CN104965044B - 一种黄芪药材及其水提取物的快速多信息薄层鉴别方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种黄芪药材及其水提取物的快速多信息薄层鉴别方法。其特征在于：用简便、快捷的前处理方法得到供试品与对照药材溶液，在同一块薄层板上，获得黄芪及提取物在紫外光灯365nm和254nm、以及喷雾10％硫酸乙醇溶液显色后日光和紫外光灯365nm，4种检视条件下的多信息薄层鉴别图，斑点清晰，相互交错，但又互不干扰。与常规的单信息薄层相比，不但大幅度提高了黄芪及其提取物的质量可控性，有利于质量监督，而且还提高检测效率3倍、节约成本80％，减少环境污染90％。
Description
技术领域
本发明涉及一种黄芪药材及其水提取物的快速多信息薄层鉴别方法。
背景技术
中药黄芪及其提取制剂的薄层鉴别方法，一直是一件令人头痛的问题。因其样品和对照药材的前处理方法非常繁琐复杂，需要用有机溶剂反复纯化处理，仅样品的前处理就要花费近一天时间、数百ml的有机试剂，效率低、环境污染严重、危害操作人员的身体健康。以中国药典2010年版药典一部为例，就其药材与其制剂的薄层鉴别方法，随机摘录列举3例：
1、黄芪单味药材薄层鉴别
A.取本品粉末3g，加甲醇20ml，加热回流1小时，滤过，滤液加于中性氧化铝柱(100～120目，5g，内径为10～15mm)上，用40％甲醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水30m]使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，用水洗涤2次，每次20ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同棕褐色斑点；紫外光灯365nm下显相同的橙黄色荧光斑点。
B.取本品粉末2g，加乙醇30ml，加热回流20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加0.3％氢氧化钠溶液15ml使溶解，滤过，滤液用盐酸调节pH值至5～6，用乙酸乙酯15ml振摇提取，分取乙酸乙酯液，用铺有适量无水硫酸钠的滤纸滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪对照药材2g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇(10∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏后，置紫外光灯365nm下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点。
鉴别A是以黄芪甲苷、鉴别B是以对照药材为参照，检测一批黄芪药材，要制备两种供试品溶液，通过两次薄层展开，总花费时间8小时、有机溶剂250ml。
2.制剂中黄芪薄层鉴别
A.正心降脂片中黄芪薄层鉴别 取本品适量，除去包衣，研细，取3g，置索式提取器中，加2％氢氧化钾甲醇溶液，加热回流提取至无色，提取液蒸干，残渣用20mmll水溶解，用乙醚提取3次，每次20ml，弃去乙醚液，水液再用水饱和的三氯甲烷-正丁醇(2∶1)混合溶液提取3次，每次20ml，合并下层溶液，用0.1mol/L的氢氧化钾溶液洗涤三氯甲烷-正丁醇液，收集下层溶液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；置紫外光灯365nm下检视，显相同颜色荧光斑点。
该鉴别方法是以黄芪甲苷为对照，仅一批样品前处理就要花费时间7-8小时、有机溶剂273ml。
B.补肾固齿丸中黄芪薄层鉴别 取本品20g，研碎，加甲醇50ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水15ml使溶解，用水饱和的正丁醇，振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次30ml，再用正丁醇饱和水洗涤2次，每次30ml，正丁醇液回收溶剂至约2ml，加中性氧化铝(100～120目)3g，搅匀，蒸干，加在中性氧化铝柱(100～120目，2g，内径为10～15mm)上，用40％甲醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪对照药材1g，加甲醇30ml，同法制成对照药材溶液。再取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液10μl、对照药材与对照品溶液各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。
该鉴别方法鉴别一批样品，样品与对照药材前处理要花费时间7-8小时、有机溶剂400ml。
由上述黄芪单味药材的薄层鉴别以及其在制剂中的薄层鉴别实例，印证了目前为止，其鉴别的繁琐性、复杂性、费时性、信息量的单一性、对周围环境的污染性以及高成本、低效率。所以提高检测效率、降低检测成本、减少环境污染，创建黄芪药材及其水提取物的快速多信息薄层鉴别方法，成了检测人员刻不容缓的奋斗目标，我们就是在该背景条件下，发明了黄芪药材及其水提取物的快速多信息薄层鉴别方法。
黄芪药材水提取物或配方颗粒的制备方法 取黄芪饮片4500-5000g，分别加水8倍量，煎煮提取二次，每次1-2小时，滤过，滤液70℃减压浓缩，浓缩液喷雾干燥或70℃减压干燥，得各自水提取物干膏粉；或加糊精适量，混匀，制粒，分别制成1000g，分装，得各自水提取物配方颗粒。
发明内容
