CN101703583A - 心宁胶囊的质量检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种心宁胶囊的质量检测方法，包括如下步骤：鉴别：川芎、三七、芦丁、芍药苷TLC检查；含量测定：照高效液相色谱法测定；a、色谱条件与系统适用性试验：b、对照品溶液的制备：取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加50％甲醇制成每1ml含70μg的溶液，即得。c、供试品溶液的制备：d、测定法。检查应符合胶囊剂项下有关的各项规定。本方法稳定、重现性好、有利于对产品质量进行控制。
Description
技术领域
本发明属于中药制剂的质量控制领域，特别涉及心宁胶囊的质量检测方法。
背景技术
心宁胶囊是由丹参300g、槐花150g、川芎150g、三七54g、红花150g、降香150g、赤芍150g。以上七味，三七、川芎粉碎成细粉，过筛，备用；其余丹参等五味，第一次加8倍量水煎煮3小时，第二次加6倍量水煎煮2小时，第三次加6倍量水煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成相对密度为1.05～1.15(60～70℃)的清膏，干燥，与上述细粉混匀，制粒，填充，制成1000粒，每粒装0.38g，即得。系由已有国家标准的药品“心宁片”改剂型而得。原心宁片质量标准中含量测定，是检测处方中丹参药材所含的丹参素钠，进行丹参素钠含量方法学研究，加样回收率达不到要求，因而无法有效控制其质量。
发明内容
本发明的目的在于克服上述缺点而提供的一种方法稳定、重现性好、有利于对产品质量进行控制的心宁胶囊的质量检测方法。
本发明的一种心宁胶囊的质量检测方法，包括如下步骤：
(1)鉴别：
a、取本品内容物3g，加乙醚50ml，超声处理20分钟，滤过，药渣备用。滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取川芎对照药材1g，加乙醚20ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
b、取(a)项下备用药渣，挥干溶剂，加甲醇50ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水50ml使溶解，用水饱和正丁醇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次60ml，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取三七对照药材0.5g，加甲醇20ml，超声处理30分钟，同法制成对照药材溶液。再取三七皂苷R1对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇-水(65∶35∶10)10℃放置12小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
c、取本品内容物3g，加乙醇10ml，振摇5分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取芦丁对照品，加甲醇制成每1ml含4mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水(18∶3∶4.5)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，热风吹至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视.供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点.
d、取本品内容物3g，加乙醇溶液20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。另取赤芍对照药材0.5g，加乙醇10ml，振摇5分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml溶解，作为对照药材溶液。再取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液10μl，对照药材溶液5μl，对照品溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液(8∶1∶4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(2)含量测定：照高效液相色谱法(中国药典2005版一部附录VI D)测定。
a、色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-水-乙酸(28∶10∶61∶1)为流动相；检测波长为286nm；流速为0.8ml/分钟；柱温25℃。理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于2000。
b、对照品溶液的制备取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加50％甲醇制成每1ml含70μg的溶液，即得。
