CN101837072B - 一种治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法，该质量检测方法包括性状、鉴别、检查和含量测定，其中鉴别是采用薄层色谱法对制剂中黄芪、赤芍和丹参的鉴别，含量测定是用高效液相色谱法测定制剂中淫羊藿苷的含量或用高效液相色谱法在同一色谱条件下同时测定制剂中粉防己碱和防己诺林碱的含量。本发明所采用的质量检测方法科学合理，准确度高，重现性好，能全面有效地控制和确保治疗肝炎的金马肝泰片和金马肝泰胶囊的质量稳定、可控、高效和安全，确保该制剂的临床疗效，更好的满足医疗需要。
Description
技术领域
本发明涉及药品的质量检测方法，特别是一种治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法，确切的说是金马肝泰片或胶囊的质量检测方法，属于药品的技术领域。
背景技术
金马肝泰片和金马肝泰胶囊，其主要成分为马蹄金、铁包金、马鞭草、防己、败酱草、淫羊藿、黄芪、赤芍和丹参等共九味中药材，作为民族药具有清热解毒，健脾利湿，活血化瘀的功效，主要用于肝胆湿热，气滞血瘀所致的急、慢性肝炎等。现有剂型为颗粒剂，已被列入国家中成药标准汇编内科肝胆分册，其质量标准相对较为简单，仅对处方中的防己进行质量控制，因而不能很好地确保其临床用药的有效性及安全性，需要进一步研究，提高其质量控制标准。根据我国药品管理法的相关规定，改变剂型或工艺作为新药研究管理，金马肝泰片和金马肝泰胶囊作为一种新药，目前还没有有效的质量控制方法。发明人对金马肝泰片和金马肝泰胶囊进行了研究，以期探索如何有效控制金马肝泰片和金马肝泰胶囊的质量，从而确保其临床疗效。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供一种治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法，所制定的质量检测方法能全面有效地控制金马肝泰片和金马肝泰胶囊的质量，从而确保了金马肝泰片和金马肝泰胶囊的临床疗效。
为了解决上述技术问题，本发明采用如下的技术方案：治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法。这种治疗肝炎的药物制剂这样制备：马蹄金288.2g、铁包金153.3g、马鞭草115g、防已191.6g、败酱草115g、淫羊藿153.3g、黄芪153.3g、赤芍153.3g、丹参230g，以上九味药材，加水煎煮两次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至90～95℃时测相对密度为1.14～1.16的清膏，冷至室温，加2倍量乙醇，搅拌均匀，放置48小时，滤过，滤液回收乙醇，药液浓缩至50～60℃时相对密度为1.34～1.40的稠膏；稠膏加入适当辅料制成1000份片剂或胶囊剂，所述的质量检测方法包括性状、鉴别、检查和含量测定，其中鉴别是采用薄层色谱法对制剂中黄芪、赤芍和丹参的鉴别，含量测定是用高效液相色谱法测定制剂中淫羊藿苷的含量或用高效液相色谱法在同一色谱条件下同时测定制剂中粉防己碱和防己诺林碱的含量。
上述的药物制剂的质量检测方法中，所述的鉴别包括：
（1）丹参鉴别：取本品0.1g～10g，加甲醇1ml～150ml，加热回流0.1h～2h，滤过，滤液蒸干，残渣加水1ml～50ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取1～5次，每次1ml～50ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇0.5ml～5ml使溶解，作为供试品溶液；另取原儿茶醛对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录Ⅵ B薄层色谱法试验，吸取对照品溶液0.5～1μl、供试品溶液2～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为1.9～2.9∶1.5～2.5∶0.5～1.5∶0.4～0.8的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲苯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积比为1∶1的1%三氯化铁水溶液-1%铁氰化钾水溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
（2）赤芍鉴别：取本品0.1g～10g，加甲醇1ml～150ml，加热回流5min～60min，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水1ml～50ml使溶解，用乙醚振摇提取1～4次，每次1ml～50ml，弃去乙醚液，水层用水饱和的正丁醇提取1～5次，每次1ml～30ml，合并正丁醇液，正丁醇液用氨试液3ml～50ml洗涤，弃去氨试液，再用3ml～50ml水洗涤，弃去水液，取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇0.5ml～5ml使溶解，作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录Ⅵ B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为6～10∶0.8～1.2∶2～6∶0.8～1.2的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以浓度为3%～10%的香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
