法(附录VI D)测定。

色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2)为流动相，检测波长为280nm。理论板数按黄芩苷峰计算不低于6000。

对照品溶液的制备  取黄芩苷对照品适量，精密称定，加70％甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备  取本品10片，除去包衣，精密称定，研细，取0.5g，精密称定，精密加入70％甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率50W，频率50kHz)45分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置10ml量瓶中，用70％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

测定法  分别精密量取对照品溶液10μl与供试品溶液5～10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品每片含黄芩以黄芩苷(C₂₁H₁₈O₁₁)计，不得少于10.0mg。

功能与主治：清心清脑，镇惊安神。降低血压，疏通经络，防治中风。用于头晕目眩，烦燥不宁，风痰壅盛，言语不清，手足不遂。

用法与用量：口服。一次4片，一日1～3次。

注意：孕妇忌服。

贮藏：密封。

实施例2心脑静片质量标准起草说明：

心脑静片质量标准收载在卫生部药品标准中药成方制剂第二册中。采用三家企业，共计10批样品见表(1)，对心脑静片质量标准进行了提高、完善，起草制定了心脑静片的质量标准。与部颁标准相比，增加了处方中黄柏、冰片及槐花的薄层鉴别方法；以黄芩苷为定量指标，制定了黄芩的含量测定方法。现将起草工作情况说明如下：1、样品情况说明，见表(1)。

表(1)

2、处方：修订。按照1000片制成总量修订。处方中除铁丝威灵仙外，其余十五味质量标准均收载在《中国药典》2005年版一部中，其中黄柏为芸香科植物黄皮树Phellodendron chinense Schneid.的干燥种皮。铁丝威灵仙质量标准收载在《天津市中药饮片炮制规范》2005年版中(附件4)。另处方中天南星(制)与现版药典制天南星相同，故修订为制天南星。

4制法：修订。关于相对密度，天津中新药业集团股份有限公司乐仁堂制药厂(本品原研单位)实际执行的相对密度范围为1.24～1.28(80℃)，若采用部颁标准中现相对密度，粘稠度增大，不易倾出。故进行调整。另将制成总量改为制成制剂总量。

5性状：修订。本品为糖衣片，除去包衣后显棕褐色；气香，味微苦、凉。

6鉴别

6.1鉴别(1)：鉴于本品部分为生粉入药，故增加显微鉴别法，鉴别处方中珍珠母和朱砂。参照《中国药典》2005年版一部有关内容，进行了制定。具体内容为：不规则块片灰白色或近无色，表面多不平整，呈明显的颗粒性，有的块片呈较松散的片层状结构，边缘呈不规则锯齿状(珍珠母)。不规则细小颗粒暗棕红色，有光泽，边缘暗黑色(朱砂)。10批样品均符合规定。见图(1-1)～(1-4)。图(1-1)、图(1-2)朱砂的不规则细小颗粒图(1-3)、图(1-4)珍珠母的不规则块片。

6.2鉴别(2)：新增方法。参照《中国药典》2005年版一部有关内容进行了制订。采用薄层色谱法，以盐酸小檗碱为对照品，鉴别处方中黄柏。

6.2.1供试品溶液的制备：取本品3片，除去包衣，研细，加三氯甲烷30ml，超声处理15分钟，滤过(残渣备用)，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷2ml使溶解，作为供试品溶液。

6.2.2对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品，加三氯甲烷制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。

6.2.3阴性样品溶液制备：按处方配比，取除黄柏以外的其他药味按工艺制得制剂，再按“6.2.1”制备方法制得阴性样品溶液。

6.2.4方法与结果：照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取供试品溶液及阴性样品溶液2～6μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水(6∶3∶1.5∶1.5∶0.3)为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点，阴性样品无干扰。10批样品均符合规定。结果见图(2-1)。

