CN111189944A - 一种同时鉴别三味拳参口服液中苦参和穿心莲的方法 - Google Patents
一种同时鉴别三味拳参口服液中苦参和穿心莲的方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种同时鉴别三味拳参口服液中苦参和穿心莲的方法,包括下述步骤:取供试品,加三氯甲烷,振摇提取,分取三氯甲烷层,蒸干,残渣加乙醇使溶解,对照品溶液的制备,薄层色谱法:点样量:点样量4~8μL,硅胶板,展开系统:三氯甲烷‑甲醇‑浓氨溶液混合溶液的体积百分比为6~8:0.5~0.8:0.3~0.5。该方法快速、灵敏、准确、专属性强,通过一次样品处理,采用一套薄层色谱鉴别系统同时鉴别苦参、穿心莲,不仅节省了试剂、时间,提高了工作效率,而且解决了原有苦参鉴别方法存在的问题,从而更好地进行质量控制。
Description
技术领域
本发明涉及一种能定性测定中药复方制剂中苦参和穿心莲的检验方法,具体地说涉及一种同时鉴别三味拳参口服液中苦参和穿心莲的方法。
背景技术
三味拳参口服液为中兽药成方制剂,收载于《兽药质量标准》2017年版(中药卷),由拳参、穿心莲、苦参三味药组成,具有清热解毒、燥湿止痢的功效,主治湿热泄泻等证,广泛应用于集约化家禽养殖企业。三味拳参口服液质量标准中分别规定了苦参及穿心莲的薄层色谱鉴别方法,不仅费时,费试剂,而且在实际检验工作中发现苦参的鉴别方法存在一定的问题,苦参鉴别所用到的吸附剂是硅胶G薄层板,层析用的展开剂是苯-丙酮-乙酸乙酯-浓氨溶液(2∶3∶4∶0.2),对照是采用苦参的指标成份苦参碱、氧化苦参碱,此方法中氧化苦参碱对照品并无斑点显示,而是在点样原点有一类似橙红色斑点,导致结果无法判定,且展开剂中苯具有较高毒性,是一种致癌物质易对实验人员造成危害,现有技术需要能够同时鉴别三味拳参口服液中苦参和穿心莲成分的方法,而且该方法不需要使用具有高毒性的苯。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术中的问题,提供一种同时鉴别三味拳参口服液中苦参和穿心莲的方法,该方法快速、灵敏、准确、专属性强,通过一次样品处理,采用一套薄层色谱鉴别系统同时鉴别苦参、穿心莲,不仅节省了试剂、时间,提高了工作效率。
为了实现上述目的,本发明通过以下技术方案实现:
一种同时鉴别三味拳参口服液中苦参和穿心莲的方法,包括下述步骤:
第一步:供试品溶液的制备:取供试品,加三氯甲烷,振摇提取,分取三氯甲烷层,蒸干,残渣加乙醇使溶解,作为供试品溶液;
第二步:对照品溶液的制备:另取氧化苦参碱、苦参碱对照品,加乙醇制成每1ml各含1mg的溶液,作为对照品溶液;再取穿心莲内酯对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;
第三步:薄层色谱法:点样量:点样量4~8μL,硅胶板,展开系统:三氯甲烷-甲醇-浓氨溶液混合溶液的体积百分比为6~8:0.5~0.8:0.3~0.5;结果判定:置紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与穿心莲内酯对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,表明可检出穿心莲内酯(穿心莲的指标成份);色谱斑点分离好、清晰、背景无干扰,经无穿心莲阴性样品对照,色谱无干扰,再喷以稀碘化铋钾试液,日光下检视,供试品色谱中,在与氧化苦参碱、苦参碱对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。色谱斑点分离好、清晰,背景无干扰,经无苦参阴性样品对照,色谱无干扰。表明可检出氧化苦参碱、苦参碱(苦参的指标成份)。
优选的:所述第三步中展开剂三氯甲烷-甲醇-浓氨溶液混合溶液的体积百分比为7:0.6:0.4。
优选的:所述第三步的硅胶板是GF254薄层板,规格10cm×20cm。
优选的:所述第一步中供试品与三氯甲烷的体积比为1:2.5。
进一步的:所述第一步中供试品为10ml,三氯甲烷为25ml。
本发明的有益效果是:
1.本发明方法优于已公开的技术,通过一套薄层展开系统同时把苦参和穿心莲两种药材一次鉴别出来,方法简便快速、分离效果好,鉴别精度高,结果重现性好,易于观察,专属性强,斑点清晰,既达到中国兽药典的要求,还节省时间、试剂。
2.本发明方法样品处理简便、省试剂、省时间,三味拳参口服液原标准对苦参、穿心莲分别鉴别,需采用2次样品处理,本发明方法只进行一次样品处理,可减少使用三氯甲烷25ml,而且无需“加热回流1小时”,对样品只需“振摇提取”即可,大大节省试剂和操作时间。
3.本发明方法展开剂只采用3种试剂:三氯甲烷、甲醇、浓氨溶液,三氯甲烷属于二类易制毒化学品;原方法展开剂采用4种试剂:苯、丙酮、乙酸乙酯、浓氨溶液,且苯属于一类致癌物,因此新方法更环保安全。
附图说明
图1为对照例1采用《兽药质量标准》2017年版(中药卷)的收载的方法(苦参鉴别)结果图;
图2为对照1中采用《兽药质量标准》2017年版(中药卷)的收载的方法(苦参鉴别)重复验证结果图;