（3）黄芪鉴别：取本品5g～50g，加甲醇5ml～200ml，加热回流0.5h～2h，滤过，滤液浓缩至约1ml～5ml，加于中性氧化铝柱上，用浓度为30%～50%的甲醇50ml～200ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水5ml～50ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取1～5次，每次5ml～50ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤1～4次，每次5ml～50ml ，再用正丁醇饱和的水洗涤1～4次，每次5ml～50ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇0.5ml～5ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录Ⅵ B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5～10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为50～80∶25～45∶5～15的三氯甲烷-甲醇-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以浓度为5%～25%的硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
前述的治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法中，所述鉴别（2）赤芍鉴别中，显色时加热的温度为100℃～120℃；鉴别（3）黄芪鉴别中，所用的展开剂为三氯甲烷-甲醇-水10℃以下放置后的下层溶液；显色时加热的温度为100℃～120℃。
前述的治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法中，所述的含量测定是通过高效液相色谱法测定制剂中淫羊藿苷的含量；以淫羊藿苷为对照，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比乙腈：水=15～45:55～85为流动相进行含量测定。
前述的治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法中，具体的讲，所述淫羊藿苷的含量测定方法包括以下步骤：
（1）色谱条件与系统适用性试验：仪器：Agilent色谱仪；色谱柱为Diamonsil（R）C18色谱柱，以乙腈-水=15～45:55～85为流动相，柱温20～30℃，流速1.0mL/min，检测波长255～285nm；进样量10μl，理论塔板数不低于1500；
（2）对照品溶液的制备：精密称取淫羊藿苷对照品适量，置容量瓶中，加入甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制得浓度为≤1mg/ml的溶液，即得对照品溶液；
（3）供试品溶液的制备：取本品适量，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入适量稀乙醇，称定重量，超声提取30min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，取上清液，滤过，取续虑液，即得供试品溶液；
（4）测定方法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，按照步骤（1）所述色谱条件测定，即得。
前述的治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法中，准确的说，所述淫羊藿苷的含量测定方法包括以下步骤：
（1）色谱条件与系统适用性试验：仪器：Agilent色谱仪；色谱柱为Diamonsil（R）C18色谱柱，以乙腈-水=15～45:55～85为流动相，柱温20～30℃，流速1.0mL/min，检测波长255～285nm；进样量10μl，理论塔板数不低于1500；
（2）对照品溶液的制备：精密称取淫羊藿苷对照品9.64mg，置10ml容量瓶中，加入甲醇溶解精密至刻度，作为储备液；精密量取储备液1ml置10ml容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，即得浓度为0.0964mg/ml对照品溶液；
（3）供试品溶液的制备：取本品0.5g，精密称定，置50ml具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇20ml，称定重量，超声提取30min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，取上清液，滤过，取续虑液，即得供试品溶液；