6.2.5耐用性试验：在上述试验基础上，对本方法进行了耐用性试验。试验包括不同薄层板，低温及高湿环境对分离情况的影响，见图(2-2)～(2-5)，考察结果上述不同条件对本项试验无影响。图(2-1)从左至右1～3：沈阳东新药业有限公司样品(批号：071105、071106、071107)；4～6：天津乐仁堂制药厂(批号：129004、129005、129006)；7～10：哈高科佳木斯中药有限公司(批号：01001、03002、04001、06001)；11：盐酸小檗碱对照品(中检所)；12：阴性样品

图(2-2)青岛板  图(2-3)烟台板  图(2-4)青岛板图(2-5)青岛板T＝17.0℃；RH＝55％；T＝17.0℃  RH＝55％；T＝7.6℃RH＝11％；T＝17.0℃  RH＝95％；图(2-2)～图(2-5)从左到右：1盐酸小檗碱对照品2～4：天津乐仁堂制药厂(批号：129004、129005、129006)

6.3鉴别(3)：新增方法。参照《中国药典》2005年版一部有关内容进行了制订。采用薄层色谱法，以冰片为对照品，鉴别处方中冰片。

6.3.1供试品溶液的制备：取“6.2.1”供试品溶液。

6.3.2对照品溶液的制备：取冰片对照品，加三氯甲烷制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。

6.3.3阴性样品溶液的制备：按处方配比，取除冰片以外的其他药味按工艺制得制剂，再按“6.2.1”制备方法制得阴性样品溶液。

6.3.4方法与结果：照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取供试品溶液及阴性样品溶液2～6μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯(19∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性样品无干扰。10批样品均符合规定。结果见图(3-1)。

6.3.5耐用性试验：在上述试验基础上，对本方法进行了耐用性试验。试验包括不同薄层板，低温及高湿环境对分离情况的影响，见图(3-2)～(3-4)，考察结果上述不同条件对本项试验无影响。

图(3-1)糖衣片；图(3-1)从左至右：1阴性样品；2～4：天津乐仁堂制药厂(批号：129004、129005、129006)；5～6：哈高科佳木斯中药有限公司(批号：04001、06001)，7冰片对照品(中检所)(烟台板)图(3-2)青岛板；图(3-3)天津产、铝基板；图(3-4)青岛板T＝18.0℃  RH＝44％T＝7.4℃  RH＝10％  T＝18.0℃  RH＝93％；图(3-2)～(3-4)从左到右：1～3：天津乐仁堂制药厂(批号：129004、129005、129006)；4冰片对照品

6.4鉴别(4)：新增方法。参照《中国药典》2005年版一部有关内容进行了制订。采用薄层色谱法，以芦丁为对照品，槐花为对照药材鉴别处方中槐米。

6.4.1供试品溶液的制备：取“6.2.1”项下的残渣，加甲醇25ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。

6.4.2对照药材溶液的制备：取槐花对照药材0.2g，加甲醇10ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为对照药材溶液

6.4.3对照品溶液的制备：取芦丁对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。

6.4.4阴性样品溶液制备：按处方配比，取除槐花以外的其他药味按工艺制得制剂，再按上述供试品溶液制备方法制得阴性样品溶液。

6.4.5方法与结果：照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述四种溶液各4～8μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水(8∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热约3分钟，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。置碘缸中熏数分钟。供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性样品无干扰。试验中，曾选用国家食品药品监督管理局标准(试行)YBZ06672005，以乙酸乙酯-甲酸-水(8∶1∶1)为展开剂，因展开剂中有酸，使得供试品黄柏中盐酸小檗碱上行，影响芦丁斑点，将展开剂中甲酸改为甲醇。另试验中发现，自制薄层板与Merck板检验效果基本一致。见图(4-1)，(4-2)。

6.4.6耐用性试验：在上述试验基础上，对本方法进行了耐用性试验。试验包括不同薄层板，低温及高湿环境对分离情况的影响，见图(4-3)～(4-6)，考察结果上述不同条件对本项试验无影响。

图(4-1)与图(4-2)从左至右：1：阴性样品；2～4：沈阳东新药业有限公司(批号：071105、071106、071107)；5～7：天津乐仁堂制药厂(批号：129004、129005、129006)；8～11：哈高科佳木斯中药有限公司(批号：01001、03002、04001、06001)；12：芦丁对照品；13：槐花对照药材(merck板)；