本发明就是针对黄芪药材及其在复方制剂中薄层鉴别繁琐、费时、信息量单一、方法污染环境和高成本的弊端，发明了一种黄芪药材及其水提取物的快速多信息薄层鉴别方法。即，用简便、快捷的前处理方法得到供试品与对照药材溶液，在同一块薄层板上，获得黄芪在紫外光灯365nm和254nm、以及喷雾10％硫酸乙醇溶液显色后，日光和紫外光灯365nm，4种检视条件下的多信息薄层鉴别图，斑点清晰，相互交错，但又互不干扰(见图1、2、3、4)。与常规的单信息薄层相比，不但大幅度提高了黄芪及其提取物的质量可控性，有利于质量监督，而且还提高了检测效率、节约了成本，减少了环境污染，具创造性与实用性。
本发明解决其技术问题所采用的方案为：
(1)黄芪药材的薄层鉴别 取黄芪药材粉末与对照药材各2g，分别加水80ml，小火煎煮30分钟，棉花过滤，滤液蒸干，残留物各加浓氨水0.5ml，振摇使湿润均匀，分别加正丁醇10ml，超声处理20分钟，倾取正丁醇液，蒸干，残留物各加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液与对照药材溶液；再取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.25mg溶液，作为对照品溶液；吸取对照药材溶液、对照品溶液和供试品溶液各5～6μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为1∶2∶4∶0.5的氯仿-乙酸乙酯-甲醇-浓氨为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯254nm和365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点和荧光主斑点；再喷以10％硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，日光和紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品和对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色斑点和荧光主斑点。
(2)黄芪水提取物的薄层鉴别 取黄芪水提取物适量，研细，称取1.0g，加浓氨水1.5ml，振摇使湿润均匀，加正丁醇10ml，超声处理30分钟，倾取正丁醇液，蒸干，残留物加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；吸取供试品溶液与鉴别(1)项下的对照药材溶液和对照品溶液各5～8μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为1∶2∶4∶0.5的氯仿-乙酸乙酯-甲醇-浓氨为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯254nm和365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点和荧光主斑点；再喷以10％硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，日光和紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品和对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色斑点和荧光主斑点。
本发明的原理如下：
依据中药各有效成分的化学结构与性质，遵循相似相容的提取原则，采用适宜的提取溶剂，简便、快捷地制备供试品与对照药材溶液。再通过展开剂的移动，各成分在薄层板上的吸附、解吸附的能力的不同，使其斑点得以分离。又借助各成分极性大小，选取极性近似的有效成分，在不同的检视条件下，呈现不同的斑点颜色，在同一块薄层板上，不同的检视条件下，获得多信息的薄层色谱图。
本发明的创新点及有益效果如下：
1.黄芪药材和对照药材的前处理方法是：分别用水煎煮后，煎液蒸干，用浓氨水湿润，少量正丁醇超声提取，正丁醇液蒸干，甲醇溶解，即为样品和对照药材溶液。再制备黄芪甲苷对照品溶液。花费时间约2小时，有机溶剂21ml，与报道方法相比，节约前处理时间6小时、有机溶剂250ml。并实现了在同一薄层板上，以对照药材和黄芪甲苷双重指标为对照，检视药材的多信息斑点和黄芪甲苷的单体斑点，既节约展开剂，又节约薄层板和展开时间。
2.黄芪水提取物的前处理方法是：只一步在碱性条件下，用10ml正丁醇超声提取，正丁醇液蒸干，甲醇溶解，即为样品溶液；即便加上对照药材与对照品溶液的制备时间，总花费时间最多2小时、有机溶剂22ml。与相同检测指标的已报道方法相比，平均节约时间6小时、有机溶剂380ml。
3.检测的信息量是紫外光灯(365nm)下的荧光斑点；紫外光灯(254nm)下的棕褐色斑点和喷雾10％硫酸乙醇溶液显色后，日光下检视的四种颜色斑点和紫外光灯(365nm)下的兰色、橙红色、黑色等多种颜色斑点。该四种检视条件下的信息斑点，从其Rf值分析，不是同一种成分，其信息量之多，已报道方法是不能相比的。
4.本鉴别方法与已报道方法的不同之处还在于：本鉴别的展开剂是碱性展开剂，而已报道方法是偏酸性或中性展开剂。本鉴别利用了展开剂的碱性，可以将一些酸性的物质，拖在原点，使其不随展开剂移动或移动缓慢，克服薄层板的背景干扰，实现样品和对照药材不经纯化处理，也能获得清晰的薄层色谱图。
5.本发明与报道的薄层鉴别方法相比，提高检测效率3倍，节省检测时间70％，降低检测成本80％，减少环境污染90％。本鉴别方法目前是鉴别黄芪最简便的方法，为黄芪药材及其水提取制剂提供了快速多信息薄层鉴别的参考依据。
附图说明
图1为黄芪药材及其提取物紫外光灯254nm下的薄层TLC图。
图2为黄芪药材及其提取物紫外光灯365nm下的薄层TLC图。
图3为黄芪药材及其提取物显色后，日光下的薄层TLC图。
图4为黄芪药材及其提取物显色后，紫外光灯365nm下的薄层TLC图。