（4）测定方法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，按照步骤（1）所述色谱条件测定，即得。
前述的治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法中，所述的含量测定还可以是通过高效液相色谱法在同一色谱条件下同时测定制剂中粉防己碱和防己诺林碱的含量；以粉防己碱和防己诺林碱混合溶液为对照，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比乙腈：甲醇：水：冰乙酸=35～45：45～55：25～35：0.5～1.5为流动相进行含量测定；每100ml流动相中含十二烷基磺酸钠0.2g～1.0g。
上述的治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法中，具体的说，所述粉防己碱和防己诺林碱的含量测定方法包括以下步骤：
（1）色谱条件与系统适用性试验：仪器：岛津LC-10Atvp高效液相色谱仪；色谱柱为Diamonsil C18；以体积比乙腈：甲醇：水：冰乙酸=35～45：45～55：25～35：0.5～1.5为流动相，柱温为10℃～40℃；检测波长230nm～350nm；进样量5μL；理论塔板数不低于4000；
（2）对照品溶液的制备：分别称取粉防己碱和防己诺林碱对照品适量，精密称定，分置于容量瓶中超声，完全溶解后精密至刻度，作为储备液；储备液各取适量置于同一容量瓶中，稀释至刻度，摇匀即得；
（3）供试品溶液的制备：取本品适量，精密称定，精密加入0.5～5%盐酸甲醇溶液适量，称定重量，加热回流15～45min，放冷，再称定重量，用0.5～5%盐酸甲醇溶液补足减失的重量，滤过；精密量取续滤液适量，置容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得；
（4）测定方法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，按照步骤（1）所述色谱条件测定，即得。
前述的治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法中，准确的说，所述粉防己碱和防己诺林碱的含量测定方法包括以下步骤：
（1）色谱条件与系统适用性试验：仪器：岛津LC-10Atvp高效液相色谱仪；色谱柱为Diamonsil C18；以体积比乙腈：甲醇：水：冰乙酸=35～45：45～55：25～35：0.5～1.5为流动相，柱温为10℃～40℃；检测波长230nm～350nm；进样量5μL；理论塔板数不低于4000；
（2）对照品溶液的制备：称取粉防己碱对照品12mg,防己诺林碱对照品9mg，精密称定，分置于25ml容量瓶中超声，完全溶解后精密至刻度，作为储备液；储备液各取2ml置于同一10ml容量瓶中，稀释至刻度，摇匀即得；
（3）供试品溶液的制备：取本品1g，精密称定，精密加入2%盐酸甲醇溶液25ml，称定重量，加热回流30min，放冷，再称定重量，用2%盐酸甲醇溶液补足减失的重量，滤过；精密量取续滤液5ml，置10ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得；
（4）测定方法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，按照步骤（1）所述色谱条件测定，即得。
前述的治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法中，所述的性状和检查包括，对于片剂：（1）性状：本品为薄膜衣片，除去薄膜衣后显灰棕色至棕褐色；气香，味苦；（2）检查：符合中国药典2005年版一部附录I D中片剂项下的各项规定；
对于胶囊剂：（1）性状：本品为硬胶囊，内容物为棕色至棕褐色颗粒及粉末；气香，味苦；（2）检查：符合中国药典2005年版一部附录I L中胶囊剂项下的各项规定。
为了确保本发明的含量测定方法科学、合理、可行，申请人对其进行了一系列的试验研究和考察，具体如下：
（一）单独测定淫羊藿苷。
1、药品与试剂 淫羊藿苷对照品110737-200415（中国药品生物制品检定所），甲醇﹑乙腈为色谱醇，水为重蒸馏水。
2、仪器分析条件仪器 Angilent1100高效液相色谱仪；7725i型手动进样器；1100VWD型紫外检测器；HT-230A柱温箱；HP化学工作站；电子天平（BP211D）；CX-250型超声波清洗器。
3、色谱条件 色谱柱：Diamonsil (R) C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；乙腈-水（30:70）为流动相；柱温：25℃；检测波长：270 nm。
4、溶液制备
4.1 对照品溶液的制备
精密称取淫羊藿苷对照品9.64mg，置10ml容量瓶中，加入甲醇溶解精密至刻度，作为储备液；精密量取储备液1ml置10ml容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，即得浓度为0.0964mg/ml对照品溶液。
4.2供试品溶液的制备
