CN113125628A - 苦参及三味拳参口服液中苦参的薄层色谱鉴别方法 - Google Patents
苦参及三味拳参口服液中苦参的薄层色谱鉴别方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及薄层色谱检测技术领域,尤其涉及一种苦参及三味拳参口服液中苦参的薄层色谱鉴别方法。该检测方法以三氯甲烷对待测样品进行前处理,以(2.8~3.2):(5.5~6.5):(2.8~3.2):(0.9~1.1)比例的三氯甲烷‑乙酸乙酯‑甲醇‑浓氨为展开剂,以稀碘化铋钾试液显色,能够使氧化苦参碱斑点展开,不再停留在原点,且斑点整齐无边缘效应,比移值适中(0.2~0.8),可用于苦参的鉴别,也可用于检测待测样品中是否含有苦参。
Description
技术领域
本发明涉及薄层色谱检测技术领域,尤其涉及一种苦参及三味拳参口服液中苦参的薄层色谱鉴别方法。
背景技术
现有技术中含有苦参并需鉴别苦参的中成药有很多种,如三味拳参口服液,该药由拳参、穿心莲、苦参三味药组成,具有清热解毒,燥湿止痢的功效,主治家禽的湿热泄泻,是一种广泛用于家禽的治疗药物。为了保证药品的疗效,需要对三味拳参口服液进行质量检测,其中苦参的鉴别是其质量评价中必检项目之一。
目前,三味拳参口服液中苦参的鉴别采用的是《兽药质量标准》2017年版(中药卷)中的薄层鉴别方法,展开剂为苯-丙酮-乙酸乙酯-浓氨试液(2:3:4:0.2),对照品为氧化苦参碱、苦参碱。但在实际应用中采用该方法鉴别三味拳参口服液中的苦参时,氧化苦参碱对照品无斑点显示,只是在原点点样处显橙红色,因此无法判断结果。并且其展开剂中的苯为一级致癌物,对环境和人员都有较高的风险系数。
有文献资料显示将展开剂改为三氯甲烷-甲醇-浓氨(6:0.6:0.3)氧化苦参碱斑点可以展开并显示,但是在实际应用中边缘效应明显,斑点对应不齐且比移值偏低。
发明内容
针对现有技术中存在的以上技术问题,本发明提供一种苦参及三味拳参口服液中苦参的薄层色谱鉴别方法,该方法专属性强,斑点整齐、明亮、无边缘效应,且比移值适中,相比现有技术方法,更为准确,使含有苦参的药材质量更加容易控制。
为达到上述发明目的,本发明实施例采用了如下的技术方案:
一种苦参的薄层色谱鉴别方法,包括以下步骤:
S1、将待测样品在pH9~10的条件下以三氯甲烷浸提,将所得浸提液蒸干,以乙醇溶解,得供试品溶液;
S2、将对照品以乙醇溶解,得对照品溶液;所述对照品包括氧化苦参碱对照品;
S3、取所述供试品溶液、对照品溶液,点样于同一硅胶G薄层板上,以(2.8~3.2):(5.5~6.5):(2.8~3.2):(0.9~1.1)比例的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨为展开剂,展开,取出,晾干,喷以稀碘化铋钾试液。
本发明通过对展开剂组成以及各成分比例进行大量研究后得出上述展开剂,该展开剂能够使氧化苦参碱斑点展开,不再停留在原点,且斑点整齐无边缘效应,比移值适中。并且该展开剂中不含一级致癌物,使用更安全。经稀碘化铋钾试液显色后,供试品溶液在氧化苦参碱对照品溶液相应的位置上显相同颜色的橙色斑点,而不含氧化苦参碱的待测样品则不会显色,由此可鉴别待测样品是否为苦参,也可用于判断待测样品中是否含有苦参。
优选地,展开剂为3:6:3:1比例的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨。该比例下的展开剂能够达到最佳的展开效果,斑点更整齐。
优选地,所述对照品还包括苦参碱对照品和槐定碱对照品。对照品溶液中苦参碱对照品、苦参碱对照品、槐定碱对照品的浓度可均选择0.2~1.2mg/ml。
优选地,S1中以三氯甲烷浸提的方法为超声提取。
优选地,所述超声提取的功率为250W,频率为33kHz,超声时间为25~35min。该提取条件能够在很短的时间内使更多的氧化苦参碱被提取出来,提取效果与加热回流1小时的效果基本相当。
以及,本发明实施例还提供一种三味拳参口服液中苦参的薄层色谱鉴别方法,包括以下步骤:
步骤一、取三味拳参口服液,调节pH值至9~10,加三氯甲烷提取,放冷,得三氯甲烷液提取液;取三氯甲烷提取液,蒸干,残渣加乙醇使溶解,得供试品溶液;