图(4-3)青岛板；图(4-4)青岛板；图(4-5)青岛板；图(4-6)青岛板；T＝19.5℃  RH＝39％；T＝7.5℃  RH＝10％；图(4-7)烟台板；图(4-8)烟台板；T＝20.0℃  RH＝95％；图(4-3)～图(4-8)从左到右：1芦丁对照品，槐花对照药材3～5：天津乐仁堂制药厂(批号：129004、129005、129006)。7含量测定：参照《中国药典》2005年版一部及有关内容，以黄芩苷为定量指标，采用高效液相色谱法，建立了黄芩含量测定方法。

7.1仪器与试药：仪器：SHIMADZU LC-20AD，LC solution工作站。SHIMADZULC-2010CHT，CLASS-VP工作站。

色谱柱：Sepax Sappire TC-C18(250×4.6mm，5μm)色谱柱；DiamonsilC18(250×4.6mm，5μm)色谱柱。

试剂：甲醇(色谱纯，天津市康科德科技有限公司)，磷酸(分析纯，天津市化学试剂五厂)，水为去离子水。

对照品：黄芩苷(中国药品生物制品检定所购置，批号：0715-20001，供含量测定用)。

样品见表(1)。

7.2色谱条件：参照《中国药典》2005年版一部有关含量测定方法制定。

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2)为流动相，检测波长为280nm，柱温：35℃；流速：1ml/分钟。理论板数按黄芩苷峰计算不低于6000。实测理论板数为12166。

7.3提取条件的选择：7.3.1提取溶剂的考察：取同一批号(沈阳东新药业有限公司批号：071105)样品，除去包衣，研细，取约0.5g，精密称定，分别精密加入甲醇、70％甲醇、稀乙醇、50％甲醇各50ml，称定重量，超声处理60分钟，放冷，再称定重量，分别用各自的溶剂补足减失的重量，滤过，取续滤液，分别测定样品中黄芩苷含量。结果见表(2)。

表(2)提取溶剂的选择

表(2)显示，除用甲醇提取的含量较低外，采用其他三种溶剂提取，测定结果无明显差别。用70％甲醇提取的样品较澄清，易于滤过，故采用70％甲醇做为提取溶剂。

7.3.2提取方式的考察：取同一批号(沈阳东新药业有限公司批号：071105)样品，除去包衣，研细，取约0.5g，精密称定，精密加入70％甲醇50ml，称定重量，分别采用超声处理与加热回流的方式，进行考察。提取时间均为60分钟，然后放冷，再称定各自重量，用70％甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，测定各自样品中黄芩苷含量。结果见表(3)。

表(3)提取方式的选择

表(3)显示，采用超声处理和加热回流两种提取方式，测定结果基本相同，因超声处理的方式较为简便，故选择超声处理方式进行。

7.3.3提取时间的考察：取同一批号(沈阳东新药业有限公司批号：071105)样品，除去包衣，研细，取约0.5g，精密称定，精密加入70％甲醇50ml，称定重量，分别超声处理30、45、60分钟，放冷，再称定各自重量，用70％甲醇补足各自减失的重量，滤过，取续滤液，测定样品中黄芩苷含量。结果见表(4)。

表(4)提取时间的考察

表(4)显示，提取时间超过30分钟后，其含量测定结果无明显差异(3次测定的RSD为0.9％)，考虑到超声处理的功率与频率存在一定差异，故超声时间选为45分钟。

7.4溶液的制备

7.4.1对照品溶液的制备：取黄芩苷对照品适量，精密称定，加70％甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。结果见图(5)。

7.4.2供试品溶液的制备：取本品10片，除去包衣，精密称定，研细，取0.5g，精密称定，精密加入70％甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率50W，频率50kHz)45分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置10ml量瓶中，用70％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。结果见图(6)。