取本品约0.5g，精密称定，置50ml具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇20ml，称定重量，超声提取30min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，取上清液，滤过，取续虑液，即得供试品溶液。
5、系统适用性实验
采用Diamonsil (R) C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，乙腈-水（30：70）为流动相，检测波长270nm，柱温25℃。取供试样品、淫羊藿阴性样品各0.5g，精密称定，以供试品溶液制备方法制得供试品溶液和阴性样品溶液，分别精密吸取上述两种溶液和对照品溶液各10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，从色谱图中可以看出，供试样品在淫羊藿苷出峰处有对应峰，阴性样品则在淫羊藿苷出峰处无对应峰，说明阴性样品无假阳性峰。供试样品中淫羊藿苷的理论塔板数为3818，故暂定淫羊藿苷理论塔板数不低于1500，分离度应符合要求。测定结果见表1。
表1 淫羊藿苷系统适用性试验
6、线性关系试验
分别精密量取对照品溶液2、4、6、8、10、12μl，依次进样。在上述色谱条件下测定淫羊藿苷对照品峰面积，以峰面积（Y）对测定量（X，μg）线性回归，得回归方程Y＝2260.3X－50.727（r＝0.9999）。结果见表2，结果表明，淫羊藿苷在0.5784～1.928μg范围内线性关系良好。
表2 淫羊藿苷线性关系考察
7、精密度试验
精密量取淫羊藿苷对照品溶液（9.640μg/ml），在上述色谱条件下，重复进样5次，记录色谱，结果见表3，淫羊藿苷RSD为0.88%，说明有良好的精密度。
表3 淫羊藿苷精密度试验
8、稳定性试验
取金马肝泰胶囊约0.5g，精密称定，按供试品溶液的制备方法进行制备，分别在0、2、4、6、8h按上述色谱条件测定，记录色谱，结果见表4，淫羊藿苷RSD为0.88%，说明有稳定性良好。
表4 淫羊藿苷稳定性试验
9、重复性试验
取同一批金马肝泰胶囊按供试品溶液制备方法制备5份供试品溶液，分别进样，记录色谱图，计算，结果见表5，淫羊藿苷RSD为1.06%，说明有良好的重复性。
表5 淫羊藿苷重复性试验
10、回收率试验
称取5份金马肝泰胶囊（其中淫羊藿苷含量0.6811%）0.2g，精密称定，分别精密加入对照品储备液1ml，按照供试品溶液制备方法制备，按上述测定方法测定，记录色谱图，计算，结果见表6。
表6 淫羊藿苷回收率试验
11、样品含量测定
取3个批号的金马肝泰胶囊0.5g，精密称定，按供试品溶液的制备方法进行制备，即得样品溶液。精密量取10ul注入液相色谱仪进行测定，另取淫羊藿苷对照品（0.0964mg/ml），同法测定，按外标法以峰面积计算，结果见表7。
表7 金马肝泰胶囊含量测定结果
（二）同时测定粉防己碱和防己诺林碱的含量
1、药品与试剂 粉防己碱对照品110711-200406（中国药品生物制品检定所），防己诺林碱对照品110793-200605（供含量测定用，中国药品生物制品检定所），甲醇﹑乙腈为色谱醇，盐酸﹑冰乙酸为分析纯，重蒸水。
2、仪器分析条件岛津LC-10Atvp高效液相色谱仪，CL-10Avp系统控制器，LC-10Atvp输液泵，SPD-10Avp紫外检测器，7725i型手动进样器，Class-VP5.0工作站数据处理系统，CTO-10Asvp恒温柱箱；BP211D电子天平（德国），CX-250型超声波清洗器。
3、色谱条件：色谱柱迪马Diamonsil C18（4.6mm×250mm，5μm）；乙腈－甲醇－水－冰乙酸为流动相；检测波长：280nm；柱温：25℃；
4、溶液制备
4.1对照品溶液的制备
称取粉防己碱和防己诺林碱对照品各12mg和9mg，精密称定，分置于25ml容量瓶中超声，完全溶解后精密至刻度，作为储备液；储备液各取2ml置于同一10ml容量瓶中，稀释至刻度，摇匀即得。
4.2供试品溶液的制备
取本品约1g，精密称定，精密加入2%盐酸甲醇溶液25ml，称定重量，加热回流30min，放冷，再称定重量，用2%盐酸甲醇溶液补足减失的重量，滤过。精密量取续滤液5ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
5、系统适用性实验
采用迪马DiamonsilC18（4.6mm×250mm,5μm）色谱柱，乙腈－甲醇－水－冰乙酸（40：50：30：1）（每100ml含十二烷基磺酸钠0.41g）为流动相，检测波长280nm，柱温25℃。取供试样品、防己阴性样品，以供试品溶液制备方法制得供试品溶液和阴性样品溶液，分别精密吸取上述两种溶液和对照品溶液各5μl注入液相色谱仪，记录色谱图，从色谱图中可以看出，供试样品在粉防己碱和防己诺林碱出峰处有对应峰，阴性样品则在粉防己碱和防己诺林碱出峰处无对应峰，说明阴性样品无假阳性峰。供试样品中粉防己碱和防己诺林碱的理论塔板数分别为6546和5939，二者的分离度为2.53，故暂定粉防己碱和防己诺林碱苷理论塔板数均不低于4000，分离度应符合要求。测定结果见表8。
表8 粉防己碱和防己诺林碱系统适用性试验
结果可知，阴性对照样品与供试品及对照品溶液相比较，在粉防己碱和防己诺林碱的相应保留时间内无吸收峰，故阴性样品中的成分不会影响供试品中粉防己碱和防己诺林碱的测定结果。
6、线性关系考察