图3为实施例1中采用本发明所述方法做出的三味拳参口服液的薄层色谱图,置紫外光灯(254nm)下检视;
图4为实施例1中采用本发明所述方法做出的三味拳参口服液的薄层色谱图,再喷以稀碘化铋钾试液,日光下检视。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
实施例一
本实施示例一种同时鉴别三味拳参口服液中苦参和穿心莲的方法:
第一步:供试品溶液的制备:取本品10ml,加三氯甲烷25ml,振摇提取,分取三氯甲烷层,蒸干,残渣加乙醇1ml使溶解,作为供试品溶液。
第二步:对照品溶液的制备:另取氧化苦参碱、苦参碱对照品,加乙醇制成每1ml各含1mg的溶液,作为对照品溶液;再取穿心莲内酯对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。
第三步:薄层色谱法1.点样量:点样量4μL。
2.硅胶板:GF254薄层板(10cm×20cm),(批号:20180508,购自青岛海洋化工有限公司)。
3.展开系统:三氯甲烷-甲醇-浓氨溶液混合溶液的体积百分比为6:0.6:0.3。
4.结果判定
4.1置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中,在与穿心莲内酯对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,表明可检出穿心莲内酯(穿心莲的指标成份);缺穿心莲的阴性样品在与穿心莲内酯对照品色谱相应的位置上,无相同颜色的斑点,即阴性不存在干扰,表明该方法专属性可行,如图3所示,而且色谱斑点分离好、清晰、背景无干扰,经无穿心莲阴性样品对照,色谱无干扰。
4.2再喷以稀碘化铋钾试液,日光下检视,供试品色谱中,在与氧化苦参碱、苦参碱对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。色谱斑点分离好清晰,背景无干扰,经无苦参阴性样品对照,色谱无干扰。表明可检出氧化苦参碱、苦参碱(苦参的指标成份),如图4所示。
试药及试剂:氧化苦参碱对照品(批号:110780-201007)、苦参碱对照品(批号:110805-200508)、穿心莲内酯对照品(批号:110797-201108),均来源中国食品药品检定研究院,批号20992-201108;
三氯甲烷、甲醇、浓氨溶液均为分析纯;
其中所用仪器;BP211D 分析天平 (赛多利斯,德国);瑞氏CAMAG薄层自动点样器(规格型号LINOMAT5)、CAMAG VISUALIZER全自动薄层色谱成像系统。
本发明中所使用的浓氨溶液可以为药典中加载的浓氨溶液,即含氨(NH3)为25.0%~28.0%(g/g) 。
实施例二
第一步:供试品溶液的制备:取本品10ml,加三氯甲烷25ml,振摇提取,分取三氯甲烷层,蒸干,残渣加乙醇1ml使溶解,作为供试品溶液。
第二步:对照品溶液的制备:另取氧化苦参碱、苦参碱对照品,加乙醇制成每1ml各含1mg的溶液,作为对照品溶液;再取穿心莲内酯对照品,加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液,作为对照品溶液。
第三步:薄层色谱法
1.点样量:点样量5ul。
2.硅胶板:GF254薄层板(10cm×20cm),(批号:20150309,购自烟台江友硅胶开发有限公司)
3.展开系统:三氯甲烷-甲醇-浓氨溶液混合溶液的体积百分比为7:0.5:0.2。
4.结果判定
4.1置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中,在与穿心莲内酯对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,表明可检出穿心莲内酯(穿心莲的指标成份);色谱斑点分离好、清晰、背景无干扰。
4.2再喷以稀碘化铋钾试液,日光下检视,供试品色谱中,在与氧化苦参碱、苦参碱对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,表明可检出氧化苦参碱、苦参碱(苦参的指标成份)
实施例三
第一步:供试品溶液的制备:取本品10ml,加三氯甲烷25ml,振摇提取,分取三氯甲烷层,蒸干,残渣加乙醇1ml使溶解,作为供试品溶液。
第二步:对照品溶液的制备:另取氧化苦参碱、苦参碱对照品,加乙醇制成每1ml各含1mg的溶液,作为对照品溶液;再取穿心莲内酯对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。
第三步:薄层色谱法
1.点样量:点样量8ul。
2.硅胶板:GF254薄层板(10cm×20cm),(批号:20190226,购自青岛鼎康硅胶有限公司)
3.展开系统:三氯甲烷-甲醇-浓氨溶液混合溶液的体积百分比为8:0.6:0.3。
4.结果判定
4.1置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中,在与穿心莲内酯对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,表明可检出穿心莲内酯(穿心莲的指标成份);色谱斑点分离好、清晰、背景无干扰。