c、供试品溶液的制备取本品约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75％甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率34KHZ)30分钟，放冷，再称定重量，用75％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
d、测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
上述的心宁胶囊的质量检测方法，其中：本品每粒含丹参以丹酚酸B(C36H30O16)计，不得少于2.5mg。
上述的心宁胶囊的质量检测方法，其中还可设检查步骤：应符合胶囊剂项下有关的各项规定(中国药典2005年版一部附录I L)。
本发明与现有技术相比，具有明显的有益效果，由以上技术方案可知：同一体系中对川芎、三七、芦丁、芍药苷进行鉴别，丹参药材对心血管系统起作用的主要是丹参的水溶性成分，选用对加样回收率能达到要求，而且重复性好的水溶液性成分丹酚酸B作为含量测定指标成分，通过色谱条件选择、供试品溶液的制备选择、系统适用性、线性关系、精密度、样品稳定性、样品重现性、样品加样回收率、样品测定等试验确定含量测定方法，使得心宁胶囊质量更容易控制，且方法稳定、重现性好。
具体实施方式
以下通过试验例来进一步说明本发明方法的有益效果。
一、鉴别
1.1仪器、对照品、对照药材、试剂和试药：
仪器：BYCDE薄层自动铺板器；电子天平(十万分之一)AE240型。
试剂：乙酸乙酯、乙醚、甲酸、丙酮、二氯甲烷、正己烷、甲醇、氨水、甲苯、硫酸、正丁醇均为分析纯。
对照品：芦丁对照品(批号：100080-200306)、三七皂苷R1对照品(批号：110745-200415)、芍药苷对照品(批号：110736-200320)由中国药品生物制品检定所提供。
对照药材：川芎对照药材(批号：120918-200608)、红花对照药材(批号：120907-200408)、三七对照药材(批号：120941-200304)、降香对照药材(批号：120952-200506)由中国药品生物制品检定所提供。
试药：心宁胶囊由贵阳新天药业股份有限公司提供。
1.2鉴别本鉴别为川芎薄层鉴别，参照心宁片质量标准鉴别(1)。确定了正文心宁胶囊川芎TLC检查方法，经3批中试样品试验，该方法稳定，重现性好，且阴性无干扰。
1.3鉴别本鉴别为三七薄层鉴别。参照心宁片质量标准鉴别(2)。
心宁片质量标准鉴别(2)中供试品处理方法为：取〔鉴别〕(1)项下备用药渣，挥干，加甲醇50ml，超声30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水50ml使溶解，用水饱和正丁醇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次60ml，取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，即得。为了能充分提取，因此将提取条件改为改在哪了？：取〔鉴别〕(1)项下备用药渣，挥干，加甲醇50ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水50ml使溶解，用水饱和正丁醇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次60ml，取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，即得。另取三七对照药材0.5g，加甲醇20ml，超声处理30分钟，同法制成对照药材溶液。再取三七皂苷R1对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。经过试验，该方法分离效果较好，故列入正文。
1.3.2吸附剂的选择参照心宁片质量标准鉴别(2)，选用硅胶G，分离效果较好，故将其列入正文。
1.3.3展开剂的选择按照心宁片质量标准鉴别(2)，用二氯甲烷取代原心宁片鉴别(2)展开剂中毒性试剂三氯甲烷，即是以二氯甲烷-甲醇-水(65∶35∶10)10℃放置12小时的下层溶液为展开剂。经过试验，该方法分离效果较好，故列入正文。
1.3.4显色剂的选择按照心宁片质量标准鉴别(2)，以10％硫酸乙醇溶液为显色剂，结果斑点显色清晰，故列入正文。
综上所述，确定了正文心宁胶囊三七TLC检查方法，经3批中试样品试验，该方法稳定，重现性好，且阴性无干扰。
1.4鉴别本鉴别为槐花薄层鉴别。
1.4.1提取条件的选择
方法一、取本品内容物3g，加甲醇10ml，振摇10分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。方法二、取本品内容物3g，加乙醇10ml，振摇5分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取芦丁对照品，加甲醇制成每1ml含4mg的溶液，作为对照品溶液。经过试验，方法二分离效果较好，故列入正文。
1.4.2吸附剂的选择 选用硅胶G，分离效果较好，故将其列入正文。
1.4.3展开剂的选择 方法一、以乙酸乙酯-甲酸-水(8∶1∶1)；方法二、以乙酸乙酯-甲酸-水(18∶3∶4.5)上层溶液为展开剂。经过实验，以方法二乙酸乙酯-甲酸-水(18∶3∶4.5)为展开剂，分离效果较好，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，故将方法二展开剂列入正文。
1.4.4显色剂的选择以三氯化铝试液为显色剂，结果斑点在365nm下检视清晰，故列入正文.