分别精密吸取对照品溶液（其中粉防己碱0.0961mg/ml，防己诺林碱0.0719mg/ml）2、4、6、8、10μl进样，测定，记录色谱图。分别以粉防己碱和防己诺林碱峰面积为纵坐标，以进样量（??g）为横坐标，经线性回归得粉防己碱和防己诺林碱回归方程分别为（n=5）：Y=640399X＋7980.5（r﹦0.9997），Y=635343X＋7435.1（r﹦0.9984）。结果表明：粉防己碱在0.1922～0.961μg范围内线性关系良好，防己诺林碱在0.1438～0.7190μg范围内线性关系良好。
表9 粉防己碱和防己诺林碱线性关系考察
7、精密度试验
取同一份供试品溶液（20080101）重复进样5次，记录色谱，结果见表10，粉防己碱和防己诺林碱RSD分别为1.33%和3.01%，说明有良好的精密度。
表10 粉防己碱和防己诺林碱精密度试验
8、重复性试验
取同一样品（20050308）按供试品溶液制备方法制备5份供试品溶液，分别进样，记录色谱，计算，结果见表11和表12，粉防己碱和防己诺林碱RSD分别为0.84%和1.26%，说明有良好的重复性。
表11 粉防己碱重复性试验
表12 防己诺林碱重复性试验
9、稳定性试验
精密称取供试品（20080101）1g，照供试品溶液制备方法制得供试品溶液。将供试品溶液于室温下放置0、4、8、12、24h后，按上述色谱条件依次精密吸取各时间段该溶液5μl，进样，记录色谱图，计算，结果见表13，粉防己碱和防己诺林碱RSD分别为1.12%和1.13%，说明有良好的稳定性。
表13 粉防己碱和防己诺林碱稳定性试验
10、回收率试验
称取5份金马肝泰片样品（其中粉防己碱和防己诺林碱含量分别为0.5724%和0.3185%）0.2g，精密称定，分置于5个25ml容量瓶中，分别精密加入对照品储备液各2ml，按照供试品溶液制备方法制备，按上述测定方法测定，记录色谱图，计算，结果见表14和表15。
表14 粉防己碱回收率试验
表15 防己诺林碱回收率试验
11、样品含量测定 按供试品溶液制备方法及色谱条件，测定三批样品中粉防己碱和防己诺林碱的含量，测定结果见表16、表17。
表16 三批样品同时测定粉防己碱和防己诺林碱含量中粉防己碱的测定结果
表17 三批样品同时测定粉防己碱和防己诺林碱含量中防己诺林碱的测定结果
本发明的有益效果：与现有技术相比，本发明建立了治疗肝炎的金马肝泰片和金马肝泰胶囊的质量检测方法，该方法采用薄层色谱法分别对黄芪、赤芍和丹参进行定性定量鉴别，达到多成分同时控制，另外，在原有含量测定项目的基础上增加了对淫羊藿苷、粉防己碱和防己诺林碱项目的测定，利用高效液相色谱测定淫羊藿苷或同时测定粉防己碱和防己诺林碱的含量，能够进一步有效控制金马肝泰片和胶囊的质量，从而最大限度的确保产品质量。本发明所采用的质量检测方法科学合理，准确度高，重现性好，能全面有效地控制和确保治疗肝炎的金马肝泰片和金马肝泰胶囊的质量稳定、可控、高效和安全，确保该制剂的临床疗效，更好的满足医疗的需要。
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的说明。
具体实施方式
实施1。治疗肝炎的金马肝泰胶囊的质量控制方法如下：
性状：本品为硬胶囊，内容物为棕色至棕褐色颗粒及粉末；气香，味苦；
鉴别：（1）丹参鉴别：取金马肝泰胶囊内容物3g，加甲醇25ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取原儿茶醛对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取对照品溶液0.5～1μl、供试品溶液2～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲苯-甲酸（2.4∶2∶1∶0.6）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铁水溶液-1%铁氰化钾水溶液（1∶1）（临用新配）。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
（2）赤芍鉴别：取金马肝泰胶囊内容物4g，加甲醇25ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，弃去乙醚液，水层用水饱和的正丁醇提取2次，每次15ml，合并正丁醇液，正丁醇液用氨试液30ml洗涤，弃去氨试液，再用30ml水洗涤，弃去水液，取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述两种溶液各2～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨溶液（8∶1∶4∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
（3）黄芪鉴别：取金马肝泰胶囊内容物20g，加甲醇25ml，加热回流1小时，滤过，滤液浓缩至约2ml，加于中性氧化铝柱（200～300目，5g，内径10～15mm）上，用40%甲醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水20ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次20ml，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述两种溶液各5～10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（65∶35∶10）10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