步骤二、取对照品加乙醇溶解,得对照品溶液;所述对照品包括氧化苦参碱对照品;
步骤三:吸取所述供试品溶液和对照品溶液,分别点于同一硅胶G薄层板上,以(2.8~3.2):(5.5~6.5):(2.8~3.2):(0.9~1.1)比例的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨为展开剂,展开,取出,晾干,喷以稀碘化铋钾试液。
经稀碘化铋钾试液显色后,供试品溶液在氧化苦参碱对照品溶液相应的位置上显相同颜色的橙色斑点,而若按该方法对不含苦参的阴性对照溶液进行检测,则在氧化苦参碱对照品溶液相应的位置上没有斑点,由此可鉴别三味拳参口服液中是否含有苦参。该方法操作简单、判断准确,适用于工业化生产过程中大批量样品的检测。
步骤一也可在加三氯甲烷提取后再调节pH,本发明在供试品处理中先调节pH值以后再用三氯甲烷提取,目的在于防止三氯甲烷腐蚀pH计,对检测结果无影响(如图4所示),本发明对此不作限定。先调节pH再加三氯甲烷提取或先加三氯甲烷提取再调节pH均在本发明保护范围之内。
优选地,展开剂为3:6:3:1比例的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨。该比例下的展开剂能够达到最佳的展开效果,斑点更整齐。
优选地,所述对照品还包括苦参碱对照品和槐定碱对照品。
所述对照品溶液中苦参碱对照品、苦参碱对照品、槐定碱对照品的浓度可均选择0.2~1.2mg/ml。
优选地,步骤一中用浓氨试液调节所述三味拳参口服液和三味拳参口服液苦参阴性样品溶液的pH。
优选地,步骤一中所述加三氯甲烷提取的方法为超声提取,超声处理的条件优选采用功率250W,频率33kHz,超声时间25~35min。
本发明的有益效果在于:本发明以氧化苦参碱、苦参碱、槐定碱作为对照品,相比《兽药质量标准》2017年版(中药卷)中仅采用氧化苦参碱作为对照品检测结果更全面、更准确。本发明的展开剂能够使氧化苦参碱斑点展开,不再停留在原点,比移值适中,且斑点整齐无边缘效应。并且该展开剂中不含一级致癌物,使用更安全。
附图说明
图1为本发明实施例1检测苦参的薄层色谱图;
图2为本发明实施例2检测三味拳参口服液中苦参的薄层色谱图;
图3为本发明实施例3检测三味拳参口服液中苦参的重复性试验的薄层色谱图;
图4为本发明实施例4检测三味拳参口服液中苦参的薄层色谱图;
图5为对比例1检测三味拳参口服液中苦参的薄层色谱图;
图6为对比例2检测三味拳参口服液中苦参的薄层色谱图;
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白,以下结合附图及实施例,对本发明进行进一步详细说明。应当理解,此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明,并不用于限定本发明。
在以下实施例中,氧化苦参碱:购自中国食品药品检定研究院;批号:110780-201909;
苦参碱:购自中国食品药品检定研究院;批号:110805-201709;
槐定碱:购自中国食品药品检定研究院;批号:110784-201706。
稀碘化铋钾试液按《兽药质量标准》2017年版(中药卷)的规定配制。
三氯甲烷、浓氨、乙醇、甲醇、甲苯、乙酸乙酯等均为分析纯。
硅胶G薄层板的规格为10cm×20cm。
实验室温度16~25℃,湿度30%~50%。
实施例1
本发明实施例提供了苦参的薄层色谱鉴别方法。步骤如下:
步骤一:供试品溶液制备:取苦参单煎液10ml加浓氨试液调节pH值至9.5,加三氯甲烷25ml,超声处理(功率250W,频率33kHz)30分钟,放冷,得三氯甲烷液提取液;取三氯甲烷提取液,蒸干,残渣加乙醇2ml使溶解。
步骤二:对照品溶液制备:取氧化苦参碱对照品、苦参碱对照品、槐定碱对照品加乙醇制成每1ml含各对照品均为1mg的溶液。
步骤三:薄层色谱系统:吸取步骤一制备的供试品溶液、步骤二制备的对照品溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,展开剂为三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨(3:6:3:1),展开,取出,晾干,喷以稀碘化铋钾试液。