7.4.3阴性样品溶液的制备：按处方取除黄芩的各味药材，按【制法】制得样品，再按“7.4.2”供试品溶液制备方法制得阴性样品溶液。结果见图(7)。

7.4.4测定法：分别精密吸取对照品溶液10μl与供试品溶液5～10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

7.5标准曲线的制备：取黄芩苷对照品适量，精密称定，加70％甲醇分别制成每1ml含0.0354mg、0.0590mg、0.1180mg、0.1770mg、0.2360mg、0.2950mg的溶液，分别各精密吸取10μl，注入液相色谱仪中，按“7.2”色谱条件分析，测定各自峰面积，以对照品进样量(μg)为横坐标，峰面积值为纵坐标，求得回归方程：Y＝3.1748×10⁶X-6.4294×10³，r＝0.9999。结果表明黄芩苷在0.3540～2.9500μg范围内线性良好，结果见表(5)、图(8)。

表(5)黄芩苷标准曲线

7.6进样精密度试验：取同一批号(沈阳东新药业有限公司批号：071105)样品，除去包衣，研细，取约0.5g，取1份，按照“7.4.2”供试品溶液制备方法操作，按“7.2”色谱条件分析，连续进样6次，测定样品中黄芩苷峰面积，测得峰面积平均值为3799418；峰面积的RSD为0.2％，结果见表(6)。

表(6)进样精密度试验

7.7重复性试验：取同一批号(沈阳东新药业有限公司批号：071105)样品，除去包衣，研细，取约0.5g，共6份，按照“7.4.2”供试品溶液制备操作，按“7.2”色谱条件分析，测定每份样品中黄芩苷含量。结果样品中黄芩苷平均含量为23.472mg/g，RSD为1.32％，结果见表(7)。

表(7)重复性试验

7.8稳定性试验：取同一批号(沈阳东新药业有限公司批号：071105)样品，除去包衣，研细，取约0.5g，取1份，按照“7.4.2”供试品溶液制备操作，按“7.2”色谱条件分析，分别在0、3、6、9、12小时，测定样品中黄芩苷峰面积，测得峰面积值的RSD为0.3％，供试品溶液在12小时内稳定，结果见表(8)。

表(8)稳定性试验

7.9回收率试验：取同一批号(沈阳东新药业有限公司批号：071105)样品，除去包衣，研细，取约0.25g，共6份，精密称定，分别精密加入黄芩苷对照品70％甲醇溶液(0.2361mg/ml)25ml，分别精密加70％甲醇溶液25ml，再按照“7.4.2”供试品溶液制备操作，制得供回收率用供试品溶液，按“7.2”色谱条件分析，计算回收率，结果平均回收率为101.51％，RSD为1.13％，符合规定。结果见表(9)。

表(9)回收率试验

7.10样品测定：取表(1)中10个批号样品，按照“6.4.2”供试品溶液制备操作，按“6.2”色谱条件分析，测定样品中黄芩苷含量。结果见表(10)。

7.11粗放度试验

7.11.1不同色谱柱的考察：取重复性试验中1、2号样品溶液，使用SHIMADZULC-2010CHT高效液相色谱仪，CLASS-VP工作站，分别使用Sepax Sappire C18(250×4.6mm，5μm)色谱柱和Diamonsil C18(250×4.6mm，5μm)色谱柱，按照“7.2”色谱条件分析，测定样品中黄芩苷含量。结果RAD为0.15％，结果见表(11)。

7.11.2不同仪器的考察：取重复性试验中1、2号样品溶液，使用SepaxSappire C18(250×4.6mm，5μm)色谱柱，分别使用SHIMADZU LC-20AD高效液相色谱仪，LC solution工作站；和SHIMADZU LC-2010CHT高效液相色谱仪，CLASS-VP工作站。按照“7.2”色谱条件分析，测定样品中黄芩苷含量，结果RAD为0.6％。结果见表(12)。