检查：符合中国药典2005年版一部附录I L中胶囊剂项下的各项规定。
含量测定：以淫羊藿苷为对照，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比乙腈：水=15～45:55～85为流动相进行含量测定。
（1）色谱条件与系统适用性试验：仪器：Agilent色谱仪；色谱柱为Diamonsil（R）C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm），以乙腈-水=15～45:55～85为流动相，柱温20～30℃，流速1.0mL/min，检测波长255～285nm；进样量10μl，理论塔板数不低于1500。
（2）对照品溶液的制备：精密称取淫羊藿苷对照品9.64mg，置10ml容量瓶中，加入甲醇溶解精密至刻度，作为储备液；精密量取储备液1ml置10ml容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，即得浓度为0.0964mg/ml对照品溶液。
（3）供试品溶液的制备：取本品0.5g，精密称定，置50ml具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇20ml，称定重量，超声提取30min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，取上清液，滤过，取续虑液，即得供试品溶液；
（4）测定方法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，按照步骤（1）所述色谱条件测定，即得。
功能主治：清热解毒，健脾利湿，活血化瘀。用于肝胆湿热，气滞血瘀所致的急、慢性肝炎。
用法用量：口服。一次2粒，一日3次。
规格：每片重0.5g。
贮藏：密封。
实施2。治疗肝炎的金马肝泰片的质量控制方法如下：
性状：本品为薄膜衣片，除去薄膜衣后显灰棕色至棕褐色；气香，味苦；
鉴别：（1）丹参鉴别：取金马肝泰片，除去薄膜衣，研细，取约3g，加甲醇25ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取3次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取原儿茶醛对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取对照品溶液0.5～1μl、供试品溶液2～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲苯-甲酸（2.4∶2∶1∶0.6）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铁水溶液-1%铁氰化钾水溶液（1∶1）（临用新配）。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
（2）赤芍鉴别：取金马肝泰片，除去薄膜衣，研细，取约4g，加甲醇25ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，弃去乙醚液，水层用水饱和的正丁醇提取2次，每次15ml，合并正丁醇液，正丁醇液用氨试液30ml洗涤，弃去氨试液，再用30ml水洗涤，弃去水液，取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述溶液各2～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨溶液（8∶1∶4∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
（3）黄芪鉴别：取金马肝泰片，除去薄膜衣，研细，取约20g，加甲醇25ml，加热回流1小时，滤过，滤液浓缩至约2ml，置中性氧化铝柱（200～300目，5g，内径10～15mm）上，用40%甲醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水20ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次20ml，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述两种溶液各5～10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（65∶35∶10）10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
检查：符合中国药典2005年版一部附录I D中片剂项下的各项规定。
含量测定：以粉防己碱和防己诺林碱混合溶液为对照，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比乙腈：甲醇：水：冰乙酸=35～45：45～55：25～35：0.5～1.5为流动相进行含量测定；每100ml流动相中含十二烷基磺酸钠0.2g～1.0g。