结果如图1所示,供试品溶液在对照品溶液相应的位置上显相同颜色的橙色斑点,斑点整齐、明亮、无边缘效应,且比移值适中,而阴性对照溶液在对照品溶液相应的位置上没有斑点。该结果说明本发明提供的苦参的薄层色谱鉴别方法专属性强,重复性良好,可准确鉴别三味拳参口服液中是否含有苦参。
实施例2
本发明实施例提供了三味拳参口服液中苦参的薄层色谱鉴别方法,三味拳参口服液批号为20200901。步骤如下:
步骤一:供试品溶液制备:取三味拳参口服液10ml加浓氨试液调节pH值至9.5,加三氯甲烷25ml,超声处理(功率250W,频率33kHz)30分钟,放冷,得三氯甲烷液提取液;取三氯甲烷提取液,蒸干,残渣加乙醇2ml使溶解。
步骤二:对照品溶液制备:取氧化苦参碱对照品、苦参碱对照品、槐定碱对照品加乙醇制成每1ml含各对照品均为1mg的溶液。
步骤三:阴性对照溶液的制备:取三味拳参口服液苦参阴性样品溶液10ml加浓氨试液调节pH值至9.5,加三氯甲烷25ml,超声处理(功率250W,频率33kHz)30分钟,放冷,得阴性对照提取液;取阴性对照提取液,蒸干,残渣加乙醇2ml使溶解。
步骤四:薄层色谱系统:吸取步骤一制备的供试品溶液、步骤二制备的对照品溶液、步骤三制备的阴性对照溶液5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,展开剂为三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨(3:6:3:1),展开,取出,晾干,喷以稀碘化铋钾试液。
结果如图2所示,供试品溶液在对照品溶液相应的位置上显相同颜色的橙色斑点,斑点整齐、明亮、无边缘效应,且比移值适中,而阴性对照溶液在对照品溶液相应的位置上没有斑点。该结果说明本发明提供的苦参的薄层色谱鉴别方法专属性强,可准确鉴别三味拳参口服液中是否含有苦参。
实施例3
本发明实施例提供了三味拳参口服液中苦参的薄层色谱鉴别方法的重复性试验,三味拳参口服液批号分别为20201001、20201103、20201203。步骤同实施例1。
结果如图3所示。其中供试品溶液1由批号为20201001的三味拳参口服液制成,供试品溶液2由批号为20201103的三味拳参口服液制成,供试品溶液3由批号为20201203的三味拳参口服液制成。该结果说明本发明提供的苦参的薄层色谱鉴别方法重复性良好,可用于三味拳参口服液生产中的苦参检查。
实施例4
本发明实施例提供了三味拳参口服液中苦参的薄层色谱鉴别方法,三味拳参口服液批号为20200901。步骤如下:
步骤一:供试品溶液制备:取三味拳参口服液10ml加三氯甲烷25ml,加浓氨试液调节pH至9.5,超声处理(功率250W,频率33kHz)30分钟,放冷;取三氯甲烷提取液蒸干,残渣加乙醇2ml使溶解。
步骤二:对照品溶液制备:取氧化苦参碱对照品、苦参碱对照品、槐定碱对照品加乙醇制成每1ml含各对照品均为1mg的溶液。
步骤三:薄层色谱系统:吸取步骤一制备的供试品溶液、步骤二制备的对照品溶液以及实施例2中的供试品溶液,分别点于同一硅胶G薄层板上,展开剂为三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨(3:6:3:1),展开,取出,晾干,喷以稀碘化铋钾试液。
结果如图4所示,实施例2和实施例4的供试品溶液在对照品溶液相应的位置上均显相同颜色的橙色斑点,斑点整齐、明亮、无边缘效应,且比移值适中。该结果说明加三氯甲烷提取和调节pH的顺序对检测结果无影响,均可准确鉴别三味拳参口服液中是否含有苦参。
对比例1
采用《兽药质量标准》2017年版(中药卷)收载的方法对三味拳参口服液进行苦参的薄层色谱鉴别,具体步骤如下:取三味拳参口服液10ml加三氯甲烷25ml,摇匀,加浓氨试液调节pH值至9.5,加热回流1小时,放冷,取三氯甲烷液蒸干,残渣加乙醇2ml使溶解,作为供试品溶液。按相同方法制备苦参单煎液供试品溶液和三味拳参口服液苦参阴性对照溶液。另取氧化苦参碱、苦参碱、槐定碱对照品,分别加乙醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录0502)试验,吸取上述三种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以苯-丙酮-乙酸乙酯-浓氨试液(2:3:4:0.2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以稀碘化铋钾试液。