表(10)十批样品含量测定结果

表(11)不同色谱柱对含量测定的影响

表(12)不同仪器对含量测定的影响

结果显示，建立的含量测定方法粗放度良好。

7.12含量限度的制定：鉴于黄芩水煎入药，转移率按40％计算，本品每片含黄芩以黄芩苷(C₂₁H₁₈O₁₁)计，应不得少于10.30mg；表(10)显示，10批样品中，仅有3批样品符合规定。经分析，可能与企业用黄芩的前处理有关。本品含量暂定为：本品每片含黄芩以黄芩苷(C₂₁H₁₈O₁₁)计，不得少于10.0mg。

Claims (1)

1.一种中药制剂心脑静片的检测方法，其中所述的药物配方由中药材：

莲子心11g  珍珠母46g     槐米64g         黄柏64g

木香7g     黄芩286g      夏枯草214g      钩藤214g

龙胆71g    淡竹叶36g     铁丝威灵仙179g  制天南星57g

甘草14g    人工牛黄7.1g  朱砂7.1g        冰片19.3g组成，制法：以上十六味，朱砂水飞成极细粉；莲子心、珍珠母、槐米、黄柏、木香粉碎成细粉，过筛；人工牛黄、冰片分别研细，过筛；其余黄芩等八味加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至80℃测定相对密度为1.24～1.28的清膏，加入莲子心等粉末及辅料，混匀，与朱砂配研，制成颗粒，干燥，放冷，加入人工牛黄、冰片粉末，混匀，压制成1000片，包糖衣，即得，其特征在于：其方法的步骤是：

(1)以珍珠母、朱砂的显微特征为对照，显微镜鉴别心脑静片处方中否含有珍珠母、朱砂；以盐酸小檗碱、冰片、槐花为对照品，薄层色谱法鉴别心脑静片处方中是否含有盐酸小檗碱、冰片、槐米成分；

所述的置显微镜鉴别心脑静片处方中否含有珍珠母和朱砂的方法为：取本品，置显微镜下观察：不规则块片灰白色或近无色，表面多不平整，呈明显的颗粒性，有的块片呈较松散的片层状结构，边缘呈不规则锯齿状为珍珠母；不规则细小颗粒暗棕红色，有光泽，边缘暗黑色为朱砂；

所述的薄层色谱法鉴别心脑静片处方中是否含有盐酸小檗碱成分的方法为：取本品3片，除去包衣，研细，加三氯甲烷30ml，超声处15分钟，滤过，残渣备用，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷2ml使溶解，作为供试品溶液。另取盐酸小檗碱对照品，加三氯甲烷制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液2～6μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水为展开剂，甲苯∶乙酸乙酯∶异丙醇∶甲醇∶水＝6∶3∶1.5∶1.5∶0.3，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点；

所述的薄层色谱法鉴别心脑静片处方中是否含有冰片成分的方法为：取冰片对照品，加三氯甲烷制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取鉴别盐酸小檗碱项下的供试品溶液2～6μl、上述对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯为展开剂，甲苯∶乙酸乙酯＝19∶1展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

所述的薄层色谱法鉴别心脑静片处方中是否含有槐米成分的方法为：取鉴别盐酸小檗碱项下的残渣，加甲醇25ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取槐花对照药材0.2g，加甲醇10ml，同法制成对照药材溶液；再取芦丁对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各4～8μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水为展开剂，乙酸乙酯∶甲醇∶水＝8∶1∶1，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热约3分钟，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；置碘缸中熏数分钟；供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

(2)以黄芩苷为对照品，高效液相色谱法检测心脑静片处方中黄芩苷的含量的方法：

(1)色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇∶水磷酸＝47∶53∶0.2为流动相，检测波长为280nm；理论板数按黄芩苷峰计算不低于6000；

(2)对照品溶液的制备：取黄芩苷对照品适量，精密称定，加70％甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得；

(3)供试品溶液的制备：取本品10片，除去包衣，精密称定，研细，取0.5g，精密称定，精密加入70％甲醇50ml，称定重量，超声处理，功率50W，频率50kHz，45分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置10ml量瓶中，用70％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得；

(4)测定法：分别精密量取对照品溶液10μl与供试品溶液5～10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；。

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