4.2再喷以稀碘化铋钾试液,日光下检视,供试品色谱中,在与氧化苦参碱、苦参碱对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,表明可检出氧化苦参碱、苦参碱(苦参的指标成份)。色谱斑点分离好清晰,背景无干扰,
对照例
采用《兽药质量标准》2017年版(中药卷)的收载的方法,具体步骤如下:
(1)取本品10ml,加三氯甲烷25ml,摇匀,加浓氨溶液调节pH值至9.5,加热回流1小时,放冷,取三氯甲烷液蒸干,残渣加乙醇2ml使溶解,作为供试品溶液。另取氧化苦参碱对照品,加乙醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录0502)试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以苯-丙酮乙酸乙酯浓氨溶液(2:3:4:0.2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以稀碘化铋钾试液,如图1所示喷以稀碘化铋钾试液,日光下检视,供试品色谱中,在与氧化苦参碱对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
采用上面的防范重复验证结果,如图2喷以稀碘化铋钾试液,日光下检视,供试品色谱中,氧化苦参碱对照品在原点未展开,只是在点样原点有一类似橙红色斑点。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例,对于本领域的普通技术人员而言,可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型,本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
Claims (6)
1.一种同时鉴别三味拳参口服液中苦参和穿心莲的方法,其特征是:包括下述步骤:
第一步:供试品溶液的制备:取供试品,加三氯甲烷,振摇提取,分取三氯甲烷层,蒸干,残渣加乙醇使溶解,作为供试品溶液;
第二步:对照品溶液的制备:另取氧化苦参碱、苦参碱对照品,加乙醇制成每1ml各含1mg的溶液,作为对照品溶液;再取穿心莲内酯对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;
第三步:薄层色谱法:点样量:点样量4~8μL,硅胶板,展开系统:三氯甲烷-甲醇-浓氨溶液混合溶液的体积百分比为6~8:0.5~0.8:0.3~0.5;结果判定:置紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与穿心莲内酯对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,表明可检出穿心莲内酯;再喷以稀碘化铋钾试液,日光下检视,供试品色谱中,在与氧化苦参碱、苦参碱对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,表明可检出氧化苦参碱、苦参碱。
2.如权利要求1所述的同时鉴别三味拳参口服液中苦参和穿心莲的方法,其特征是:所述第三步中展开剂三氯甲烷-甲醇-浓氨溶液混合溶液的体积百分比为7:0.6:0.4。
3.如权利要求1所述的同时鉴别三味拳参口服液中苦参和穿心莲的方法,其特征是:所述第三步的硅胶板是GF254薄层板,规格10cm×20cm。
4.如权利要求1所述的同时鉴别三味拳参口服液中苦参和穿心莲的方法,其特征是:所述第一步中供试品与三氯甲烷的体积比为2:5。
5.如权利要求1-4任一所述的同时鉴别三味拳参口服液中苦参和穿心莲的方法,其特征是:所述第一步中供试品为10ml,三氯甲烷为25ml。
6.如权利要求1-5任一所述的同时鉴别三味拳参口服液中苦参和穿心莲的方法,其特征是:所述第三步中置254nm紫外光灯下检视。
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Denomination of invention: A Method for Simultaneously Identifying Sophora flavescens and Andrographis paniculata in Sanwei Quanshen Oral Liquid Effective date of registration: 20230425 Granted publication date: 20211231 Pledgee: Qilu bank Limited by Share Ltd. Ji'nan Changqing branch Pledgor: JINAN GUANGSHENGYUAN BIOTECHNOLOGY CO.,LTD. Registration number: Y2023980039112 |