（1）色谱条件与系统适用性试验：仪器：岛津LC-10Atvp高效液相色谱仪；色谱柱为Diamonsil C18（4.6mm×250mm,5μm）；以体积比乙腈：甲醇：水：冰乙酸=35～45：45～55：25～35：0.5～1.5为流动相，柱温为10℃～40℃；检测波长230nm～350nm；进样量5μL；理论塔板数不低于4000；
（2）对照品溶液的制备：分别称取粉防己碱和防己诺林碱对照品各12mg和9mg，精密称定，分置于25ml容量瓶中超声，完全溶解后精密至刻度，作为储备液；储备液各取2ml置于同一10ml容量瓶中，稀释至刻度，摇匀即得。
（3）供试品溶液的制备：取本品1g，精密称定，精密加入2%盐酸甲醇溶液25ml，称定重量，加热回流30min，放冷，再称定重量，用2%盐酸甲醇溶液补足减失的重量，滤过；精密量取续滤液5ml，置10ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
（4）测定方法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，按照步骤（1）所述色谱条件测定，即得。
功能主治：清热解毒，健脾利湿，活血化瘀。用于肝胆湿热，气滞血瘀所致的急、慢性肝炎。
用法用量：口服。一次2片，一日3次。
规格：每片重0.55g。
贮藏：密封。
Claims (4)
1.一种治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法，其特征在于：所述治疗肝炎的药物制剂是金马肝泰片和金马肝泰胶囊，其质量检测方法包括性状、鉴别、检查和含量测定，其中鉴别是采用薄层色谱法对制剂中黄芪、赤芍和丹参的鉴别，所述的鉴别包括：（1）丹参鉴别：取本品0.1g～10g，加甲醇1ml～150ml，加热回流0.1h～2h，滤过，滤液蒸干，残渣加水1ml～50ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取1～5次，每次1ml～50ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇0.5ml～5ml使溶解，作为供试品溶液；另取原儿茶醛对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录Ⅵ B薄层色谱法试验，吸取对照品溶液0.5～1μl、供试品溶液2～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为1.9～2.9∶1.5～2.5∶0.5～1.5∶0.4～0.8的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲苯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积比为1∶1的1%三氯化铁水溶液-1%铁氰化钾水溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；（2）赤芍鉴别：取本品0.1g～10g，加甲醇1ml～150ml，加热回流5min～60min，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水1ml～50ml使溶解，用乙醚振摇提取1～4次，每次1ml～50ml，弃去乙醚液，水层用水饱和的正丁醇提取1～5次，每次1ml～30ml，合并正丁醇液，正丁醇液用氨试液3ml～50ml洗涤，弃去氨试液，再用3ml～50ml水洗涤，弃去水液，取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇0.5ml～5ml使溶解，作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录Ⅵ B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为6～10∶0.8～1.2∶2～6∶0.8～1.2的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以浓度为3%～10%的香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；（3）黄芪鉴别：取本品5g～50g，加甲醇5ml～200ml，加热回流0.5h～2h，滤过，滤液浓缩至1ml～5ml，加于中性氧化铝柱上，用浓度为30%～50%的甲醇50ml～200ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水5ml～50ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取1～5次，每次5ml～50ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤1～4次，每次5ml～50ml ，再用正丁醇饱和的水洗涤1～4次，每次5ml～50ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇0.5ml～5ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录Ⅵ B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5～10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为50～80∶25～45∶5～15的三氯甲烷-甲醇-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以浓度为5%～25%的硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