结果如图5所示,氧化苦参碱对照品在原点显橙红色斑点,未展开。
对比例2
在实施例2的基础上将展开剂更换为三氯甲烷-甲醇-浓氨(6:0.6:0.3),对三味拳参口服液中苦参进行薄层色谱鉴别,三味拳参口服液批号为20201203,步骤同实施例2。同时按实施例1中的步骤一制备三味拳参口服液的供试品溶液、苦参单煎液的供试品溶液和三味拳参口服液苦参阴性对照溶液,并点样。
结果如图6所示,氧化苦参碱斑点可以展开并显示,但是边缘效应明显,斑点对应不齐。
以上结果表明,本发明提供的苦参的薄层色谱鉴别方法具有更高的准确性。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种苦参的薄层色谱鉴别方法,其特征在于,包括以下步骤:
S1、将待测样品在pH9~10的条件下以三氯甲烷浸提,将所得浸提液蒸干,以乙醇溶解,得供试品溶液;
S2、将对照品以乙醇溶解,得对照品溶液;所述对照品包括氧化苦参碱对照品;
S3、取所述供试品溶液、对照品溶液,点样于同一硅胶G薄层板上,以(2.8~3.2):(5.5~6.5):(2.8~3.2):(0.9~1.1)比例的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨为展开剂,展开,取出,晾干,喷以稀碘化铋钾试液。
2.根据权利要求1所述的苦参的薄层色谱鉴别方法,其特征在于,展开剂为3:6:3:1比例的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨;和/或
所述对照品还包括苦参碱对照品和槐定碱对照品。
3.根据权利要求1所述的苦参的薄层色谱鉴别方法,其特征在于,S1中以三氯甲烷浸提的方法为超声提取。
4.根据权利要求3所述的苦参的薄层色谱鉴别方法,其特征在于,所述超声提取的功率为250W,频率为33kHz,超声时间为25~35min。
5.一种三味拳参口服液中苦参的薄层色谱鉴别方法,其特征在于,包括以下步骤:
步骤一、取三味拳参口服液,调节pH值至9~10,加三氯甲烷提取,放冷,得三氯甲烷液提取液;取三氯甲烷提取液,蒸干,残渣加乙醇使溶解,得供试品溶液;
步骤二、取对照品加乙醇溶解,得对照品溶液;所述对照品包括氧化苦参碱对照品;
步骤三:吸取所述供试品溶液和对照品溶液,分别点于同一硅胶G薄层板上,以(2.8~3.2):(5.5~6.5):(2.8~3.2):(0.9~1.1)比例的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨为展开剂,展开,取出,晾干,喷以稀碘化铋钾试液。
6.根据权利要求5所述的三味拳参口服液中苦参的薄层色谱鉴别方法,其特征在于,展开剂为3:6:3:1比例的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨;和/或
所述对照品还包括苦参碱对照品和槐定碱对照品;和/或
所述对照品溶液中苦参碱对照品的浓度为0.2~1.2mg/ml。
7.根据权利要求6所述的三味拳参口服液中苦参的薄层色谱鉴别方法,其特征在于,所述对照品溶液中所述苦参碱对照品的浓度为0.2~1.2mg/ml;
所述槐定碱对照品的浓度为0.2~1.2mg/ml。
8.根据权利要求5~7任一项所述的三味拳参口服液中苦参的薄层色谱鉴别方法,其特征在于,步骤一中用浓氨试液调节所述三味拳参口服液和三味拳参口服液苦参阴性样品溶液的pH。
9.根据权利要求5~7任一项所述的三味拳参口服液中苦参的薄层色谱鉴别方法,其特征在于,步骤一中所述加三氯甲烷提取的方法为超声提取。
10.根据权利要求9任一项所述的三味拳参口服液中苦参的薄层色谱鉴别方法,其特征在于,所述超声提取的功率为250W,频率为33kHz,超声时间为25~35min。
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