图1、2、3、4为同一块薄层板，其中，1.2.3为黄芪提取物；4.黄芪甲苷；5.黄芪对照药材；6.7为黄芪药材
本发明具体实施方式如下：
(1)黄芪药材的薄层鉴别 取黄芪药材粉末与对照药材各2g，分别加水80ml，小火煎煮30分钟，棉花过滤，滤液蒸干，残留物各加浓氨水0.5ml，振摇使湿润均匀，分别加正丁醇10ml，超声处理20分钟，倾取正丁醇液，蒸干，残留物各加甲醇0.5ml使溶解，分别作为供试品与对照药材溶液；再取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.25mg溶液，作为对照品溶液；吸取对照药材溶液、对照品溶液和供试品溶液各5～6μl，分别点于同一硅胶6F254薄层板上，以体积比为1∶2∶4∶0.5的氯仿-乙酸乙酯-甲醇-浓氨为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯254nm和365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点和荧光主斑点；再喷以10％硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，日光和紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品和对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色斑点和荧光主斑点。
(2)黄芪水提取物的薄层鉴别 取黄芪水提取物适量，研细，称取1.0g，加浓氨水1.5ml，振摇使湿润均匀，加正丁醇10ml，超声处理30分钟，倾取正丁醇液，蒸干，残留物加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；吸取供试品溶液与鉴别(1)项下的对照药材溶液和对照品溶液各5～8μl，分别点于同一硅胶6F254薄层板上，以体积比为1∶2∶4∶0.5的氯仿-乙酸乙酯-甲醇-浓氨为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯254nm和365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点和荧光主斑点；再喷以10％硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，日光和紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品和对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色斑点和荧光主斑点。
Claims (2)
1.一种黄芪药材及其水提取物的快速多信息薄层鉴别方法，其特征在于：
(1)黄芪药材的薄层鉴别 取黄芪药材粉末与对照药材各2g，分别加水80ml，小火煎煮30分钟，棉花过滤，滤液蒸干，残留物各加浓氨水0.5ml，振摇使湿润均匀，分别加正丁醇10ml，超声处理20分钟，倾取正丁醇液，蒸干，残留物各加甲醇0.5ml使溶解，分别作为供试品与对照药材溶液；再取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.25mg溶液，作为对照品溶液；吸取对照药材溶液、对照品溶液和供试品溶液各5～6μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为1∶2∶4∶0.5的氯仿-乙酸乙酯-甲醇-浓氨为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯254nm和365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点和荧光主斑点；再喷以10％硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，日光和紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品和对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色斑点和荧光主斑点；
(2)黄芪水提取物的薄层鉴别 取黄芪水提取物适量，研细，称取1.0g，加浓氨水1.5ml，振摇使湿润均匀，加正丁醇10ml，超声处理30分钟，倾取正丁醇液，蒸干，残留物加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；吸取供试品溶液与鉴别(1)项下的对照药材溶液和对照品溶液各5～8μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为1∶2∶4∶0.5的氯仿-乙酸乙酯-甲醇-浓氨为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯254nm和365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点和荧光主斑点；再喷以10％硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，日光和紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品和对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色斑点和荧光主斑点。
2.根据权利要求1所述的一种黄芪药材及其水提取物的快速多信息薄层鉴别方法，其特征在于所述的黄芪水提取物每1g相当原生药材4.5～5g。
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