综上所述，确定了正文心宁胶囊槐花TLC检查方法，经3批中试样品试验，该方法稳定、重现性好，且阴性无干扰。
1.5鉴别本鉴别为赤芍薄层鉴别。
1.5.1提取条件的选择
取本品内容物3g，加乙醇溶液20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。另取赤芍对照药材0.5g，加乙醇10ml，振摇5分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml溶解，作为对照药材溶液。再取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。经过试验，该方法分离效果较好，故列入正文。
1.5.2吸附剂的选择参照《中国药典》2005年版赤芍药材质量标准鉴别(2)，选用硅胶G，分离效果较好，故将其列入正文。
1.5.3展开剂的选择 参照《中国药典》2005年版赤芍药材质量标准鉴别(2)，方法一、以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)；方法二、以二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液(8∶1∶4∶1)为展开剂。经过实验，以方法二二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液(8∶1∶4∶1)为展开剂，分离效果较好，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，故将方法二展开剂列入正文。
1.5.4显色剂参照《中国药典》2005年版赤芍药材质量标准鉴别(2)，以5％香草醛硫酸溶液为显色剂，结果斑点显色清晰，故列入正文。
综上所述，确定了正文心宁胶囊赤芍TLC检查方法，经3批中试样品试验，该方法稳定、重现性好，且阴性无干扰。
除此之外，还对方中红花、降香进行了TLC鉴别，结果方法不可行，所以未列入质量标准草案正文。
二、检查
1.1一般检查
1.1.1装量差异 按(中国药典2005年版一部附录IL)胶囊剂项下规定，依法检查，结果均符合规定。
1.1.2崩解时限 按(中国药典2005年版一部附录XII A)崩解时限检查法规定，依法检查，结果均符合规定。
1.1.3水分 按(中国药典2005年版一部附录IX H)水分测定法规定，依法检查，结果均符合规定。
1.1.4微生物限度检查 按《中国药典》2005年版一部“微生物限度标准”规定，依法检查，结果均符合规定。
1.2重金属及砷盐检查
1.2.1重金属检查：按《中国药典》2005版一部附录IX E重金属检查法第二法检查。结果小于百万分之十。
1.2.2砷盐检查：按《中国药典》2005版一部附录IX F砷盐检查法第一法检查。结果小于百万分之二。
根据以上的检验结果，说明本品中重金属、砷盐都符合规定，且含量都很低，因此不列入质量标准草案。
三、含量测定 照高效液相色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI D)测定。
本品原剂型标准中含量测定，是检测处方中丹参药材所含的丹参素钠，但我们参照原剂型含量测定的方法进行丹参素钠含量方法学研究，结果加样回收率达不到要求(具体数据见下表)，而资料显示丹参药材对心血管系统起作用的主要是丹参的水溶性成分，所以我们对丹参的另一水溶液性成分丹酚酸B进行了研究，结果表明该方法不仅加样回收率能达到要求，而且重复性好，故将本品含测指标成分确定为丹酚酸B。
丹参素钠加样回收率
3.1仪器、对照品、试剂和试药
3.1.1仪器：Agilent 1100型高效液相色谱仪、VWD检测器、Agilent化学工作站；
超声波清洗器CX-250型(频率：29-34KHz，功率：≥250W，北京医疗设备二厂)；
电子天平(万分之一)BS-210S型(塞多利斯公司)；电子天平(十万分之一)AE240型(Mettler公司)。
3.1.2对照品：丹酚酸B对照品(批号：111562-200504)供含量测定用，购于中国药品生物制品检定所。
3.1.3试剂：甲醇、冰醋酸为分析纯；甲醇、乙腈为色谱纯；水为重蒸馏水。
3.1.4试药：心宁胶囊样品由贵阳新天药业股份有限公司提供。
3.2对照品溶液的制备
对照品贮备液：精密称取丹酚酸B对照品18.15mg，置50ml量瓶中，加75％甲醇溶液，溶解并稀释至刻度，摇匀，即得每1ml含0.363mg的溶液。
对照品溶液①精密量取上述对照品贮备溶液10ml，置50ml量瓶中，加75％甲醇溶液溶解瓶稀释至刻度，摇匀，即得每1ml含72.6μg的溶液。
对照品溶液②精密量取上述对照品贮备溶液2ml，置5ml量瓶中，加75％甲醇溶液溶解瓶稀释至刻度，摇匀，即得每1ml含145.2μg的溶液。
3.3色谱条件试验
方法一
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(伊利特ODS2 C18250mm×4.6mm，5μm)
流速：1.0ml/分钟
检测波长：286nm
供试品溶液的制备：取本品约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75％甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率34KHZ)30分钟，放冷，再称定重量，用75％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。以甲醇-乙腈-甲酸-水(30∶10∶1∶59)为流动相，分别精密吸取对照品溶液(C＝145.2μg/ml)和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。
结果从供试品图谱中可以看出，丹酚酸B峰与其它峰之间分离度低，峰形差，表明该流动相不能作为本实验的色谱条件。
方法二
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(伊利特ODS2 C18250mm×4.6mm，5μm)
流速：0.8ml/分钟
柱温：25℃
检测波长：286nm
供试品溶液的制备：取本品约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75％甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率34KHZ)30分钟，放冷，再称定重量，用75％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。以甲醇-乙腈-水-乙酸(28∶10∶61∶1)为流动相，分别精密吸取对照品溶液(C＝72.6μg/ml)和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。
结果从供试品图谱中可以看出，丹酚酸B峰与其它峰之间有良好的分离度、峰形好、柱效高，故将该色谱条件作为本实验的色谱条件。
3.4供试品溶液的制备选择：
方法1：取本品约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75％甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率34KHZ)15分钟，放冷，再称定重量，用75％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
方法2：取本品约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75％甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率34KHZ)30分钟，放冷，再称定重量，用75％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
方法3：取本品约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75％甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率34KHZ)60分钟，放冷，再称定重量，用75％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
分别精密吸取丹酚酸B对照品溶液(C＝72.6μg/ml)和3个供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果见下表：
结论：从以上试验结果可以看出，各方法中，丹酚酸B峰与其它峰之间均有良好的分离，方法2、3含量无明显变化，综合考虑故将方法2列入正文，即为：取本品内容物约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75％甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率34KHZ)30分钟，放冷，再称定重量，用75％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
3.5系统适用性试验
取本品约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75％甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率34KHZ)30分钟，放冷，再称定重量，用75％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；另取阴性样品同法制成阴性样品溶液。精密吸取对照品溶液(72.6μg/ml)、阴性样品溶液和供试品溶液各10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。从色谱图中可看出，供试品在与对照品保留时间相应的位置上有峰，且峰形好，而阴性样品在相应的位置上无峰，说明阴性样品对样品测定无干扰。样品在图谱中的丹酚酸B峰的理论板数为4072，与其它物质有良好的分离，峰形好，综合考虑，规定本实验的理论塔板数按丹酚酸B峰计算，应不得低于2000。
3.6线性关系试验
对照品溶液①：精密量取7.2项下丹酚酸B对照品贮备液(C＝0.363mg/ml)1ml，置25ml量瓶中，加75％甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，即得每1ml含0.01452mg的溶液
对照品溶液②：精密量取7.2项下丹酚酸B对照品贮备液(C＝0.363mg/ml)2ml，置25ml量瓶中，加75％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得每1ml含0.02904mg的溶液。
对照品溶液③：精密量取7.2项下丹酚酸B对照品贮备液(C＝0.363mg/ml)3ml，置25ml量瓶中，加75％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得每1ml含0.04356mg的溶液。
对照品溶液④：精密量取7.2项下丹酚酸B对照品溶液①(C＝72.6μg/ml)20ml，置25ml量瓶中，加75％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得每1ml含0.05808mg的溶液。
对照品溶液⑤：用7.2项下丹酚酸B对照品溶液①，即为每1ml含72.6μg的溶液。
对照品溶液⑥：用7.2项下丹酚酸B对照品溶液②，即为每1ml含145.2μg的溶液。
精密吸取上述6个对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果见下表：
| 序号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
| 对照品溶液浓度(mg/ml) | 0.01452 | 0.02904 | 0.04356 | 0.05808 | 0.07260 | 0.14520 |
| 序号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
| 峰面积 | 197.15962 | 392.43307 | 594.60614 | 790.78625 | 984.15894 | 1971.69238 |
以峰面积为纵坐标，以浓度(mg/ml)为横坐标作线性关系图
得线性方程Y＝13578x+0.367 R＝0.9999
拟合过原点的直线方程为：Y＝13582x R＝0.9999
将对照品浓度代入上述两式计算，相对标准偏差小于1.0％，故可认为标准曲线过原点，回归方程截距为零，由此含量测定可采用外标一点法计算。对照品溶液浓度在0.01452mg/ml～0.14520mg/ml之间线性关系良好。
3.7精密度试验 精密吸取丹酚酸B对照品溶液(C＝72.6μg/ml)10μl，注入液相色谱仪，连续进样5次，记录色谱图，结果见下表：
实验结果表明，该方法有良好的精密度。
3.8样品稳定性试验：
取本品(批号：20061101)内容物约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75％甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率34KHZ)30分钟，放冷，再称定重量，用75％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。分别精密吸取供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，并将供试品溶液放置0、1、2、4、8、12小时后，分别精密吸取供试品溶液10μl进样测定，记录色谱图，结果见下表：
从上述试验结果得出，供试品溶液在12小时内稳定性良好。
3.9样品重重性试验
取本品(批号：20061101)内容物约0.2g(平行样5份)，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75％甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率34KHZ)30分钟，放冷，再称定重量，用75％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液(浓度为72.6μg/ml)和五份供试品溶液各10μl进样测定，结果见下表：
通过上述试验结果得出，该方法的样品重现性好。
3.10样品加样回收率试验
对照品溶液的制备：用7.2项下丹酚酸B对照品溶液①，即为每1ml含72.6μg的溶液。
取本品(批号：20061101)内容物约0.1g(平行样6份)，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入上述丹酚酸B对照品25ml，再精密加入75％甲醇25ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率34KHZ)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。分别精密吸取丹酚酸B对照品溶液(C＝72.6μg/ml)及上述6份供试品溶液各10μl，分别进样测定，结果见下表：
从上述实验结果得出，该方法有良好的回收率。
3.11样品测定
三批中试样品含量测定结果见下表：
| 批号 | 含量1(mg/粒) | 含量2(mg/粒) | 平均含量(mg/粒) |
| 20061101 | 6.30 | 6.28 | 6.3 |
| 批号 | 含量1(mg/粒) | 含量2(mg/粒) | 平均含量(mg/粒) |
| 20061102 | 6.20 | 6.18 | 6.2 |
| 20061103 | 6.20 | 6.21 | 6.2 |
含量限度计算公式：
根据上述计算公式计算结果为2.79mg/粒，因此规定本品每粒含丹参以丹酚酸B(C36H30O16)计，不得少于2.5mg。
实施例：
一种心宁胶囊的质量检测方法，包括如下步骤：
(1)鉴别：
a、取本品内容物3g，加乙醚50ml，超声处理20分钟，滤过，药渣备用。滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取川芎对照药材1g，加乙醚20ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
b、取(a)项下备用药渣，挥干溶剂，加甲醇50ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水50ml使溶解，用水饱和正丁醇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次60ml，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取三七对照药材0.5g，加甲醇20ml，超声处理30分钟，同法制成对照药材溶液。再取三七皂苷R1对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005版一部附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇-水(65∶35∶10)10℃放置12小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
c、取本品内容物3g，加乙醇10ml，振摇5分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取芦丁对照品，加甲醇制成每1ml含4mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水(18∶3∶4.5)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，热风吹至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
d、取本品内容物3g，加乙醇溶液20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液.另取赤芍对照药材0.5g，加乙醇10ml，振摇5分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml溶解，作为对照药材溶液.再取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液.照薄层色谱法(中国药典2005版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液10μl，对照药材溶液5μl，对照品溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液(8∶1∶4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(2)检查：应符合胶囊剂项下有关的各项规定(中国药典2005年版一部附录I L)。
(3)含量测定：照高效液相色谱法(中国药典2005版一部附录VI D)测定。
a、色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-水-乙酸(28∶10∶61∶1)为流动相；检测波长为286nm；流速为0.8ml/分钟；柱温25℃。理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于2000。
b、对照品溶液的制备取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加50％甲醇制成每1ml含70μg的溶液，即得。
c、供试品溶液的制备取本品约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75％甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率34KHZ)30分钟，放冷，再称定重量，用75％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
d、测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每粒含丹参以丹酚酸B(C36H30O16)计，不得少于2.5mg。
Claims (3)
1.一种心宁胶囊的质量检测方法，包括如下步骤：
(1)鉴别：
a、取本品内容物3g，加乙醚50ml，超声处理20分钟，滤过，药渣备用；滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取川芎对照药材1g，加乙醚20ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比9∶1正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
b、取a项下备用药渣，挥干溶剂，加甲醇50ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水50ml使溶解，用水饱和正丁醇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次60ml，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取三七对照药材0.5g，加甲醇20ml，超声处理30分钟，同法制成对照药材溶液；再取三七皂苷R1对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比65∶35∶10二氯甲烷-甲醇-水10℃放置12小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
c、取本品内容物3g，加乙醇10ml，振摇5分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取芦丁对照品，加甲醇制成每1ml含4mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比18∶3∶4.5乙酸乙酯-甲酸-水的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，热风吹至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
d、取本品内容物3g，加乙醇溶液20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取赤芍对照药材0.5g，加乙醇10ml，振摇5分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml溶解，作为对照药材溶液；再取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl，对照药材溶液5μl，对照品溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比8∶1∶4∶1二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(2)含量测定：照高效液相色谱法测定；
a、色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比28∶10∶61∶1甲醇-乙腈-水-乙酸为流动相；检测波长为286nm；流速为0.8ml/分钟；柱温25℃；理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于2000；
b、对照品溶液的制备 取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加50％甲醇制成每1ml含70μg的溶液，即得；
c、供试品溶液的制备 取本品约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75％甲醇50ml，密塞，称定重量，功率250W、频率34KHZ超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用75％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
d、测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得.
2.如权利要求1所述的心宁胶囊的质量检测方法，其中：本品每粒含丹参以丹酚酸B计，不得少于2.5mg。
3.权利要求2所述的心宁胶囊的质量检测方法，其中检查：应符合胶囊剂项下有关的各项规定。
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