所述的含量测定是用高效液相色谱法测定制剂中淫羊藿苷的含量，即以淫羊藿苷为对照，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比乙腈：水=15～45:55～85为流动相进行含量测定；或用高效液相色谱法在同一色谱条件下同时测定制剂中粉防己碱和防己诺林碱的含量，即以粉防己碱和防己诺林碱混合溶液为对照，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比乙腈：甲醇：水：冰乙酸=35～45：45～55：25～35：0.5～1.5为流动相进行含量测定；每100ml流动相中含十二烷基磺酸钠0.2g～1.0g；
所述的性状和检查包括，对于片剂：（1）性状：本品为薄膜衣片，除去薄膜衣后显灰棕色至棕褐色；气香，味苦；（2）检查：符合中国药典2005年版一部附录I D中片剂项下的各项规定；对于胶囊剂：（1）性状：本品为硬胶囊，内容物为棕色至棕褐色颗粒及粉末；气香，味苦；（2）检查：符合中国药典2005年版一部附录I L中胶囊剂项下的各项规定。
2.根据权利要求1所述的治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法，其特征在于：所述鉴别（2）赤芍鉴别中，显色时加热的温度为100℃～120℃；鉴别（3）黄芪鉴别中，所用的展开剂为三氯甲烷-甲醇-水10℃以下放置后的下层溶液；显色时加热的温度为100℃～120℃。
3.根据权利要求1所述的治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法，其特征在于：所述淫羊藿苷的含量测定方法包括以下步骤：
（1）色谱条件与系统适用性试验：仪器：Agilent色谱仪；色谱柱为Diamonsil（R）C18色谱柱，以乙腈-水=15～45:55～85为流动相，柱温20～30℃，流速1.0mL/min，检测波长255～285nm；进样量10μl，理论塔板数不低于1500；
（2）对照品溶液的制备：精密称取淫羊藿苷对照品9.64mg，置10ml容量瓶中，加入甲醇溶解精密至刻度，作为储备液；精密量取储备液1ml置10ml容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，即得浓度为0.0964mg/ml对照品溶液；
（3）供试品溶液的制备：取本品0.5g，精密称定，置50ml具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇20ml，称定重量，超声提取30min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，取上清液，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
（4）测定方法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，按照步骤（1）所述色谱条件测定，即得。
4.根据权利要求1所述的治疗肝炎的药物制剂的质量检测方法，其特征在于：所述粉防己碱和防己诺林碱的含量测定方法包括以下步骤：
（1）色谱条件与系统适用性试验：仪器：岛津LC-10Atvp高效液相色谱仪；色谱柱为Diamonsil C18；以体积比乙腈：甲醇：水：冰乙酸=35～45：45～55：25～35：0.5～1.5为流动相，柱温为10℃～40℃；检测波长230nm～350nm；进样量5μL；理论塔板数不低于4000；
（2）对照品溶液的制备：称取粉防己碱对照品12mg,防己诺林碱对照品9mg，精密称定，分置于25ml容量瓶中超声，完全溶解后精密至刻度，作为储备液；储备液各取2ml置于同一10ml容量瓶中，稀释至刻度，摇匀即得；
（3）供试品溶液的制备：取本品1g，精密称定，精密加入2%盐酸甲醇溶液25ml，称定重量，加热回流30min，放冷，再称定重量，用2%盐酸甲醇溶液补足减失的重量，滤过；精密量取续滤液5ml，置10ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得；
（4）测定方法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，按照步骤（1）所述色谱条件测定，即得。
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20120222 |
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| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |